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副猪嗜血杆菌CDT三顺反子的表达、组装及生物学活性

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中国兽医学报 2024年第2期44卷 283-289页

作者：李军星余斌徐丽华苏菲叶十一袁秀芳浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021

副猪嗜血杆菌是猪的常见病原菌,以异源三聚体形式分泌到胞外环境的细胞致死性膨胀毒素(CDT)是该菌重要的毒力因子,制备完整的重组CDT对于其功能研究至关重要。本研究构建了可用于同时表达CDT 3个亚基的三顺反子重组质粒,优化了完整毒素... 详细信息

副猪嗜血杆菌是猪的常见病原菌,以异源三聚体形式分泌到胞外环境的细胞致死性膨胀毒素(CDT)是该菌重要的毒力因子,制备完整的重组CDT对于其功能研究至关重要。本研究构建了可用于同时表达CDT 3个亚基的三顺反子重组质粒,优化了完整毒素三聚体的体外组装及纯化方法,并验证了重组三聚体毒素的生物学活性。结果显示,CDT 3个亚基以CdtA/CdtB/CdtC-his方式组合时,按0.1 g/L等体积混合,在PBS中以尿素浓度梯度透析时组装效果最好。构建的重组三顺反子质粒在大肠杆菌中可以同时表达出比例相当的3个CDT亚基,并且均以包涵体形式存在,经包涵体离心粗纯化后,即可用于重组三聚体CDT的组装。组装的三聚体CDT经亲和层析及分子筛层析纯化,得到高纯度的完整毒素。完整毒素可以引起Marc145细胞体积明显膨胀,且分裂周期停滞于G2/M期的细胞比例显著增加。结果表明,本研究建立了一种简单有效的副猪嗜血杆菌重组CDT完整毒素制备方法,所制备的CDT具有良好的生物学活性。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死性膨胀毒素三顺反子质粒完整毒素

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吉林省肉牛产业政企联动发展模式

吉林畜牧兽医 2024年第6期45卷 1-3页

作者：安冬杨林巍野郭延辉冯凯赵楚琦邵洪泽高启臣吉林省畜牧兽医科学研究院吉林长春130000 延边大学吉林延吉133002 榆树市动物疫病预防控制中心吉林长春130400

按照国家领导的指示,积极响应中央一号文件提出:“构建多元化食物供给体系-树立大食物观”“推动农产品加工业优化升级”“强化农民增收举措”等多项指导思想。支持农户发展特色种养、林下经济等家庭经营项目,推进畜产品生产和初加工、... 详细信息

按照国家领导的指示,积极响应中央一号文件提出:“构建多元化食物供给体系-树立大食物观”“推动农产品加工业优化升级”“强化农民增收举措”等多项指导思想。支持农户发展特色种养、林下经济等家庭经营项目,推进畜产品生产和初加工、精深加工等协同发展,落实“一主六双”高质量发展战略。结合消费者对牛肉需求量的增加,吉林省凭借农业大省年产4000万吨秸秆的优势,启动“秸秆变肉”暨千万头肉牛工程,打造千万头肉牛工程,各地借助政府、龙头养殖企业、行业协会、企业服务等多种平台载体积极开展模式探索,促进吉林省肉牛产业快速发展。本文将集中介绍以“政府+企业”为代表的新型发展模式,加快推进肉牛产业发展。

关键词：肉牛发展模式企业政府

2012—2021年青藏高原牦牛源沙门菌流行病学调查

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中国动物传染病学报 2024年第1期32卷 202-206页

作者：班马泽郎李天娇周赛赛吴丹卢姊豪宋仁德罗晓林赵索南马进寿参木友石红梅索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院林芝860000 青海玉树藏族自治州畜牧兽医工作站玉树815400 四川省草原科学研究院成都610097 青海省海北畜牧兽医科学研究所海北812200 青海省大通种牛场大通810102 西藏农牧科学院草原研究所拉萨850000 甘南州畜牧工作站甘南747000

为了明确青藏高原地区牦牛感染沙门菌(SE)情况,该研究采用ELISA双抗体夹心法,对2012—2021年采集自西藏、青海、甘肃、四川1725份牦牛血清样品进行SE抗体检测。结果显示:1725份牦牛血清中检测出SE抗体总阳性率为23.54%(406/1725),西藏... 详细信息

为了明确青藏高原地区牦牛感染沙门菌(SE)情况,该研究采用ELISA双抗体夹心法,对2012—2021年采集自西藏、青海、甘肃、四川1725份牦牛血清样品进行SE抗体检测。结果显示:1725份牦牛血清中检测出SE抗体总阳性率为23.54%(406/1725),西藏地区牦牛SE阳性率与其他地区相比较高;2012—2021年青藏高原地区牦牛血清SE抗体年阳性率分别为7.35%、46.02%、15.31%、17.68%、8.79%、19.84%、6.04%、23.64%、14.81%、74.64%;牦牛在不同海拔感染SE的阳性率分别为13.67%(2900~3400 m)、14.61%(3400~3900 m)、28.62%(3900~4400 m)、34.72%(4400 m以上);不同性别牦牛感染SE平均阳性率分别为公(25.61%)、母(21.99%);4省牦牛感染SE阳性率分别为西藏(27.67%)、青海(13.50%)、甘肃(13.33%)、四川(1.89%)。本研究结果可为了解青藏高原牦牛SE病的流行病学情况,提供参考。

关键词：青藏高原牦牛沙门菌流行病学

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电导抑制-离子色谱法测定有机酸化剂中11种有机酸含量

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动物营养学报 2024年第3期36卷 2031-2040页

作者：谢秀兰徐菲中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

本试验旨在建立一种同时检测有机酸化剂中11种有机酸含量的分析方法。样品中有机酸经提取后,以0.5 mmol/L硫酸水溶液∶丙酮∶乙腈=84∶6∶10为淋洗液等度洗脱,经Organic Acids 250/7.8分析柱分离,柱温30℃,流速0.5 mL/min,进样体积20μL... 详细信息

本试验旨在建立一种同时检测有机酸化剂中11种有机酸含量的分析方法。样品中有机酸经提取后,以0.5 mmol/L硫酸水溶液∶丙酮∶乙腈=84∶6∶10为淋洗液等度洗脱,经Organic Acids 250/7.8分析柱分离,柱温30℃,流速0.5 mL/min,进样体积20μL,采用电导抑制检测器进行外标法定量。结果显示:11种有机酸含量在一定范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9994),检出限介于0.01~0.11 mg/L,11种有机酸3个不同添加水平加标回收率处于92.9%~112.2%,相对标准偏差均小于2.4%。本方法简便高效,精密度、准确度良好,线性范围宽,能同时分离有机酸化剂中11种有机酸。

关键词：离子色谱有机酸化剂有机酸

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畜禽遗传资源价值框架与评估方法研究进展

中国畜牧杂志 2024年

作者：马卓李同斌浦华赵凯 1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 2.无棣县畜牧兽医管理服务中心中国农业科学院北京畜牧兽医研究所无棣县畜牧兽医管理服务中心

畜禽遗传资源是保障国家畜产品有效供给的战略性资源，是畜牧科技创新与现代种业发展的物质基础。开展畜禽遗传资源价值评估，是促进我国畜禽遗传资源保护和开发利用的现实选择。本文综述了遗传资源价值框架和评估方法，并评述了畜禽遗... 详细信息

畜禽遗传资源是保障国家畜产品有效供给的战略性资源，是畜牧科技创新与现代种业发展的物质基础。开展畜禽遗传资源价值评估，是促进我国畜禽遗传资源保护和开发利用的现实选择。本文综述了遗传资源价值框架和评估方法，并评述了畜禽遗传资源价值评估实证研究中广泛采用的选择实验法，以期为建立我国畜禽遗传资源价值评估体系提供参考。

关键词：畜禽遗传资源价值框架评估方法选择实验法

非洲猪瘟病毒p30蛋白在本氏烟草中的表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医学报 2024年第1期44卷 12-19,28页

作者：刘悦魏天张春雨张建峰王成宇张芳毓朱日宁鞠安琪王思月曲磊张守峰扈荣良梁静王永志吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118 吉林省农业科学院畜牧兽医研究所吉林长春130124 中国农业科学院长春兽医研究所吉林长春130122

为建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体间接ELISA检测方法,利用马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)介导的植物生物反应器在本氏烟草中表达ASFV p30蛋白,并以表达的蛋白作为包被抗原,对间接ELISA各反应条件进行优化... 详细信息

为建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体间接ELISA检测方法,利用马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)介导的植物生物反应器在本氏烟草中表达ASFV p30蛋白,并以表达的蛋白作为包被抗原,对间接ELISA各反应条件进行优化。依据ASFV SY-18株的CP204L(p30)基因序列,按照本氏烟草密码子的偏好性,对p30基因(231~536 bp)的核苷酸序列进行优化、人工合成及克隆,通过In-Fusion连接技术将扩增的p30基因插入到PVY基因组的P1和HC-Pro基因之间,构建PVY-p30重组病毒质粒,以摩擦的方式将质粒接种本氏烟草叶片,14 d后,通过RT-PCR和Western blot分析目的基因的转录和重组蛋白的表达情况,并利用Ni-NTA-琼脂糖亲和层析柱纯化本氏烟草中表达的p30重组蛋白,Western blot分析p30重组蛋白的纯化效果和反应原性,将纯化后的p30重组蛋白作为包被抗原,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,构建的PVY-p30重组病毒能够系统性侵染本氏烟草;p30重组蛋白能够在本氏烟草叶片中表达,且具有良好的反应原性;纯化的p30重组蛋白效果较好,能够被p30蛋白单克隆抗体识别。建立的ELISA检测方法最佳反应条件为抗原质量浓度0.5 mg/L,37℃包被1 h;待检血清1∶400倍稀释,37℃孵育0.5 h;HRP标记二抗37℃孵育0.5 h;TMB室温避光显色10 min;阴阳性临界值为0.461。当ASFV阳性血清稀释度为1∶2560时,仍检测为阳性,具有较高的敏感性;该方法与其他常见病阳性血清不发生交叉反应,能够特异性地检测ASFV抗体;重复性试验显示批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%;该方法与ASFV商品化检测试剂盒相比,总体符合率为85.0%。结果表明,本研究构建的PVY-p30重组病毒载体能介导p30重组蛋白在本氏烟草中表达,以植物表达的p30重组蛋白为抗原建立的ASFV抗体间接ELISA检测方法可用于疾病的临床检测及疫情监测,同时为可饲疫苗的研发提供了基础材料。

关键词：间接ELISA 非洲猪瘟病毒马铃薯Y病毒植物生物反应器 p30蛋白

MsWRKY33转录调控MsACS2影响紫花苜蓿耐盐性的研究

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草地学报 2024年第1期32卷 54-65页

作者：李心武敬也陈菲儿樊璐马琳王学敏中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

乙烯作为重要的植物激素之一,在植物逆境胁迫应答中发挥重要作用。ACS基因是乙烯合成过程中的关键限速酶(ACC合成酶)基因,本研究通过探究紫花苜蓿MsWRKY33转录因子对ACS基因的调控关系,为MsWRKY33参与紫花苜蓿耐盐胁迫响应的具体调控机... 详细信息

乙烯作为重要的植物激素之一,在植物逆境胁迫应答中发挥重要作用。ACS基因是乙烯合成过程中的关键限速酶(ACC合成酶)基因,本研究通过探究紫花苜蓿MsWRKY33转录因子对ACS基因的调控关系,为MsWRKY33参与紫花苜蓿耐盐胁迫响应的具体调控机制奠定理论基础。利用同源克隆、载体构建、酵母单杂交、酵母双杂交、qRT-PCR等技术,验证MsWRKY33对AtACS2和MsACS2的转录调控,并对盐胁迫下转基因株系中MsACS2表达模式进行分析。结果显示:MsWRKY33转录因子可以与W-box元件特异性结合,且对AtACS2和MsACS2具有转录调控作用;MsWRKY33转基因株系中MsWRKY33基因的表达量显著高于对照,转基因株系中MsACS2的表达是在MsWRKY33基因大量表达后呈上升趋势,进一步说明紫花苜蓿MsACS2基因的表达可能受MsWRKY33转录因子的正向调控。因此,紫花苜蓿受到盐胁迫时可诱导MsWRKY33的表达,MsWRKY33转录因子通过正向调控MsACS2表达,可能影响乙烯合成,从而影响紫花苜蓿的盐胁迫响应。

关键词：紫花苜蓿酵母单杂交 MsWRKY33 MsACS2 耐盐性

放牧对中小型土壤动物群落结构影响的Meta分析

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草地学报 2024年第4期32卷 1194-1203页

作者：孙彩彩安海涛杨晓霞吕卫东刘文亭董全民青海大学畜牧兽医科学院青海省畜牧兽医科学院/三江源区高寒草地生态教育部重点实验室/青海省高寒草地适应性管理重点实验室青海西宁810016

中小型土壤动物是地下生态系统重要的参与者,在地下生态系统物质循环和能量流动过程中均扮演着重要角色。本研究通过对40篇文献进行Meta分析,探讨放牧对中小型土壤动物群落结构变化的影响,结果表明:(1)放牧会提高中小型土壤动物丰度,但... 详细信息

中小型土壤动物是地下生态系统重要的参与者,在地下生态系统物质循环和能量流动过程中均扮演着重要角色。本研究通过对40篇文献进行Meta分析,探讨放牧对中小型土壤动物群落结构变化的影响,结果表明:(1)放牧会提高中小型土壤动物丰度,但会降低物种数和多样性指数。(2)放牧通过影响植物群落和土壤理化性质,进而间接影响中小型土壤动物的群落结构。(3)相关性分析表明,在围封处理下,中小型土壤动物丰度与土壤含水量、速效钾呈正相关;在放牧处理下,中小型土壤动物丰度与土壤含水量、速效钾、全磷呈显著正相关(P科学的放牧方式。

关键词：放牧中小型土壤动物群落结构 Meta分析

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非洲猪瘟病毒抗体化学发光检测法的建立

中国动物传染病学报 2024年

作者：张宝真陈卓凡田欣何嘉敏杨佳臻庞旋飞王贵平李中圣白挨泉佛山科学技术学院生命科学与工程学院广州市番禺区畜牧兽医站广东海大畜牧兽医研究院有限公司

非洲猪瘟（ASF）作为高致病性传染病，自从2018年在我国爆发，给我国生猪养殖业造成了严重的经济损失。针对非洲猪瘟病毒（ASFV）抗体，建立一种快速、灵敏的化学发光检测方法。以ASFV P30蛋白作为包被抗原，羊抗猪IgG-HRP抗体作为酶标... 详细信息

非洲猪瘟（ASF）作为高致病性传染病，自从2018年在我国爆发，给我国生猪养殖业造成了严重的经济损失。针对非洲猪瘟病毒（ASFV）抗体，建立一种快速、灵敏的化学发光检测方法。以ASFV P30蛋白作为包被抗原，羊抗猪IgG-HRP抗体作为酶标抗体，鲁米诺为底物溶液，优化检测方法，成功建立ASFV化学发光抗体检测方法。该方法能在室温30 min内完成对ASFV抗体血清特异性检测，灵敏度高于商品化ASFV抗体检测试剂盒，与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒的抗体阳性血清均无交叉反应；批内、批间变异系数均小于10%，重复性良好。通过对108份临床血清样品的检测并与商品化ASFV抗体检测试剂盒检测结果进行比较，符合率达93.5%。本研究建立的ASFV化学发光抗体检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好、简单快速，可应用于临床血清ASFV抗体的检测。

关键词：非洲猪瘟病毒真核表达化学发光抗体检测方法