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缺血再灌注大鼠脑皮质Bcl-2、Bax和p53的动态表达

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吉林大学学报（医学版） 2012年第4期38卷 697-700,822页

作者：许妍妍刘丽莉刘春春蔡睿田佳怡刘玲高振平吉林大学白求恩医学院人体解剖学教研室吉林长春130021 吉林大学白求恩医学院

目的:探讨大鼠脑缺血再灌注损伤早期凋亡相关基因Bcl-2、Bax和p53mRNA和蛋白表达的动态变化,为研究脑缺血再灌注损伤过程中的神经保护机制提供实验依据。方法:选择健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠52只,随机分为假手术对照组(12只)和缺... 详细信息

目的:探讨大鼠脑缺血再灌注损伤早期凋亡相关基因Bcl-2、Bax和p53mRNA和蛋白表达的动态变化,为研究脑缺血再灌注损伤过程中的神经保护机制提供实验依据。方法:选择健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠52只,随机分为假手术对照组(12只)和缺血再灌注2、3、6、8、12h组(每组8只)。采用插线法制作大鼠大脑中动脉栓塞后再灌注模型;采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测脑缺血再灌注不同时间点神经细胞凋亡的变化;通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学法观察凋亡相关基因Bcl-2、Bax和p53表达的动态变化。结果:TUNEL染色显示,缺血再灌注组大鼠脑缺血周围区,再灌注2h后凋亡细胞开始出现,6～12h明显增多。Bcl-2、Bax和p53mRNA和蛋白的表达随着缺血再灌注时间的延长呈增高趋势,Bcl-2蛋白高表达的细胞形态相对完整,Bax和p53蛋白高表达的细胞受损严重。Bcl-2mRNA和蛋白的表达较Bax和p53出现的早。结论:Bcl-2蛋白的表达对神经细胞具有保护作用,早期调控促进Bcl-2的表达并减少Bax和p53的表达,对降低缺血再灌注过程中神经细胞的损伤有重要作用。

关键词：脑缺血再灌注细胞凋亡

肾组织中CGRP、NO变化与大鼠糖尿病肾病的相关性研究

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中国老年学杂志 2008年第13期28卷 1284-1285页

作者：孟德欣杨利敏贾秀月王柏欣王伟群吉林大学白求恩医学院生理教研室

目的观察糖尿病(DM)大鼠肾组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、一氧化氮(NO)及24h尿微量白蛋白含量变化,探讨糖尿病肾病(DN)时上述指标间的相关性。方法Wistar大鼠,造成DM模后第6、8、10、12、14周应用放射免疫方法检测肾组织中CGRP、NO及24... 详细信息

目的观察糖尿病(DM)大鼠肾组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、一氧化氮(NO)及24h尿微量白蛋白含量变化,探讨糖尿病肾病(DN)时上述指标间的相关性。方法Wistar大鼠,造成DM模后第6、8、10、12、14周应用放射免疫方法检测肾组织中CGRP、NO及24h尿微量白蛋白的改变。结果CGRP与NO、24h尿微量白蛋白呈显著负相关。结论动态观察肾组织中CGRP、NO的含量变化有助于DN的早期发现。

关键词：降钙素基因相关肽一氧化氮尿微量白蛋白糖尿病肾病

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缰核与奖赏和稳态

生理科学进展 2008年第4期39卷 292-296页

作者：王绍吉林大学白求恩医学院生理学教研室长春130021

奖赏可以激励动物去进行和维持与个体生存和种族延续有关的行为。有机体在完成这些行为所进行的稳态调节过程中,从总体上要经历和脑内多巴胺神经元的活动密切相关的奖赏预测和奖赏预测失误。外侧缰核神经元在无奖赏预测过程中对多巴胺... 详细信息

奖赏可以激励动物去进行和维持与个体生存和种族延续有关的行为。有机体在完成这些行为所进行的稳态调节过程中,从总体上要经历和脑内多巴胺神经元的活动密切相关的奖赏预测和奖赏预测失误。外侧缰核神经元在无奖赏预测过程中对多巴胺神经元有强力抑制作用。保持稳态平衡是机体活动的根本目标,奖赏是推动稳态平衡的驱动力。缰核能独立完成奖赏功能,并参与众多与生命活动攸关的生理功能调节,所以它可能也是机体稳态调节的中心之一。

关键词：奖赏奖赏预测缰核

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脂筏在人类疱疹病毒6型装配中的作用

病毒学报 2008年第4期24卷 295-299页

作者：黄红兰李凡吉林大学白求恩医学院病原生物学教研室

为了探讨脂筏在人类疱疹病毒6型(HHV-6)装配中的作用,用HHV-6 GS株感染HSB2细胞,用非离子去污剂Triton X-100提取脂筏成分,利用Western blot分析HHV-6包膜糖蛋白与脂筏的相关性。并用免疫荧光双标记的方法,从分子共定位的角度研究HHV-6... 详细信息

为了探讨脂筏在人类疱疹病毒6型(HHV-6)装配中的作用,用HHV-6 GS株感染HSB2细胞,用非离子去污剂Triton X-100提取脂筏成分,利用Western blot分析HHV-6包膜糖蛋白与脂筏的相关性。并用免疫荧光双标记的方法,从分子共定位的角度研究HHV-6糖蛋白B(gB)与GPI(glycosyl-phosphatidyl inosital)锚固蛋白CD59分子以及神经节苷脂GM1(monosialotetrahexosyl ganglioside)分子之间的表达与分布关系。结果发现HHV-6包膜糖蛋白B、H、L、Q1和Q2(gB、gH、gL、gQ1和gQ2)分布在脂筏部位。激光共聚焦显微镜可观察到CD59分子及GM1均与HHV-6包膜糖蛋白B有着相同的分布,即脂筏提供HHV-6装配的平台。关于脂筏在人类疱疹病毒6型装配中的作用,这是第一次报道。

关键词：人类疱疹病毒6型脂筏装配

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SUMO蛋白酶的发酵和纯化工艺的研究

中国生物工程杂志 2009年第2期29卷 81-86页

作者：冯秀萍杜柏榕闫东梅赵向峰朱迅吉林大学白求恩医学院免疫教研室长春130021

目前,小分子肽多需要进行融合表达,虽然有GST标签等表达体系,但是表达产物切割时仍留有多余氨基酸,影响小分子肽的功能;SUMO蛋白酶对SUMO融合表达系统表达的重组蛋白进行切割时没有多余氨基酸残留,因此成为蛋白切割工具的热点。利用基... 详细信息

目前,小分子肽多需要进行融合表达,虽然有GST标签等表达体系,但是表达产物切割时仍留有多余氨基酸,影响小分子肽的功能;SUMO蛋白酶对SUMO融合表达系统表达的重组蛋白进行切割时没有多余氨基酸残留,因此成为蛋白切割工具的热点。利用基因工程技术构建重组His-Ulp1/pET3c/BL21(DE3)工程菌株,用摇瓶优化表达条件,摸索高密度发酵工艺和不同层析纯化工艺条件。结果表明,经1.0mmol/L的IPTG30℃诱导表达6h,表达效果最好。罐发酵后菌体SDS-PAGE分析表达量可达24.39%,通过CMSepharose Fast Flow阳离子交换一步层析可获得纯度大于98%的SUMO蛋白酶,每升发酵液可获得355mg的SUMO蛋白酶纯品。Western blot分析表明,UlP1能与6×His抗体产生免疫反应。为日后大规模产业化生产奠定了基础。

关键词： SUMO蛋白酶(UlP1) 发酵优化离子交换层析

重组人胸腺素β16的表达、纯化及其生物学活性研究

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中国免疫学杂志 2009年第4期25卷 306-311,320页

作者：冯秀萍马威杜柏榕闫东梅朱迅吉林大学白求恩医学院免疫教研室长春130021

目的:人工合成人胸腺素β16(Thymosin β16,Tβ16)的DNA序列,克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pET3c中,获得了高表达菌株。经发酵、破菌、层析纯化、酶切后获得了Tβ16表达产物,并研究其体内外生物学活性。方法:将构建的重组His-SUMO-Tβ16... 详细信息

目的:人工合成人胸腺素β16(Thymosin β16,Tβ16)的DNA序列,克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pET3c中,获得了高表达菌株。经发酵、破菌、层析纯化、酶切后获得了Tβ16表达产物,并研究其体内外生物学活性。方法:将构建的重组His-SUMO-Tβ16融合蛋白的表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。表达的融合蛋白经超声破碎、离子交换和金属亲和层析进行纯化后,用His-SUMO蛋白酶酶切,再经金属亲和层析和Superdex30凝胶层析,获得胸腺素β16。对胸腺素β16进行体内外生物学活性研究。结果:重组His-SUMO-Tβ16融合蛋白为可溶性表达,Tβ16比活性为5.3×105U/mg,在体外可促进BALB/c3T3细胞增殖,促进兔角膜细胞的增殖,促进血管内皮细胞的增殖和迁移以及促进鸡胚绒毛膜血管的增殖;在体内可促进家兔碱烧伤皮肤愈合。结论:成功构建了重组His-SUMO-Tβ16融合蛋白的大肠杆菌表达载体,获得了重组Tβ16蛋白,其具有很好的修复作用,为进一步Tβ16产业化开发奠定了基础。

关键词：胸腺素β16 表达纯化创伤修复

哺乳期大鼠大量摄入酒精对子代成年期胰岛素敏感性的影响

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中国生物制品学杂志 2008年第8期21卷 683-686页

作者：杜红伟张明高航吕晓艳高鹏李晶吉林大学第一医院儿科长春130021 吉林大学白求恩医学院药理教研室长春130021 吉林大学白求恩医学院病理教研室长春130021

目的观察哺乳期大鼠大量摄入酒精对子代成年期胰岛素敏感性的影响。方法将Wistar雌鼠哺乳期酒精灌胃4g/kg·d,对照组给予等容积蒸馏水。子代出生后,每周测量体重1次,断乳后1周开始测量进食量;对第16周龄子代雄性鼠进行静脉葡萄糖耐量试... 详细信息

目的观察哺乳期大鼠大量摄入酒精对子代成年期胰岛素敏感性的影响。方法将Wistar雌鼠哺乳期酒精灌胃4g/kg·d,对照组给予等容积蒸馏水。子代出生后,每周测量体重1次,断乳后1周开始测量进食量;对第16周龄子代雄性鼠进行静脉葡萄糖耐量试验;Western blot检测骨骼肌细胞膜葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)含量;酶学法测定血浆和骨骼肌甘油三酯(TG)含量。结果哺乳期大鼠摄入酒精对后代生长发育无明显影响。与对照组比较,哺乳期大鼠摄入酒精的子代鼠16周龄时,葡萄糖耐量降低,血糖曲线下面积增加,胰岛素敏感指数(SI)、处置指数(DI)及葡萄糖耐量指数(KG)均明显降低,但葡萄糖效应指数(SG)与对照组比较,差异无显著意义,葡萄糖刺激的胰岛素快速反应分泌总量差异亦无显著意义;哺乳期大鼠摄入酒精的子代鼠,骨骼肌细胞膜GLUT4含量、血浆及骨骼肌TG含量与对照组比较,差异均无显著意义。结论哺乳期大鼠大量摄入酒精可引起后代成年期发生胰岛素抵抗,其发生机制与骨骼肌GLUT4转位及TG含量无关。

关键词：哺乳期胰岛素抵抗酒精子代

人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗的计算机辅助设计及真核表达

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第1期26卷 38-40页

作者：任继玲王华杨明王丽吴秀丽王丽颖于永利吉林大学白求恩医学院免疫学教研室吉林长春130021 吉林大学白求恩医学院分子生物学教研室吉林长春130021

目的:设计并表达预防16型人乳头瘤病毒感染的重组蛋白疫苗。方法:选取HPV16型病毒L1蛋白上的B表位和T表位,将其连接组合成多种方式,利用计算机预测蛋白质的三维结构,选取其中最优的结构进行基因克隆构建,并利用杆状昆虫系统进行表达。结... 详细信息

目的:设计并表达预防16型人乳头瘤病毒感染的重组蛋白疫苗。方法:选取HPV16型病毒L1蛋白上的B表位和T表位,将其连接组合成多种方式,利用计算机预测蛋白质的三维结构,选取其中最优的结构进行基因克隆构建,并利用杆状昆虫系统进行表达。结果:利用计算机设计出了一种重组蛋白,成功构建了该重组蛋白的结构基因,并在杆状昆虫表达系统中得到表达。结论:成功构建并表达了人乳头瘤病毒的重组蛋白疫苗。

关键词：人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗计算机辅助设计真核表达

体内稳定表达HER2多表位基因B16细胞系的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第1期25卷 13-15页

作者：李贺向泽敏吴秀丽王莉卫红飞万敏王丽颖于永利吉林大学白求恩医学院免疫学教研室吉林长春130021 吉林大学白求恩医学院分子生物学教研室吉林长春130021

目的:建立体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤B16细胞系。方法:利用分子克隆技术构建真核表达载体pcDNA3-GFP-HER2,阳离子脂质体介导法将其稳定转染入B16细胞,G418克隆筛选及体内传代后,流式细胞术(FCM)分选出GFP-HER2表达阳性... 详细信息

目的:建立体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤B16细胞系。方法:利用分子克隆技术构建真核表达载体pcDNA3-GFP-HER2,阳离子脂质体介导法将其稳定转染入B16细胞,G418克隆筛选及体内传代后,流式细胞术(FCM)分选出GFP-HER2表达阳性细胞群,对该群细胞进行无G418条件下的单克隆筛选并进行体内稳定性检测。结果:经限制性内切酶鉴定及序列分析,pcDNA3-GFP-HER2构建正确;最终建立的表达HER2基因B16细胞系体内传代后GFP-HER2阳性率高于90%。结论:成功建立了体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤细胞系,为其他体内稳定表达外源基因的转染细胞的建立提供了借鉴。

关键词：小鼠黑色素瘤细胞 HER2 阳离子脂质体