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双重核酸纸条快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly毒素基因方法的建立及试剂盒的研制

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南方医科大学学报 2025年

作者：刘岩杨建宇周钰娇丁文博张先宇高林然潘蓓珍杨继飞赵云冬北华大学医学技术学院临床生化及分子生物学检验教研室

目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA，以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因，分别用6-FAM标记p... 详细信息

目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA，以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因，分别用6-FAM标记prfA上游引物5'端，Biotin标记prfA下游引物5'端，Digoxin标记hly上游引物5'端和Biotin标记hly下游引物5'端，建立单核细胞增生李斯特菌的毒素基因检测方法，通过克隆转化、测序分析，克隆阳性对照品，研发试剂盒并对试剂盒特异性、灵敏度、复现性及稳定性进行评价，并通过样品检测对试剂盒进行验证。结果水煮法提取的单核细胞增生李斯特菌浓度为148.81±0.97 ng/μL,A260/A280在1.8～2.0范围内；PCR产物经克隆转化、测序对比，与GenBank数据库中基因序列的同源性均为100%；特异性检测，仅单核细胞增生李斯特菌为阳性结果，与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、蜡样芽胞杆菌无交叉反应；灵敏度检测，最低检测限为10-2 ng/μL，比琼脂糖凝胶电泳高10倍；复现性检测，不同实验室不同人员分别对核酸试纸条进行验证，结果一致；稳定性检测，在第6、9、12月对核酸试纸条进行验证，稳定性较好。样品检测结果显示，本试剂盒可准确快速的检出样品中单核细胞增生李斯特菌。结论本研究所研发的单核细胞增生李斯特菌双重毒素检测试剂盒可同时检测单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly毒素基因，具有特异性强、灵敏度高、复现性好、稳定性好等优点，对保障食品安全具有现实意义。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 prfA hly 双重核酸试纸条

高糖抑制蛋白KIAA0753和CCSAP表达并通过钙信号阻断小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的成骨分化

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中国药理学通报 2025年第3期41卷 456-465页

作者：王吉春钱正霞李梦雪汪长东重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院麻醉科重庆400016

目的探究高糖对蛋白KIAA0753和CCSAP的影响,以及高糖条件下KIAA0753和CCSAP与成骨分化以及钙信号通路三者之间的联系。方法利用5.5和25 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度的成骨培养基诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过Western blot检... 详细信息

目的探究高糖对蛋白KIAA0753和CCSAP的影响,以及高糖条件下KIAA0753和CCSAP与成骨分化以及钙信号通路三者之间的联系。方法利用5.5和25 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度的成骨培养基诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过Western blot检测KIAA0753和CCSAP蛋白表达情况;转染过表达质粒进入人胚肾细胞(HEK-293T),免疫共沉淀检测蛋白KIAA0753和CCSAP相互作用;利用成骨培养基分别在不同葡萄糖浓度和不同诱导时间处理MC3T3-E1细胞,试剂盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,Western blot检测KIAA0753、CCSAP、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)等蛋白的表达情况,然后再设置5.5、25 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)+OE-CCSAP组MC3T3-E1细胞,依次检测KIAA0753、OCN、OPN蛋白的表达情况以及ALP活性;利用高通量基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)中糖尿病鼠模型数据集筛选差异基因进行生物信息学分析;对MC3T3-E1细胞分别设置5.5、25 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)+OE-KIAA0753组,Western blot检测钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡbeta,CAMK2B)、受磷蛋白(phospholamban,PLN)蛋白的表达。结果与5.5 mmol·L^(-1)组相比,25 mmol·L^(-1)抑制成骨细胞中KIAA0753和CCSAP蛋白表达,且蛋白KIAA0753和CCSAP存在相互作用。同时25 mmol·L^(-1)也抑制成骨细胞ALP、OPN、OCN蛋白表达,在25 mmol·L^(-1)的条件下过表达CCSAP上调KIAA0753、OCN、OPN、ALP的表达。糖尿病鼠模型的差异基因主要富集在“信号受体、信号调控”等方面。25 mmol·L^(-1)葡萄糖抑制成骨细胞中CAMK2B、PLN蛋白的表达,且在25 mmol·L^(-1)的条件下过表达KIAA0753上调CAMK2B、PLN蛋白的表达。结论高糖抑制KIAA0753和CCSAP蛋白表达,抑制小鼠胚胎成骨细胞前体细胞成骨分化和钙信号传导,过表达CCSAP挽救高糖对成骨分化的抑制作用以及过表达KIAA0753逆转高糖对钙信号通路的抑制作用。

关键词：糖尿病 KIAA0753 CCSAP 蛋白相互作用成骨分化钙信号

幽门螺杆菌诱导线粒体未折叠蛋白反应对胃癌细胞增殖的影响

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安徽医科大学学报 2025年第2期60卷 300-306页

作者：陈吉丽李雷蕾陈源佳赵艳谢渊周建奖贵州医科大学基础医学院贵阳550000 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550000 贵州医科大学附属医院肿瘤科贵阳550000

目的从线粒体未折叠蛋白反应(UPR MT)角度研究幽门螺杆菌(Hp)诱导胃癌细胞增殖的机制。方法用Hp感染C57BL6/J小鼠、人胃癌细胞AGS和SGC-7901,提取细胞线粒体蛋白,Western blot检测UPR MT的相关指标:激活转录因子5(ATF5),热休克蛋白60(mt... 详细信息

目的从线粒体未折叠蛋白反应(UPR MT)角度研究幽门螺杆菌(Hp)诱导胃癌细胞增殖的机制。方法用Hp感染C57BL6/J小鼠、人胃癌细胞AGS和SGC-7901,提取细胞线粒体蛋白,Western blot检测UPR MT的相关指标:激活转录因子5(ATF5),热休克蛋白60(mtHSP60)、热休克蛋白70(mtHSP70)及线粒体蛋白酶(ClpP)的表达。用免疫组织化学定位4个蛋白质在小鼠胃组织中的表达部位。用Hp感染AGS和SGC-7901细胞,RTCA和CCK-8检测细胞增殖。最后,利用UALCAN数据库中TCGA样本分析4个指标在胃癌组织中的表达。结果Hp感染能显著促进C57BL6/J小鼠胃上皮细胞、人胃癌细胞AGS和SGC-7901线粒体中ATF5、mtHSP60、mtHSP70、ClpP的表达,促进胃癌细胞增殖。与TCGA样本中人正常胃组织比较,ATF5、mtHSP60、mtHSP70、ClpP在胃癌组织中高表达,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论Hp感染能够诱导胃上皮细胞及胃癌细胞发生UPR MT,促进细胞增殖。

关键词：幽门螺杆菌胃癌细胞线粒体未折叠蛋白反应细胞增殖线粒体蛋白激活转录因子5

过氧化物酶体增殖物激活受体介导的能量代谢重塑在肾疾病中的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2025年第2期41卷 238-248页

作者：戴祺慧杨萌刘新光广东省医学免疫与分子诊断重点实验室广东医科大学衰老研究所广东医科大学生物化学与分子生物学研究所广东医科大学医学技术学院广东东莞523808

随着患病率的持续上升,肾疾病成为全球范围内严重的公共卫生问题,严重影响患者的生活质量。肾病的发病机制较为复杂为其防治带来了困难。研究发现,代谢稳态失衡通常会影响肾功能,进而引起肾病变。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome... 详细信息

随着患病率的持续上升,肾疾病成为全球范围内严重的公共卫生问题,严重影响患者的生活质量。肾病的发病机制较为复杂为其防治带来了困难。研究发现,代谢稳态失衡通常会影响肾功能,进而引起肾病变。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)作为内源性配体激活的转录因子,在调节代谢分子网络特别是氧化磷酸化、脂代谢和葡萄糖代谢中发挥重要作用。激活PPAR能够改善线粒体损伤,促进脂肪酸分解并减轻胰岛素抵抗,从而恢复肾的代谢功能和缓解肾的病变。尽管现已开发了多种激活PPAR的小分子药物,但该类药物在临床试验阶段出现不良反应。目前,临床治疗肾疾病仍缺乏安全有效的用药方案。精细解析PPAR家族调控肾的细胞能量代谢的分子机制,寻找和开发新的靶向PPAR及其调控的下游代谢途径的小分子药物,对于肾疾病的认知和诊治具有重要的意义。另一方面,明确不同肾疾病发生发展过程中的代谢变化,针对性地应用靶向PPAR的药物或策略对肾疾病的治疗也尤为重要。本文概述了PPAR家族成员调控靶基因转录的方式及其在氧化磷酸化和糖脂代谢重塑中的作用,并归纳总结了PPAR表达或活性的改变对急性、慢性肾病和年龄相关性肾疾病的影响,有望为肾疾病的防治提供新的思路和理论支撑。

关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体肾能量代谢肾脏疾病

TIE1的泛癌图谱及其在宫颈癌中的潜在作用机制

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海南医科大学学报 2025年

作者：韦洪建王鑫刘芯言林冰洁王齐心史永华新疆医科大学基础医学院病理学教研室新疆医科大学临床医学部新疆地方病分子生物学重点实验室

目的：探讨TIE1在人体肿瘤组织中的表达谱及其潜在的临床意义。方法：利用TIMER2、GEPIA2、cBioPortal、UALCAN和STRING等在线网站和数据库，分析不同类型癌症中TIE1的表达与预后、遗传改变、肿瘤免疫及甲基化状态之间的关系。在本研究... 详细信息

目的：探讨TIE1在人体肿瘤组织中的表达谱及其潜在的临床意义。方法：利用TIMER2、GEPIA2、cBioPortal、UALCAN和STRING等在线网站和数据库，分析不同类型癌症中TIE1的表达与预后、遗传改变、肿瘤免疫及甲基化状态之间的关系。在本研究中，使用宫颈癌患者的数据集分析了TIE1表达，并通过富集分析研究了TIE1的分子机制。通过划痕及Transwell侵袭实验进行体外研究，以确定TIE1在宫颈癌细胞中的生物学功能。结果：泛癌分析显示，TIE1在某些肿瘤中表达上调，其表达与癌症患者的预后显著相关。经数据库分析发现TIE1在皮肤黑色素瘤（Skin Cutaneous Melanoma，SKCM）患者中的基因改变频率最高。此外，TIE1的表达与某些肿瘤中的免疫细胞浸润密切相关。在某些类型的肿瘤中，TIE1启动子的甲基化水平显示出显著差异。通过KEGG富集分析，我们发现与TIE1相关的基因在Ras、PI3K-Akt、RAP1和MAPK信号通路中有较高的富集程度。在宫颈癌数据集GO富集分析也表明，这些基因在与外部包裹结构组织、含胶原蛋白的细胞外基质以及与糖胺聚糖结合相关的通路中富集。此外，体外实验的结果进一步证实了TIE1在促进宫颈癌细胞迁移和侵袭方面的作用。结论：TIE1的表达水平与临床预后、基因突变以及肿瘤细胞周围的免疫浸润状态之间存在密切的关联性。本研究为深入理解TIE1在肿瘤发生和发展过程中的作用提供了关键基础数据。

关键词： TIE1 生存分析免疫浸润分析甲基化分析富集分析

双重核酸纸条快速检测单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly毒素基因

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南方医科大学学报 2025年第2期45卷 387-394页

作者：刘岩杨建宇周钰娇丁文博张先宇高林然潘蓓珍杨继飞赵云冬北华大学医学技术学院临床生化及分子生物学检验教研室吉林吉林132013

目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA,以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因,分别用6-FAM标记prfA... 详细信息

目的基于聚合酶链反应和胶体金技术相结合的双重核酸试纸条方法快速检测单核细胞增生李斯特菌prfA和hly两种毒素基因。方法采用加热煮沸法提取单核细胞增生李斯特菌DNA,以单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly为靶基因,分别用6-FAM标记prfA上游引物5'端,Biotin标记prfA下游引物5'端,Digoxin标记hly上游引物5'端和Biotin标记hly下游引物5'端,建立单核细胞增生李斯特菌的毒素基因检测方法,通过克隆转化、测序分析,克隆阳性对照品,研发试剂盒并对试剂盒特异性、灵敏度、复现性及稳定性进行评价,并通过样品检测对试剂盒进行验证。结果水煮法提取的单核细胞增生李斯特菌浓度为148.81±0.97ng/μL,A_(260)/A_(280)在1.8~2.0范围内;PCR产物经克隆转化、测序对比,与GenBank数据库中基因序列的同源性均为100%;特异性检测,仅单核细胞增生李斯特菌为阳性结果,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、蜡样芽胞杆菌无交叉反应;灵敏度检测,最低检-2测限为10 ng/μL,比琼脂糖凝胶电泳高10倍;复现性检测,不同实验室不同人员分别对核酸试纸条进行验证,结果一致;稳定性检测,在第6、9、12月对核酸试纸条进行验证,稳定性较好。样品检测结果显示,本试剂盒可准确快速的检出样品中单核细胞增生李斯特菌。结论本剂盒可同时检测单核细胞增生李斯特菌的prfA和hly毒素基因,具有特异性强、灵敏度高、复现性好、稳定性好等优点,对保障食品安全具有现实意义。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 prfA hly 双重核酸试纸条

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乙肝病毒核酸检测方法研究进展

重庆医科大学学报 2025年第2期50卷 152-157页

作者：李亚兰马圆艳汪德强蔡雪飞重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断重点实验室重庆400016

乙型肝炎病毒感染是一个重大公共卫生问题,为了避免发展成为肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌,患者通常需要长期服药治疗,检测血清中乙肝病毒核酸的动态变化水平可以作为临床安全停药的重要指标。对于乙肝患者的“精准治疗”,提高乙肝病毒... 详细信息

乙型肝炎病毒感染是一个重大公共卫生问题,为了避免发展成为肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌,患者通常需要长期服药治疗,检测血清中乙肝病毒核酸的动态变化水平可以作为临床安全停药的重要指标。对于乙肝患者的“精准治疗”,提高乙肝病毒核酸检测的特异度和灵敏度以及对结果的科学解读都十分重要。本文简要对目前已有检测方法的运用场景及其优缺点进行总结,为将来在临床中针对不同情况选择不同方法提供参考。

关键词：核酸检测乙肝病毒研究进展

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佛手柑内酯延缓骨关节炎软骨细胞衰老

陆军军医大学学报 2025年第3期47卷 262-274页

作者：叶元兰刘恺文潘一鸣郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆

目的基于网络药理学、分子对接技术并结合体外实验探讨佛手柑内酯(Bergapten)治疗骨关节炎(osteoarthritis,OA)的作用与机制。方法检索Super-Pred、Swiss Target Prediction、Drug Bank等相关数据库获取佛手柑内酯的功能靶点和OA疾病相... 详细信息

目的基于网络药理学、分子对接技术并结合体外实验探讨佛手柑内酯(Bergapten)治疗骨关节炎(osteoarthritis,OA)的作用与机制。方法检索Super-Pred、Swiss Target Prediction、Drug Bank等相关数据库获取佛手柑内酯的功能靶点和OA疾病相关作用靶点,将靶点通过Venny 2.1.0进行交集,利用STRING数据库进行蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)分析,利用AutoDock Vina软件进行分子对接。在C28/I2细胞中进行体外验证实验,CCK-8检测佛手柑内酯对C28/I2细胞增殖活性的影响,RT-qPCR和细胞免疫荧光检测增殖凋亡、炎症和衰老相关分泌表型(senescence associated secretory phenotype,SASP)因子的表达情况。使用细胞衰老β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)染色试剂盒检测SA-β-Gal水平的变化。结果筛选得到145个佛手柑内酯治疗OA的潜在作用靶点。PPI分析发现HSP90AA1、EGFR、HIF1A、PIK3CA 4个潜在核心靶点,且分子对接可形成较稳定的复合物。CCK-8发现,10μmol/L佛手柑内酯处理48 h,C28/I2细胞的存活率最高(P<0.05)。细胞免疫荧光、RT-qPCR和Western Blot实验显示,佛手柑内酯处理后,细胞增殖标志物PCNA、CCND1和CCNE1的表达增加(P<0.05),而凋亡指标Caspase3和BAX的表达降低(P<0.05)。同时,佛手柑内酯处理后,IL-1β诱导的炎性因子IL-6和TNF-α的表达降低,而抗炎因子IL-4和IL-10的表达增加(P<0.05)。SASP因子P16、P21、MMP9和MMP13的表达也显著减少(P<0.05)。Sa-β-Gal染色显示,IL-1β诱导后C28/I2细胞的β-半乳糖苷酶水平显著增加(P<0.05),而佛手柑内酯处理后,β-半乳糖苷酶染色的阳性细胞率显著降低(P<0.05)。结论佛手柑内酯可降低IL-1β刺激的软骨细胞中的SASP因子IL-6、TNF-α、P16、P21、MMP9、MMP13等的表达,从而在延缓OA进展中发挥其抗炎、抗衰老的作用。

关键词：骨关节炎 5-甲氧基补骨脂素网络药理学衰老相关分泌表型

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合成朱砂与天然朱砂的鉴别特征研究

中国药学杂志 2025年第04期 334-348页

作者：魏梦佳辛雪颖段雯雯李娆娆王翘楚顾雪竹骆璐中国中医科学院中药研究所美国乔治城大学医学中心生物化学及分子生物学系

目的研究合成朱砂和天然朱砂的晶体构型和物相组成，对比合成朱砂和天然朱砂光谱学特征，分析其显微特征及微量元素差异。方法采用粉晶X射线衍射、拉曼光谱、傅里叶红外光谱、电子探针微区分析、电感耦合等离子体质谱等方法，探索合... 详细信息

目的研究合成朱砂和天然朱砂的晶体构型和物相组成，对比合成朱砂和天然朱砂光谱学特征，分析其显微特征及微量元素差异。方法采用粉晶X射线衍射、拉曼光谱、傅里叶红外光谱、电子探针微区分析、电感耦合等离子体质谱等方法，探索合成朱砂和天然朱砂的鉴别方法。结果研究表明合成朱砂和天然朱砂的晶型相同；天然朱砂中常见的杂质为石英、黄铁矿、方解石、辉锑矿等；合成朱砂中含有极少量的方解石杂质，质量较为均一；通过使用电子探针微区分析技术或粉晶X射线衍射技术结合偏光显微法，可有效对合成朱砂和天然朱砂中的杂质进行分析。结论合成朱砂和天然朱砂的中红外光谱和拉曼光谱特征相似，其特征微量元素一致，通过等离子体电感耦合质谱法，可将铁、镁、锌3种元素作为二者鉴别的参考。

关键词：合成朱砂天然朱砂鉴别质量控制