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神经再生素对皮层细胞基因表达影响的基因芯片研究

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中国药科大学学报 2003年第1期34卷 78-80页

作者：丁斐顾星星王东顾晓松南通医学院江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的 :采用基因芯片技术 ,观察神经再生素对体外培养的胚鼠大脑皮层细胞基因表达的影响。方法 :取ICR胚鼠 (15d)大脑皮层细胞 ,无血清培养。实验组加入神经再生素 (2 μg/ml) ,对照组加入等量基础培养液。培养 6h后 ,抽提实验组和对照... 详细信息

目的 :采用基因芯片技术 ,观察神经再生素对体外培养的胚鼠大脑皮层细胞基因表达的影响。方法 :取ICR胚鼠 (15d)大脑皮层细胞 ,无血清培养。实验组加入神经再生素 (2 μg/ml) ,对照组加入等量基础培养液。培养 6h后 ,抽提实验组和对照组皮层细胞总RNA ,经反转录分别用Cy5、Cy3荧光标记成cDNA探针。将荧光标记的cDNA与MGEC 40s基因表达谱芯片杂交 ,芯片扫描、数据处理。结果 :实验组和对照组大脑皮层细胞出现 64条差异性表达的基因。呈现上调的基因有 :钙调素结合蛋白、锌指蛋白激酶、核糖体蛋白等基因 ;下调基因有 :抑制细胞分裂因子等基因。结论 :神经再生素可作用于体外培养的胚鼠大脑皮层细胞。

关键词：神经再生素皮层细胞基因表达基因芯片研究

周围神经损伤后Tropic 1808基因表达蛋白的免疫组织化学研究

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解剖学报 2004年第3期35卷 234-239页

作者：陈雪张沛云王晓冬吴坚南通医学院江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的　研究Tropic 180 8基因表达蛋白在受损大鼠坐骨神经中的表达与分布。　方法　用酶联间接法和双重免疫荧光法进行免疫组织化学染色。并通过计算机图像处理技术 ,测量阳性区域的强度与面积。　结果　损伤神经的近侧端和远侧端中施万... 详细信息

目的　研究Tropic 180 8基因表达蛋白在受损大鼠坐骨神经中的表达与分布。　方法　用酶联间接法和双重免疫荧光法进行免疫组织化学染色。并通过计算机图像处理技术 ,测量阳性区域的强度与面积。　结果　损伤神经的近侧端和远侧端中施万细胞均有Tropic 180 8基因表达蛋白的阳性免疫反应 ,阳性免疫反应物主要分布于施万细胞膜上 ,远侧端的阳性反应物强度和面积强于和大于近侧端。　结论　周围神经损伤后 ,Tropic180 8基因表达蛋白分布于损伤近侧端和远侧端的施万细胞膜上 ,并且远侧端中该蛋白的表达强于近侧端。

关键词： Tropic 1808基因表达蛋白坐骨神经免疫组织化学大鼠

糖元合成酶激酶3β对微管相关蛋白tau的磷酸化作用

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生物化学与生物物理进展 2007年第9期34卷 945-951页

作者：刘飞施建华丁绍红尹晓敏南通大学江苏省神经再生重点实验室南通大学医学院生化教研室南通226001

tau蛋白是中枢神经系统中重要的微管相关蛋白,其功能受磷酸化调节.异常过度磷酸化的tau蛋白是阿尔茨海默病患者脑中神经纤维缠结的主要组成部分.糖元合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)是重要的tau蛋白激酶之一,它虽... 详细信息

tau蛋白是中枢神经系统中重要的微管相关蛋白,其功能受磷酸化调节.异常过度磷酸化的tau蛋白是阿尔茨海默病患者脑中神经纤维缠结的主要组成部分.糖元合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)是重要的tau蛋白激酶之一,它虽可催化tau蛋白多个位点的磷酸化,但对不同位点,其催化效率不同.通过位点特异性、磷酸化依赖的tau蛋白抗体,用免疫印迹技术,检测GSK-3β对tau蛋白位点特异性的磷酸化作用及动力学.用双倒数作图,计算GSK-3β催化tau磷酸化以及各个位点磷酸化的Km值,并结合培养细胞中的实验,研究GSK-3β对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性.结果显示,GSK-3β催化tau蛋白多个位点的磷酸化,其中包括Thr181、Ser199、Ser202、Thr205、Thr212、Thr217、Thr231、Ser396和Ser404,对不同的位点磷酸化作用,其Km值不同,GSK-3β对Ser396的Km值最低,即对Ser396位点的亲和性最高,催化其磷酸化的能力最强.在培养的细胞中,也显示了GSK-3β的表达引起Ser396位点的磷酸化最明显.

关键词： tau 糖元合成酶激酶3β(GSK-3β) 磷酸化

Preparation and application of rat myostatin antiserum

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Neuroscience Bulletin 2009年第2期25卷 54-60页

作者：黄丽王莉莉刘梅顾晓松南通大学江苏省神经再生重点实验室南通226001

Objective To prepare and identify a polyclonal antibody against rat myostatin and investigate myostatin expression in the rat atrophic gastrocnemius muscle after tibial nerve crush. Methods The purified fusion protein was used as antigen to immunize rabbits for the preparation of polyclonal antibody. The polyclonal antibody of the protein was measured by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）, western-blot and immunochemistry. Myostatin protein expression levels in normal and atrophic gastrocnemius muscle were detected by western-blot and immunochemistry assays. Results The GST-myostatin had a purity of 96% and possessed high titer and specificity. The level of myostatin in gastrocnemius muscle significantly increased one week after tibial nerve crush, reached the peak on day 14, and then returned to normal level on day 28. Conclusion We have successfully made antiserum of rat myostatin and found that the expression level of myostatin protein in the gastrocnemius after tibial nerve crush-induced atrophy was time-dependent. This study provides an experimental basis to clarify the possible role of myostatin during skeletal muscle atrophy.

关键词： myostatin antibody tibial nerve crush western blot immunohistochemistry

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神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

解剖学报 2003年第5期34卷 472-476页

作者：陈罡王晓冬张沛云丁斐南通医学院江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的　研究神经再生素 (NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。　方法　通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪AnnexinV和caspase 3活力检测等方法 ,了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响。NGF和RPMI16 40... 详细信息

目的　研究神经再生素 (NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。　方法　通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪AnnexinV和caspase 3活力检测等方法 ,了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响。NGF和RPMI16 40作对照。　结果　培养细胞的突起生长数量和长度、MTT微量比色的A值、AnnexinV PE 7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase 3活力的检测等指标 ,在NRF组和NGF组间无明显差异 ;而与空白对照组间差异有显著性意义。　结论　神经再生素对低血清培养下PC12细胞的凋亡有抑制作用。

关键词：神经再生素 PC12细胞细胞凋亡磷脂结合蛋白

肿瘤抑制因子PTEN蛋白在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的表达与分布

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解剖学报 2002年第6期33卷 587-589页

作者：严志强张沛云王晓冬徐邦生衣昕南通医学院江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的　观察肿瘤抑制因子PTEN蛋白在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的表达和分布。　方法　免疫组织化学ABC法显示大鼠脊髓和背根神经节中PTEN阳性免疫反应产物。　结果　背根节神经元及穿越背根节神经纤维轴突有阳性免疫反应产物存在 ;PTE... 详细信息

目的　观察肿瘤抑制因子PTEN蛋白在成年大鼠腰段脊髓和背根节中的表达和分布。　方法　免疫组织化学ABC法显示大鼠脊髓和背根神经节中PTEN阳性免疫反应产物。　结果　背根节神经元及穿越背根节神经纤维轴突有阳性免疫反应产物存在 ;PTEN阳性免疫反应产物在脊髓主要位于灰质神经元。　结论　PTEN在成年大鼠腰段脊髓和背根节神经元及神经纤维轴突中表达。

关键词：肿瘤抑制因子 PTEN 腰段脊髓蛋白表达成年大鼠免疫组织化学ABC法背根节

负载钛酸钙取向性静电纺聚己内酯/丝素蛋白支架促进周围神经再生

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中国组织工程研究 2025年第28期29卷 6070-6082页

作者：柳小军商雨情管文超许琳琳李贵才河南省药品医疗器械检验院河南省郑州市450018 国家药监局医用生物防护及植入器械质量评价重点实验室河南省郑州市450018 南通大学神经再生教育部重点实验室江苏省南通市226001

背景:取向性聚己内酯/丝素蛋白共混静电纺丝支架修复周围神经损伤可促进神经再生,但修复效果有限,还需要进一步结合生物活性材料、生长因子等因素制备仿生神经支架。钛酸钙纳米颗粒具有促进施万细胞间黏附的能力,已被广泛运用于生物医... 详细信息

背景:取向性聚己内酯/丝素蛋白共混静电纺丝支架修复周围神经损伤可促进神经再生,但修复效果有限,还需要进一步结合生物活性材料、生长因子等因素制备仿生神经支架。钛酸钙纳米颗粒具有促进施万细胞间黏附的能力,已被广泛运用于生物医学材料领域。目的:采用静电纺丝技术制备取向性聚己内酯/丝素蛋白-钛酸钙功能化支架,进一步探索该支架对施万细胞活力与黏附的影响。方法:采用静电纺丝技术制备聚己内酯/丝素蛋白支架,通过调整制备过程中的注射器流速、接收装置转速、纺丝时间筛选最优参数进行后续实验。在最优参数下,采用静电纺丝技术制备随机取向聚己内酯/丝素蛋白支架(记为PCL/SF-R)、取向性聚己内酯/丝素蛋白支架(记为CTO-0)及含0.1,0.5,1.0 mg/mL聚多巴胺修饰钛酸钙的取向性聚己内酯/丝素蛋白支架(依次记为CTO-1、CTO-5、CTO-10),表征5组支架的物理性能。将5组支架浸提液分别与大鼠成纤维细胞系(L929)共培养,采用MTT法检测细胞增殖。将大鼠施万细胞系(RSC96)分别接种于5组支架上,进行细胞活力、细胞骨架染色及细胞骨架与细胞黏附相关基因检测。结果与结论:①制备静电纺丝支架的最优参数为:注射器流速15μL/min,接收装置转速1800 r/min,纺丝时间1 h;②PCL/SF-R组水接触角最大、弹性模量最小,CTO-0组水接触角最小、弹性模量最大;CTO-0组支架降解速率低于CTO-1组,并且随着取向性支架中钛酸钙质量浓度的增加,支架的降解速率降低;③5组支架对L929细胞无毒性作用,具有良好的生物相容性;CCK-8检测结果显示,CTO-10可提升RSC96细胞活力;细胞骨架染色结果显示,取向性支架上细胞的长宽比和细胞突起长度均高于随机取向支架;qPCR检测结果显示,CTO-5组、CTO-0组YAP、Cntn2 mRNA表达均高于PCL/SF-R组(P神经再生。

关键词：钛酸钙取向性静电纺丝聚己内酯丝素蛋白周围神经再生工程化神经材料

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神经生长液对兔周围神经损伤的修复作用研究

中国临床解剖学杂志 2005年第1期23卷 83-86页

作者：张俊芳周鸣鸣刘梅丁斐南通医学院江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的:研究神经生长液(nerve growth decoction,NGD)促进兔周围神经损伤的修复作用。方法:大耳白兔40只,雌雄各半,行腓总神经夹伤术。实验分为五组:NGD低、中、高剂量组,弥可保组(阳性对照),空白对照组。口服给药四周后行电生理、组织学... 详细信息

目的:研究神经生长液(nerve growth decoction,NGD)促进兔周围神经损伤的修复作用。方法:大耳白兔40只,雌雄各半,行腓总神经夹伤术。实验分为五组:NGD低、中、高剂量组,弥可保组(阳性对照),空白对照组。口服给药四周后行电生理、组织学检测和超微结构观察。结果:NGD高、中剂量组和弥可保组在腓总神经传导速度恢复率,脊髓前角运动神经元的存活率及再生髓鞘计数均明显好于空白对照组(P神经纤维的髓鞘形态、厚度、成熟度均优于对照组,变性纤维的数目少于对照组。结论:神经生长液能促进损伤周围神经的再生和功能的恢复。

关键词：神经生长液/药理学神经再生/中药疗法周围神经损伤兔弥可保

地高辛标记的大鼠p75RNA探针的制备和应用

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中国临床解剖学杂志 2005年第5期23卷 518-520页

作者：沈宓丁斐江苏省神经再生重点实验室南通医学院江苏南通226001

目的:制备用地高辛标记的神经生长因子低亲和力受体(p75)的RNA探针。研究p75在海马组织中的表达。方法:设计p75引物,构建p75/pGEM-T重组质粒,分别用ApaⅠ和SacⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6和T7聚合酶转录合成酶合成地高辛标记的(d... 详细信息

目的:制备用地高辛标记的神经生长因子低亲和力受体(p75)的RNA探针。研究p75在海马组织中的表达。方法:设计p75引物,构建p75/pGEM-T重组质粒,分别用ApaⅠ和SacⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6和T7聚合酶转录合成酶合成地高辛标记的(dig-)正反义RNA探针。运用点膜杂交的方法检验探针的敏感度,运用该探针,通过原位杂交分析p75在海马中的表达。结果:构建了p75/pGEM-T质粒,获得高效价的正、反义dig-p75RNA探针,应用该探针发现p75mRNA在海马中的表达。结论:成功制备了地高辛标记的p75RNA探针,为进一步研究p75在海马中发育和损伤过程中的表达打下基础。

关键词：神经生长因子(p75) 大鼠地高辛标记p75RNA探针原位杂交