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LEC-5在秀丽线虫中的表达及亚细胞定位

吉林农业大学学报 2024年第2期46卷 329-334页

作者：张楠程淑琴宫鹏涛李建华王晓岑李新张西臣吉林大学动物医学学院人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室长春130062

采用gibson组装法构建带有lec-5启动子的lec-5p::gfp::lec-5::lec-53’UTR目的质粒和带有肠道特异性vha-6启动子的vha-6p::gfp::lec-5::lec-53’UTR目的质粒,并通过显微注射方法获得游离型的LEC-5P::GFP::LEC-5荧光蛋白标记虫株和整合型的VHA-6P::GFP::LEC-5荧光蛋白标记虫株。利用激光共聚焦显微镜观察LEC-5在秀丽线虫中的表达和亚细胞定位。结果表明:LEC-5在秀丽线虫的肌肉组织和表皮组织中表达,并位于肠上皮细胞的顶端膜和胞质中的囊泡上。研究结果为进一步深入研究LEC-5在RAB-11介导的上皮细胞极性调控中的作用提供试验依据。

关键词：秀丽线虫 LEC-5蛋白 GFP标记虫株构建表达亚细胞定位

基于Fh010935蛋白的绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测方法的建立

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吉林农业大学学报 2024年第4期46卷 655-660页

作者：段佳慧刘少雄张楠李建华宫鹏涛王晓岑李新唐博张西臣吉林大学动物医学学院长春130062 吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室长春130062

利用肝片吸虫(Fasciola hepatica)重组蛋白Fh010935建立绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测方法。首先烧制胶体金溶液,对胶体金溶液pH,SPA标记量进行优化,透射电镜鉴定金标蛋白。然后优化检测(T)线重组蛋白Fh010935包被浓度、质控... 详细信息

利用肝片吸虫(Fasciola hepatica)重组蛋白Fh010935建立绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测方法。首先烧制胶体金溶液,对胶体金溶液pH,SPA标记量进行优化,透射电镜鉴定金标蛋白。然后优化检测(T)线重组蛋白Fh010935包被浓度、质控(C)线抗SPA抗体包被浓度,制备胶体金免疫层析试纸。最后评价试纸条的敏感性、特异性、重复性和保存期,并对内蒙古地区绵羊血清样品进行检测。结果表明:K_(2)CO_(3)最适浓度为0.4 mmol/L,SPA最佳标记量为6μg/mL,T线Fh010935重组蛋白最佳包被浓度为0.25 mg/mL,C线最佳包被浓度为8倍稀释抗SPA抗体。性能试验表明,该方法最低血清稀释度为1∶160,与绵羊捻转血矛线虫、双腔吸虫、新孢子虫感染血清无免疫交叉反应,重复性良好,4℃和常温放置保存期均达到180 d。对内蒙古地区64份绵羊血清样品进行检测,阳性率为14.1%。以肝片吸虫重组蛋白Fh010935为包被抗原建立的绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测法具有良好的敏感性、特异性和重复性,保存期较长,可用于绵羊肝片吸虫感染的快速检测及流行病学调查。

关键词：重组蛋白肝片吸虫胶体金免疫层析试纸法

囊型包虫病流行现状及犬抗成虫疫苗候选抗原研究进展

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中国兽医学报 2024年第2期44卷 403-412页

作者：吴小霞鄂玉婷丁静刘晓雷 Mehdi Borhani 王学林刘明远吉林大学动物医学学院人兽共患病研究所人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

棘球蚴病/包虫病(cystic echinococcosis,CE)是一种全球性的人畜共患动物源性疾病,严重威胁人类和家畜的生命。由细粒棘球蚴引起的CE在我国高发流行,免疫接种是预防该病流行的最理想途径,在过去的几十年中,许多研究已经描述了该病的保... 详细信息

棘球蚴病/包虫病(cystic echinococcosis,CE)是一种全球性的人畜共患动物源性疾病,严重威胁人类和家畜的生命。由细粒棘球蚴引起的CE在我国高发流行,免疫接种是预防该病流行的最理想途径,在过去的几十年中,许多研究已经描述了该病的保护性候选抗原及其在终末宿主和中间宿主免疫中的作用。目前EG95重组蛋白疫苗效果最好,对中间宿主羊的保护力可达到96%~100%。但终末宿主犬作为传播的核心传染源,对其仍缺乏有效的防控手段,尤其是缺乏有效的接种疫苗,因此疫苗在犬身上的潜在应用是未来研究的重点。能抑制犬体内虫体发育并减少虫体在犬肠道内产卵量的疫苗研发将有望控制包虫病在流行地区的传播,大大加快该病的控制和消除。本研究从细粒棘球绦虫的生命周期、分子流行病学、地理分布以及终末宿主犬疫苗候选抗原等方面进行系统综述,旨在对CE的传播、未来发展方向和防治提供理论参考,为加速我国在CE终末宿主疫苗的研发进程和尽早应用于防控实践奠定基础。

关键词：棘球蚴病/包虫病细粒棘球绦虫流行病学候选抗原疫苗犬

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青霉噻唑酸对雄性小鼠生殖功能的毒性作用

吉林农业大学学报 2024年

作者：胡瑞雪郭健柳增善赵柯胡盼卢士英李岩松任洪林王洋人兽共患传染病重症诊治全国重点实验室人兽共患病研究教育部重点实验室人兽共患病研究所吉林大学动物医学学院

抗生素残留正在成为国际食品贸易中最容易引发贸易冲突的敏感问题。抗生素残留超标已经给我国的动物性食品带来很大的经济损失，其中以青霉素的残留最为常见。青霉噻唑酸（Benzylpenicilloic acid，BPNLA）是青霉素的热解产物之一。先... 详细信息

抗生素残留正在成为国际食品贸易中最容易引发贸易冲突的敏感问题。抗生素残留超标已经给我国的动物性食品带来很大的经济损失，其中以青霉素的残留最为常见。青霉噻唑酸（Benzylpenicilloic acid，BPNLA）是青霉素的热解产物之一。先前研究表明，青霉噻唑酸对雄性生殖系统具有损伤作用，但其潜在机制尚不明确。为了探究青霉噻唑酸的毒性表现及作用机制，使用C57BL/6 雄性小鼠构建了急性毒性体内模型，评估了组织病理学、精子质量和骨髓微核率。结果表明：青霉噻唑酸导致了睾丸组织曲精小管排列疏松，细胞间隙变宽，精子数量、存活率以及骨髓微核率显著降低，同时精子畸形率明显增加，证实了其具有生殖毒性作用。使用正常小鼠睾丸Sertoli细胞（TM4细胞）构建了体外模型，利用转录组测序分析了青霉噻唑酸处理后引起的差异基因和信号通路的表达变化，同时通过ELISA检测炎症因子，发现细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-1β明显升高。综上，青霉噻唑酸能够导致雄性生殖障碍，其作用机制可能与调控炎症反应的信号通路相关。

关键词：青霉噻唑酸雄性生殖系统急性毒性转录组测序炎症

泛素特异性蛋白酶47调控狂犬病病毒感染的功能研究

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中国兽医学报 2024年

作者：张艳楠武梦阳王重阳董浩淼果鑫郭艺迪张茂林吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室

为探究泛素特异性蛋白酶47(ubiquitin-specific protease 47， USP47)对狂犬病病毒(rabies virus，RABV)感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a，N2a)的影响，本研究通过RT-qPCR、免疫印记和病毒滴度测定等技术，检测在N2a细胞中，RABV直... 详细信息

为探究泛素特异性蛋白酶47(ubiquitin-specific protease 47， USP47)对狂犬病病毒(rabies virus，RABV)感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a，N2a)的影响，本研究通过RT-qPCR、免疫印记和病毒滴度测定等技术，检测在N2a细胞中，RABV直接感染对USP47表达水平的影响，然后检测过表达USP47及敲低USP47后RABV 核蛋白和磷蛋白基因水平、蛋白水平和上清液病毒滴度的变化。结果显示，RABV感染会引起N2a细胞中USP47转录水平上调。过表达USP47后，RABV N和RABV P 基因和蛋白表达水平均上升，上清中病毒滴度也随之升高，同时白细胞介素6(IL-6)基因水平降低；敲低USP47后，RABV N和RABV P 基因和蛋白表达水平降低，上清中病毒滴度也相应降低，IL-6基因水平升高。结果表明，USP47可促进RABV感染，抑制白细胞介素6的表达。这一发现为深入研究USP47调控RABV感染的分子机制打下了基础。

关键词：狂犬病病毒感染泛素特异性蛋白酶47 白细胞介素6

旋毛虫泛素连接酶TP12446基因的活性鉴定及分析

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中国兽医学报 2024年

作者：张姝妍董子健庞建达王赛宁党倩倩尹凤英刘晓雷王学林吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室

以课题组前期转录组学试验数据为基础,筛选旋毛虫肌幼虫时期特异表达基因TP12446并预测其RNF家族属性。对其理化性质及活性进行分析和鉴定,为进一步对TP12446基因的功能进行探究奠定基础。采用生物信息学方法预测TP12446蛋白的理化性质... 详细信息

以课题组前期转录组学试验数据为基础,筛选旋毛虫肌幼虫时期特异表达基因TP12446并预测其RNF家族属性。对其理化性质及活性进行分析和鉴定,为进一步对TP12446基因的功能进行探究奠定基础。采用生物信息学方法预测TP12446蛋白的理化性质、结构等,利用体外泛素化反应验证其泛素连接酶活性,qPCR分析TP12446在旋毛虫不同时期表达特性。结果显示生物信息学分析表明TP12446蛋白由453个氨基酸组成,理论相对分子质量为51.48 kDa。且TP12446蛋白含信号肽并具有跨膜结构,属于分泌蛋白,主要定位于细胞质膜。TP12446蛋白结构分析表明二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,且含有RING结构域和PA结构域。B细胞抗原表位预测显示该蛋白共有10个B细胞抗原表位。糖基化和磷酸化位点预测显示,TP12446蛋白含有38个潜在磷酸化位点。PPI互作蛋白预测显示,TP12446蛋白与Usp8、Tmem37、Otub1、Otub2、Ubox5及CD151相互作用较强。qPCR检测表明,TP12446基因在肌幼虫时期高表达,体外泛素化反应验证了其E3泛素连接酶活性。TP12446蛋白为疏水性分泌蛋白,具有E3泛素连接酶活性,互作蛋白预测提示其可能参与调控细胞周期和细胞凋亡。

关键词：旋毛虫泛素连接酶生物信息学活性鉴定

狂犬病病毒感染N2a细胞引起的转录体差异表达

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中国兽医学报 2024年第8期44卷 1682-1690页

作者：刘晓敏郭艺迪果鑫张艳楠王重阳汪滋辰张丹玮张茂林吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

狂犬病是一种人畜共患疾病,对全球公共卫生构成极大威胁。狂犬病病毒(RABV)呈嗜神经性传播,会引发宿主严重的神经功能紊乱,致死率几乎100%。为鉴定RABV影响神经细胞功能的重要基因,本研究采用RNA测序(RNA-seq)方法建立并分析了固定毒株C... 详细信息

狂犬病是一种人畜共患疾病,对全球公共卫生构成极大威胁。狂犬病病毒(RABV)呈嗜神经性传播,会引发宿主严重的神经功能紊乱,致死率几乎100%。为鉴定RABV影响神经细胞功能的重要基因,本研究采用RNA测序(RNA-seq)方法建立并分析了固定毒株CVS-11感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a,N2a)的mRNA表达谱,并通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析确定差异表达基因(DEGs)。结果显示,在CVS-11毒株感染的N2a中,共有415个差异表达基因,其中89个为上调基因,326个为下调基因。差异表达基因涉及多种生物学过程,包括轴突传导信号通路、胆固醇代谢通路、氮代谢信号通路、鞘糖脂生物合成信号通路等,其中多种DEGs已被证明与RABV感染密切相关,从中挑选出12个与轴突传导、抗原处理与呈递等通路相关的差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证,其变化趋势与RNA-seq结果一致。本研究检测了神经细胞在RABV感染条件下基因转录组变化,为探究RABV感染对神经细胞功能的影响机制提供了新的线索。

关键词：狂犬病病毒 N2a细胞神经系统转录组

基于RPA-CRISPR/Cas12a的异尖线虫快速可视化检测方法

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中国兽医科学 2024年第6期54卷 735-741页

作者：王皓璐赵连静陈秀琴杨亚明吴方伟刘晓雷王洋白雪吉林大学、动物医学学院、人兽共患病研究所、人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 云南省寄生虫病防治所云南普洱665000

为了实现对海产品中异尖线虫的快速、便捷、高效的检测以控制其流行,针对异尖线虫内转录间隔区(ITS)保守序列设计重组酶聚合酶扩增(RPA)引物和CRISPR RNA(crRNA),并通过优化crRNA浓度等反应条件建立RPA-CRISPR/Cas12a荧光检测体系,并评... 详细信息

为了实现对海产品中异尖线虫的快速、便捷、高效的检测以控制其流行,针对异尖线虫内转录间隔区(ITS)保守序列设计重组酶聚合酶扩增(RPA)引物和CRISPR RNA(crRNA),并通过优化crRNA浓度等反应条件建立RPA-CRISPR/Cas12a荧光检测体系,并评估该方法的灵敏度、特异性与重复性,通过人工污染样品验证其实际检测能力。结果表明:RPA-CRISPR/Cas12a荧光检测体系可在40 min内完成反应,敏感性为1 copy/μL,该方法仅能检测出异尖线虫,不与宫脂线虫、肠舌状绦虫、带鱼鱼肉组织、小黄花鱼鱼肉组织反应。本实验建立的RPA-CRISPR/Cas12a荧光可视化检测体系快速、灵敏、特异,可应用于海产品中异尖线虫的检测。

关键词：异尖线虫 RPA CRISPR/Cas12a 可视化检测

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布鲁氏菌引发巨噬细胞铁死亡抑制其胞内寄生

中国动物传染病学报 2024年

作者：程梦妍刘学聪赵明明王志波刘益辛曹旗张凯邹德颖韩成胡盼卢士英李岩松卢强柳增善任洪林吉林大学人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室人兽共患病研究教育部重点实验室人兽共患病研究所动物医学学院重庆研究院辽宁省盘锦检验检测中心

为探究布鲁氏菌与巨噬细胞铁死亡的关系，本研究以不同感染复数的猪种布鲁氏菌S2菌株(*** S2)感染RAW264.7细胞12h后，利用试剂盒检测细胞活性、活性氧(ROS)、Fe2+、脂质过氧化(MDA)水平以及GSH和GSSG含量，RT-qPCR和Western blot检测... 详细信息

为探究布鲁氏菌与巨噬细胞铁死亡的关系，本研究以不同感染复数的猪种布鲁氏菌S2菌株(*** S2)感染RAW264.7细胞12h后，利用试剂盒检测细胞活性、活性氧(ROS)、Fe2+、脂质过氧化(MDA)水平以及GSH和GSSG含量，RT-qPCR和Western blot检测铁死亡相关分子的表达情况。加入铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)后，检测相同指标，并通过平板计数分析该抑制剂对布鲁氏菌胞内寄生的影响。结果发现：与空白组相比，*** S2感染显著降低细胞活性，增加细胞内ROS、Fe2+、MDA水平，降低GSH含量以及升高GSSG含量；并抑制谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)及胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)在转录水平和蛋白水平上的表达，且呈剂量相关性(P所述，布鲁氏菌感染引发巨噬细胞铁离子累积、脂质过氧化物增加，从而使细胞发生铁死亡，铁死亡抑制剂Fer-1又可增加布鲁氏菌胞内寄生数量，故布鲁氏菌可能通过引发巨噬细胞铁死亡的方式抑制其胞内寄生。

关键词：布鲁氏菌铁死亡 Fer-1 胞内寄生