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白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响

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中国热带医学 2024年第8期24卷 907-913页

作者：覃燕春李莹胡欢周璐黄贞植吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳561113 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州贵阳561113

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应;制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb_CTL1蛋白(蚊唾液C型凝集素蛋白)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养,取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞,实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化,分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养,通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达,分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示,与未免疫组比较,rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖,刺激指数(stimulation index,SI)>2,P基础。

关键词： rAlb-34k2-1蛋白 2型登革病毒细胞免疫应答

微小隐孢子虫GP900^(829~1099)蛋白的表达及其对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 55-62页

作者：杨玲王龙王佳阳周坤铮闫宝龙赵威黄慧聪温州医科大学基础医学院寄生虫教研室浙江温州325035 江苏省扬州市中医院检验科扬州225002

目的初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900) 829~1 099aa片段(GP^(900^(829~1099)))通过核因子-κB (NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用。方法从NCBI数据库中获取... 详细信息

目的初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900) 829~1 099aa片段(GP^(900^(829~1099)))通过核因子-κB (NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用。方法从NCBI数据库中获取微小隐孢子虫GP^(900^(829~1099))氨基酸序列进行生物信息学分析。以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,PCR扩增gp900^(829~1099)基因片段,构建pET-32a-gp900^(829~1099)重组质粒并转化至BL21感受态细胞中诱导表达。纯化、超滤浓缩重组蛋白并去除内毒素。采用0.16、0.80、4.00、20.00、100.00、500.00μg/ml的GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激RAW264.7细胞24 h后,CCK-8法检测其对RAW264.7细胞活力的调节作用。以0.16、0.80、4.00μg/ml的GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激RAW264.7细胞,以PBS为对照组,脂多糖(1μg/ml)为阳性对照,24 h后流式细胞术检测CD86表达量,qPCR检测RAW264.7细胞中IL-6和TNF-α mRNA的相对转录水平,ELISA检测RAW264.7细胞培养上清中IL-6、TNF-α的表达水平。采用蛋白质免疫印迹分析NF-κB和MAPK信号通路中P65蛋白和细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白磷酸化水平。结果 GP^(900^(829~1099))蛋白二级结构中β转角占比9.23%,无规则卷曲占比64.58%,且含有较丰富的T、B细胞抗原表位。表达的GP^(900^(829~1099))重组蛋白的相对分子质量约为49 000。CCK-8结果显示,GP^(900^(829~1099))对细胞没有毒性作用,后续实验采用0.16、0.80和4.00μ/g/ml作为作用浓度。流式细胞术结果显示,CD86+的阳性表达率分别为(13.500±0.815)%、(18.670±0.657)%、(20.470±1.271)%,后两者均高于对照组的(14.500±0.872)%(t=3.818、3.872,P <0.05)。qPCR结果显示,0.16、0.80和4.00μg/ml组RAW264.7细胞的IL-6 mRNA相对转录水平分别为1.409±0.050、2.052±0.098和3.284±0.097,均高于对照组的1.010±0.096 (t=3.700、7.595、16.700,均P<0.05);TNF-α mRNA相对转录水平分别为1.077±0.034、1.440±0.021和2.378±0.037,后两者均高于对照组1.000±0.025(t=13.380、30.850,均P<0.05)。ELISA检测结果显示,RAW264.7细胞培养上清中,0.16、0.80和4.00μg/ml组IL-6的表达水平分别为(535.400±17.230)、(572.800±8.286)、(555.600±23.940) mg/L,均高于对照组的(454.400±18.630) mg/L (t=3.193、5.809、3.339,P<0.05);TNF-α细胞因子的表达水平分别为(351.800±12.270)、(386.400±10.250)、(489.800±10.540) mg/L,后两者均高于对照组的(324.200±11.070) mg/L (t=4.125、10.830,P<0.05)。蛋白质免疫印迹结果显示,0.16、0.80和4.00μg/ml组RAW264.7细胞p-P65、p-ERK蛋白的相对表达水平分别为2.294±0.254、1.714±0.205、1.877±0.309,1.522±0.054、1.760±0.066、1.582±0.027,均高于对照组的1.0±0.0 (t=5.100、3.489、2.836,9.737、11.450、21.900,均P<0.05)。结论不同浓度GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激巨噬细胞后,通过激活NF-κB和MAPK信号通路诱导巨噬细胞活化,通过促进TNF-α和IL-6 mRNA的转录参与巨噬细胞的免疫调节。

关键词：微小隐孢子虫微线体蛋白GP900 RAW264.7 NF-κB MAPK

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疟原虫内膜复合体蛋白研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 111-116,120页

作者：韩竹茜朱晓彤中国医科大学基础医学院免疫教研室辽宁沈阳110122

疟疾是由疟原虫感染所致的全球危害最严重的三大传染病之一。疟原虫的裂殖子、动合子和子孢子均具有特征性的内膜复合体(IMC)。IMC定位于质膜下,在胞质侧与膜下网络紧密相连。IMC在细胞分裂过程中提供支撑骨架,维持细胞的形态和稳定性,... 详细信息

疟疾是由疟原虫感染所致的全球危害最严重的三大传染病之一。疟原虫的裂殖子、动合子和子孢子均具有特征性的内膜复合体(IMC)。IMC定位于质膜下,在胞质侧与膜下网络紧密相连。IMC在细胞分裂过程中提供支撑骨架,维持细胞的形态和稳定性,参与疟原虫发育和入侵宿主细胞等过程。深入研究IMC蛋白的结构、功能和转录调控机制,对研发相应的抑制剂或阻断剂以阻断疟疾传播有重要意义。本文就近年来IMC蛋白结构及其转录调控机制的研究进展进行综述。

关键词：疟原虫内膜复合体肺泡蛋白棕榈酰化磷酸化

广西来宾市2017—2023年101例粪类圆线虫感染的诊断和分析

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中国热带医学 2024年

作者：韦新艳陆燕韦凤妮阮贵香潘菊花吕佳音石云良刘登宇来宾市兴宾区人民医院广西医科大学基础医学院寄生虫学教研室

目的分析来宾市2017—2023年诊断的101例粪类圆线虫感染患者的临床特征，为粪类圆线虫病防治提供资料。方法收集来宾市兴宾区人民医院2017—2023年确诊感染粪类圆线虫101例患者的临床资料，对患者的年龄、性别、职业、受教育程度和临... 详细信息

目的分析来宾市2017—2023年诊断的101例粪类圆线虫感染患者的临床特征，为粪类圆线虫病防治提供资料。方法收集来宾市兴宾区人民医院2017—2023年确诊感染粪类圆线虫101例患者的临床资料，对患者的年龄、性别、职业、受教育程度和临床症状及贫血情况等进行统计分析。结果 101例粪类圆线虫感染病例中男性79例，女性22例，男女性比为3.6∶1。患者大部分来自农村地区，以务农为主，且文化程度较低，年龄（65.32±12.48）岁，>60岁老年患者67例。首发有消化道腹痛、黑便和血性腹泻症状分别有16、12和6例，合并肺部感染、高血压、痛风和风湿性关节炎、糖尿病和恶性肿瘤分别29、25、18、13和12例。实验室检查显示，出现贫血、大便隐血阳性和嗜酸性粒细胞增高分别59、63和51例。结论来宾市兴宾区的粪类圆线虫感染患者多发于文化程度低的农村老年人，男性多于女性。粪类圆线虫患者中仅部分出现腹痛、腹泻等肠道症状，但大部分患者合并有肺部感染、高血压、痛风性、风湿性关节炎、糖尿病、恶性肿瘤等疾病，合并感染有加快和加剧疾病进程的风险，应加强当地粪类圆线虫的防控。

关键词：粪类圆线虫贫血消化道症状农村地区

安徽省部分地区硬蜱蜱种鉴定及蜱携带无形体检测

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中国人兽共患病学报 2024年第4期40卷 302-307页

作者：赵雪 Lerato Khakhane 陆皖晴吴鑫云宋芳菲新宇张莹莹邢晨徐可瀚何茂章柳燕安徽医科大学基础医学院微生物教研室合肥230032

目的了解安徽省部分地区硬蜱蜱种种类、蜱种分布及蜱虫携带无形体情况,为蜱传无形体防控提供参考依据。方法于2023年4月至8月,在安徽省金寨县、含山县、旌德县、巢湖市等地通过布旗法和从动物身上采集硬蜱共计630只。用体式显微镜进行... 详细信息

目的了解安徽省部分地区硬蜱蜱种种类、蜱种分布及蜱虫携带无形体情况,为蜱传无形体防控提供参考依据。方法于2023年4月至8月,在安徽省金寨县、含山县、旌德县、巢湖市等地通过布旗法和从动物身上采集硬蜱共计630只。用体式显微镜进行形态学鉴定,设计蜱特异性引物进行蜱种分子生物学鉴定。设计无形体16S rRNA特异性引物用巢式PCR检测单只蜱虫无形体携带情况。利用MEGA11.0构建系统发育树并分析。结果安徽省金寨县微小扇头蜱占18.8%(18/96)、长角血蜱占81.2%(78/96),含山县、巢湖市均为长角血蜱,旌德县均为微小扇头蜱。长角血蜱携带无形体阳性率为30.9%(102/330),包括牛无形体1.8%(6/330)、嗜吞噬细胞无形体21.8%(72/330)和一种uncultured无形体7.3%(24/330),微小扇头蜱携带嗜吞噬细胞无形体13.6%(18/132)。牛无形体和未培养无形体在游离蜱检测出,在24.4%的寄生蜱和15.8%的游离蜱检测出嗜吞噬细胞无形体。结论安徽省调查县的蜱种包括长角血蜱和微小扇头蜱,长角血蜱和微小扇头蜱及其游离蜱和寄生蜱均携带无形体。

关键词：蜱蜱种鉴定长角血蜱微小扇头蜱无形体安徽省

白细胞介素-4对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第3期42卷 354-359,366页

作者：骆泽妮吴安琪汪志锴潘晋孙希萌首都医科大学基础医学院病原生物学系北京100069 首都医科大学基础医学院北京100069

目的探讨小鼠白细胞介素-4 (IL-4)对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用。方法消化旋毛虫保种小鼠肌肉,收集肌幼虫,超声破碎后离心,取上清制备旋毛虫抗原。将10只野生型BALB/c小鼠随机分成未感染组和野生感染组,每组5只;另取4只IL-4敲除(... 详细信息

目的探讨小鼠白细胞介素-4 (IL-4)对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用。方法消化旋毛虫保种小鼠肌肉,收集肌幼虫,超声破碎后离心,取上清制备旋毛虫抗原。将10只野生型BALB/c小鼠随机分成未感染组和野生感染组,每组5只;另取4只IL-4敲除(IL-4KO) BALB/c小鼠作为IL-4KO感染组。野生感染组和IL-4KO感染组每鼠灌胃旋毛虫肌幼虫400条,未感染组灌胃等体积PBS。感染旋毛虫后8 d,采集各组小鼠眼眶静脉血,离心收集血清,ELISA检测单核细胞趋化因子1 (MCP-1)含量。剖取十二指肠和近端空肠,制备石蜡切片后进行苏木精-伊红(HE)染色,使用Aperio ImageScope 12.4.3测量测量十二指肠、空肠的肠绒毛和隐窝的长度与杯状细胞的数量和大小,计算肠绒毛长度/隐窝长度的比值(V/C)和杯状细胞数/绒毛长度的比值(GC/V)。分离肠系膜淋巴结中的淋巴细胞,与旋毛虫抗原(10μg/ml)共培养72 h,收集细胞上清,高通量液相蛋白芯片(Luminex)技术检测IL-1β、IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、干扰素γ (IFN-γ)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)的含量。使用SPSS 26.0统计软件对数据进行分析,两两比较采用独立样本t检验,多样本比较采用单因素方差分析。结果 ELISA结果显示,未感染组、野生感染组、 IL-4KO感染组小鼠血清中MCP-1含量分别为(344.90±21.80)、(350.50±38.30)、(467.94±190.01) pg/ml,IL-4KO感染组高于野生感染组(t=0.681,P 0.05)外,IL-4KO感染组均高于野生感染组(F=5.52、24.73、48.72、5.00、123.10、50.55,P <0.05或0.01)。结论 IL-4在旋毛虫感染肠道期起免疫保护作用,能够降低小鼠血清中MCP-1含量,减缓十二指肠及空肠的炎症反应,抑制炎性细胞因子的分泌。

关键词：旋毛形线虫白细胞介素-4 肠道期感染抵抗作用

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微小膜壳绦虫对ICR小鼠肠道菌群的影响

黑龙江畜牧兽医 2024年第17期 8-12,108-110页

作者：李小毛赵敬王鸿雁张科牟荣贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵阳550025 贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵阳550025

为了探究微小膜壳绦虫(Hymenolepis nana)对ICR小鼠肠道菌群的影响,试验采用随机分组方式将30只ICR小鼠分为感染组和对照组,每组15只,感染组灌胃感染0.2 mL鉴定和纯化后的微小膜壳绦虫虫卵配制成的虫卵悬浊液(浓度为2500个/mL),对照组... 详细信息

为了探究微小膜壳绦虫(Hymenolepis nana)对ICR小鼠肠道菌群的影响,试验采用随机分组方式将30只ICR小鼠分为感染组和对照组,每组15只,感染组灌胃感染0.2 mL鉴定和纯化后的微小膜壳绦虫虫卵配制成的虫卵悬浊液(浓度为2500个/mL),对照组灌胃等量生理盐水,并于感染后第2,4,6,8,10天采集空肠内容物,采用16S rDNA扩增子测序分析技术检测16S rDNA扩增产物,所得的数据使用多组间方差分析进行两两比较,对肠道菌群的种类、分布和丰度状况进行研究。结果表明:菌群种类繁多,以厚壁菌门(占比为64%)、拟杆菌门(占比为25%)为主,其次是变形菌门(占比为6%)和放线菌门(占比为3%)。感染微小膜壳绦虫后第4,6,8,10天肠道菌群α多样性Sobs值呈现先下降再上升的趋势,第8天显著低于第4,6,10天(P0.05);与对照组相比,感染组相对丰度上调的菌群主要从属厚壁菌门,有紫单胞菌科、毛螺菌科和乳杆菌科;下调的菌群种类较多,主要从属厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门和变形菌门。与对照组相比,感染后第10天感染组小鼠肠道乳杆菌属的相对丰度升高最明显;葡萄球菌属、咸海鲜球菌属和棒杆菌属的相对丰度降低。说明微小膜壳绦虫感染会导致宿主肠道菌群失调,其中乳杆菌属的相对丰度变化最明显。

关键词：微小膜壳绦虫 ICR小鼠肠道菌群菌群失调乳杆菌属

包虫囊液对干扰素信号TRIF/IFITM3通路的影响

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中国病原生物学杂志 2024年第7期19卷 773-778,783页

作者：屈晴袁振地达尔·叶尔革命蒙克嘎勒齐新伟单骄宇新疆医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室乌鲁木齐830017 新疆地方病分子生物学重点实验室新疆医科大学基础医学院生理学教研室新疆医科大学第一附属医院中亚高发疾病发病机制与防治国家重点实验室

目的探索包虫囊液干预人源肝细胞(L02)过程中TRIF/IFITM3通路相关蛋白的变化。方法从感染细粒棘球蚴病的羊肝中获取囊液,用不同比例囊液浓度(1∶10、1∶100和1∶1000)干预肝细胞并设置阴性对照组(未加囊液干预)。采用囊液浓度(1∶1000... 详细信息

目的探索包虫囊液干预人源肝细胞(L02)过程中TRIF/IFITM3通路相关蛋白的变化。方法从感染细粒棘球蚴病的羊肝中获取囊液,用不同比例囊液浓度(1∶10、1∶100和1∶1000)干预肝细胞并设置阴性对照组(未加囊液干预)。采用囊液浓度(1∶1000)干预肝细胞后分别在0、24、48和72 h收集细胞。实时荧光定量PCR检测TRIF/IFITM3通路相关mRNA的表达,Western blot检测TRIF、IRF3、IFITM3、Foxp3的蛋白表达变化。免疫荧光检测IFITM3、Foxp3的表达和定位。Spearman分析TRIF、IFITM3及Foxp3的相关性。结果 Western blot显示囊液浓度(1∶1000)促进TRIF、IRF3、IFITM3蛋白表达,TRIF的相对表达量分别是(0.45±0.09)、(0.54±0.05)、(1.08±0.24)、(1.75±0.31);IFITM3的相对表达量分别是(1.02±0.41)、(1.00±0.16)、(1.24±0.12)、(1.84±0.20)。囊液浓度(1∶1000)刺激肝细胞0、24、48和72 h后,Western blot显示TRIF、IRF3、IFITM3蛋白表达量逐渐下降,而Foxp3表达量增高。TRIF的相对表达量分别是(1.00±0.31)、(1.08±0.19)、(0.90±0.13)、(0.57±0.05);IFITM3的相对表达量分别是(0.80±0.26)、(0.94±0.09)、(0.82±0.19)、(0.54±0.18)。Foxp3的相对表达量分别是(0.70±0.11)、(0.80±0.02)、(0.83±0.03)、(1.08±0.04)。免疫荧光显示,在泡球蚴感染60 d时,小鼠肝脏IFITM3和Foxp3发生共定位。Spearman分析TRIF与IFITM3存在正相关性(r=0.704,P寄生。

关键词：细粒棘球蚴感染 Toll样受体衔接蛋白干扰素诱导的跨膜蛋白3 核转录因子Foxp3

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IL-4对肠道期旋毛形线虫感染的抵抗作用

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年

作者：骆泽妮吴安琪汪志锴潘晋孙希萌首都医科大学基础医学院病原生物学系首都医科大学基础医学院

目的探讨小鼠白细胞介素-4 (IL-4)对肠道期旋毛形线虫感染的抵抗作用。方法消化旋毛虫保种小鼠肌肉收集肌幼虫。超声破碎肌幼虫虫体后离心，过滤上清制备旋毛虫抗原。将10只野生型小鼠随机分成未感染组和感染组，每组5只；另随机取4只... 详细信息

目的探讨小鼠白细胞介素-4 (IL-4)对肠道期旋毛形线虫感染的抵抗作用。方法消化旋毛虫保种小鼠肌肉收集肌幼虫。超声破碎肌幼虫虫体后离心，过滤上清制备旋毛虫抗原。将10只野生型小鼠随机分成未感染组和感染组，每组5只；另随机取4只IL-4敲除（IL-4KO）鼠作为敲除感染组。感染组和敲除感染组每鼠灌胃旋毛虫肌幼虫400条，未感染组灌胃等体积PBS。感染旋毛虫后8 d，采集小鼠眼眶静脉血，取十二指肠和近端空肠2～3 cm，并分离肠系膜淋巴结。离心收集小鼠眼眶静脉血血清，ELISA检测单核细胞趋化因子（MCP-1）含量。十二指肠和近端空肠制备石蜡切片后进行苏木精-伊红（HE）染色，使用AperioImageScope12.4.3测量测量十二指肠、空肠的肠绒毛和隐窝的长度与杯状细胞的数量和大小，计算肠绒毛长度/隐窝长度的比值（V/C）和杯状细胞数/绒毛长度的比值（GC/V）。分离肠系膜淋巴结中的淋巴细胞，与旋毛虫抗原（10μg/ml）共培养72 h后收集细胞上清，高通量液相蛋白芯片（Luminex）技术检测IL-1β、IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、干扰素γ (IFN-γ)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)的含量。使用SPSS26.0统计软件对数据进行分析，两两比较采用独立样本t检验，多样本比较采用单因素方差分析。结果 ELISA结果显示，未感染组、感染组、敲除感染组小鼠血清中MCP-1含量分别为（344.90±21.80）、（350.50±38.30）、（467.94±190.01） pg/ml，敲除感染组高于感染组（t=0.681,P 0.05、 0.05)；敲除感染组十二指肠和空肠GC/V分别为9.66±0.88、7.33±0.88，均高于感染组（F=17.12、16.78，均P 0.05)；敲除感染组十二指肠和空肠杯状细胞大小分别为（12.39±1.17）、（11.05±0.60）μm，均大于感染组（F=18.47、16.22，均P <0.05）。Luminex结果显示，未感染组小鼠淋巴细胞培养上清中IL-1β、IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量分别为（0.39±0.03）、（1.02±0.07）、（0.72±0.36）、（0.62±0.34）、（3.01±1.01）、（0.32±0.01）、（1.53±0.85） pg/ml，感染组的含量分别为（0.45±0.03）、（1.03±0.04）、（1.00±0.38）、（0.64±0.16）、（0.62±0.24）、（0.57±0.09）、（0.94±0.31） pg/ml，敲除感染组的含量分别为（0.80±0.37）、（2.70±0.94）、（49.76±16.40）、（25.25±3.26）、（12.51±4.86）、（51.20±8.93）、（15.86±2.74） pg/ml，敲除感染组的IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、IFN-γ、TNF-α均高于感染组（F=5.52、24.73、48.72、5.00、123.10、50.55,P <0.05、0.01、0.01、0.05、0.01、0.01）。结论 IL-4在旋毛虫感染肠道期能够降低小鼠血清中MCP-1含量，减缓十二指肠及空肠的炎症反应，可能会影响炎性细胞因子的分泌；在小鼠旋毛虫感染肠道期起着保护性免疫作用，是感染的保护性关键因子，对于抵抗旋毛虫早期感染有重要作用。

关键词：旋毛形线虫 IL-4 肠道期