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牛源犬新孢子虫NcSAG1基因重组腺病毒株的构建及动物免疫试验

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中国农业科学 2012年第22期45卷 4705-4712页

作者：贾立军张守发延边大学农学院动物医学系

【目的】构建表达牛源犬新孢子虫NcSAG1基因的重组腺病毒株,并接种Balb/c小鼠,评价重组腺病毒株对Balb/c小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平。【方法】PCR扩增牛源犬新孢子虫NcSAG1基因,构建pMD18-T-NcSAG1克隆质粒和pCR259-NcSAG1重组... 详细信息

【目的】构建表达牛源犬新孢子虫NcSAG1基因的重组腺病毒株,并接种Balb/c小鼠,评价重组腺病毒株对Balb/c小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平。【方法】PCR扩增牛源犬新孢子虫NcSAG1基因,构建pMD18-T-NcSAG1克隆质粒和pCR259-NcSAG1重组腺病毒穿梭质粒;将鉴定正确的pCR259-NcSAG1重组腺病毒穿梭质粒依次转化HighQ-1 Transpose-Ad 294和HighQ-1感受态细胞,构建Transpose-Ad-NcSAG1重组腺病毒表达质粒;PacI酶切线性化后,脂质体介导转染QBI-HEK 293细胞包装重组腺病毒Ad5-NcSAG1,应用PCR和Westernblotting技术检测Ad5-NcSAG1及其表达蛋白产物。测定Ad5-NcSAG1重组腺病毒滴度后,接种Balb/c小鼠,测定小鼠血清中IgG特异性抗体和细胞因子IFN-γ、IL-4水平,以此评价重组腺病毒株的免疫应答效果。【结果】扩增的牛源犬新孢子虫NcSAG1基因大小为982bp,与GenBank中发表的NcSAG1(AF132217)核苷酸序列的同源性为99.2%;经PCR和Western blotting检测,重组腺病毒Ad5-NcSAG1在QBI-HEK 293细胞中包装成功,表达蛋白的分子量为33kD,具有较好的反应原性;测得重组腺病毒Ad5-NcSAG1滴度为1010TCID50/mL,Ad5-NcSAG1接种Balb/c小鼠后,能够诱导产生高水平的IgG特异性抗体和IFN-γ、IL-4细胞因子。说明Ad5-NcSAG1重组腺病毒对Balb/c小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答。【结论】成功构建了牛源犬新孢子虫NcSAG1基因的重组腺病毒株,该毒株能够诱导Balb/c小鼠产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,为犬新孢子虫新型疫苗的临床试验奠定了基础。

关键词：牛犬新孢子虫 NcSAG1 重组腺病毒动物免疫

我国蜱和人群中TBEV流行情况的Meta分析

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中国人兽共患病学报 2021年第7期37卷 631-638页

作者：门晓钰杜海莹蔡晓静付力安朱妍东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

目的通过评价蜱、人群中蜱传脑炎病毒阳性率及血清抗体阳性率的情况,分析蜱传脑炎在我国的流行特点,明确我国现行蜱传脑炎预防控制措施疫苗接种的重要意义,为该病的预防控制提供科学依据。方法检索PubMed、万方、维普和知网数据库搜集20... 详细信息

目的通过评价蜱、人群中蜱传脑炎病毒阳性率及血清抗体阳性率的情况,分析蜱传脑炎在我国的流行特点,明确我国现行蜱传脑炎预防控制措施疫苗接种的重要意义,为该病的预防控制提供科学依据。方法检索PubMed、万方、维普和知网数据库搜集2000-2019年发表的关于蜱中蜱传脑炎病毒阳性率和人血清学调查的文章,通过Meta分析方法利用Stata15软件对选定的11篇和12篇相关文献进行汇总和分析,得到蜱传脑炎在我国蜱和人群中的流行特点。结果 2000-2019年我国TBEV阳性蜱主要分布在吉林、黑龙江和内蒙古。不同蜱种中TBEV阳性率不同,森林革蜱中TBEV阳性率最高为5%(95%CI:2%~10%,P<0.05)。人群特征分析显示:男性抗体阳性率高于女性,林区工人、军人和农民易感染。不同地区人群血清抗体阳性率差异很大,新疆地区的抗体阳性率最高为14%(95%CI:9%~21%,P<0.05)。结论我国TBEV流行多在东北地区,阳性蜱以森林草蜱为主,感染人群多为林区工人、军人和农民。

关键词：蜱传脑炎蜱血清流行病学

动物家族性高脂蛋白血症──人类高血压、高脂血症自发模型

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中国兽医杂志 1995年第5期21卷 40-42页

作者：张乃生李毓义解放军农牧大学动物医学系

动物家族性高脂蛋白血症──人类高血压、高脂血症自发模型张乃生，李毓义（解放军农牧大学动物医学系，吉林长春１３００６２）遗传性高脂蛋白血症的根本病因，不论在人或动物，都在于脂质代谢的先天缺陷，主要发病环节则因病型而不同... 详细信息

动物家族性高脂蛋白血症──人类高血压、高脂血症自发模型张乃生，李毓义（解放军农牧大学动物医学系，吉林长春１３００６２）遗传性高脂蛋白血症的根本病因，不论在人或动物，都在于脂质代谢的先天缺陷，主要发病环节则因病型而不同。家族性甘油三酯血症，主要起因于肝...

关键词：动物家族性高脂蛋白血症高血压高脂血症

鼻气管炎鸟疫杆菌株的分离鉴定及最低抑菌浓度测定

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中国农业大学学报 2012年第2期17卷 124-129页

作者：刘爱晶潘青田德雨侯娜何诚中国农业大学动物医学院北京100193

为测定鼻气管炎鸟疫杆菌对不同药物的敏感程度,本试验从北京、吉林、河北、内蒙和山东地区患严重气囊炎病鸡的肺脏以及辽宁肉种鸡蛋黄中成功分离到了6株鼻气管炎鸟疫杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT),并通过染色镜检、生化试... 详细信息

为测定鼻气管炎鸟疫杆菌对不同药物的敏感程度,本试验从北京、吉林、河北、内蒙和山东地区患严重气囊炎病鸡的肺脏以及辽宁肉种鸡蛋黄中成功分离到了6株鼻气管炎鸟疫杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT),并通过染色镜检、生化试验和PCR法对其进行了鉴定。随后选择山东分离株在培养基上繁殖,经腹腔注射接种21日龄SPF鸡,接种后出现典型的肺炎和气囊炎,并测定其半数致死量。在此基础上,采用微量测定法测定6个临床分离菌株和3个对照菌株对12种药物的最小抑菌浓度(MIC)。9株ORT对于莫西沙星、甲磺酸加替沙星和乳酸环丙沙星比较敏感,MIC值为0.49～31.25μg/mL;临床广泛使用的盐酸强力霉素MIC测定值变化较大,分布在1.90～125μg/mL;除北京株和吉林株外,其他7株ORT对利福平比较敏感,MIC值为3.91～15.6μg/mL;分离株对于氟苯尼考、四环素、金霉素、磺胺间甲氧嘧啶、磷霉素钠和头孢噻肟钠不敏感,部分菌株的MIC值已经超过1 000μg/mL。

关键词：鸡鼻气管炎乌疫杆菌分离鉴定最小抑菌浓度

新孢子虫NcGRA2t基因的原核表达及鉴定

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中国兽医杂志 2015年第4期51卷 33-34+38页

作者：金春梅于龙政张守发延边大学农学院动物医学系

为研究新孢子虫GRA2t基因的原核表达及其表达产物的免疫活性,用EcoRI和XhoI限制性内切酶从pMD20-NcGRA2t上切下NcGRA2t基因,克隆入pGEX-4T1中构建NcGRA2t-GST融合蛋白基因的重组表达载体pGEX-4T1-NcGRA2t。经测序验证后,在大肠杆菌BL-21... 详细信息

为研究新孢子虫GRA2t基因的原核表达及其表达产物的免疫活性,用EcoRI和XhoI限制性内切酶从pMD20-NcGRA2t上切下NcGRA2t基因,克隆入pGEX-4T1中构建NcGRA2t-GST融合蛋白基因的重组表达载体pGEX-4T1-NcGRA2t。经测序验证后,在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,表达产物采用谷胱甘肽-琼脂糖层析柱进行纯化。用Westernblotting方法,以犬感染新孢子虫Ncl株的血清鉴定表达产物的活性。结果,构建了pGEX-4T1-NcGRA2t原核表达质粒,并在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达分子量为46 ku的NcGRA2t-GST融合蛋白,表达产物经谷胱甘肽-琼脂糖层析柱纯化后,得到N端带有GST标签的NcGAR2t蛋白。Westernblotting结果显示,表达产物具有生物学活性。

关键词：新孢子虫 NcGRA2t 原核表达

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犬附红细胞体PCR检测方法的建立及应用

畜牧与兽医 2013年第3期45卷 81-84页

作者：夏晓辉丁晓双张晓轩张守发许应天延边大学农学院动物医学系

通过将GenBank上报道的犬附红细胞体16S rRNA基因序列与其他物种同源序列进行比对,取其种间特异性和种内保守性较高区域设计1对引物,以吉林省延边地区犬附红细胞体基因组DNA为模板进行PCR扩增,并进行特异性、敏感性试验验证,建立犬附红... 详细信息

通过将GenBank上报道的犬附红细胞体16S rRNA基因序列与其他物种同源序列进行比对,取其种间特异性和种内保守性较高区域设计1对引物,以吉林省延边地区犬附红细胞体基因组DNA为模板进行PCR扩增,并进行特异性、敏感性试验验证,建立犬附红细胞体PCR诊断方法,应用于临床检测。结果表明:该方法可成功扩增出大小为529 bp的犬附红细胞体片段,与GenBank中German no.1(AY150973.1)序列同源性为98.5%。其最低DNA检测量为25 fg/μL,不与犬巴贝斯虫、犬弓形虫及猪附红细胞体等病原体基因组产生交叉反应。同时通过对57份犬血液样本的检测结果说明,该方法检出率明显高于姬姆萨染色镜检法,且避免了假阳性。本试验所建立的PCR检测方法具有特异、敏感、准确等优点,为犬附红细胞体病的诊断提供了一种可靠的方法。

关键词：犬附红细胞体 16SrRNA PCR

鹅细小病毒延边株VP3基因真核表达质粒构建

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江苏农业科学 2010年第3期 20-21+90页

作者：杜秋明鲁承王暖成延边大学农学院动物医学系

用碱裂解法对鹅细小病毒延边分离株进行GPV基因组DNA提取。根据已发表的鹅细小病毒VP3基因序列,设计1对含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的引物,以GPV基因组DNA为模板,应用PCR扩增出VP3基因片段,将VP3基因与克隆载体pMD 18-T连接,转化到感受... 详细信息

用碱裂解法对鹅细小病毒延边分离株进行GPV基因组DNA提取。根据已发表的鹅细小病毒VP3基因序列,设计1对含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的引物,以GPV基因组DNA为模板,应用PCR扩增出VP3基因片段,将VP3基因与克隆载体pMD 18-T连接,转化到感受态大肠杆菌BL21中进行克隆。用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切该片段并回收该片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pVAXI真核表达载体中,获得重组质粒pVAXI-VP3,经PCR鉴定,限制性内切酶双酶切分析和克隆片段序列测定比较,证实了重组质粒的正确性。

关键词：鹅细小病毒 VP3基因真核表达构建

不同水平肌醇对獭兔皮肤中β-连环蛋白和激素敏感脂酶表达的影响

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动物营养学报 2017年第8期29卷 2743-2750页

作者：李敏崔亚利王丙雷陈宝江河北农业大学动物医学院保定071000 河北农业大学动物科技学院保定071000

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平的肌醇对獭兔皮肤中β-连环蛋白(β-catenin)和激素敏感脂酶(HSL)表达的影响。选取(40±1)日龄的同期断奶獭兔120只(公母各占1/2),随机分成4组,每组30只。在4组獭兔的饲粮中分别添加0、25、50、75 mg/k... 详细信息

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平的肌醇对獭兔皮肤中β-连环蛋白(β-catenin)和激素敏感脂酶(HSL)表达的影响。选取(40±1)日龄的同期断奶獭兔120只(公母各占1/2),随机分成4组,每组30只。在4组獭兔的饲粮中分别添加0、25、50、75 mg/kg的肌醇,试验期为3个月。在试验的第30天(2月龄)、第60天(3月龄)和第90天(4月龄),分别取腹部、背中部、臀部皮肤,采用免疫组织化学和蛋白质印迹(Western blot)法对β-catenin和HSL的蛋白质表达和定位进行检测。结果表明:β-catenin在毛囊中广泛表达,在毛根鞘细胞和毛乳头均有棕黄色阳性反应细胞。HSL在毛根鞘细胞,尤其是在内根鞘细胞内,呈现非常明显的棕黑色强阳性表达。饲粮中添加50 mg/kg肌醇可以极显著增加2~4月龄獭兔背中部皮肤毛囊中β-catenin和HSL阳性表达细胞的平均灰度值(P<0.01),极显著增加4月龄獭兔背中部、腹部和臀部皮肤毛囊中β-catenin和HSL阳性表达细胞的平均灰度值(P<0.01)。结果提示,肌醇能够通过上调4月龄獭兔毛囊中β-catenin和HSL的表达来促进毛囊的发育,在本试验中,饲粮肌醇水平达到50 mg/kg时效果最佳。

关键词：肌醇獭兔毛囊 β-连环蛋白激素敏感脂酶

鸭肠炎病毒US10基因的原核表达及抗血清的制备

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吉林农业大学学报 2013年第1期35卷 58-62,71页

作者：张蕾董井泉母晓宇马波王君伟东北农业大学动物医学院哈尔滨150030

以鸭肠炎病毒(DEV)C-KCE株基因组DNA为模板,PCR扩增获得US10基因。构建了其原核表达载体pET-32a-US10,经1.0 mmol/L IPTG诱导,目的蛋白在Rosetta(DE3)pLys宿主菌中获得了表达。SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白以包涵体形式表达,与预期大... 详细信息

以鸭肠炎病毒(DEV)C-KCE株基因组DNA为模板,PCR扩增获得US10基因。构建了其原核表达载体pET-32a-US10,经1.0 mmol/L IPTG诱导,目的蛋白在Rosetta(DE3)pLys宿主菌中获得了表达。SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白以包涵体形式表达,与预期大小相符。利用亲和层析法纯化目的蛋白,以纯化的蛋白为免疫原制备其抗血清,琼脂扩散法测得抗体效价为1∶4,间接ELISA法测定抗体效价为1∶102 400。间接免疫荧光试验证实制备的抗血清可特异性识别鸭肠炎病毒的US10基因编码产物。

关键词：鸭肠炎病毒 US10基因表达