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医学免疫学课程“B to B”循环模式的构建与实践

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中国免疫学杂志 2024年第7期40卷 1507-1509页

作者：闫东梅杨巍付海英李冬倪维华齐妍袁红艳吉林大学基础医学院免疫学系长春130021

医学免疫学的培养目标是使学生注重免疫学理论联系临床实际,熟悉专业英语,自觉关注前沿知识,具备自主学习与终身学习的能力。但已有的教学模式缺少临床疾病相关事件讲解,实验内容及项目安排与临床严重脱节,对解决临床问题方面的科学研... 详细信息

医学免疫学的培养目标是使学生注重免疫学理论联系临床实际,熟悉专业英语,自觉关注前沿知识,具备自主学习与终身学习的能力。但已有的教学模式缺少临床疾病相关事件讲解,实验内容及项目安排与临床严重脱节,对解决临床问题方面的科学研究明显不足。本教研团队从临床实际(Bedside)问题出发,回到基础研究(Bench),再去临床解决实际问题(Bedside),建立免疫学教学的“B to B”循环模式,全面培养具有临床胜任能力、科研思维能力以及创新精神、国际视野的高级医学专业人才。

关键词：免疫学临床基础循环结合评价

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新生大鼠原代软骨细胞分离和培养方法的改进

吉林大学学报（医学版） 2024年第5期50卷 1438-1449页

作者：杨丹聃陈骄阳王馨珩赵泽彤潘莹薛百功高长曌吉林大学基础医学院病原免疫细胞遗传学实验中心吉林长春130021 吉林大学中日联谊医院皮肤科吉林长春130033 吉林大学基础医学院细胞学系吉林长春130021 吉林大学中日联谊医院放疗科吉林长春130033

目的:探讨新生大鼠原代软骨细胞分离和培养的改进方法,以建立高效经济的体外软骨细胞培养体系。方法:从新生大鼠关节中分离原代软骨细胞,分为过夜消化(OD)组和快速消化(RD)组进行分离,OD组软骨细胞采用Ⅱ型胶原酶过夜消化,RD组软骨细胞... 详细信息

目的:探讨新生大鼠原代软骨细胞分离和培养的改进方法,以建立高效经济的体外软骨细胞培养体系。方法:从新生大鼠关节中分离原代软骨细胞,分为过夜消化(OD)组和快速消化(RD)组进行分离,OD组软骨细胞采用Ⅱ型胶原酶过夜消化,RD组软骨细胞采用预消化的物理化学消化相结合的手段分离细胞。采用含0%(空白组1)、1%、2%、4%和10%胎牛血清(FBS),0(空白组2)、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0 g·L^(-1)维生素C(VC)和0(空白组3)、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0μg·L^(-1)聚乳酸-羟基乙酸共聚体(PLGA)纳米粒子的改良培养液培养软骨细胞。将杜氏改良Eagle培养基F12营养混合液(DMEM/F12)与含不同浓度FBS、VC和PLGA的培养液分别混合,并按照各成分浓度进行相应分组。采用细胞计数仪计数各组细胞并检测各组细胞存活率和直径,采用甲苯胺蓝特异性染色法检测各组细胞形态表现,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,采用细胞黏附实验检测各组细胞黏附率,采用Hoechst/碘化丙碇(PI)染色检测各组细胞凋亡情况,采用MTT法检测改良培养液培养后各组细胞增殖活性,将细胞分为DMEM/F12+10%FBS组(对照组)、DMEM/F12+1%FBS组、DMEM/F12+1%FBS+0.4 g·L^(-1)VC+1μg·L^(-1)PLGA组,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测改良培养液培养后各组细胞中性别决定区域Y框转录因子9(SOX9)、Ⅱ型胶原α1链(Col2A1)、Ⅹ型胶原α1链(Col10A1)和基质金属蛋白酶13(MMP13)mRNA表达水平,采用免疫荧光染色检测改良培养液培养后各组细胞中Ⅱ型胶原(COLⅡ)和SOX9表达情况。结果:OD组原代软骨细胞存活率小于RD组,细胞平均直径大于RD组。OD组原代软骨细胞形态较大,呈梭形,大多数细胞出现伪足;RD组原代软骨细胞形态较小,大多数细胞呈菱形,仅部分细胞出现伪足。2组原代软骨细胞经甲苯胺蓝特异性染色均显色明显,但RD组消化时间较短,软骨细胞实际培养时间较OD组缩短9~13 h,原代软骨细胞形态更为幼稚。OD组原代软骨细胞在培养24 h时增殖较为缓慢,培养48 h时增殖速度升高,较培养12 h时增殖活性明显升高(P<0.01)。RD组原代软骨细胞在培养24 h时增殖稍缓,培养48 h时增殖速度加快,较培养12 h时增殖活性明显升高(P<0.01);培养24和48 h时,与OD组比较,RD组原代细胞增殖速度升高(P<0.05)。RD组软骨凋亡细胞数少于OD组,2组均无坏死软骨细胞。大鼠软骨细胞增殖活性随着培养液中FBS浓度升高而升高,与空白组1比较,培养液中含1%、2%、4%和10%FBS时,软骨大鼠细胞增殖活性明显升高(P<0.05)。与空白组2比较,培养液中含0.2~1.0 g·L^(-1)VC时大鼠软骨细胞增殖活性明显升高(P<0.05),其中含0.4 g·L^(-1)VC时大鼠软骨细胞增殖活性最高(P<0.01)。与空白组3比较,培养液中含1~4μg·L^(-1)PLGA时,大鼠软骨细胞增殖活性明显升高(P<0.05),其中含1μg·L^(-1)PLGA时大鼠软骨细胞增殖活性最高(P<0.05)。与DMEM/F12+10%FBS组比较,DMEM/F12+1%FBS组大鼠软骨细胞中SOX9 mRNA和COL2A1 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与DMEM/F12+10%FBS组比较,DMEM/F12+1%FBS+0.4 g·L^(-1)VC+1μg·L^(-1)PLGA组大鼠软骨细胞中SOX9 mRNA和COL2A1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。免疫荧光染色,荧光显微镜下DMEM/F12+10%FBS组部分软骨细胞中出现COLⅡ绿色荧光信号和SOX9红色荧光信号,荧光强度弱;DMEM/F12+1%FBS组大多数软骨细胞中出现COLⅡ绿色荧光信号和SOX9红色荧光信号,荧光强度明显强于DMEM/F12+10%FBS组;DMEM/F12+1%FBS+0.4 g·L^(-1)VC+1μg·L^(-1)PLGA组软骨细胞中均出现COLⅡ绿色荧光信号和SOX9红色荧光信号,荧光强度较DMEM/F12+10%FBS组和DMEM/F12+1%FBS组明显升高。DMEM/F12+1%FBS组软骨细胞中COLⅡ和SOX9蛋白表达量明显高于DMEM/F12+10%FBS组,DMEM/F12+1%FBS+0.4 g·L^(-1)VC+1μg·L^(-1)PLGA组软骨细胞中COLⅡ和SOX9蛋白表达量明显高于DMEM/F12+10%FBS组。结论:改良后的大鼠原代软骨细胞分离和培养方法可以弥

关键词：软骨细胞原代细胞培养体外技术条件培养基血清

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微流控技术在抗感染免疫研究中的应用

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第1期44卷 34-38页

作者：柳博洋朱琳静方芳齐妍崔雪玲吉林大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学系吉林省神经免疫与临床免疫重点实验室长春130021 吉林建筑大学科学研究处长春130118 吉林大学基础医学院免疫学系长春130021

抗感染免疫是机体免疫系统抵抗病原体感染的第一道免疫防线,涉及多种免疫细胞活化、迁移及病原体清除过程。因此,免疫细胞行为及病原体检测就成为疾病诊断和预测的重要指标。近年来,基于微流控芯片开发的多种免疫细胞行为检测技术,以及... 详细信息

抗感染免疫是机体免疫系统抵抗病原体感染的第一道免疫防线,涉及多种免疫细胞活化、迁移及病原体清除过程。因此,免疫细胞行为及病原体检测就成为疾病诊断和预测的重要指标。近年来,基于微流控芯片开发的多种免疫细胞行为检测技术,以及细菌生长和药物筛查方法,因具有微型化、高通量、高敏感度、快速分析及低消耗等优势,已经在生物学、药理学及临床疾病研究和诊断中广泛使用。因此,本文对微流控技术在固有免疫细胞迁移、细胞核变形、致病菌及病毒快速检测等抗感染免疫研究中的应用进行综述,希望能进一步推动微流控技术在抗感染免疫研究和临床诊断中的应用发展。

关键词：微流控芯片感染免疫细胞迁移细菌快速检测

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灵芝三萜的药理学研究进展

菌物研究 2024年第1期22卷 60-78页

作者：卢烽姜涛杨宝学北京大学基础医学院药理学系北京100191 血管稳态与重构全国重点实验室北京100191 北华大学基础医学院吉林132013

灵芝是药食同源的大型真菌,可用于预防和治疗多种疾病。灵芝三萜是灵芝的重要活性成分,其含量是评价灵芝品质的重要指标。灵芝三萜的化学结构决定其多样的生物学活性,包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、调节免疫功能以及调节代谢等。... 详细信息

灵芝是药食同源的大型真菌,可用于预防和治疗多种疾病。灵芝三萜是灵芝的重要活性成分,其含量是评价灵芝品质的重要指标。灵芝三萜的化学结构决定其多样的生物学活性,包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、调节免疫功能以及调节代谢等。文中基于相关研究文献对灵芝三萜的药理作用及其机制进行总结和论述,以期为灵芝三萜在创新药物研发与功能性食品开发领域的基础研究和转化应用提供系统参考资料。

关键词：灵芝三萜药理活性功能性食品灵芝酸

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噬菌体治疗肺炎克雷伯菌感染的研究进展

微生物学报 2024年第1期64卷 61-75页

作者：钟家琪周雨非徐雨林龚思烨张灼阳上海交通大学医学院上海200025 上海交通大学医学院基础医学实验教学中心上海200025

随着细菌的进化以及部分抗生素的滥用,耐药细菌的感染已成为21世纪主要的公共卫生挑战之一。其中,耐药肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)问题尤为突出。噬菌体在治疗耐药细菌感染引起的疾病方面展现出一定的潜力及独特优势,但目前噬... 详细信息

随着细菌的进化以及部分抗生素的滥用,耐药细菌的感染已成为21世纪主要的公共卫生挑战之一。其中,耐药肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)问题尤为突出。噬菌体在治疗耐药细菌感染引起的疾病方面展现出一定的潜力及独特优势,但目前噬菌体治疗尚缺乏统一的临床指导规范。虽然临床上有少数将噬菌体用于治疗肺炎克雷伯菌感染的成功案例,但多数情况下是采用噬菌体配合抗生素疗法,噬菌体在其中的作用仍不明确。本文综合评述国内外研究数据,回顾与噬菌体治疗肺炎克雷伯菌感染相关的数个重点问题,包括噬菌体的特性以及影响其疗效的因素,旨在为肺炎克雷伯菌和其他耐药细菌的噬菌体治疗提供参考。

关键词：肺炎克雷伯菌耐药细菌噬菌体治疗

人巨细胞病毒UL95抗原表位肽段测定在SLE诊断中的意义

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中华检验医学杂志 2024年第9期47卷 1042-1051页

作者：胡亚徐臣玉强薇章慧娣冯方方温州医科大学附属第一医院肾内科温州325000 温州医科大学基础医学院温州325000 温州医科大学第一临床医学院温州325000 温州医科大学基础医学院形态教学实验中心温州325000

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)UL95基因的优势B细胞表位肽段在诊断系统性红斑狼疮(SLE)疾病中的临床意义,以及SLE患者血浆中UL95特异性抗体水平和临床指标的相关性,以期找到SLE疾病的辅助诊断指标。方法采用非随机对照研究,分析HCMV UL95... 详细信息

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)UL95基因的优势B细胞表位肽段在诊断系统性红斑狼疮(SLE)疾病中的临床意义,以及SLE患者血浆中UL95特异性抗体水平和临床指标的相关性,以期找到SLE疾病的辅助诊断指标。方法采用非随机对照研究,分析HCMV UL95基因序列特征及其多态性,并利用生物信息学分析并化学合成UL95优势B细胞表位短肽,将UL95合成短肽作为包被抗原,ELISA法检测97例SLE患者及35名健康对照者(HC)血浆中UL95的特异性抗体水平,ROC曲线分析UL95短肽抗体对于SLE的诊断价值,Pearson相关性检验分析UL95特异性抗体水平与SLE患者临床指标的相关性。结果UL95基因核苷酸序列相似性为92.9%~100%,氨基酸序列相似性为92.1%~100%,序列高度保守,具有同源性。多种参数综合预测得到可能优势B细胞表位6个,分别命名为(Bp1、Bp2、Bp3、Bp4、Bp5、Bp6)。ELISA结果显示SLE患者血浆中的UL95特异性抗体水平(0.35±0.12)高于HC组(0.28±0.10)(t=3.091,P=0.002)。区分SLE和HC的ROC曲线下面积为0.703,敏感度为54.6%,特异度为88.6%。此外中高活动亚组(SLEDAI≥4)的UL95特异性抗体水平(OD值)(0.36±0.10)高于低活动亚组(SLEDAI<4分)(0.30±0.07)(t=‒2.055,P=0.044)。UL95特异性抗体水平和临床指标总免疫球蛋白G、总免疫球蛋白M呈正相关,与补体C3、补体C4、血小板呈负相关。结论UL95的抗体水平与狼疮疾病活动度有关,UL95的Bp1(10~21)肽段对SLE辅助诊断有重要意义,有望成为一种新的参考指标。

关键词：巨细胞病毒红斑狼疮,系统性抗原,B细胞

灵芝酸A对非小细胞肺癌PC9细胞糖酵解及其关键限速酶的影响

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吉林大学学报（医学版） 2024年第3期50卷 682-688页

作者：任爱华董彦伯苗润芝吕俞娇刘岩峰北华大学基础医学院解剖教研室吉林吉林132013 北华大学临床医学院外科教研室吉林吉林132013

目的:探讨不同剂量灵芝酸A(GAA)对非小细胞肺癌(NSCLC) PC9细胞的生物活性、糖酵解及其限速酶表达的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养NSCLC PC9细胞,将PC9细胞分为空白对照组、低剂量(25μmol·L^(-1)) GAA组、中剂量(50μmol·L^(... 详细信息

目的:探讨不同剂量灵芝酸A(GAA)对非小细胞肺癌(NSCLC) PC9细胞的生物活性、糖酵解及其限速酶表达的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养NSCLC PC9细胞,将PC9细胞分为空白对照组、低剂量(25μmol·L^(-1)) GAA组、中剂量(50μmol·L^(-1)) GAA组和高剂量(100μmol·L^(-1)) GAA组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组PC9细胞存活率,Transwell小室实验检测各组PC9细胞迁移细胞数,葡萄糖检测试剂盒检测各组PC9细胞葡萄糖摄取量,三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测各组PC9细胞中ATP水平,乳酸检测试剂盒检测各组PC9细胞中乳酸水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组PC9细胞中己糖激酶2(HK2)和M2型丙酮酸激酶(PKM2) mRNA表达水平,Westernblotting法检测各组PC9细胞中HK2和PKM2蛋白表达水平。结果:MTT法,培养24、48和72 h时,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞存活率明显降低(P实验,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组细胞迁移数明显减少(P<0.05);与低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞迁移数明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中葡萄糖摄取量和乳酸水平均明显降低(P<0.05),高剂量GAA组PC9细胞中ATP水平明显降低(P<0.05)。RT-qPCR法,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中HK2和PKM2 mRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。Western blotting法,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中HK2和PKM2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:中和高剂量GAA可抑制PC9细胞增殖及迁移的生物活性,降低糖酵解作用,其作用机制可能与抑制关键限速酶HK2和PKM2的表达有关。

关键词：灵芝酸A 癌,非小细胞肺己糖激酶2 M2型丙酮酸激酶糖酵解

α-突触核蛋白的异常修饰及在帕金森病中的作用机制

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中国组织工程研究 2024年第8期28卷 1301-1306页

作者：齐雪李家慧朱远峰禹璐王鹏北华大学基础医学院人体解剖学教研室吉林省吉林市132013 北华大学基础医学院神经退行性疾病研究室吉林省吉林市132013

背景:因α-突触核蛋白异常聚集而形成的路易体是帕金森病特征性病理变化。近年多项研究揭示α-突触核蛋白聚集体的形成与其翻译后修饰关系密切。α-突触核蛋白的磷酸化、硝基化、乙酰化、泛素化等修饰在帕金森病的发病和进展中的作用得... 详细信息

背景:因α-突触核蛋白异常聚集而形成的路易体是帕金森病特征性病理变化。近年多项研究揭示α-突触核蛋白聚集体的形成与其翻译后修饰关系密切。α-突触核蛋白的磷酸化、硝基化、乙酰化、泛素化等修饰在帕金森病的发病和进展中的作用得到广泛关注。目的:通过文献综述的方法阐述关于α-突触核蛋白修饰类型、修饰位点对帕金森病的特征性病理形成和进展的影响。方法:由第一作者系统检索中国知网和PubMed数据库,以“α-突触核蛋白,帕金森病,磷酸化,乙酰化,泛素化,硝基化”为中文检索词,以“α-Synuclein,Parkinson’s disease,phosphorylation,acetylation,ubiquitination,nitration”为英文检索词,收集整理近年来与α-突触核蛋白异常修饰相关的文献,最终纳入61篇文献进行综述分析。结果与结论:①α-突触核蛋白异常修饰与其蛋白结构和其带有正负电荷密切相关,其氨基端带有正电荷,易发生泛素化和乙酰化修饰;其中心疏水区域因其疏水特性易形成β片层结构,其羧基端带有负电荷,是主要磷酸化修饰区域。②磷酸化修饰位点可促进磷酸化修饰并与α-突触核蛋白的聚集密切相关,而蛋白激酶可靶向激活翻译修饰,可能有助于促进或抑制聚集体形成。③α-突触核蛋白的降解途径主要发挥清除病理性蛋白的作用,各种激酶催化促使蛋白泛素化修饰后,使其功能受损,导致蛋白异常堆积,从而加重神经退变。④α-突触核蛋白的氨基端经过乙酰化修饰后,可提升蛋白对细胞膜的穿梭能力,减缓蛋白聚集,可能为神经细胞保护靶点,但是在突变型蛋白发生乙酰化修饰后反而产生相反作用。⑤α-突触核蛋白的硝基化修饰主要与氧化应激相关,在活性氧的作用下,硝基化修饰的蛋白聚集倾向增强。⑥由于α-突触核蛋白不同翻译后修饰产生的影响各异,因此阐明其翻译后修饰的主要机制,抑制促使蛋白聚集的翻译后修饰,可能为帕金森病早期诊断和治疗提供新靶点参考。

关键词： α-突触核蛋白帕金森病聚集体磷酸化酪氨酸乙酰化泛素化硝基化发病机制基因突变

补阳还五汤防治2型糖尿病小鼠骨骼肌病变的作用

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中国实验方剂学杂志 2024年第14期30卷 10-16页

作者：王杨姜立娟崔巍张文风魏岩长春中医药大学基础医学院长春130117

目的:基于线粒体转运、糖代谢、氧化应激及炎性介质探讨补阳还五汤防治2型糖尿病骨骼肌病变的作用。方法:选用60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,高脂饲料联合链脲佐菌素腹腔注射构建2型糖尿病小鼠模型,按随机数字表法随机分组,其中正常组、补... 详细信息

目的:基于线粒体转运、糖代谢、氧化应激及炎性介质探讨补阳还五汤防治2型糖尿病骨骼肌病变的作用。方法:选用60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,高脂饲料联合链脲佐菌素腹腔注射构建2型糖尿病小鼠模型,按随机数字表法随机分组,其中正常组、补阳还五汤高、中、低剂量组、二甲双胍组、模型组各10只。补阳还五汤各剂量组及二甲双胍组灌喂剂量分别为86.5、43.2、21.6 g·kg^(-)1、150 mg·kg^(-1);实验期间定期检测小鼠血糖等指标,实验结束后取骨骼肌,分别置于4%多聚甲醛-80℃冰箱冻存。进行血液样本送检,骨骼肌采用苏木素-伊红(HE)染色,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症指标及活性氧(ROS),蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫组化检测线粒体蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、饮水量、进食量显著升高(P<0.01),体质量显著降低(P<0.01),与模型组比较,补阳还五汤组及二甲双胍组小鼠空腹血糖、进水量、进食量明显降低(P<0.05,P<0.01),体质量上升(P<0.01);与正常组比较,模型组TNF-α、IL-6、ROS显著增加(P<0.01),与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各组TNF-α、IL-6、ROS均明显下降(P<0.05,P<0.01)。模型组骨骼肌肌纤维普遍萎缩性变细,提示骨骼肌萎缩,形态结构改变,而二甲双胍组及补阳还五汤各组小鼠骨骼肌病理状态有所减轻,纤维束形态部分恢复正常;与正常组比较,模型组线粒体融合蛋2(Mfn2)显著减少(P<0.01),与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组Mfn2明显增多(P<0.05,P<0.01);与正常组比较,模型组分裂蛋白Drp1显著增多(P<0.01),与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组分裂蛋白1(Drp1)显著减少(P<0.01)。结论:补阳还五汤可以改善2型糖尿病骨骼肌病变小鼠的体质量及骨骼肌病理形态,降低空腹血糖、进食量、进水量、TNF-α、IL-6、ROS值及分裂蛋白Drp1,升高体质量及线粒体融合蛋白Mfn2。

关键词：补阳还五汤 2型糖尿病骨骼肌线粒体线粒体融合蛋2(Mfn2) 分裂蛋白1(Drp1)