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一种迅捷、经济及高效回收DNA片段方法的建立

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吉林大学学报（医学版） 2008年第5期34卷 910-913页

作者：杨春伟孙妙囡孙德军吉林大学再生医学科学研究所生物技术药物教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院

目的:建立一种迅捷、经济、高效的从凝胶中回收DNA的方法。方法:以二氯二甲基硅烷硅化晴纶纱,以硅化的晴纶纱作为过滤垫层,冻融处理凝胶,离心收集液体,计算不同硅化晴纶纱厚度、不同冻融时间、不同离心力、不同离心时间和不同DNA片段长... 详细信息

目的:建立一种迅捷、经济、高效的从凝胶中回收DNA的方法。方法:以二氯二甲基硅烷硅化晴纶纱,以硅化的晴纶纱作为过滤垫层,冻融处理凝胶,离心收集液体,计算不同硅化晴纶纱厚度、不同冻融时间、不同离心力、不同离心时间和不同DNA片段长度的DNA回收率。结果:用硅化晴纶纱从凝胶中回收DNA时,0.5～2.0mm硅化晴纶纱厚度DNA片段回收率均在85%左右,提示不同硅化晴纶纱厚度对DNA片段回收率影响较小;冻融时间在30min前,随着冻融时间延长,回收率上升明显,至30min回收率达85%,再增加冻融时间回收率变化不显著,提示冻融时间对回收率影响较大,冻融时间应为1h;在***-1前,随着离心力增加,回收率上升明显,至***-1回收率达85%,再增加转速,回收率有略微上升,提示离心力对回收率影响较大,离心力应超过***-1(约合10000g);以***-1离心,30min前,离心时间对回收率影响较大,至30min时,回收率达85%,增加离心时间,回收率不再增加;250～2000bp长度DNA片段,回收率为80.7%～88.4%,即使100bp小片段回收率也能达到76%以上,表明片段大小对回收率影响较小,说明本方法的有效性。结论:硅化晴纶纱厚度0.5～2.0mm,冻融时间≥1h,离心力≥10000g,离心时间30minDNA回收率较高;硅化晴纶纱法可以高效地从电泳凝胶中回收目的DNA片段。

关键词： DNA 回收硅化晴纶纱

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牛胰脏RNA Ⅱ的制备

吉林大学学报（医学版） 2007年第6期33卷 1101-1103页

作者：赵轶卓孙妙囡孙德军吉林大学再生医学科学研究所生物技术药物教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院

目的：改进从牛胰脏制备RNAⅡ的方法，以降低成本，减少污染排放，提高产品的质量和收率。方法：采用酶-苯酚-氯仿稀盐法，替代传统方法的大剂量苯酚多次萃取法从牛胰脏提取RNAⅡ。结果：采用酶-苯酚-氯仿-稀盐法制备的RNAⅡ，制剂A260... 详细信息

目的：改进从牛胰脏制备RNAⅡ的方法，以降低成本，减少污染排放，提高产品的质量和收率。方法：采用酶-苯酚-氯仿稀盐法，替代传统方法的大剂量苯酚多次萃取法从牛胰脏提取RNAⅡ。结果：采用酶-苯酚-氯仿-稀盐法制备的RNAⅡ，制剂A260／A230、A260／A280的比值分别达到2．1和1．9以上，传统工艺为1．44和1．63；DNA含量控制在2％以下，传统工艺为6．2％；有机试剂消耗降低明显，由传统工艺的18000mL苯酚·kg^-1牛胰脏降低到600和300mL氯仿·kg^-1牛胰脏；成本由原来的253元·g^1牛胰脏核糖核酸降到11～14元·g^1牛胰脏核糖核酸。结论：采用酶-苯酚-氯仿-稀盐法制备的RNAⅡ中蛋白、多糖含量较低，纯度较传统方法有较大提高；该方法可减少有机试剂用量，减少污染排放，使生产成本大幅度下降；本工艺适合大规模生产RNAⅡ。

关键词： RNAⅡ 牛胰脏酶-苯酚氯仿-稀盐法

基于UPLC-Q-TOF MS技术的血栓心脉宁片成分分析

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质谱学报 2019年第3期40卷 244-252,I0002页

作者：谭静林红强刘云鹤王涵吴福林董庆海赵莹李平亚刘金平郝秀华吉林大学药学院天然药物研究中心吉林长春130021 吉林大学再生医学科学研究所生化研究室吉林长春130021 吉林大学药学院药物制剂教研室吉林长春130021

为全面了解中药大品种血栓心脉宁片(XXT)化学成分,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-Q-TOFMS)测定该复方制剂的小分子成分(100~1500u),通过UNIFI天然产物分析平台,比对各成分的精确分子质量、保留时间及质谱碎... 详细信息

为全面了解中药大品种血栓心脉宁片(XXT)化学成分,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-Q-TOFMS)测定该复方制剂的小分子成分(100~1500u),通过UNIFI天然产物分析平台,比对各成分的精确分子质量、保留时间及质谱碎片离子信息,分析鉴定各化合物结构。结果表明,在XXT中共鉴定出187种化学成分,包括三萜皂苷类、菲醌类、蟾蜍甾二烯类和甾体类及其他结构类型的化合物。血栓心脉宁片富含小分子化学成分且结构类型多样,是其发挥抗血瘀活性及多靶点作用机制的物质基础。该研究可为阐明XXT的药效物质基础和提升质量控制标准提供数据参考。

关键词：血栓心脉宁片(XXT) 化学成分超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-Q-TOFMS)

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一种复合果蔬发酵饮品增强免疫力功能研究

食品研究与开发 2014年第17期35卷 115-118页

作者：王智鼎李岳飞宋艳孙德军吉林大学药学院再生医学科学研究所生物技术药物教研室吉林长春130021

探讨免疫康对机体的免疫调节能力。使用混合果蔬发酵饮品对小鼠进行30d灌胃,进行小鼠迟发型变态反应(DTH),ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法),血清溶血素测定,抗体生成细胞(PFC),小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实... 详细信息

探讨免疫康对机体的免疫调节能力。使用混合果蔬发酵饮品对小鼠进行30d灌胃,进行小鼠迟发型变态反应(DTH),ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法),血清溶血素测定,抗体生成细胞(PFC),小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。小鼠的各项指标都有所改善,证实了混合果蔬发酵饮品可以从体液免疫、细胞免疫和单核巨噬细胞系统方面改善机体免疫力。

关键词：发酵免疫力饮品

rhKD/APP对大鼠急性胰腺炎血清炎性因子和胰腺组织超微结构的影响

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吉林大学学报（医学版） 2008年第1期34卷 32-34页

作者：蒋春晓张馨木张赢予顾国贞颜炜群吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室吉林长春130021

目的:观察rhKD/APP对实验性大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)血清炎性因子和胰腺组织超微结构的影响。方法:采用3.5%的牛磺胆酸钠0.1mL·100g-1逆行注入大鼠胰胆管内诱导ANP模型。60只大鼠随机分为假手术组(Sham组),模型组(Model组),rhKD/APP... 详细信息

目的:观察rhKD/APP对实验性大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)血清炎性因子和胰腺组织超微结构的影响。方法:采用3.5%的牛磺胆酸钠0.1mL·100g-1逆行注入大鼠胰胆管内诱导ANP模型。60只大鼠随机分为假手术组(Sham组),模型组(Model组),rhKD/APP低、中、高剂量组(4×104kU·kg-1、8×104kU·kg-1、16×104kU·kg-1组),阳性药抑肽酶组(Aproitin组),观察ANP大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)变化和胰腺组织超微结构变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清TNF-α和NO水平明显升高(P<0.001);与模型组比较,rhKD/APP中、高剂量组大鼠血清TNF-α和NO均降低(P<0.05或P<0.01),与阳性药抑肽酶组比较差异无显著性。胰腺组织超微结构显示细胞表面可见较多微绒毛,核仁明显,分泌颗粒增多。结论:rhKD/APP早期给药可显著减轻胰腺炎症反应,对大鼠急性胰腺炎具有治疗作用。

关键词： rhKD/APP 急性胰腺炎大鼠,Wistar 细胞因子

一种表现为皮肤胶原沉着病的小鼠慢性移植排斥模型的建立

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军事医学 2011年第8期35卷 599-602页

作者：侯春梅张及禄高小飞李新颖冯健男沈倍奋黎燕肖鹤军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室北京100850 吉林大学再生医学科学研究所生物技术药物教研室长春130021

目的建立一种小鼠慢性移植排斥模型。方法将6～8周龄BALB/c(雌性)小鼠经6 Gy60Co全身照射后随机分为同基因移植组和异基因移植组。异基因组尾静脉输注未经照射的B10.D2(雄性)小鼠的骨髓细胞和脾细胞的混合悬液。移植术后通过小鼠性染色... 详细信息

目的建立一种小鼠慢性移植排斥模型。方法将6～8周龄BALB/c(雌性)小鼠经6 Gy60Co全身照射后随机分为同基因移植组和异基因移植组。异基因组尾静脉输注未经照射的B10.D2(雄性)小鼠的骨髓细胞和脾细胞的混合悬液。移植术后通过小鼠性染色体基因组检测、组织病理学分析,以及流式细胞仪和实时定量PCR检测确定小鼠病变的发生。结果病理学分析显示,异基因组小鼠主要表现为皮肤损伤,与同基因组相比,皮肤明显增厚,皮肤弹性降低,真皮层炎性细胞浸润,毛囊和脂肪减少或消失,大量的纤维组织增生,皮下组织出现明显结构改变;性染色体基因组分析显示,异基因组受者小鼠皮肤内有供者小鼠细胞的浸润;流式结果显示,异基因组小鼠皮肤内CD11b、CD45和CD3表达明显增强;实时定量PCR检测结果显示,异基因组小鼠皮肤RANTES、TGF-β1以及胶原蛋白ⅠmRNA水平明显升高。结论与同基因组小鼠相比,异基因组小鼠表现为皮肤胶原沉着病损伤;CD11b+、CD45+和CD3+细胞以及趋化因子RANTES和细胞因子TGF-β1参与了这一病理过程的发生。本研究建立了一种表现为皮肤胶原沉着病的小鼠慢性移植排斥反应模型,为相关后续研究提供了有益的基础。

关键词：移植物排斥皮肤胶原沉着病动物模型

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蜂毒明肽的原核表达及纯化

中国生物制品学杂志 2009年第10期22卷 971-974页

作者：朱文赫王涵孙妙囡孙德军吉林大学再生医学科学研究所生物技术药物教研室长春130021 吉林大学中日联谊医院检验科长春130033 吉林大学基础医学院长春130021

目的原核表达并纯化蜂毒明肽。方法人工合成蜂毒明肽基因,与肠激酶识别序列基因串联,插入原核表达载体pGEX-2T中,构建蜂毒明肽与谷胱甘肽硫转移酶的融合表达载体pGEX-APAM。将重组质粒转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS... 详细信息

目的原核表达并纯化蜂毒明肽。方法人工合成蜂毒明肽基因,与肠激酶识别序列基因串联,插入原核表达载体pGEX-2T中,构建蜂毒明肽与谷胱甘肽硫转移酶的融合表达载体pGEX-APAM。将重组质粒转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并进行纯化和肠激酶切割。结果经Western blot鉴定,表达产物具有良好的反应原性。在优化的表达条件下,融合蛋白的表达量约占菌体总蛋白的25.8%,且大部分以可溶性形式存在。纯化的融合蛋白纯度大于95%,每毫克融合蛋白经肠激酶切割后,可得蜂毒明肽58.5μg,回收率为81.9%。结论已成功地原核表达并纯化了蜂毒明肽。

关键词：蜂毒明肽原核表达纯化

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复合培养人工皮肤的细胞生物学规律

吉林大学学报（医学版） 2005年第4期31卷 495-497,F002页

作者：马刚石毅周余来杨同书吉林大学再生医学科学研究所细胞工程研究室

目的:探讨复合培养人工皮肤构建过程中的细胞生物学规律。方法:应用组织工程学技术制备人工皮肤,计算收缩指数,3HTdR掺入法测定DNA合成能力,3H脯氨酸掺入法测定培养人工皮肤胶原蛋白合成能力。结果:培养12d之内,人工皮肤的收缩指数只有5... 详细信息

目的:探讨复合培养人工皮肤构建过程中的细胞生物学规律。方法:应用组织工程学技术制备人工皮肤,计算收缩指数,3HTdR掺入法测定DNA合成能力,3H脯氨酸掺入法测定培养人工皮肤胶原蛋白合成能力。结果:培养12d之内,人工皮肤的收缩指数只有5%左右;14d后开始出现较大的同心圆收缩,收缩指数14%～27%;23d后收缩指数维持在30%左右。3HTdR掺入率及3H脯氨酸掺入率随着培养时间的延长而逐渐升高。结论:复合培养人工皮肤增殖活跃,收缩不明显,具有合成细胞外基质的能力。

关键词：皮肤,人工胶原蛋白细胞增殖收缩指数

嗜酸乳杆菌高密度培养工艺条件的优化及其评价

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吉林大学学报（医学版） 2013年第5期39卷 1036-1040页

作者：宋艳李岳飞王智鼎宋帅孙德军吉林大学再生医学科学研究所生物技术药物教研室吉林长春130021 吉林农业大学发展学院生物制药技术教研室吉林长春130600

目的:探讨嗜酸乳杆菌培养条件,研制出一种菌活性高、密度大、操作简便、易于生产应用的发酵工艺,阐明乳酸菌直投式发酵剂的生产和应用。方法:选取嗜酸乳杆菌中国株为菌种,根据培养基成分的配比不同,分为实验组和对照组,优化培养条件以及... 详细信息

目的:探讨嗜酸乳杆菌培养条件,研制出一种菌活性高、密度大、操作简便、易于生产应用的发酵工艺,阐明乳酸菌直投式发酵剂的生产和应用。方法:选取嗜酸乳杆菌中国株为菌种,根据培养基成分的配比不同,分为实验组和对照组,优化培养条件以及MRS液体培养基的配方,通过紫外分光光度计检测菌液的吸光度(A650)值和活菌数量变化,筛选出最优的工艺过程。结果:通过筛选确定嗜酸乳杆菌的最佳培养条件是接种量1%,初始pH值6.2,37℃恒温厌氧培养23h;最适培养基配方为3.5%蛋白胨、0.5%酵母提取物、2%葡萄糖、0.2%柠檬酸铵、0.088%磷酸氢二钠、0.6%乙酸钠、0.025%硫酸锰、0.06%硫酸镁、1%营养因子和0.1%吐温80;由最适培养工艺培养得到的菌种数可达1.43×1011 cfu·mL-1,较传统培养方案相比菌种数增长约1×1011 cfu·mL-1,且工艺简便易行。结论:实现对嗜酸乳杆菌培养条件和培养基配方的优化,得到嗜酸乳杆菌最优培养工艺条件,菌种的高密度培养可用于乳酸菌直投式发酵剂的制备和应用。

关键词：嗜酸乳杆菌高密度培养条件优化工艺