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十二指肠贾第虫Rab11互作蛋白的筛选

中国病原生物学杂志 2024年第1期19卷 25-31页

作者：高梦遥赵志腾李璐张西臣王晓岑李新张楠宫鹏涛吉林大学动物医学学院吉林长春130062

目的 Rab11属于Rab小分子GTP酶家族,主要参与贾第虫外泌体样囊泡的产生。研究贾第虫囊泡运输中的分子机制,探寻贾第虫Rab11蛋白的互作蛋白至关重要。方法通过分子克隆技术构建含His标签的原核表达质粒pET-32a-Rab11,经诱导表达和纯化,... 详细信息

目的 Rab11属于Rab小分子GTP酶家族,主要参与贾第虫外泌体样囊泡的产生。研究贾第虫囊泡运输中的分子机制,探寻贾第虫Rab11蛋白的互作蛋白至关重要。方法通过分子克隆技术构建含His标签的原核表达质粒pET-32a-Rab11,经诱导表达和纯化,获得Rab11融合蛋白(rGdRab11)。用该蛋白免疫小鼠,制备抗血清,以此为抗体采用免疫荧光法观察Rab11蛋白的亚细胞定位。应用His-pull down联合质谱技术筛选贾第虫全虫蛋白中与Rab11蛋白互作的候选蛋白,并在GiardiaDB数据库和Revigo中对筛选的候选蛋白进行生物信息学分析。结果成功表达和纯化出Rab11融合蛋白,并制备鼠源抗Rab11多克隆抗体。免疫荧光法观察Rab11蛋白定位于贾第虫滋养体细胞膜区域和细胞质中。共筛选出528个与Rab11特异性结合的候选互作蛋白,其中蛋白质评分大于20分的候选互作蛋白有517个,包括124个未知蛋白,393个已知蛋白。GO分析上述蛋白涉及组蛋白修饰、组蛋白单泛素化、代谢过程、建立或维持细胞骨架极性以及内吞等多种生物进程。结论成功表达和纯化出Rab11融合蛋白,并制备了鼠抗Rab11多克隆抗体。筛选出贾第虫中与Rab11互作的候选蛋白528个,为研究贾第虫Rab11的分子机制奠定了理论基础。

关键词：十二指肠贾第虫 rGdRab11 His-pull down LC-MS/MS 互作蛋白

能量补充剂对酮病奶牛肝脏代谢和肝损伤的影响

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吉林农业大学学报 2024年第1期46卷 161-167页

作者：李伟房志愿陈喜莹杜希良刘国文李心慰吉林大学动物医学学院长春130062

将杜仲粉、过瘤胃葡萄糖等12种成分按照一定比例混合后,制成能量补充剂,选择6头围产期健康奶牛与30头围产期酮病奶牛分别进行能量补充剂毒性试验与酮病治疗效果评价试验。结果表明:健康围产期奶牛连续灌服7 d能量补充剂不会对奶牛肝肾... 详细信息

将杜仲粉、过瘤胃葡萄糖等12种成分按照一定比例混合后,制成能量补充剂,选择6头围产期健康奶牛与30头围产期酮病奶牛分别进行能量补充剂毒性试验与酮病治疗效果评价试验。结果表明:健康围产期奶牛连续灌服7 d能量补充剂不会对奶牛肝肾功能造成损伤。酮病奶牛连续灌服能量补充剂3 d后,显著降低血液β-羟丁酸、游离脂肪酸浓度,同时显著提高血糖浓度;灌服能量补充剂能显著增加酮病奶牛血液过氧化物酶体标志酶过氧化氢酶以及谷胱甘肽过氧化物酶活性,显著降低氧化应激标志物丙二醛含量;此外,血液炎性细胞因子IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α含量以及肝损伤指示酶丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶的含量及总胆红素和间接胆红素的含量显著降低;灌服能量补充剂能显著促进酮病奶牛肝脏AMPK的磷酸化和SIRT3的蛋白表达。综上,灌服能量补充剂有效缓解酮病的能量负平衡、氧化应激、炎性反应和肝损伤。

关键词：奶牛围产期能量负平衡酮病能量补充剂肝损伤

半胱氨酰tRNA合成酶2在金黄色葡萄球菌感染的奶牛乳腺上皮细胞中的作用

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吉林农业大学学报 2024年

作者：萨其拉梁巧李娜李丰阳雷连成吉林大学动物医学学院吉林大学白求恩第一医院

为探讨半胱氨酰tRNA合成酶2（Cysteinyl-tRNA synthetase 2， CARS2）在金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus， S. aureus）感染奶牛乳腺上皮细胞（MAC-T）中的作用，采用shRNA敲降CARS2，通过平板菌落计数法检测S. aureus对MAC-T细胞的黏附、侵袭和其在胞内的存活能力；流式细胞术检测S. aureus感染MAC-T后活性氧（ROS）的释放水平；qRT-PCR和ELISA技术检测S. aureus感染MAC-T细胞后IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA和蛋白表达水平；Western blotting检测S. aureus感染后对MAC-T细胞自噬的影响。结果显示：敲降CARS2不影响S. aureus向MAC-T细胞的黏附和侵袭（p ＞ 0.05），但却显著提高了其胞内存活能力（p ＜ 0.01），同时下调ROS的释放（p ＜ 0.05）；另外，敲降CARS2显著降低了S. aureus感染后炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达（p ＜ 0.05），下调细胞自噬（p ＜ 0.05）。结果表明：CARS2可能通过调控ROS和细胞自噬水平，抑制S. aureus在MAC-T细胞内的存活，CARS2可能是奶牛乳腺炎潜在的调控靶点。

关键词：半胱氨酰-tRNA合成酶2 金黄色葡萄球菌活性氧细胞自噬奶牛乳腺上皮细胞

巴马香猪与长白猪骨骼肌卫星细胞增殖分化差异

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中国兽医学报 2024年第8期44卷 1749-1754,1781页

作者：任思禹李颖吉林大学动物医学学院吉林长春130062

猪肉的质量与猪骨骼肌的发育和肌内脂质沉积有关,而骨骼肌卫星细胞具有分化为成肌细胞、脂肪细胞的潜能。为分析骨骼肌卫星细胞的增殖分化对骨骼肌形成的影响,本研究从长白猪和巴马香猪背最长肌处分离纯化骨骼肌卫星细胞,并利用免疫荧... 详细信息

猪肉的质量与猪骨骼肌的发育和肌内脂质沉积有关,而骨骼肌卫星细胞具有分化为成肌细胞、脂肪细胞的潜能。为分析骨骼肌卫星细胞的增殖分化对骨骼肌形成的影响,本研究从长白猪和巴马香猪背最长肌处分离纯化骨骼肌卫星细胞,并利用免疫荧光检测Pax7的表达情况进行细胞鉴定。通过RT-qPCR检测2个品种猪骨骼肌卫星细胞中细胞周期相关因子和成肌成脂相关因子的mRNA表达量,CCK-8检测2种细胞的增殖情况。结果表明,2个品种猪骨骼肌卫星细胞表现出不同的增殖能力和分化潜能:与巴马香猪相比,长白猪骨骼肌卫星细胞表现出较强的增殖能力和较高的成肌分化潜能以及较低的成脂分化潜能。本研究发现不同肉质猪骨骼肌卫星细胞增殖分化能力存在差异,为阐明不同肉质猪骨骼肌形成差异的相关机理提供了理论依据。

关键词：骨骼肌卫星细胞增殖分化猪

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3例犬炎性乳腺癌的病理学诊断和组织学分级评价

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中国兽医杂志 2024年第1期60卷 15-20页

作者：高蕊石俊超张竞贾茜涵马莹贺文琦陆慧君吉林大学动物医学学院吉林长春130062

为了对3例临床疑似犬炎性乳腺癌的病例进行确诊,本试验采用苏木精-伊红(H.E.)染色对送检肿物进行组织病理学检查,应用全角蛋白(Pan ck)抗体、角蛋白8(CK8)抗体和血管性血友病因子(VWF)抗体进行免疫组织化学染色以判断免疫表型。结果显... 详细信息

为了对3例临床疑似犬炎性乳腺癌的病例进行确诊,本试验采用苏木精-伊红(H.E.)染色对送检肿物进行组织病理学检查,应用全角蛋白(Pan ck)抗体、角蛋白8(CK8)抗体和血管性血友病因子(VWF)抗体进行免疫组织化学染色以判断免疫表型。结果显示,3例患犬肿瘤内部形成管状癌、致密癌、筛状癌和粉刺性癌,并伴有淋巴管扩张、肿瘤栓子浸润淋巴管等现象,符合犬炎性乳腺癌的特征;免疫组织化学染色结果证实,肿瘤为腺上皮起源,且淋巴管、血管内存在大量肿瘤栓子。通过病理学分析结合临床表现,3例病例均确诊为犬炎性乳腺癌。根据Pena分级标准,将病例1判定为Ⅲ级炎性乳腺癌,病例2和3判定为Ⅱ级炎性乳腺癌。本试验结果不仅可为犬炎性乳腺癌的病理诊断提供参考,而且为犬炎性乳腺癌临床病例治疗方案的制定和预后评估提供理论依据。

关键词：犬炎性乳腺癌病理组织学免疫组织化学

黄芪多糖合生元对大肠杆菌性犊牛腹泻粪便评分和血清指标的影响

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中国兽医学报 2024年第8期44卷 1807-1812页

作者：陈俊薛晨曦刘梦林李心慰吉林大学动物医学学院吉林长春130062

为探讨黄芪多糖合生元对大肠杆菌性犊牛腹泻粪便评分和血液指标的影响,本研究选择品种相同(荷斯坦),日龄相近(6~9日龄),体质量相近(44.56±5)kg的20头大肠杆菌性腹泻犊牛,使用单因素完全随机设计分为对照组和试验组。试验期10 d,试验期... 详细信息

为探讨黄芪多糖合生元对大肠杆菌性犊牛腹泻粪便评分和血液指标的影响,本研究选择品种相同(荷斯坦),日龄相近(6~9日龄),体质量相近(44.56±5)kg的20头大肠杆菌性腹泻犊牛,使用单因素完全随机设计分为对照组和试验组。试验期10 d,试验期内对照组与试验组犊牛每天肌肉注射博落回注射液(1 mg/kg)+恩诺沙星注射液(20 mg/kg)进行治疗,试验组犊牛除正常治疗方案外每天在饲奶中添加20 g黄芪多糖合生元制剂。试验期内每天上午9:00采集各组犊牛粪便进行粪便评分,试验期结束采集颈静脉血进行血液相关指标的检测。结果表明,试验组比对照组腹泻率下降17%,但粪便评分无显著统计学差异;试验组比对照组免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白M(IgM)含量分别增加54.81%和60.40%(P<0.01),免疫球蛋白G(IgG)和白细胞介素-10(IL-10)含量分别增加50.89%和46.80%(P<0.05),而白细胞介素-6(IL-6)含量减少28.99%(P<0.05),白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量分别减少20.88%和37.10%(P<0.01);试验组D-乳酸(D-LA)和内毒素(LPS)比对照组分别降低47.46%和65.31%(P<0.01),二胺氧化酶(DAO)活性降低30%(P<0.01);试验组比对照组总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量增加12.78%(P<0.05),过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性分别增加53.09%和60.57%(P<0.01),而丙二醛(MDA)含量降低33.29%(P<0.01)。结果表明,黄芪多糖合生元制剂可以缓解大肠杆菌性腹泻犊牛的肠黏膜损伤,提高机体免疫力并提升抗氧化应激能力,降低致病菌和氧化应激对肠黏膜通透性的影响。

关键词：黄芪多糖合生元犊牛腹泻粪便评分免疫球蛋白氧化应激

短链脂肪酸丁酸增强巨噬细胞预防问号钩端螺旋体的急性感染

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中国兽医学报 2024年第8期44卷 1743-1748页

作者：陈曦谢旭峰刘鑫刘久茜张文龙曹永国吉林大学动物医学学院吉林长春130062

钩端螺旋体病(钩体病)是一种全球性自然疫源性人兽共患传染病。研究表明,肠道菌群代谢产物短链脂肪酸参与宿主免疫调节、影响疾病进程。本试验旨在探究肠道菌群代谢产物短链脂肪酸在钩体病中的作用。结果表明,补充短链脂肪酸丁酸能显著... 详细信息

钩端螺旋体病(钩体病)是一种全球性自然疫源性人兽共患传染病。研究表明,肠道菌群代谢产物短链脂肪酸参与宿主免疫调节、影响疾病进程。本试验旨在探究肠道菌群代谢产物短链脂肪酸在钩体病中的作用。结果表明,补充短链脂肪酸丁酸能显著提高金黄地鼠钩体病存活率。体外试验表明,丁酸处理抑制感染钩体后巨噬细胞Cat和Gsr基因表达,但上调了NOX1和NOX4基因表达。同时,丁酸刺激增加了感染钩体巨噬细胞ROS水平,而高水平的ROS可增强巨噬细胞杀菌功能。体内试验也证实丁酸通过调节ROS的产生保护金黄地鼠抵抗急性钩端螺旋体病。综上所述,肠道菌群代谢产物短链脂肪酸丁酸通过调节ROS表达增强巨噬细胞杀菌功能,从而保护宿主抵抗钩体病。

关键词：丁酸钩体病 ROS 巨噬细胞肠道菌群

以企业难题为导向的“实践立题-高校培养-企业就业”培养模式构建和实践——以吉林大学兽医专业学位为例

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中国兽医杂志 2024年第7期60卷 151-156,F0003页

作者：李棕松张楠李赫贺文琦邱家章张茜雷连成李建华吉林大学动物医学学院吉林长春130062

本文立足兽医专业学位研究生教育,以找准兽医专业学位研究生培养目标定位为基准,对专业学位教育实践能力不足的问题进行分析;以兽医专业学位研究生实践立题为切入点,创新概念思路;以企业难题为导向,尝试构建一种兽医专业学位研究生培养... 详细信息

本文立足兽医专业学位研究生教育,以找准兽医专业学位研究生培养目标定位为基准,对专业学位教育实践能力不足的问题进行分析;以兽医专业学位研究生实践立题为切入点,创新概念思路;以企业难题为导向,尝试构建一种兽医专业学位研究生培养新模式新途径,提出兽医专业学位研究生培养实践新观点,探索出“实践立题-高校培养-企业就业”三位一体培养模式和构建要素。本文着重于兽医专业学位研究生的培养实践,以帮助解决企业难题为核心导向,旨在通过此途径强化研究生的实践能力培养,从而提升兽医专业学位研究生教育质量。

关键词：兽医专业学位培养模式企业难题实践创新

黄芪多糖合生元的制备及其对犊牛生长性能的影响

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中国兽医学报 2024年第8期44卷 1821-1830页

作者：王蓝卓薛晨曦陈俊李心慰刘国文吉林大学动物医学学院吉林长春130062

首先使用冷冻干燥法制备黄芪多糖合生元粉剂,响应面法优化后的冻干保护剂配方为17.99%脱脂乳粉,7.26%蔗糖,8.04%低聚半乳糖和9.64%黄芪多糖,余量为蒸馏水;制备的菌粉中乳酸菌存活率为88.06%。随后进行犊牛饲喂试验评价黄芪多糖合生元的... 详细信息

首先使用冷冻干燥法制备黄芪多糖合生元粉剂,响应面法优化后的冻干保护剂配方为17.99%脱脂乳粉,7.26%蔗糖,8.04%低聚半乳糖和9.64%黄芪多糖,余量为蒸馏水;制备的菌粉中乳酸菌存活率为88.06%。随后进行犊牛饲喂试验评价黄芪多糖合生元的临床应用效果。试验选取30头日龄相近(2~4日龄)、健康的新生犊牛,将其随机分为对照组和黄芪多糖合生元饲喂组,每组15头,试验期为28 d。结果表明,与对照组相比,黄芪多糖合生元饲喂组犊牛平均日增重(ADG)显著增加,而且粪便评分和腹泻率也显著降低;与对照组相比,黄芪多糖合生元饲喂组犊牛血清IgA、IgG、IgM、IL-2和IL-10含量显著升高,而血清IL-6和TNF-α含量显著降低;对粪便进行微生物多样性分析,黄芪多糖合生元能够显著增加Chao1、Sobs和Shannon指数并显著降低Simpson指数;在门水平上,蓝藻菌门(Cyanobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度在黄芪多糖合生元饲喂组显著增加,而变形菌门(Proteobacteria)相对丰度显著减少;在属水平上,黄芪多糖合生元饲喂组的大肠杆菌-志贺菌属(Escherichia-Shigella)相对丰度显著降低,未命名梭菌纲_UCG-014属(norank_f__norank_o__Clostridia_UCG-014)和丁酸球菌属(Butyricicoccus)相对丰度显著增加。综上,本研究成功制备出黄芪多糖合生元粉剂,并证明该粉剂能够显著促进犊牛的生长,增强免疫机能,改善肠道菌群结构并减少犊牛腹泻的发生率。

关键词：犊牛腹泻合生元黄芪多糖生长性能免疫功能肠道菌群