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T细胞依赖的双特异性抗体结构设计的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：李清泓梁红远上海生物制品研究所有限责任公司第一研究室

随着抗体工程的不断发展，靶向CD3的T细胞依赖的双特异性抗体已经发展出多种多样的结构，从而满足更多临床治疗的需求。依据是否含有Fc段可将T细胞依赖的双特异性抗体分为IgG样和非IgG样两种结构。其中轻重链错配问题是双特异性抗体最... 详细信息

随着抗体工程的不断发展，靶向CD3的T细胞依赖的双特异性抗体已经发展出多种多样的结构，从而满足更多临床治疗的需求。依据是否含有Fc段可将T细胞依赖的双特异性抗体分为IgG样和非IgG样两种结构。其中轻重链错配问题是双特异性抗体最常见的制备难点，为解决该问题，目前已有多种技术应用于其结构设计中，包括杵臼技术、结构域交换技术等。由于T细胞依赖的双特异性抗体的作用机制是将T细胞重定向至肿瘤细胞继而发挥杀伤作用，因此Fc段杀伤功能的沉默、靶点的亲和力设计，以及免疫突触形成的距离设计均是T细胞依赖的双特异性抗体结构设计的重点。本文将围绕以上针对T细胞依赖的双特异性抗体结构设计的研究进展进行总结。

关键词：双特异性抗体 T细胞接合器抗体结构蛋白质工程综述

猪肺炎支原体通过抑制SPLUNC1功能破坏呼吸道炎性反应平衡

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中国农业科学 2024年第1期57卷 216-226页

作者：王海燕张珍珍倪博刘蓓蓓冯志新江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心

【背景】猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)通过定植猪呼吸道黏膜层，破坏呼吸道炎性反应平衡，引起炎性损伤和持续性感染。短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(short palate lung and nasal epithelial clone1,SPLUNC1)是呼吸... 详细信息

【背景】猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)通过定植猪呼吸道黏膜层，破坏呼吸道炎性反应平衡，引起炎性损伤和持续性感染。短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(short palate lung and nasal epithelial clone1,SPLUNC1)是呼吸道黏膜分泌的具有重要抗菌和抗炎功能的蛋白，被认为是呼吸道黏膜面对危险信号时的“信号传感器”。【目的】从Mhp和SPLUNC1相互作用入手，分析Mhp感染对SPLUNC1表达的影响以及SPLUNC1对Mhp引起的炎性反应的调控作用，揭示Mhp引起炎性损伤的新机制，为解决Mhp持续性感染问题提供参考。【方法】利用猪肺炎支原体对猪支气管上皮细胞（porcine bronchial epithelial cells,PBECs）感染模型和猪体感染模型，通过荧光定量PCR、间接免疫荧光和Western-blotting等方法，分别检测Mhp感染后对肺脏中SPLUNC1以及体外PBECs中SPLUNC1转录和表达的影响。克隆并扩增猪源SPLUNC1基因通过酶切鉴定，构建成功SPLUNC1真核和原核表达重组质粒pCDNA3.1-SPLUNC1以及pET28a-SPLUNC1。与此同时，设计靶向SPLUNC1的siRNA干扰片段。利用体外SPLUNC1蛋白孵育、体内呼吸道黏膜SPLUNC1抗体封闭，通过Mhp CCU50检测明确SPLUNC1对Mhp体内外生长的影响。在猪支气管上皮细胞中，通过过表达或siRNA干扰SPLUNC1基因，后感染Mhp，利用Western-blotting、间接免疫荧光以及酶联免疫吸附方法，明确SPLUNC1对Mhp的黏附作用、诱导炎性因子表达以及MAPK信号通路活化的影响。【结果】Mhp感染猪后可引起肺脏实变，主要组织病理表现为肺脏炎性损伤，同时显著上调肺泡灌洗液中趋化因子CXCL8和炎性因子TNFα和IL-1β分泌。Mhp体内外感染后，体内肺脏和体外猪支气管上皮细胞中SPLUNC1的转录和表达均显著下调。以上研究表明，Mhp可诱导肺脏炎性反应，抑制SPLUNC1表达。另一方面，体外PBECs中过表达SPLUNC1后，Mhp感染引起的CXCL8表达显著减少；siRNA干扰SPLUNC1后，Mhp感染引起的CXCL8表达显著增加，表明SPLUNC1负调控Mhp感染引起的CXCL8表达。基于Mhp感染入侵呼吸道过程，本研究进一步解析SPLUNC1负调控CXCL8表达的机制。结果表明：无论是SPLUNC1和Mhp体外孵育，还是SPLUNC1抗体体内封闭，Mhp的体内外生长均未受影响；SPLUNC1的过表达或siRNA干扰对Mhp体外黏附PBECs的能力也无显著影响；过表达SPLUNC1可抑制pERK和IκBα的激活，相反SPLUNC1 siRNA干扰后，可促进pERK和IκBα的激活。以上研究证明SPLUNC1不是通过调控Mhp的生长和黏附，而是通过负调控MAPK-ERK通路的活化来调控CXCL8的表达。【结论】SPLUNC1可通过MAPK-ERK信号通路来调控炎性因子的过度表达，维护宿主炎性平衡；与此同时，Mhp感染后可通过抑制SPLUNC1的表达来破坏宿主炎性反应的平衡调控，进而引起炎性损伤。本研究为解析Mhp感染损伤机制提供依据。

关键词：猪肺炎支原体支原体-宿主相互作用炎性反应 SPLUNC1

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响应面法优化鼠细小病毒悬液制备及滴度测定

生物技术 2024年

作者：郭慧是翡史云凤王闽佳吴玮李冬梅上海生物制品研究所有限责任公司研发部

[目的]研究鼠细小病毒（MMV）感染性滴度测定方法,同时制备高滴度的MMV。[方法]通过Box-Behnken设计-响应面法优化A9细胞制备MMV及MMV感染性滴度测定工艺。[结果]A9细胞的最佳接种浓度、病毒培养时间及病毒吸附时间分别为9×10～3个/孔... 详细信息

[目的]研究鼠细小病毒（MMV）感染性滴度测定方法,同时制备高滴度的MMV。[方法]通过Box-Behnken设计-响应面法优化A9细胞制备MMV及MMV感染性滴度测定工艺。[结果]A9细胞的最佳接种浓度、病毒培养时间及病毒吸附时间分别为9×10～3个/孔、12 d及0 h,所建立的检测方法精密性较好;A9细胞沉淀中病毒滴度高于上清,且随病毒MOI值的升高而逐渐增加,在MOI为0.5时,感染后72 h收获,病毒滴度最高。[结论]Box-Behnken设计-响应面法适用于A9细胞制备MMV及MMV感染性滴度测定工艺。制备的病毒液的平均滴度为6.35TCID50/0.1 mL。

关键词：鼠细小病毒 A9细胞感染复数感染性滴度响应面法病毒悬液上清沉淀

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mRNA疫苗生产工艺及质量控制的研究进展

中国新药杂志 2024年第11期33卷 1109-1114页

作者：唐琪施金荣邢沛东聂希霖杨晓明武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究二室武汉430207 武汉生物制品研究所有限责任公司质量控制室武汉430207 武汉生物制品研究所有限责任公司质量保证部武汉430207 中国生物技术股份有限公司北京100029

由于mRNA疫苗具有结构简单、构建快速及保护效果好等特点,在应对病原体变异及新发传染病方面表现出了明显优势,作为疫苗研发的新一代技术引起了各方的广泛关注,但是其在生产工艺和质量控制方面还缺乏系统的研究和报道。本综述对mRNA疫... 详细信息

由于mRNA疫苗具有结构简单、构建快速及保护效果好等特点,在应对病原体变异及新发传染病方面表现出了明显优势,作为疫苗研发的新一代技术引起了各方的广泛关注,但是其在生产工艺和质量控制方面还缺乏系统的研究和报道。本综述对mRNA疫苗制备工艺的主要流程、工艺特征进行了阐述,根据各国指南文件及相关研究,对其制备工艺中起始材料、原液、中间制剂及成品的关键质量控制要素进行梳理,并对其检测方法进行总结归纳,为mRNA疫苗的研发与制备提供参考。

关键词： mRNA疫苗生产工艺质量控制检测方法

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抗体偶联药物治疗乳腺癌的研究进展

国际生物制品学杂志 2024年第1期47卷 56-62页

作者：梁明婵(综述) 陈哲文(审校) 上海生物制品研究所有限责任公司第二研究室上海200051 上海生物制品研究所有限责任公司上海201403

抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC)是一类由单克隆抗体通过化学接头共价连接细胞毒性药物形成的新型生物治疗药物.ADC利用单克隆抗体将细胞毒性药物递送至肿瘤细胞,实现了对肿瘤细胞的精准杀灭,具有靶向性强和不良反应小的优势... 详细信息

抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC)是一类由单克隆抗体通过化学接头共价连接细胞毒性药物形成的新型生物治疗药物.ADC利用单克隆抗体将细胞毒性药物递送至肿瘤细胞,实现了对肿瘤细胞的精准杀灭,具有靶向性强和不良反应小的优势.美国FDA批准上市的15款ADC中,有3款用于治疗乳腺癌.此文主要对近年来应用于乳腺癌治疗的ADC的研究进展作一综述.

关键词：乳腺肿瘤靶向治疗抗体偶联药物

帕博利珠单抗电荷异构体阳离子交换高效液相色谱检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2024年第3期37卷 329-334,342页

作者：蔡丽星李翱翔张琳沈培玉张坤明邱建华上海生物制品研究所有限责任公司上海200051

目的建立帕博利珠单抗电荷异构体阳离子交换高效液相色谱(cation exchange high performance liquid chromatography,CEX-HPLC)检测方法,并进行验证。方法采用MabPac SCX-10色谱柱将帕博利珠单抗与交换柱基质结合,通过逐渐增加流动相盐... 详细信息

目的建立帕博利珠单抗电荷异构体阳离子交换高效液相色谱(cation exchange high performance liquid chromatography,CEX-HPLC)检测方法,并进行验证。方法采用MabPac SCX-10色谱柱将帕博利珠单抗与交换柱基质结合,通过逐渐增加流动相盐浓度洗脱带不同电荷的异构体,并验证该方法的专属性、精密性、线性范围、准确性和耐用性。采用建立的方法对3批帕博利珠单抗成品的电荷异构体进行检测。结果帕博利珠单抗最后1个酸性异构体峰和第1个碱性异构体峰与主峰的分离度分别为1.28和1.42。流动相A和制剂缓冲液在样品出峰处无明显干扰峰;精密性验证RSD均研究。

关键词：帕博利珠单抗电荷异构体阳离子交换高效液相色谱

治疗性单克隆抗体SIBP-A电荷异构体全柱成像毛细管等电聚焦电泳测定方法的建立及验证

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国际生物制品学杂志 2024年第3期47卷 156-163页

作者：张琳陈慧聪蔡丽星蒋晴怡梁红远张坤明卢逸仁沈培玉马雷钧邱建华上海生物制品研究所有限责任公司第一研究室上海200051 上海生物制品研究所有限责任公司质量检定室上海201403

目的建立治疗性单克隆抗体(单抗)SIBP-A电荷异构体全柱成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis, icIEF)的测定方法, 并进行验证。方法针对尿素浓度、两性电解质范围及浓度和聚焦时间对icIEF方... 详细信息

目的建立治疗性单克隆抗体(单抗)SIBP-A电荷异构体全柱成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis, icIEF)的测定方法, 并进行验证。方法针对尿素浓度、两性电解质范围及浓度和聚焦时间对icIEF方法进行条件优化, 并应用优化条件对该单抗电荷异构体进行分析, 验证专属性、稳定性指示性、重复性、中间精密度、线性与范围、准确度、定量限及处理后样品的稳定性。结果优化后icIEF条件:3 mol/L尿素、1% MC胶、3%两性电解质载体Pharmalyte 3-10与Pharmalyte 8-10.5按1∶1混合, 电压1 kV、预聚焦1 min, 电压3 kV、聚焦分离6 min。专属性实验中, 空白组在样品出峰处无明显干扰峰, 对照组正常出峰且电荷异构体正常;稳定性指示性实验中, 可以检测出40 ℃放置7 d的样品正常出峰而且电荷异构体发生显著变化, 与对照样品明显不同;重复性实验中, 酸性峰、主峰及碱性峰相对百分含量的相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)分别为0.48%、0.00%和4.03%, 主峰等电点RSD为0.012%;中间精密度实验中, 酸性峰、主峰及碱性峰相对百分含量的RSD分别为0.89%、0.45%和6.14%, 主峰等电点RSD为0.072%;在蛋白终浓度0.50~1.50 mg/ml范围内具有良好的线性, 线性决定系数为0.996 8, 且回收率在95.03%~104.35%内;该方法的定量限为0.003 0 mg/ml;10 ℃条件下样品酸性峰、主峰、碱性峰相对百分含量的RSD分别为0.56%、0.00%和8.61%, 主峰等电点RSD为0.056%;室温条件下3 h酸性峰电荷异构体开始发生明显变化。结论研究建立的检测方法可以有效检测单抗SIBP-A的电荷异构体及等电点, 专属性、稳定性指示性、重复性、中间精密度、线性与范围、准确度、定量限和10 ℃条件下样品的稳定性均良好, 可用于该抗体的放行检测及稳定性检测。

关键词：治疗性单克隆抗体全柱成像毛细管等电聚焦电泳电荷异构体方法学验证

麻腮风疫苗强化免疫策略的有效性和安全性的Meta分析

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现代医学与健康研究电子杂志 2024年第8期8卷 132-137页

作者：火成效周锋沈谊清许晚汪张建张芹陈浩上海生物制品研究所有限责任公司疫苗二室上海201400

目的分析探讨麻腮风疫苗强化免疫策略的有效性和安全性,为进一步提升麻腮风疫苗的临床免疫效果提供依据。方法以麻疹、腮腺炎和风疹疫苗为关键词检索中国知网、万方、维普数据库和PubMed、Willey Library、Web of Science,搜集关于麻腮... 详细信息

目的分析探讨麻腮风疫苗强化免疫策略的有效性和安全性,为进一步提升麻腮风疫苗的临床免疫效果提供依据。方法以麻疹、腮腺炎和风疹疫苗为关键词检索中国知网、万方、维普数据库和PubMed、Willey Library、Web of Science,搜集关于麻腮风疫苗强化免疫策略的有效性和安全性的文献,2023年6月10日为检索截止日期,用于Egger检验评估文献发表偏倚,根据Cochrane协作网专用软件Rev Man 4.2.1对数据进行Meta分析。结果本文最终共纳入符合条件的文献7篇,共有1550个病例被纳入研究,Meta分析结果显示:强化免疫后机体麻疹抗体的平均滴度升高[均数差(MD)=1779.96,95%CI:1090.55~2469.37];腮腺炎抗体的平均滴度升高(MD=2296.11,95%CI:813.97~3778.24]);风疹抗体平均滴度升高(MD=84.82,95%CI:59.96~109.68)(均P0.05)。结论强化免疫策略下儿童体内的麻疹、腮腺炎和风疹抗体平均滴度出现显著升高,免疫有效性提高,同时发热、红肿和皮疹反应的发生率并没有显著增加,安全性良好。

关键词：麻腮风疫苗强化免疫有效性安全性 Meta分析

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定量PCR法在病毒滴度检测中的应用进展

国际生物制品学杂志 2024年第3期47卷 169-174页

作者：闫奥博(综述) 朱为(审校) 上海生物制品研究所有限责任公司第三研究室上海200051

定量PCR(quantitative PCR, qPCR)被广泛应用于mRNA表达、病原体检测和病毒滴定等领域, 具有快速、敏感、污染概率低和可重复的特点。此文主要对qPCR法检测各种病毒滴度的研究进展进行综述, 介绍qPCR在RNA病毒以及DNA病毒检测中的应用,... 详细信息

定量PCR(quantitative PCR, qPCR)被广泛应用于mRNA表达、病原体检测和病毒滴定等领域, 具有快速、敏感、污染概率低和可重复的特点。此文主要对qPCR法检测各种病毒滴度的研究进展进行综述, 介绍qPCR在RNA病毒以及DNA病毒检测中的应用, 并与其他检测方法进行对比, 展现qPCR检测病毒滴度的应用前景。

关键词：实时定量聚合酶链反应 DNA病毒 RNA病毒滴度