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EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

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吉林大学学报（医学版） 2024年第3期50卷 831-839页

作者：何嘉文李友廖科棋李胜男广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东湛江524002 广东医科大学附属医院神经病学研究所广东湛江524002

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和... 详细信息

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。

关键词：真核细胞翻译起始因子4A3 短发夹RNA 慢病毒稳定转染细胞系 Neuro-2a细胞

基于一测多评结合熵权逼近理想解排序法对绵马贯众炭的质量评价

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中草药 2024年第7期55卷 2397-2404页

作者：董双涛徐丽霞高建平李宝霞山西药科职业学院山西太原030031 山西医科大学药学院山西晋中030600

目的建立多元统计分析和熵权逼近理想解排序法的绵马贯众炭Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizoma Carbonisatum质量评价方法。方法收集不同产地的16批次样品,以绵马贯众素ABBA为内参物,采用一测多评(QAMS)法同时检测绵马贯众炭中白绵... 详细信息

目的建立多元统计分析和熵权逼近理想解排序法的绵马贯众炭Dryopteridis Crassirhizomatis Rhizoma Carbonisatum质量评价方法。方法收集不同产地的16批次样品,以绵马贯众素ABBA为内参物,采用一测多评(QAMS)法同时检测绵马贯众炭中白绵马素AA、二去甲基伪绵马素AA、伪绵马素、白绵马素AP、绵马酸ABA、绵马贯众素ABBA、山柰素、大豆素、去甲氧基荚果蕨素、异槲皮素和圣草次苷含量;采用多元统计分析和熵权逼近理想解排序(entropy weight technique for order preferenceby similarity to ideal solution,EW-TOPSIS)法对绵马贯众炭质量进行评价。结果外标法方法学验证符合《中国药典》2020年版规定,所建立的相对校正因子耐用性良好,QAMS法可用于绵马贯众炭中11个成分含量的同步检测;多元统计分析结果显示16批样品呈现一定的区域差异,去甲氧基荚果蕨素、绵马贯众素ABBA、伪绵马素和山柰素是引起不同批次绵马贯众炭分组的主要变量因子,EW-TOPSIS法结果显示16批绵马贯众炭质量评价贴近度(Jb)为0.1371~0.7067,S12~S16的排序位于前5位,表明吉林产地所得绵马贯众炭整体质量较好。结论所建立的集HPLC-QAMS、多元统计分析及EW-TOPSIS法于一身的综合质量评价方法,省时便捷,为绵马贯众炭的品质评价和质量控制提供参考。

关键词：粗茎鳞毛蕨绵马贯众炭一测多评法多元统计分析主成分分析正交偏最小二乘判别分析法熵权TOPSIS法白绵马素AA 伪绵马素白绵马素AP 绵马贯众素ABBA

激励理论在政务服务中心临聘人员管理中的有效运用及策略问题研究

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公关世界 2024年第4期 28-30页

作者：喻靖婷西南医科大学

临聘人员是政务服务中心工作人员的重要组成部分，更好激励临聘人员，调动工作积极性，对提升政务服务效能有很大帮助。通过对H县政务服务中心进行调研，基于双因素理论和公平理论分析，发现政务服务中心临聘人员的激励机制不合理，临... 详细信息

临聘人员是政务服务中心工作人员的重要组成部分，更好激励临聘人员，调动工作积极性，对提升政务服务效能有很大帮助。通过对H县政务服务中心进行调研，基于双因素理论和公平理论分析，发现政务服务中心临聘人员的激励机制不合理，临聘人员薪资福利待遇较低、考核体系不健全、晋升空间小，与正式职工存在同工不同酬等问题，导致工作积极性普遍较低。对此，建议通过激励因素和保健因素出发，提升薪资福利待遇、加强职业培训、健全考核评价体系，以充分激发政务服务中心临聘人员工作积极性，更好地服务办事企业群众。

关键词：政务服务中心临聘人员激励理论

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书院制下思政教育中的环境资源整合探索

吉林教育 2024年第11期 51-53页

作者：魏兆瑜罗漫妥林蕾广州医科大学

书院制教育是近年来高校教育教学改革的创新之举，采用全方位浸润育人模式开展思想政治教育工作，实现环境资源整合，践行环境育人理念。当前的书院建设实践过程中，存在着思政工作黏性不足、协同育人效果欠佳、党建工作机制不够完善等... 详细信息

书院制教育是近年来高校教育教学改革的创新之举，采用全方位浸润育人模式开展思想政治教育工作，实现环境资源整合，践行环境育人理念。当前的书院建设实践过程中，存在着思政工作黏性不足、协同育人效果欠佳、党建工作机制不够完善等问题。充分发挥书院制的育人功能，需要保留传统高校学生工作的优势，守正创新，结合时代特征，利用新的阵地和空间，推动思政力量下沉社区，实现多元教育主体协同育人。积极融入思政教育元素，构建大思政育人格局，打通“三全育人”的最后一公里，以高质量教育立德树人。

关键词：书院制思政教育资源整合环境育人

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二阶非线性抛物方程的B样条有限元法

吉林大学学报(理学版) 2024年第4期 878-885页

作者：秦丹丹王大铭黄文竹空军航空大学基础部贵州医科大学生物与工程学院

首先，用二次B样条有限元法求解Fisher-Kolmogorov（FK）方程，证明半离散格式与全离散格式解的稳定性与收敛性；其次，用Crank-Nicolson方法离散时间变量，得到近似解的收敛阶为O(（Δt）2+h3);最后，用数值算例验证了理论分析结果及B... 详细信息

首先，用二次B样条有限元法求解Fisher-Kolmogorov（FK）方程，证明半离散格式与全离散格式解的稳定性与收敛性；其次，用Crank-Nicolson方法离散时间变量，得到近似解的收敛阶为O(（Δt）2+h3);最后，用数值算例验证了理论分析结果及B样条有限元法的有效性.

关键词： Fisher-Kolmogorov方程二次B样条有限元法稳定性收敛性

颈椎前路Hybrid手术和颈椎后路单开门椎管扩大成形术治疗多节段脊髓型颈椎病临床疗效分析

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吉林大学学报（医学版） 2024年第1期50卷 228-235页

作者：王理想李春根柳根哲赵子义赵思浩陈超祝永刚李伟北京中医药大学临床医学院北京100029 首都医科大学附属北京中医医院骨科北京100010

目的:分析颈椎前路Hybrid手术和颈椎后路单开门椎管扩大成形术(EODL)治疗多节段脊髓型颈椎病的疗效,探讨多节段脊髓型颈椎病患者手术方式的选择。方法:对2017年7月—2020年7月在首都医科大学附属北京中医医院手术治疗的70例多节段脊髓... 详细信息

目的:分析颈椎前路Hybrid手术和颈椎后路单开门椎管扩大成形术(EODL)治疗多节段脊髓型颈椎病的疗效,探讨多节段脊髓型颈椎病患者手术方式的选择。方法:对2017年7月—2020年7月在首都医科大学附属北京中医医院手术治疗的70例多节段脊髓型颈椎病患者进行回顾性分析,根据手术方式不同,分为前路组35例和后路组35例,前路组患者行Hybrid手术[颈椎前路椎间盘切除融合术(ACDF)联合人工颈椎间盘置换术(ACDR)],后路组患者行EODL。记录2组患者住院时间、手术时间、术中出血量和术后引流量,通过日本骨科协会(JOA)评分、JOA改善率、颈椎残障功能指数(NDI)、疼痛视觉模拟评分(VAS)和术后满意度评分进行疗效评价,统计2组患者术后并发症发生情况。结果:与后路组比较,前路组患者术中出血量、术后引流量、住院时间和手术时间均明显减少(P0.05)。末次随访时,与后路组比较,前路组患者JOA评分和JOA改善率明显升高(P0.05)。结论:颈椎前路Hybrid手术和EODL在治疗多节段脊髓型颈椎病方面均取得了较为满意的疗效。Hybrid手术具有出血量少和手术时间短等优点,临床上应根据患者实际情况选择最适宜的术式。

关键词：脊髓型颈椎病颈椎后路椎管减压颈椎前路手术 Hybrid手术

孕晚期妇女母胎依恋现状及其与分娩恐惧的相关性研究

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军事护理 2024年第3期41卷 1-4页

作者：李海云张国春褚梁梁王君芝山东第一医科大学第一附属医院护理部山东济南250014

目的了解孕晚期妇女母胎依恋现状,分析其影响因素,并探讨其与分娩恐惧的相关性,为实施干预措施提供科学的依据。方法2023年1-2月,采用便利抽样法选取济南市某三级甲等医院就诊的孕晚期妇女329名为研究对象,采用分娩态度量表、产前依恋... 详细信息

目的了解孕晚期妇女母胎依恋现状,分析其影响因素,并探讨其与分娩恐惧的相关性,为实施干预措施提供科学的依据。方法2023年1-2月,采用便利抽样法选取济南市某三级甲等医院就诊的孕晚期妇女329名为研究对象,采用分娩态度量表、产前依恋问卷等对其调查。结果孕晚期妇女分娩恐惧总分为(29.12±6.39)分,母胎依恋总分为(48.54±7.85)分。不同年龄、胎次、文化程度以及是否计划内妊娠、有无孕期并发症和孕期抑郁情绪等的孕晚期妇女,母胎依恋得分差异均有统计学意义(均P<0.05)。分娩恐惧与母胎依恋得分呈负相关(r=-0.471,P<0.001)。年龄、胎次、长期居住地、文化程度、是否计划内妊娠、孕期睡眠时间≥10 h/d、有无孕期并发症和孕期抑郁情绪是母胎依恋的主要影响因素(均P<0.05)。结论孕晚期妇女分娩恐惧和母胎依恋处于中等水平,两者呈负相关。医护人员可采取针对性的干预预防孕妇分娩恐惧,从而改善母胎依恋关系。

关键词：孕晚期分娩恐惧母胎依恋横断面研究相关性

沉默FOXK1基因对胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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吉林大学学报（医学版） 2024年第2期50卷 371-378页

作者：陈爽李红锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121000

目的:探讨沉默叉头框K1(FOXK1)对胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA)数据库查询在胃癌组织和正常胃组织中FOXK1 mRNA表达水平;利用化学合成的si-FOXK1体外转染... 详细信息

目的:探讨沉默叉头框K1(FOXK1)对胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA)数据库查询在胃癌组织和正常胃组织中FOXK1 mRNA表达水平;利用化学合成的si-FOXK1体外转染胃癌HGC-27细胞,实验分为空白对照组、nc-FOXK1组和si-FOXK1组,采用Western blotting法评估各组的转染效率,MTT法检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的增殖能力,克隆形成实验检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的克隆形成数,细胞划痕实验检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的迁移率,Transwell小室实验检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的细胞迁移数和细胞侵袭数,Western blotting法检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞中核因子κB(NF-κB)通路相关蛋白[NF-κB p65和磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)]的表达水平。结果:GEPIA数据库查询,在胃癌组织中FOXK1 mRNA表达水平高于正常胃组织(P<0.05);Western blotting法检测,在胃癌HGC-27细胞中FOXK1蛋白表达水平高于人正常胃黏膜GES-1细胞(P<0.01);与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组FOXK1蛋白表达水平明显降低(P<0.01);MTT法检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞的增殖能力降低(P<0.05);克隆形成实验检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞克隆形成数减少(P<0.05);细胞划痕实验检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌细胞的迁移率降低(P<0.05);Transwell小室实验检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05);Western blotting法检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞中p-NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:FOXK1在胃癌HGC-27细胞中高表达,沉默FOXK1可抑制胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与NF-κB通路有关。

关键词：叉头框K1 胃肿瘤细胞增殖细胞迁移细胞侵袭核因子κB

微小RNA-124-3p靶向胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

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中国妇幼保健 2024年第1期39卷 128-132页

作者：李德复刘海艳明林极锦州医科大学辽宁锦州121001 磐石市医院妇产科吉林磐石132300 锦州医科大学附属第一医院

目的探讨微小RNA-124-3p(miR-124-3p)靶向胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响。方法选取2015年1月—2021年1月磐石市医院保存的子宫内膜癌组织及癌旁组织20例,分析miR-124-3p在癌组织、癌旁组... 详细信息

目的探讨微小RNA-124-3p(miR-124-3p)靶向胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响。方法选取2015年1月—2021年1月磐石市医院保存的子宫内膜癌组织及癌旁组织20例,分析miR-124-3p在癌组织、癌旁组织中的表达及与患者临床病理特征的关系。用子宫内膜癌MFE-280细胞进行miR-124-3p沉默和过表达转染,分为空白组、miR-124-3p-inhibitor组、miR-124-3p-mimic组,分析调控miR-124-3p表达对子宫内膜癌MFE-280细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学行为的影响。采用双荧光素酶报告实验预测miR-124-3p的靶基因,分析miR-124-3p对子宫内膜癌MFE-280细胞IGF2BP1表达量的影响。结果子宫内膜癌组织miR-124-3p表达量(1.01±0.09)低于癌旁组织(1.89±0.25),差异有统计学意义(t=14.810,P<0.05)。miR-124-3p与FIGO分期、组织学分级、淋巴结转移、肌层浸润深度有关,miR-124-3p在Ⅳ期、G3分级、有淋巴结转移、肌层浸润≥1/2的患者中表达降低(均P<0.05)。miR-124-3p-inhibitor组72 h细胞增殖率[(52.31±3.44)%vs.(40.12±2.32)%]、迁移率[(57.63±7.89)%vs.(45.65±6.72)%]、细胞穿膜数[(348.97±40.76)个vs.(245.63±24.53)个]高于空白组,差异均有统计学意义(t=9.290、3.655、6.869,均P<0.05),miR-124-3p-inhibitor组凋亡率[(20.12±1.12)%vs.(31.45±6.49)%]低于空白组,差异有统计学意义(t=6.394,P<0.05)。miR-124-3p-mimic组72h细胞增殖率[(17.89±1.54)%vs.(52.31±3.44)%]、迁移率[(16.87±1.12)%vs.(57.63±7.89)%]、细胞穿膜数[(55.64±6.91)个vs.(348.97±40.76)个]低于miR-124-3p-inhibitor组,差异均有统计学意义(t=28.880、16.170、22.440,均P<0.05),凋亡率[(77.16±10.25)%vs.(20.12±1.12)%]高于miR-124-3p-inhibitor组,差异有统计学意义(t=17.490,P<0.05)。双荧光素酶报告实验发现:miR-124-3p可抑制WT-IGF2BP1的3’-UTR荧光素酶活性,对MUT-IGF2BP1的3’-UTR荧光素酶活性无影响,且相关性分析显示miR-124-3p与IGF2BP1在子宫内膜癌中呈负相关(r=-0.409,P<0.05)。miR-124-3p-inhibitor组IGF2BP1表达量(2.31±0.19 vs.1.34±0.14)高于空白组,差异有统计学意义(t=13.000,P<0.05);miR-124-3p-mimic组IGF2BP1表达量(0.68±0.10 vs.2.31±0.19)低于miR-124-3p-inhibitor组,差异均有统计学意义(t=24.010,P<0.05)。结论miR-124-3p在子宫内膜癌中低表达,过表达处理后经靶向调控IGF2BP1表达而影响子宫内膜癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进凋亡。

关键词：微小RNA-124-3p 胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1 子宫内膜癌细胞生物学行为