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间充质干细胞来源胞外囊泡在牙及颌面部组织再生中的研究与展望

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华西口腔医学杂志 2022年第1期40卷 7-13页

作者：廖立田卫东口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心口腔转化医学教育部工程研究中心口腔再生医学国家地方联合工程实验室四川大学华西口腔医院创伤整形外科成都610041

胞外囊泡(EVs)是不同细胞间及多种组织间信号交流的重要途径,广泛参与组织发育、稳态维持和再生修复等过程。间充质干细胞(MSCs)分泌的EVs含有丰富的生物活性物质,是MSCs发挥促组织再生作用的重要分泌性成分之一。近年来,MSCs分泌的EVs(... 详细信息

胞外囊泡(EVs)是不同细胞间及多种组织间信号交流的重要途径,广泛参与组织发育、稳态维持和再生修复等过程。间充质干细胞(MSCs)分泌的EVs含有丰富的生物活性物质,是MSCs发挥促组织再生作用的重要分泌性成分之一。近年来,MSCs分泌的EVs(MSC-EVs)在牙及颌面组织修复再生中的研究取得快速进展。MSC-EVs已被证实可以有效促进牙及颌骨中干细胞和前体细胞的增殖、分化、存活、迁移,并加快血管神经再生,从而可应用于牙髓、牙周、颌骨、颞下颌关节及颌面软组织的再生。因为EVs具备免疫原性低、作用途径广、可规模化制备等优势,其临床应用潜力巨大。随着对EVs作用机理的深入探索和标准化制备及检测体系的建立,MSC-EVs治疗有望成为牙及颌面部组织再生的重要策略。

关键词：胞外囊泡间充质干细胞牙颌骨再生

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真皮脂肪调控毛发生长的研究进展

中国修复重建外科杂志 2024年第5期38卷 626-632页

作者：张悦汤炜田卫东于湄四川大学华西口腔医学院、口腔再生医学国家地方联合工程实验室成都610041 四川大学华西口腔医院口腔颌面创伤整形外科成都610041

目的总结毛发周期和真皮脂肪之间的动态同步变化以及真皮脂肪对毛发生长的影响,为临床治疗脱发提供新的研究思路。方法广泛查阅国内外相关文献,分析和总结真皮脂肪前体细胞、真皮成熟脂肪细胞以及成脂分化过程对毛发周期转变的影响。结... 详细信息

目的总结毛发周期和真皮脂肪之间的动态同步变化以及真皮脂肪对毛发生长的影响,为临床治疗脱发提供新的研究思路。方法广泛查阅国内外相关文献,分析和总结真皮脂肪前体细胞、真皮成熟脂肪细胞以及成脂分化过程对毛发周期转变的影响。结果真皮脂肪组织与毛囊解剖结构相邻,并且与毛发周期变化息息相关。真皮脂肪前体细胞的增殖分化促进毛发由静止期向生长期转变,但成熟脂肪细胞能够通过表达调节毛发周期的信号分子以加速毛发周期生长期-退行期转变。真皮脂肪的成脂分化与毛发周期转变共同受到多种信号通路的综合调节。结论真皮脂肪通过分泌多种信号分子来影响毛发周期转变以调节毛发生长,但目前研究结果尚不足以充分阐明真皮脂肪在调节毛发周期中的突出作用,具体调节机制有待进一步研究。

关键词：真皮脂肪前体细胞真皮成熟脂肪细胞毛发周期信号分子

干细胞来源与组织来源小细胞外囊泡诱导脂肪新生的比较

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中国组织工程研究 2024年第25期28卷 3981-3987页

作者：杨宝华周晓洁敬伟田卫东于湄四川大学华西口腔医(学)院口腔再生医学国家地方联合工程实验室四川省成都市610041

背景:再生医学近几十年的发展,使胞外囊泡诱导脂肪组织再生成为修复软组织缺损的可行方法。但由于实验模型不同以及胞外囊泡使用剂量不同,目前仍无法对不同来源胞外囊泡在脂肪再生中的应用效果进行定量比较。目的:比较干细胞来源小细胞... 详细信息

背景:再生医学近几十年的发展,使胞外囊泡诱导脂肪组织再生成为修复软组织缺损的可行方法。但由于实验模型不同以及胞外囊泡使用剂量不同,目前仍无法对不同来源胞外囊泡在脂肪再生中的应用效果进行定量比较。目的:比较干细胞来源小细胞外囊泡与组织来源小细胞外囊泡在体内诱导脂肪新生的效果。方法:采用超速离心法提取脂肪干细胞来源小细胞外囊泡和脂肪组织来源小细胞外囊泡,采用纳米颗粒跟踪分析、透射电镜和Western blot鉴定比较2种小细胞外囊泡的数量、粒径、形态和标志蛋白表达;使用定制硅胶管建立C57小鼠皮下脂肪新生定量评估模型,通过细胞计数和苏木精-伊红染色比较2种小细胞外囊泡体内促进脂肪组织新生的效果。结果与结论:①通过超速离心法提取2种小细胞外囊泡,粒径均位于50-200 nm之间,在透射电镜下均为典型的圆形,均表达小细胞外囊泡的特征性蛋白CD81、CD63、TSG101;②使用定制硅胶管,将等粒子数小细胞外囊泡与Matrigel凝胶混合于硅胶管中植入小鼠背部皮下,建立小鼠体内无细胞、可定量的脂肪新生模型;③植入后3,7 d,硅胶管内容物苏木精-伊红染色和细胞计数显示,加入了小细胞外囊泡的2组都比空白对照组募集到更多的宿主细胞,且脂肪组织来源小细胞外囊泡组优于脂肪干细胞来源小细胞外囊泡组;④体内植入4周的硅胶管内容物苏木精-伊红染色显示,小细胞外囊泡促进脂肪新生,且脂肪组织来源小细胞外囊泡组优于脂肪干细胞来源小细胞外囊泡组。以上结果表明,组织来源小细胞外囊泡促进脂肪新生的效果优于干细胞来源小细胞外囊泡。

关键词：脂肪干细胞脂肪组织小细胞外囊泡细胞募集脂肪细胞脂肪新生

间充质干细胞在牙周组织再生中的临床转化研究及应用前景

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中华口腔医学杂志 2023年第7期58卷 642-649页

作者：郭淑娟田卫东赵蕾四川大学华西口腔医院牙周病科、口腔疾病研究国家重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心成都610041 四川大学华西口腔医院创伤整形外科、口腔疾病研究国家重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、口腔转化医学教育部工程研究中心、口腔再生医学国家地方联合工程实验室成都610041

牙周炎是发生于牙周支持组织的口腔感染性疾病,其破坏牙齿周围软硬组织,最终引发牙齿松动脱落。目前的临床治疗手段可有效控制牙周感染及炎症,但对已遭到破坏的牙周组织,由于受到牙周缺损局部状况和患者全身因素的影响,传统牙周治疗方... 详细信息

牙周炎是发生于牙周支持组织的口腔感染性疾病,其破坏牙齿周围软硬组织,最终引发牙齿松动脱落。目前的临床治疗手段可有效控制牙周感染及炎症,但对已遭到破坏的牙周组织,由于受到牙周缺损局部状况和患者全身因素的影响,传统牙周治疗方式尚不能达到满意且稳定的牙周组织再生。近年基于间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的牙周组织再生治疗代表了一种很有前景的治疗策略,在现代再生医学中发挥了不可忽略的作用。本文结合近10年MSC在牙周组织工程中的临床转化应用研究及本课题组前期研究成果,对MSC促进牙周组织再生的机制、MSC在牙周组织再生治疗中的临床前研究、临床转化研究及MSC未来的应用前景进行总结和阐述,以期为后续开展MSC相关研究及临床试验提供参考。

关键词：牙周炎间充质干细胞牙周组织再生转化研究细胞制剂临床试验

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基于外泌体的牙髓再生策略

中华口腔医学杂志 2021年第7期56卷 709-714页

作者：陈彦杨雪婷马悦杨波田卫东四川大学华西口腔医院创伤整形外科口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心口腔转化医学教育部工程中心口腔再生医学国家地方联合工程实验室成都610041

近年来,基于牙源性干细胞的牙髓再生研究已取得突破性进展,部分研究结果已用于临床治疗。随着对牙髓再生机制的深入研究,学者发现干细胞分泌的外泌体在其中扮演着重要角色。外泌体因其相较干细胞而言具有来源广泛、效果直接、免疫排斥... 详细信息

近年来,基于牙源性干细胞的牙髓再生研究已取得突破性进展,部分研究结果已用于临床治疗。随着对牙髓再生机制的深入研究,学者发现干细胞分泌的外泌体在其中扮演着重要角色。外泌体因其相较干细胞而言具有来源广泛、效果直接、免疫排斥反应小等优势,有望通过募集宿主细胞的方式再生牙髓组织。本文将介绍牙髓再生和外泌体组织再生的研究现状,结合牙髓组织再生特点和外泌体生物学特点,对外泌体用于牙髓组织再生的相关研究进行分析和总结,并探究外泌体用于牙髓组织再生的构建策略。

关键词：牙髓干细胞牙髓再生牙源性干细胞外泌体

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不同体液来源外泌体分离鉴定方法评估

中国生物化学与分子生物学报 2021年第8期37卷 989-997页

作者：杨建廖立田卫东口腔再生医学国家地方联合工程实验室成都610041 口腔转化医学教育部工程研究中心成都610041 四川大学华西口腔医学院口腔疾病研究国家重点实验室成都610041

外泌体是细胞分泌的磷脂双分子层胞外囊泡,作为载体在细胞间发挥着物质传递和信息交流的功能。外泌体存在于多种不同体液中,在疾病诊断和药物载体方面具有良好的应用前景。由于外泌体纳米级别的大小和异质性,以及体液复杂的组成,使得体... 详细信息

外泌体是细胞分泌的磷脂双分子层胞外囊泡,作为载体在细胞间发挥着物质传递和信息交流的功能。外泌体存在于多种不同体液中,在疾病诊断和药物载体方面具有良好的应用前景。由于外泌体纳米级别的大小和异质性,以及体液复杂的组成,使得体液来源外泌体的分离尤为困难。目前,体液来源外泌体分离有6种常用方法:超速离心法、沉淀法、分子筛色谱层析法、密度梯度离心法、膜超滤法和膜特异性吸附法。每种方法都有其独特的优点与不足,单独使用均难以分离获得高质量的外泌体。不同体液来源外泌体分离方法的选择也存在差异。随着近年来微流控技术等一些新型方法的涌现与经典方法的不断改进,促使外泌体分离技术得到完善,有利于外泌体在临床与科研的相关应用研究。本篇综述对不同体液来源外泌体的提取鉴定方法作出比较及评估,总结了不同体液来源外泌体提取方法的选择和差异,为后续体液外泌体相关研究提供参考。

关键词：外泌体体液分离鉴定

同种异体牙囊细胞膜片在异种生物牙根再生中作用

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实用口腔医学杂志 2020年第2期36卷 290-294页

作者：韩雪郭维华四川大学华西口腔医院儿童口腔科口腔再生医学国家地方联合工程实验室成都610041

目的:探究同种异体牙囊细胞膜片在异种生物牙根再生中的作用。方法:应用酶消化法体外分离人和大鼠的原代牙囊细胞并制备牙囊细胞膜片。通过同种异体牙囊细胞膜片(allogeneic dental follicle cell sheets,aDFCSs)复合异种的处理后牙本... 详细信息

目的:探究同种异体牙囊细胞膜片在异种生物牙根再生中的作用。方法:应用酶消化法体外分离人和大鼠的原代牙囊细胞并制备牙囊细胞膜片。通过同种异体牙囊细胞膜片(allogeneic dental follicle cell sheets,aDFCSs)复合异种的处理后牙本质基质(xenogeneic treated dentin matrix,xTDM)构建异种生物牙根。活死细胞染色检测细胞膜片中牙囊细胞的活性。实时荧光定量PCR检测xTDM诱导后牙囊细胞内IL-6和TGF-β基因表达。大鼠颌骨体内移植1周和4周后取材,组织学染色观察生物牙根周围组织的再生情况。TRAP染色检测异种生物牙根再生中破骨细胞情况。结果:复合xTDM后的牙囊细胞IL-6基因表达显著降低,TGF-β基因表达略降低。组织学切片结果表明复合牙囊细胞膜片的生物牙根能够延缓破骨细胞的吸收作用,同促进异种生物牙根再生。结论:aDFCSs复合xTDM构建异种生物牙根可降低免疫炎症反应,促进异种生物牙根再生。

关键词：牙囊细胞膜片异种生物牙根组织再生组织工程

处理的牙本质基质对骨髓间充质干细胞成骨分化影响的研究

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华西口腔医学杂志 2016年第3期34卷 281-285页

作者：杨禾丰胡瑜孙晶晶郭维华田卫东李松昆明医科大学口腔医学院昆明650031 口腔再生医学国家地方联合工程实验室四川大学成都610041

目的采用体外研究的方法评价处理的牙本质基质(TDM)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的影响。方法将获取的牙本质颗粒进行梯度脱矿处理,制备TDM浸提液。分离培养人BMSCs后,将BMSCs培养于TDM浸提液中,CCK-8法检测细胞的增殖情况... 详细信息

目的采用体外研究的方法评价处理的牙本质基质(TDM)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的影响。方法将获取的牙本质颗粒进行梯度脱矿处理,制备TDM浸提液。分离培养人BMSCs后,将BMSCs培养于TDM浸提液中,CCK-8法检测细胞的增殖情况,培养7 d后提取细胞总蛋白采用Western blot检测成骨相关蛋白:Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Runt相关转录因子-2(Runx2)的表达情况。结果 TDM浸提液培养后,与空白对照组及羟磷灰石/β-磷酸三钙组相比,细胞增殖明显;培养7 d后,TDM组的ColⅠ、Runx2蛋白的表达量明显增高。结论TDM可以促进BMSCs的增殖及成骨向分化,提示其应用于骨组织工程的可行性。

关键词：骨髓间充质干细胞增殖分化牙本质

基于干细胞的牙功能组织模块用于牙及其支持组织再生

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中华口腔医学杂志 2017年第10期52卷 588-593页

作者：田卫东四川大学华西口腔医院创伤整形外科、口腔疾病研究国家重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、口腔再生医学国家地方联合工程实验室成都610041

基于干细胞的模块化功能组织构建已成为组织再生领域的研究新热点,利用细胞自组装规律、细胞膜片技术、静电纺丝技术、三维生物打印技术等构建功能模块,再通过类似＆quot;搭积木＆quot;的方式将模块组织进行拼装,最终实现组织或器官的再... 详细信息

基于干细胞的模块化功能组织构建已成为组织再生领域的研究新热点,利用细胞自组装规律、细胞膜片技术、静电纺丝技术、三维生物打印技术等构建功能模块,再通过类似＆quot;搭积木＆quot;的方式将模块组织进行拼装,最终实现组织或器官的再生.这一技术有望突破现有组织工程技术的瓶颈问题,实现功能性组织器官的再生及临床转化应用.牙功能组织模块的构建还处于起步阶段,其干细胞来源、构建方法、转化应用方案等尚不明确,如何通过现有技术构建牙功能组织模块仍需进一步研究.本文分别以牙功能组织模块中的牙髓、牙周及牙根功能组织模块为例介绍这3种牙功能模块的构建思路、策略及应用前景,为牙再生研究提供新的研究思路.

关键词：干细胞组织工程功能组织模块