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蜂毒肽诱导人肝癌细胞系SMMC-7721程序性坏死

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解剖学报 2021年第1期52卷 67-72页

作者：李亚巍张巍李妍侯建成张红朱文赫吉林医药学院生物化学教研室吉林吉林132013

目的探讨蜂毒肽(MLT)对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤作用及可能机制。方法采用MTT法检测不同浓度蜂毒肽对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤及程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对蜂毒肽杀伤SMMC-7721细胞的抑制作用。Hoechst 33342及PI双染... 详细信息

目的探讨蜂毒肽(MLT)对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤作用及可能机制。方法采用MTT法检测不同浓度蜂毒肽对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤及程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对蜂毒肽杀伤SMMC-7721细胞的抑制作用。Hoechst 33342及PI双染色观察细胞程序性坏死的发生,流式细胞术检测细胞程序性坏死率,透射电子显微镜检测细胞超微结构变化,Western blotting法检测SMMC-7721细胞内受体相互作用蛋白1(RIP1)的表达变化。结果与对照组比较,不同浓度蜂毒肽作用SMMC-7721细胞24 h后,细胞增殖活力明显下降(P<0.05);细胞染色呈深蓝色和红色的形态;细胞膜完整性被破坏、细胞器肿胀、细胞器膜被破坏、核膜完整性丧失,表明细胞发生坏死;Westen blotting结果显示,SMMC-7721细胞内RIP1表达比例升高。与蜂毒肽给药组比较,Nec-1预处理组细胞增殖活力显著提高,细胞坏死率降低,细胞内RIP1表达下调。结论蜂毒肽通过RIP1介导的程序性坏死途径诱导SMMC-7721细胞死亡。

关键词：蜂毒肽肝癌细胞系SMMC-7721 程序性坏死特异性抑制剂-1 受体相互作用蛋白1 免疫印迹法人

anoctamin 1在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其离子通道特性

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吉林大学学报（医学版） 2014年第6期40卷 1226-1231,1337页

作者：郝峰王皓许会静方青张丽朱杭飞张雲乔鞠晓红吉林医药学院生物化学检验教研室吉林吉林132013 吉林医药学院实验中心吉林吉林132013 吉林医药学院病原教研室吉林吉林132013

目的:探讨anoctamin 1在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达情况,分析其离子通道特性,为研究钙激活氯离子通道的生理功能提供实验依据。方法:PCR方法获得anoctamin 1编码区基因,构建pcDNA3.1-anoctamin 1真核表达载体。脂质体转染anoctamin ... 详细信息

目的:探讨anoctamin 1在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达情况,分析其离子通道特性,为研究钙激活氯离子通道的生理功能提供实验依据。方法:PCR方法获得anoctamin 1编码区基因,构建pcDNA3.1-anoctamin 1真核表达载体。脂质体转染anoctamin 1至CHO中,抗生素筛选获取稳定表达anoctamin 1的CHO株。应用RT-PCR技术和倒置荧光显微镜检测anoctamin 1于CHO中的表达和分布情况。应用卤族元素敏感的黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L检测anoctamin 1离子通道的功能。以加入calcimycin和高浓度碘离子的PBS缓冲液的为实验组,未加入calcimycin和高浓度碘离子的PBS缓冲液的为对照组。结果:限制性内切酶酶切后的琼脂糖凝胶电泳和测序,目的基因anoctamin 1克隆至真核表达载体pcDNA3.1;RT-PCR和倒置荧光显微镜观察,CHO在mRNA和蛋白水平表达anoctamin 1,且anoctamin 1蛋白主要表达于CHO膜上;荧光淬灭动力学实验,CHO表达的anoctamin 1具有转运碘离子的作用,且实验组碘离子转运速度显著高于对照组(P<0.05)。结论:anoctamin 1可高效表达于CHO膜;CHO表达的anoctamin 1具有经典钙激活氯离子通道特性。

关键词： anoctamin 1 离子通道卵巢细胞中国仓鼠

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芩丹颗粒对微波辐射小鼠心脏损伤的防护作用

中国药理学与毒理学杂志 2015年第4期29卷 559-564页

作者：朱文赫钟秀宏徐俊杰张红吕士杰吉林医药学院生物化学教研室吉林吉林132013

目的探讨芩丹颗粒对微波辐射小鼠心脏损伤的防护作用。方法 60只小鼠随机分为正常对照组、100 m W·cm-2辐射损伤组、辐射损伤+芩丹颗粒2.5,5.0和10.0 g·kg-1防护组。芩丹颗粒防护组小鼠于辐射前7 d每天ig给药1次。辐射后6 h,取静脉血... 详细信息

目的探讨芩丹颗粒对微波辐射小鼠心脏损伤的防护作用。方法 60只小鼠随机分为正常对照组、100 m W·cm-2辐射损伤组、辐射损伤+芩丹颗粒2.5,5.0和10.0 g·kg-1防护组。芩丹颗粒防护组小鼠于辐射前7 d每天ig给药1次。辐射后6 h,取静脉血,用生化法检测血清谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性。取心肌组织,用比色法检测三磷酸腺苷(ATP)含量、线粒体呼吸链复合体Ⅳ和Ⅴ活性,用光镜和电镜观察心肌组织结构的变化,用Western蛋白印迹法检测细胞色素c(Cyt c)和激活型胱天蛋白酶3表达的变化。结果与正常对照组比较,微波辐射组小鼠心肌细胞水肿、线粒体数量减少且形态异常,血清中GOT,CK和LDH活性升高(P<0.01),线粒体呼吸链复合体Ⅳ和Ⅴ活性显著下降(P<0.01),心肌细胞Cyt c和激活型胱天蛋白酶3蛋白表达显著升高(P<0.01)。与辐射损伤组比较,芩丹颗粒5.0和10.0 g·kg-1防护组小鼠心肌细胞体积正常,细胞核和细胞器形态完好,心肌细胞结构损伤程度显著缓解;心肌组织ATP含量、线粒体呼吸链复合体Ⅳ和Ⅴ活性均显著升高(P<0.01);心肌细胞Cyt c和激活型胱天蛋白酶3蛋白表达均显著下降(P<0.01)。结论芩丹颗粒对微波辐射致小鼠心肌细胞损伤具有一定的防护作用,其机制可能与其改善微波所致心肌细胞能量代谢有关。

关键词：微波辐射芩丹颗粒 ATP 线粒体呼吸链

双氢青蒿素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制研究

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中国药学杂志 2018年第3期53卷 187-192页

作者：朱文赫陈丽红许娜徐俊杰张红李妍吕士杰张巍吉林医药学院生物化学教研室吉林吉林132013

目的探讨双氢青蒿素在体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用,并初步研究其可能分子机制。方法 25,50,100,200和400μmol·L^(-1)双氢青蒿素作用SMMC-7721细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测双氢青蒿素对SMMC-7721细胞增殖的抑制... 详细信息

目的探讨双氢青蒿素在体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用,并初步研究其可能分子机制。方法 25,50,100,200和400μmol·L^(-1)双氢青蒿素作用SMMC-7721细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测双氢青蒿素对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,激光共聚焦显微镜检测凋亡形态的变化,Rho123染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blot法检测细胞内Bcl-2,Bax,Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达变化。结果 MTT实验结果表明,25~400μmol·L^(-1)双氢青蒿素对SMMC-7721细胞增殖具有明显的抑制作用。流式细胞仪检测周期结果显示,双氢青蒿素可以使SMMC-7721细胞周期阻滞于G2/M期。Hochest 333258染色结果显示,给药组细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂的凋亡形态。流式细胞仪检测凋亡结果显示,双氢青蒿素给药组细胞凋亡随药物浓度呈现升高趋势(P<0.01)。Rho 123染色结果显示,双氢青蒿素给药组细胞线粒体膜电位呈现明显的下降趋势(P<0.01)。Western blot结果显示,双氢青蒿素给药组细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高。结论双氢青蒿素能诱导SMMC-7721细胞凋亡,其凋亡机制可能与线粒体途径相关。

关键词：双氢青蒿素细胞凋亡线粒体膜电位肝癌细胞 G,/M期阻滞

西兰花多肽组分分离及对过氧化氢所致血管内皮细胞损伤的保护作用研究

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中国药学杂志 2017年第16期52卷 1403-1408页

作者：朱文赫徐俊杰张巍李妍张红吕士杰吉林医药学院生物化学教研室吉林吉林132013

目的探索西兰花多肽组分对过氧化氢(H_2O_2)所致血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法采用醇沉,Sephadex G-25凝胶过滤层析获得分离西兰花多肽组分。体外培养人静脉血管内皮细胞EVC-304,经不同浓度西兰花多肽组分Ⅱ(1、2、4、8μg... 详细信息

目的探索西兰花多肽组分对过氧化氢(H_2O_2)所致血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法采用醇沉,Sephadex G-25凝胶过滤层析获得分离西兰花多肽组分。体外培养人静脉血管内皮细胞EVC-304,经不同浓度西兰花多肽组分Ⅱ(1、2、4、8μg·mL^(-1))处理细胞24 h后,加入100μmol·L^(-1) H_2O_2再进行培养12 h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,细胞分析仪检测EVC-304细胞凋亡和线粒体膜电位的变化,试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测细胞内激活型Caspase-3、细胞色素C(Cyto C)、Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果 Sephadex G-25凝胶过滤层析共获得4个洗脱峰,选择西兰花多肽组分Ⅱ用于后续实验。实验结果表明,同正常组相比,H_2O_2损伤组细胞存活率显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),线粒体膜电位去极化细胞比例升高(P<0.01),MDA含量增加,SOD活性减少,激活型Caspase-3、细胞质中Cyto C表达水平,Bax/Bcl-2比值升高(P<0.01)。与H2O2损伤组相比,2、4、8μg·mL^(-1)西兰花多肽组分Ⅱ处理组细胞存活率明显升高(P<0.01),凋亡细胞率明显下降(P<0.01),线粒体膜电位去极化细胞比例下降(P<0.01),MDA含量下降,SOD活性升高,细胞内激活型Caspase-3,Cyto C表达,Bax/Bcl-2比值下降(P<0.01)。结论西兰花多肽组分Ⅱ对H_2O_2所致血管内皮细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与保护血管内皮细胞受损线粒体功能相关。

关键词：西兰花多肽细胞凋亡氧化损伤心血管疾病

钙激活氯通道ANO1在小鼠心肌细胞的表达及其功能鉴定

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中国病理生理杂志 2015年第3期31卷 539-542页

作者：侯毅鞠许会静张雲乔扈昕虹郝峰吉林医药学院临床生物化学检验教研室吉林吉林132013

目的:探讨钙激活氯通道蛋白anoctamin 1(ANO1)在小鼠原代培养心肌细胞中的表达及其功能特性。方法:采用胰酶与胶原酶共同消化,联合2次差速贴壁法获得C57BL/6小鼠原代心肌细胞;并用免疫荧光染色法检测α-横纹肌肌动蛋白,以鉴定心肌细胞纯... 详细信息

目的:探讨钙激活氯通道蛋白anoctamin 1(ANO1)在小鼠原代培养心肌细胞中的表达及其功能特性。方法:采用胰酶与胶原酶共同消化,联合2次差速贴壁法获得C57BL/6小鼠原代心肌细胞;并用免疫荧光染色法检测α-横纹肌肌动蛋白,以鉴定心肌细胞纯度;应用RT-PCR检测小鼠心肌细胞ANO1 mRNA的表达;免疫印迹检测ANO1蛋白在小鼠心肌细胞的表达情况;应用荧光淬灭动力学实验检测ANO1钙激活氯通道的功能特性。结果:RT-PCR结果表明原代培养的小鼠心肌细胞表达ANO1 mRNA。免疫印迹实验结果显示原代培养的小鼠心肌细胞表达ANO1蛋白。荧光淬灭动力学实验证实表达于小鼠心肌细胞的ANO1具有钙激活氯通道典型的阴离子转运功能特性。结论:ANO1在小鼠心肌细胞中有明确表达,并具有钙激活氯离子通道特性,提示ANO1是钙激活氯通道的分子基础。

关键词： Anoctamin 1 钙激活氯离子通道心肌细胞

鹿茸多肽对过氧化氢所致血管内皮细胞损伤的保护作用

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中国药理学与毒理学杂志 2014年第5期28卷 697-701页

作者：朱文赫张巍李妍徐俊杰吕士杰吉林医药学院生物化学教研室吉林吉林132013

目的观察鹿茸多肽对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养人静脉血管内皮细胞EVC-304加入鹿茸多肽20,40和80 mg·L-1,培养24 h后再加入H2O2100μmol·L-1作用12 h。MTT法检测细胞存活率,Hoechst333258染色... 详细信息

目的观察鹿茸多肽对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养人静脉血管内皮细胞EVC-304加入鹿茸多肽20,40和80 mg·L-1,培养24 h后再加入H2O2100μmol·L-1作用12 h。MTT法检测细胞存活率,Hoechst333258染色法观察EVC-304细胞形态,用试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Western蛋白质印迹法检测细胞内胱天蛋白酶3和热激蛋白70(HSP70)的表达。结果同正常组相比,H2O2使细胞存活率明显降低(P<0.01),细胞染色质固缩,细胞核致密浓染,且胞核变小浓集,SOD活性降低,MDA含量升高(P<0.01),胱天蛋白酶3和HSP70表达升高(P<0.01)。与H2O2组相比,鹿茸多肽20,40和80 mg·L-1组细胞存活率明显增加(P<0.01),凋亡率由(25.3±1.0)%下降至(15.2±1.2)%,(10.3±0.9)%和(7.9±1.4)%(P<0.01),SOD活性升至19.2±0.5,22.3±1.7和(24.9±0.6)kU·g-1蛋白(P<0.01),MDA含量降至1.51±0.2,1.48±0.3和(1.02±0.1)μmol·g-1蛋白(P<0.01),细胞内胱天蛋白酶3和HSP70表达显著下降(P<0.01)。结论鹿茸多肽对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤具有明显的保护作用,其机制可能与改善细胞内的氧化应激水平有关。

关键词：鹿茸多肽过氧化氢内皮细胞细胞凋亡

胡桃醌及其与顺铂联用对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第4期27卷 663-667页

作者：张巍朱文赫李妍赵行宇罗军徐俊杰姜艳霞金瑛吉林医药学院生物化学教研室吉林吉林132013 吉林医药学院生理教研室吉林吉林132013 吉林医药学院药物化学教研室吉林吉林132013

目的探讨胡桃醌及其与顺铂联合用药对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,加入胡桃醌10～200μ***-1或者胡桃醌20μ***-1+顺铂20μ***-1继续培养8 h或24 h,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,用MTT法测定细胞... 详细信息

目的探讨胡桃醌及其与顺铂联合用药对宫颈癌HeLa细胞存活和凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,加入胡桃醌10～200μ***-1或者胡桃醌20μ***-1+顺铂20μ***-1继续培养8 h或24 h,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,用MTT法测定细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞周期和细胞早期凋亡率。结果胡桃醌10,20,50,100和200μ***-1与HeLa细胞作用24 h,随着胡桃醌浓度的增加,光镜下HeLa细胞逐渐变小、变圆;HeLa细胞存活率明显降低,分别由对照组的(100.0±0.0)%降低至(87.2±5.6)%,(66.2±4.8)%,(54.5±4.9)%,(42.5±6.4)%和(32.0±2.2)%(P<0.05,P<0.01);HeLa细胞G2/M期百分率逐渐增加,分别由对照组的(7.5±1.2)%增加到(12.9±1.2)%,(16.2±2.8)%,(23.6±3.9)%,(34.2±4.2)%和(52.6±7.8)%(P<0.05,P<0.01)。胡桃醌联合顺铂作用24 h,光镜下脱壁细胞增加,细胞形态变圆,较胡桃醌和顺铂单用组更加明显;联合用药组细胞存活率为(35.0±6.1)%,较胡桃醌和顺铂单用组〔(78.2±12.5)%和(58.5±10.9)%〕明显降低(P<0.01)。胡桃醌联合顺铂作用8 h,HeLa细胞早期凋亡率为(24.6±5.7)%,高于胡桃醌和顺铂单用组〔(6.7±1.5)%和(0.4±2.8)%〕(P<0.01)。结论胡桃醌可抑制HeLa细胞存活,促进HeLa细胞凋亡,与顺铂联合使用具有协同作用。

关键词：胡桃醌顺铂细胞凋亡细胞周期

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西兰花多肽抑制胶质瘤细胞生长的机制研究

中国药学杂志 2014年第12期49卷 1027-1031页

作者：齐玲徐俊杰纪朋艳吕士杰韩磊王玮瑶吉林医药学院病理教研室吉林吉林132013 吉林医药学院生物化学教研室吉林吉林132013

目的研究西兰花多肽抑制大鼠C6胶质瘤细胞生长的作用机制。方法培养大鼠C6胶质瘤细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测西兰花多肽对C6胶质瘤细胞生长的抑制作用;倒置显微镜观察西兰花多肽抑制C6胶质瘤细胞生长的形态学变化;流式细胞仪分析C6胶质... 详细信息

目的研究西兰花多肽抑制大鼠C6胶质瘤细胞生长的作用机制。方法培养大鼠C6胶质瘤细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测西兰花多肽对C6胶质瘤细胞生长的抑制作用;倒置显微镜观察西兰花多肽抑制C6胶质瘤细胞生长的形态学变化;流式细胞仪分析C6胶质瘤细胞的细胞周期变化;蛋白质印迹法检测C6胶质瘤细胞bax、bcl-2和caspase 3蛋白表达的变化。结果与对照组比较,48 h时10μg·mL-1西兰花多肽组细胞的生长明显受抑制,72 h时1和10μg·mL-1西兰花多肽组细胞的生长显著受抑制(P<0.01,P<0.001)。倒置显微镜观察发现,西兰花多肽作用后C6胶质瘤细胞随浓度升高而明显减少,并可见到凋亡小体。SubG1凋亡细胞百分率随着受试物浓度升高呈上升趋势,10μg·mL-1西兰花多肽组凋亡最明显(P<0.01);G0/G1期与G2/M期细胞的数量减少,S期细胞数量增加。1和10μg·mL-1西兰花多肽可使bax/bcl-2比值增加,10μg·mL-1西兰花多肽使caspase 3蛋白表达明显增加(P<0.01,P<0.001)。结论西兰花多肽可能通过阻滞细胞周期、激活细胞凋亡途径,使C6胶质瘤细胞的生长受抑制。

关键词：西兰花多肽胶质瘤抑制生长