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晶状体蛋白识别互作与白内障的研究进展

高等学校化学学报 2021年第11期42卷 3379-3389页

作者：林宁钦姚克陈祥军浙江大学医学院转化医学研究院杭州310020 浙江大学附属第二医院眼科中心杭州310009

白内障是全球致盲率最高的眼科疾病,发病组织为晶状体.晶状体内纤维细胞含有高浓度的晶状体蛋白,晶状体蛋白家族分α-,β-和γ-3大亚家族.α-晶状体蛋白具有小分子伴侣功能,可识别错误折叠蛋白质,维持晶状体内蛋白质稳态;β-/γ-晶状体... 详细信息

白内障是全球致盲率最高的眼科疾病,发病组织为晶状体.晶状体内纤维细胞含有高浓度的晶状体蛋白,晶状体蛋白家族分α-,β-和γ-3大亚家族.α-晶状体蛋白具有小分子伴侣功能,可识别错误折叠蛋白质,维持晶状体内蛋白质稳态;β-/γ-晶状体蛋白通过分子内或分子间相互作用,主要发挥结构蛋白功能.晶状体蛋白在晶状体纤维细胞内呈瞬时有序排列,精准分子识别及动态相互作用在维持晶状体透明度中发挥关键作用.晶状体内蛋白质稳态失衡是白内障的主要致病因素.晶状体蛋白半衰期长,且翻译合成后不再更新,广泛受pH值、金属离子、辐射损伤和蛋白质翻译后修饰等细胞内外环境因素和化学因素的干扰,影响晶状体蛋白间的分子识别和相互作用,诱发白内障.理清化学调控的晶状体蛋白分子识别及互作调控,有助于阐明白内障发病机理,并发掘防治白内障的创新策略.本文基于晶状体蛋白识别互作与白内障研究进展,综合评述了晶状体蛋白的分子识别、相互作用方式、调控因素及研究技术创新,并探讨了晶状体蛋白识别互作调控网络在白内障药物研发的应用价值与挑战.

关键词：晶状体蛋白白内障化学调控分子识别蛋白-蛋白相互作用液-液相分离

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肝癌患者乙型肝炎病毒全基因组结构分析

中华肿瘤杂志 2004年第4期26卷 213-216页

作者：林旭徐晓郑大利林建银福建医科大学分子医学研究中心福州350004

目的　研究肝细胞癌患者乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus,HBV)全基因组的结构及特点。方法　PCR扩增并克隆乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)阳性肝癌患者血清中HBV全基因组DNA ,测序并进行基因结构分析。结果　获得不同肝癌患者来源的 2 2株... 详细信息

目的　研究肝细胞癌患者乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus,HBV)全基因组的结构及特点。方法　PCR扩增并克隆乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)阳性肝癌患者血清中HBV全基因组DNA ,测序并进行基因结构分析。结果　获得不同肝癌患者来源的 2 2株HBV全基因组DNA ,均属于C或B基因型和adr或adw2血清型。与标准株相比 ,肝癌患者来源的HBV在表面抗原、核心抗原的B/T细胞表位、X蛋白的反式激活区及增强子Ⅱ、核心启动子区发生了一些有意义的共有变异。结论HBV的基因型与基因变异可能与HBV相关性肝癌的发生发展有关。

关键词：肝癌乙型肝炎病毒基因组基因结构克隆

双剪接型2．2 kb乙型肝炎病毒基因组剪接变异体编码蛋白的反式激活作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第11期26卷 985-989页

作者：陈婉南黄清玲林建银王林郭丹华林旭福建医科大学分子医学研究中心福州350004

目的研究双剪接型2．2 kb乙型肝炎病毒(HBV)剪接变异体编码的新蛋白的功能。方法PCR扩增双剪接型2．2kb HBV剪接特异性新基因并克隆于哺乳动物细胞表达载体pcDNA3．1/ HisC。以FuGENE6将此重组载体(pcDNA3．1/HisC-TPds)转染Huh7细胞,... 详细信息

目的研究双剪接型2．2 kb乙型肝炎病毒(HBV)剪接变异体编码的新蛋白的功能。方法PCR扩增双剪接型2．2kb HBV剪接特异性新基因并克隆于哺乳动物细胞表达载体pcDNA3．1/ HisC。以FuGENE6将此重组载体(pcDNA3．1/HisC-TPds)转染Huh7细胞,采用融合表达的多肽表位(X- press表位)抗体,通过Western blot检测目的蛋白在不同时间段的表达。pcDNA3．1/HisC-TPds分别与β-半乳糖苷酶报告载体psv-β-galactosidase(含SV40启动子/增强子)或pCMVβ(含CMV即刻早期启动子)共转染Huh7细胞,转染后48h裂解细胞并检测胞内β-半乳糖苷酶活性,实验数据以SPSS11．5软件分析。结果克隆420bp双剪接型2．2kb HBV剪接变异体新基因,Western blot显示其在Huh7细胞中表达相应蛋白,以转染后48h为最高。在含有CMV即刻早期启动子或SV40启动子/增强子的报告载体与pcDNA3．1/HisC-TPds质量比为1：10～1：50范围内,共转染有报告载体及pcDNA3．1/HisC-TPds的Huh7细胞内β-半乳糖苷酶活性均大于相应的pcDNA3．1/HisC空白载体对照组,且在1：10～1：40范围内存在剂量-效应关系。结论双剪接型2．2kb HBV剪接变异体编码的新蛋白可反式激活CMV即刻早期启动子及SV40启动子/增强子,提示其可能与HBV致病有关。

关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接反式激活启动子

戊型肝炎病毒重组颗粒性蛋白疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答研究

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病毒学报 2005年第6期21卷 428-433页

作者：吴婷欧山海程通何水珍伍小路郑舟张军夏宁邵厦门大学福建省医学分子病毒学研究中心福建厦门361005

HEV 239是福建省医学分子病毒学研究中心实验室研制的一种戊型肝炎病毒(HEV)重组颗粒性蛋白疫苗,该文旨在研究HEV239蛋白疫苗在小鼠体内诱导产生特异性免疫应答的情况。将5μg HEV 239蛋白疫苗(239-Pro)、加铝佐剂疫苗(239-Vac)或加弗... 详细信息

HEV 239是福建省医学分子病毒学研究中心实验室研制的一种戊型肝炎病毒(HEV)重组颗粒性蛋白疫苗,该文旨在研究HEV239蛋白疫苗在小鼠体内诱导产生特异性免疫应答的情况。将5μg HEV 239蛋白疫苗(239-Pro)、加铝佐剂疫苗(239-Vac)或加弗氏佐剂疫苗(239-CFA)肌肉注射免疫BALB/c鼠3次,第8周检测鼠血清抗HEV抗体及其亚类,同时用ELISPOT方法检测细胞毒性T细胞(CTL)应答。结果显示:239-Vac诱导的抗体滴度与239-CFA相当,高于无佐剂的239-Pro。239-Vac诱导的抗体中,IgG1/IgG2a比值显著高于239-CFA和239-Pro,主要为Th2型应答。除239-CFA之外,239-Vac和239-Pro也可诱导出一定的HEV抗原特异性I型Tc应答。提示:重组抗原HEV 239能诱导良好的抗体应答及一定的Tc1应答。

关键词：戊型肝炎病毒疫苗细胞免疫应答

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卒中后中枢性疼痛的病理生理机制及治疗

中国疼痛医学杂志 2023年第5期29卷 371-375页

作者：陶毅航雷静尤浩军延安大学感觉与运动疾病转化医学研究中心延安716000

脑卒中是一种常见的神经系统疾病,包括出血性和缺血性脑卒中,临床表现以感觉和运动功能障碍为主。作为脑卒中难治后遗症之一的卒中后中枢性疼痛(central post-stroke pain,CPSP),发病时间不一,症状不尽相同,易与其他病理性痛混淆,且临... 详细信息

脑卒中是一种常见的神经系统疾病,包括出血性和缺血性脑卒中,临床表现以感觉和运动功能障碍为主。作为脑卒中难治后遗症之一的卒中后中枢性疼痛(central post-stroke pain,CPSP),发病时间不一,症状不尽相同,易与其他病理性痛混淆,且临床疗效不佳。由于CPSP的发病机制不明确,临床通常以药物治疗为主,辅以神经调控、神经阻滞和手术治疗等手段。本文将总结CPSP的临床特点,重点从丘脑功能可塑性改变及胶质细胞介导的细胞和分子机制角度探讨CPSP的发病机制和相关临床治疗手段,为CPSP的基础研究和临床治疗提供思路。

关键词：脑卒中卒中后中枢性疼痛丘脑‘伤害性反应辨别器’ 胶质细胞

剪接导致截短的乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白可诱导肝细胞空泡化

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第4期24卷 279-283页

作者：林旭黄清玲郑大利徐晓陈凌林建银福建医科大学分子医学研究中心福州350004

目的　研究 4 5 8～ 130 8nt乙型肝炎病毒 (HBV)基因组剪接变异体截短的表面抗原大蛋白 (largesurfaceantigen ,LS)的肝细胞致病性。方法　将 4 5 8～ 130 8nt剪接变异体HBVDNA(基因号为AY2 38972 ,长度为 2 36 6bp)及全长HBVDNA(基因号... 详细信息

目的　研究 4 5 8～ 130 8nt乙型肝炎病毒 (HBV)基因组剪接变异体截短的表面抗原大蛋白 (largesurfaceantigen ,LS)的肝细胞致病性。方法　将 4 5 8～ 130 8nt剪接变异体HBVDNA(基因号为AY2 38972 ,长度为 2 36 6bp)及全长HBVDNA(基因号AY2 0 6 390 ,长度 32 15bp)中PreS2及S起始密码由ATG定点突变为ACG。以突变后的剪接变异体DNA为模板 ,PCR扩增剪接产生的截短LS编码基因(LS splice)及LS氨基端 2 76个氨基酸的编码基因 (LS2 76) ;以突变后的全长HBVDNA为模板 ,PCR扩增全长LS编码基因。将上述DNA片段克隆至pCDNA3.1/Hyg( )真核表达载体。重组载体以脂质体转染HepG2及Chang肝细胞 ,以HE染色观察细胞的空泡病变 ,并以流式细胞仪检测转染细胞的凋亡率。结果　表达LS、LS splice、LS2 76的重组载体转染后均可引起HepG2及Chang肝细胞发生空泡样病变。此外 ,LS可引起HepG2及Chang肝细胞凋亡 ,而LS2 76、LS splice致肝细胞凋亡作用消失。结论　 4 5 8～130 8ntHBV基因组剪接变异体产生的截短LS可致肝细胞病变 ,其作用与其氨基端 2 76个氨基酸有关。

关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接基因突变表面抗原基因转染真核表达载体流式细胞仪

一氧化氮对肝癌细胞线粒体膜通透性和胞浆中细胞色素C含量的影响

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中国医学科学院学报 2004年第5期26卷 519-523页

作者：蒋雪梅郑大利林建银福建医科大学分子医学研究中心福州350004

目的探讨一氧化氮(NO)对肝癌细胞线粒体膜通透性和胞浆中细胞色素C穴cytC雪含量的影响。方法用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡熏流式细胞术检测SMMC-7721和HepG2细胞凋亡率,MTT法观察肝癌细胞生长增殖情况熏流式... 详细信息

目的探讨一氧化氮(NO)对肝癌细胞线粒体膜通透性和胞浆中细胞色素C穴cytC雪含量的影响。方法用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡熏流式细胞术检测SMMC-7721和HepG2细胞凋亡率,MTT法观察肝癌细胞生长增殖情况熏流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位变化,Westernblot检测胞浆中cytC含量的变化熏同时应用线粒体膜通透性转变孔开放抑制剂CsA和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂BSO预处理细胞,并观察以上各指标的变化。结果SNP能诱导人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2凋亡,并可导致两株细胞线粒体跨膜电位下降,胞浆中cytC含量增加,与SNP的作用时间成正比。CsA能够抑制SNP所致的肝癌细胞线粒体跨膜电位的下降及胞浆中cytC含量的增加;而BSO则可促进线粒体跨膜电位下降,cytC从线粒体释放到胞浆。结论NO可能通过下调线粒体跨膜电位、开放线粒体膜通透性转变孔并释放线粒体cytC,来诱导SMMC-7721和HepG2细胞凋亡。

关键词：一氧化氮细胞凋亡线粒体跨膜电位细胞色素C

抗HEV嵌合抗体的构建及在CHO细胞中的表达

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病毒学报 2004年第4期20卷 291-297页

作者：罗文新李利峰许辰煜程通管宝全张军夏宁邵厦门大学福建省医学分子病毒学研究中心福建厦门361005

通过RT-PCR方法从分泌戊型肝炎(戊肝)病毒中和性鼠源单克隆抗体(单抗)8C11的杂交瘤细胞中克隆出抗体基因的重链可变区(VH)、轻链可变区(VK)序列,并分别克隆到含有人gamma1重链和kappa轻链恒定区序列的pcDNA3 1/Hygro和pcDNA3 1(+)质粒中... 详细信息

通过RT-PCR方法从分泌戊型肝炎(戊肝)病毒中和性鼠源单克隆抗体(单抗)8C11的杂交瘤细胞中克隆出抗体基因的重链可变区(VH)、轻链可变区(VK)序列,并分别克隆到含有人gamma1重链和kappa轻链恒定区序列的pcDNA3 1/Hygro和pcDNA3 1(+)质粒中,共转染中华仓鼠卵巢癌细胞(CHO)细胞。RT-PCR结果表明,转染的CHO细胞转录了嵌合重链及轻链基因,间接ELISA及Westernblot结果表明:翻译出的两种多肽在细胞内正确组装成嵌合抗体分子,并可分泌至细胞外,表达的嵌合抗体保留了原鼠单抗的抗原结合特异性及对8H3结合抗原的增强作用。8C11嵌合抗体的成功表达可降低鼠源性,为探讨戊肝抗体治疗的可能性奠定了基础。

关键词：嵌合抗体表达戊肝重链可变区单抗 CHO细胞轻链转录分泌序列

阳离子铝酞菁-黏多糖缔合物荧光探针测定生物样品中的溶菌酶

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分析化学 2014年第7期42卷 962-967页

作者：陈林黄萍杨惠卿邓雅斌李东辉厦门大学医学院抗癌研究中心

在弱酸性介质中,具有红区发射特性的强荧光化合物阳离子铝酞菁(TTMAAlPc)在带磺酸基团的低浓度阴离子黏多糖(肝素,HP)的存在下,发生诱导聚集,导致酞菁荧光几乎完全猝灭。此聚集缔合物可作为溶菌酶的荧光底物,在溶菌酶的水解作用下,HP降... 详细信息

在弱酸性介质中,具有红区发射特性的强荧光化合物阳离子铝酞菁(TTMAAlPc)在带磺酸基团的低浓度阴离子黏多糖(肝素,HP)的存在下,发生诱导聚集,导致酞菁荧光几乎完全猝灭。此聚集缔合物可作为溶菌酶的荧光底物,在溶菌酶的水解作用下,HP降解为小分子片段,破坏了TTMAAlPc的诱导聚集行为而使其释放,体系荧光显著恢复。据此现象,建立了测定溶菌酶的新方法。结合荧光光谱与荧光各向异性技术对反应机理进行了探讨。确定了最佳反应条件(醋酸缓冲体系,pH4.0、反应温度70$C、反应时间30 min),考察了共存物质的影响。在最佳条件下,方法的线性回归方程为y=#30.12121+214.65772x,r=0.99871,线性范围为0.2~2 mg/L,检出限0.015 mg/L。本研究操作简便且有较好的选择性和灵敏度。本方法用于溶菌酶实际样品的测定,并与常规的比浊法进行了比较,结果符合良好。本研究将阳离子金属酞菁荧光探针用于酶分析,开拓了酞菁荧光探针的应用范围。

关键词：溶菌酶酞菁荧光测定