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稳定表达UT-A2的FRT细胞系的建立与鉴定

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中国病理生理杂志 2007年第4期23卷 803-806页

作者：郭丽荣孟艳赵丹赵华山吕斌杨宝学赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理教研室吉林长春130021

目的:建立稳定表达尿素通道蛋白A2(UT-A2)的FRT细胞系,为寻找UT-A2抑制剂提供细胞模型。方法:通过真核表达质粒-脂质体介导的方法,将UT-A2 cDNA与真核表达载体pUB6/V5连接后的重组质粒转染入FRT细胞,经稳定筛选建立稳定表达UT-A2的FRT... 详细信息

目的:建立稳定表达尿素通道蛋白A2(UT-A2)的FRT细胞系,为寻找UT-A2抑制剂提供细胞模型。方法:通过真核表达质粒-脂质体介导的方法,将UT-A2 cDNA与真核表达载体pUB6/V5连接后的重组质粒转染入FRT细胞,经稳定筛选建立稳定表达UT-A2的FRT细胞系。功能检测实验将细胞分为对照组和稳定转染组,用2 mol/L尿素负荷试验检测稳定表达UT-A2的FRT细胞膜的尿素通透性。结果:经BSD筛选21 d后得到稳定表达UT-A2的细胞株;Western blotting证实UT-A2蛋白稳定表达;免疫荧光分析结果提示UT-A2的质膜定位。2 mol/L尿素试验证实了该细胞系具有明显尿素通透性。结论:在非肾脏上皮细胞获得了稳定质膜定位表达UT-A2的FRT细胞株,该细胞株可用于UT-A2抑制剂的筛选。

关键词：尿素通道蛋白转染尿素

线粒体分裂融合基因在氧化应激诱导宫颈癌Hela细胞损伤中的作用

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中国妇幼保健 2009年第33期24卷 4723-4725页

作者：于春艳李洪岩康劲松钟加滕孙连坤北华大学基础医学院吉林大学白求恩医学院病理生理教研室吉林长春130021

目的:利用维生素K3(VitaminK3,Vk3)复制子宫颈癌Hela细胞损伤模型,观察线粒体融合分裂基因的变化,探讨线粒体融合分裂基因在Vk3诱导Hela细胞凋亡过程中的作用。方法:MTT法检测各组Hela细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡,RT-PCR... 详细信息

目的:利用维生素K3(VitaminK3,Vk3)复制子宫颈癌Hela细胞损伤模型,观察线粒体融合分裂基因的变化,探讨线粒体融合分裂基因在Vk3诱导Hela细胞凋亡过程中的作用。方法:MTT法检测各组Hela细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡,RT-PCR方法检测各组Hela细胞中线粒体融合基因Mfn1、Mfn2和Opa1及线粒体分裂基因Drp1、Fist1和MTP18mRNA表达。结果:Vk3能够降低Hela细胞存活率,并且Hoechst33258染色结果显示细胞呈现凋亡形态变化,凋亡率增加,Mfn1、Opa1、和MTP18mRNA表达量明显下降(P<0.05);而与Vk3单独作用组比较,Vk3+NAC联合作用组Hela细胞存活率增加(P<0.05),凋亡率降低,Mfn1、Opa1、和MTP18mRNA表达量明显增加(P<0.05)。结论:线粒体融合和分裂基因表达的降低都有可能参与了氧化应激诱导的细胞损伤作用。

关键词：氧化应激线粒体融合线粒体分裂

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溶血磷脂酸对豚鼠心室肌细胞钙电流的影响

吉林大学学报（医学版） 2003年第1期29卷 62-64页

作者：李英骥陈霞葛敬岩闫励张文杰钟国赣吉林大学基础医学院生理学教研室吉林长春130021

目的 :研究溶血磷脂酸 ( LPA)对心肌细胞膜离子通道的作用及机制。方法 :采用全细胞膜片钳技术。结果 :0 .1、1 .0和 1 0 .0 μmol·L-1的 LPA对豚鼠心室肌细胞 Ca2 +通道电流均具有明显的增强作用 ,而且这种作用可以被 G蛋白受体阻断... 详细信息

目的 :研究溶血磷脂酸 ( LPA)对心肌细胞膜离子通道的作用及机制。方法 :采用全细胞膜片钳技术。结果 :0 .1、1 .0和 1 0 .0 μmol·L-1的 LPA对豚鼠心室肌细胞 Ca2 +通道电流均具有明显的增强作用 ,而且这种作用可以被 G蛋白受体阻断剂白喉毒素阻断。结论 :LPA通过与 G蛋白偶联的膜受体介导促进豚鼠心室肌细胞 Ca2 +

关键词：溶血磷脂酸膜片钳术心室肌细胞溶磷脂素类钙通道

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STEAP1基因的体外转录

中国病理生理杂志 2006年第7期22卷 1454-1456页

作者：潘玉琢李扬赵丹毛建华孙连坤赵雪俭吉林大学基础医学院病理生理教研室吉林长春130021

目的:建立STEAP1基因的体外转录模型,为进一步研究其功能奠定基础。方法:应用RT-PCR的方法从前列腺癌组织中钓取STEAP1全长cDNA,TA克隆后测序,亚克隆入pSP64载体,构建体外转录用载体STEAP1-pSP64。同时,通过PCR构建具有SP6RNA聚合酶结... 详细信息

目的:建立STEAP1基因的体外转录模型,为进一步研究其功能奠定基础。方法:应用RT-PCR的方法从前列腺癌组织中钓取STEAP1全长cDNA,TA克隆后测序,亚克隆入pSP64载体,构建体外转录用载体STEAP1-pSP64。同时,通过PCR构建具有SP6RNA聚合酶结合位点的STEAP1体外转录盒。应用体外转录试剂盒,对比STEAP1-pSP64与STEAP1体外转录盒转录效率。结果:(1)成功从人前列腺癌组织中钓取了STEAP1全长cDNA,测序发现无一碱基错配。(2)成功构建了STEAP1-pSP64载体和STEAP1体外转录盒,两者转录效率的比较表明STEAP1-pSP64载体转录RNA的量明显高于STEAP1体外转录盒。结论:成功构建了两种STEAP1体外转录模型,并证明STEAP1-pSP64载体的转录效率高于STEAP1体外转录盒。本研究为进一步研究STEAP1的功能奠定了基础。

关键词：基因,STEAP1 前列腺肿瘤 pSP64载体前列腺特异6次跨膜上皮抗原