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双酚AF对海水青鳉仔鱼心血管和神经系统毒性效应

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中国环境科学 2024年第5期44卷 2724-2732页

作者：周天洋陈月碧高佳豪王中铎郭昱嵩董忠典广东海洋大学水产学院南海水产经济动物增养殖重点实验室广东湛江524088 广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广东湛江524088

为研究BPAF对海水青鳉仔鱼生长发育的毒性效应以及毒性效应是否在环境恢复后可逆,本研究将海水青鳉仔鱼在7.96和82.91μg/L BPAF中暴露7d随后恢复7d,探讨了BPAF对海水青鳉仔鱼存活、生长、心率和游泳行为的影响,并结合仔鱼神经系统、心... 详细信息

为研究BPAF对海水青鳉仔鱼生长发育的毒性效应以及毒性效应是否在环境恢复后可逆,本研究将海水青鳉仔鱼在7.96和82.91μg/L BPAF中暴露7d随后恢复7d,探讨了BPAF对海水青鳉仔鱼存活、生长、心率和游泳行为的影响,并结合仔鱼神经系统、心血管系统和抗氧化系统相关基因转录水平的变化探究了BPAF对海水青鳉仔鱼的毒性效应.结果表明,82.91μg/L BPAF暴露显著降低了仔鱼的存活率;7.96和82.91μg/L BPAF暴露均显著抑制了仔鱼的生长、游泳行为和心率,恢复7d后仔鱼的生长得以恢复,但游泳行为和心率仍被抑制;在分子水平上,7.96μg/LBPAF暴露导致神经系统基因ache、心血管统基因tbx2b和抗氧化系统基因cat的表达水平显著下调30%、47%和56%,恢复后对ache和cat的抑制效应消失,而82.91μg/L BPAF暴露则显著下调了神经系统基因syn2a(80%)、shha(58%)、xdh(59%)、gap43(47%)、elav13(54%),心血管统基因,atp2a1(44%)、crhr1(84%)、tbx2b(60%)、arnt2(32%)、tbx6(68%)的表达水平,恢复7d后elav13的表达恢复正常水平,而gap43的表达则显著上调,抗氧化系统基因cat、sod、cox和gpx的表达水平分别比对照组低61%、71%、51%和53%.本研究为BPAF的海洋生态安全风险评估和水质基准制定提供了重要参考.

关键词：海水青鳉 BPAF 仔鱼行为发育毒性

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尼罗罗非鱼CD63基因克隆及表达特征分析

南方农业学报 2024年

作者：李梓昕陈杨慧卢春兰黄瑜蔡佳王蓓广东海洋大学水产学院/广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室/水产经济动物病害控制广东省普通高校重点实验室

【目的】克隆尼罗罗非鱼抗原分化簇63基因(CD63)并分析其在病原菌刺激后的表达情况，探究尼罗罗非鱼CD63基因在机体抗感染过程所发挥的作用。【方法】根据NCBI检索到的尼罗罗非鱼CD63基因序列(XM＿003438906.4)设计引物并对尼罗罗非鱼C... 详细信息

【目的】克隆尼罗罗非鱼抗原分化簇63基因(CD63)并分析其在病原菌刺激后的表达情况，探究尼罗罗非鱼CD63基因在机体抗感染过程所发挥的作用。【方法】根据NCBI检索到的尼罗罗非鱼CD63基因序列(XM＿003438906.4)设计引物并对尼罗罗非鱼CD63基因进行克隆，利用生物信息学对CD63基因进行理化性质分析、结构及功能位点预测、系统进化分析等，采用实时荧光定量PCR方法检测CD63组织表达以及在无乳链球菌刺激后CD63在鳃、后肠、脾等九个组织中的表达情况。【结果】获得尼罗罗非鱼CD63目的基因序列，共765 bp，编码250 个氨基酸残基。其中，尼罗罗非鱼CD63基因ORF为309 bp，编码102 个氨基酸残基。尼罗罗非鱼CD63目的基因序列预测分子量为27.8 kD，理论pI为10.45，蛋白质亲水性平均系数(GRAVY)为0.214，将其预测为疏水性蛋白。InterPro在线网站预测其不含氨基酸保守结构域。SignalP-4.1网站在线预测该序列不含信号肽。同源性对比发现，尼罗罗非鱼CD63氨基酸序列与其他物种的同源性较低；系统进化分析显示，尼罗罗非鱼CD63氨基酸序列与其他物种亲缘关系较远。CD63基因在10 种组织中均有表达，在肌肉中表达量最高，其次为血液、后肠、心、鳃、头肾、皮肤、肝脏、脾脏、脑。经无乳链球菌刺激后，CD63基因在肌肉、后肠、心、鳃、皮肤、脾脏的表达量均出现显著上调(P<0.05，下同)。在96 h时，与最高时相比，CD63基因肌肉、后肠、鳃、头肾、皮肤、脾脏、脑的表达量均出现显著下调。【结论】尼罗罗非鱼CD63的基因结构、进化关系、组织表达情况等可为尼罗罗非鱼的免疫研究提供理论依据，揭示了CD63基因参与尼罗罗非鱼抗病原菌感染的响应，为进一步研究CD63基因的功能及其在尼罗罗非鱼信号转导、免疫细胞激活中的作用奠定基础。

关键词：尼罗罗非鱼 CD63基因组织表达无乳链球菌生物信息学分析

草鱼miR-1260对鱼淋巴囊肿病毒中国株复制的调控作用

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广东海洋大学学报 2024年第3期44卷 25-33页

作者：马嘉霖战盈瑾周杰黄鉴涛闫秀英简纪常广东海洋大学水产学院/广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室/水产经济动物病害控制广东普通高校重点实验室广东湛江524088

【目的】鉴定草鱼(Ctenopharyngodon idella)miR-1260(cid-miR-1260),分析cid-miR-1260在鱼淋巴囊肿病毒中国株(Lymphocystis disease virus China,LCDV-cn)感染草鱼卵巢细胞系(Grass carp ovary cells,GCO)过程中的时序表达特性,揭示cid-miR-1260对其靶基因znf574和LCDV-cn复制的调控作用。【方法】制备LCDV-cn感染的GCO细胞,通过茎环RT-PCR和测序鉴定cid-miR-1260;采用定量PCR检测cid-miR-1260在LCDV-cn感染GCO过程中的时序表达;应用生物信息学方法预测cid-miR-1260的靶基因,并用双荧光素酶报告基因系统验证靶基因;通过转染cid-miR-1260 mimic和cid-miR-1260 inhibitor使cid-miR-1260过表达和抑制表达,并用定量PCR检测cid-miR-1260、靶基因znf574、LCDV-cn mcp基因的表达;应用Reed-Muench法测定LCDV-cn在GCO细胞中的滴度。【结果】cid-miR-1260与其他已知miR-1260仅有一个碱基差异,且cid-miR-1260在LCDV-cn感染GCO过程中呈先上升后下降的表达变化,72 h时表达量最高(P<0.05);生物信息学分析表明,znf574为cid-miR-1260的靶基因;重组质粒pmirGLO-znf574-WT与cid-miR-1260 mimic共转染后,荧光素酶活性显著降低(P<0.05),证实znf574为cid-miR-1260的靶基因;cid-miR-1260过表达后,靶基因znf574的表达显著下降(P<0.05),LCDV-cn mcp的表达和LCDV-cn在GCO细胞中的滴度显著上升(P<0.05);抑制cid-miR-1260表达后,靶基因znf574的表达量显著上升(P<0.05),LCDV-cn mcp的表达量和LCDV-cn在GCO细胞中的滴度显著下降(P<0.05)。【结论】LCDV-cn感染GCO细胞后,cid-miR-1260的表达显著上调;在LCDV-cn感染中,cid-miR-1260对其靶基因znf574的表达起负调控作用,且cid-miR-1260表达与LCDV-cn的复制呈正相关,起促LCDV-cn感染作用,而锌指蛋白ZNF574具有抗LCDV-cn作用。本研究为淋巴囊肿病的防治提供新的依据和思路。

关键词：鱼淋巴囊肿病毒中国株草鱼卵巢细胞系 cid-miR-1260 锌指蛋白基因znf574 病毒复制

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酸化剂对大口黑鲈生长、抗氧化能力和肠道健康的影响

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水产学报 2024年第6期48卷 169-183页

作者：何家鑫杨婷婷郭凯关舒郜卫华罗凯迟淑艳长江大学湖北省涝渍灾害与湿地农业重点实验室帝斯曼(中国)有限公司动物营养与健康部门帝斯曼大亚太区动物营养与保健部门广东海洋大学广东南海水产经济动物养殖重点实验室

为了探究饲料添加酸化剂对大口黑鲈生长性能、抗氧化能力和肠道健康的影响，用含不同酸化剂水平(0%、0.05%、0.10%、0.15%和0.20%)的5组等氮等脂饲料投喂初始体重为(21.31±0.18) g的大口黑鲈64 d。结果显示，大口黑鲈增重率和特定生长... 详细信息

为了探究饲料添加酸化剂对大口黑鲈生长性能、抗氧化能力和肠道健康的影响，用含不同酸化剂水平(0%、0.05%、0.10%、0.15%和0.20%)的5组等氮等脂饲料投喂初始体重为(21.31±0.18) g的大口黑鲈64 d。结果显示，大口黑鲈增重率和特定生长率随着饲料中酸化剂添加量的提高呈先升后降的变化，在0.15%组均达到最大值。与对照组相比，饲料添加0.10%～0.15%的酸化剂显著降低了大口黑鲈饲料系数，显著提高了大口黑鲈全鱼粗脂肪含量和蛋白质沉积率以及对饲料干物质、粗脂肪和总能的表观消化率。在饲料酸化剂添加量为0.15%时，大口黑鲈肠道脂肪酶活性显著高于对照组。相比于对照组，0.15%组的甘油三酯含量和总胆固醇含量显著降低，0.15%组的高密度脂蛋白胆固醇含量显著升高。饲料中酸化剂添加量在0.10%～0.15%时，大口黑鲈血清总抗氧化能力以及肠道总抗氧化能力和超氧化物歧化酶活性显著提高，血清谷草转氨酶活性和肝脏丙二醛含量显著降低。0.15%组肠道绒毛长度、绒毛宽度、肌层厚度均显著大于对照组。与对照组相比，饲料中添加0.15%的酸化剂显著上调大口黑鲈肠道抗氧化相关因子(nrf2、cat和sod1)基因的mRNA表达水平，显著上调抑炎因子(il-10)基因的mRNA表达水平，饲料中添加0.20%的酸化剂显著下调促炎因子(tnf-α、il-1β)基因的mRNA表达水平。以增重率和饲料系数为评价指标，基于折线模型结果，大口黑鲈饲料中酸化剂适宜添加量为0.148%～0.152%。研究表明，饲料中添加0.15%的酸化剂能够促进大口黑鲈的生长，提高抗氧化能力，降低肠道炎症水平以及维持肠道健康。

关键词：大口黑鲈酸化剂生长性能抗氧化能力肠道健康

马氏珠母贝V-ATPase-d基因序列特征及其与耐低温性状的关系

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水产学报 2024年第9期48卷 87-100页

作者：赖卓欣宋欣霖潘若哲谭又瑄王庆恒广东海洋大学水产学院广东省珍珠科技创新中心广东省海水养殖生物育种工程实验室广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室

液泡ATP酶（V-ATPase）在生物应对各种环境压力时发挥重要功能，为探究VATPase在马氏珠母贝低温适应过程中的作用，实验克隆了马氏珠母贝的V-ATPase-d基因，采用qRT-PCR技术研究了低温胁迫下Pm-V-ATPase-d表达量的变化，并筛选和比较了... 详细信息

液泡ATP酶（V-ATPase）在生物应对各种环境压力时发挥重要功能，为探究VATPase在马氏珠母贝低温适应过程中的作用，实验克隆了马氏珠母贝的V-ATPase-d基因，采用qRT-PCR技术研究了低温胁迫下Pm-V-ATPase-d表达量的变化，并筛选和比较了该基因在耐低温选育系（low temperature resistant line, R） F3和北部湾野生群体（Beibu Gulf wild population, W）外显子区的SNP位点。结果显示，Pm-V-ATPase-d总长为1 473 bp，开放阅读框（ORF）为1140bp，编码379个氨基酸，具有ATP典型的结构域PfamvATPsynt＿AC39。Motif分析及三级结构预测结果表明，Pm-V-ATPase-d具有较高的保守性，其在系统进化树中与长牡蛎聚为一支。组织荧光定量结果显示，Pm-V-ATPase-d在所检测的组织中均有表达，在肝胰腺、性腺和鳃组织中表达量较高。在低温胁迫条件下，Pm-VATPase-d基因的表达量随着时间的延长呈现先上升后下降的趋势，且低温组的表达量在5 d内均显著高于对照组，这表明Pm-V-ATPase-d可能参与了马氏珠母贝对温度胁迫的响应；对Pm-V-ATPase-d外显子区的SNP分析共得到35个SNP，其中34个为同义突变，只有一个位点为非同义突变，26个SNP在W和R群体的不同基因型和等位基因之间具有显著差异，单倍型连锁不平衡分析结果显示，Pm-V-ATPase-d基因SNPs可形成6个单倍体块，14种单倍型，其中单倍型GAAT、CGC、TC、TG、AG与马氏珠母贝耐低温性状显著相关。研究表明，Pm-V-ATPase-d可能是参与调节马氏珠母贝低温适应过程中的候选基因，本研究可为马氏珠母贝对低温的适应机制提供研究基础，筛选出的与抗低温性状相关的SNPs及单倍型可应用于分子辅助育种。

关键词：马氏珠母贝 V-ATPase-d基因单核苷酸多态性低温

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盐度对弓背青鳉行为及肠道菌群的影响

农业与技术 2024年第13期44卷 114-120页

作者：黄健旋刘悦黎学友王中铎郭昱嵩董忠典广东海洋大学水产学院/南海水产经济动物增养殖重点实验室广东湛江524088 广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广东湛江524088

研究盐度对弓背青鳉(Oryzias curvinotus)游泳行为及肠道菌群的影响。将青鳉饲养于0(L组)、15(M组)和30(H组)盐度水体中,通过行为分析和16S rDNA测序探究其游泳行为特征和肠道菌群组成结构。M组弓背青鳉处于大运动状态时间显著低于H组... 详细信息

研究盐度对弓背青鳉(Oryzias curvinotus)游泳行为及肠道菌群的影响。将青鳉饲养于0(L组)、15(M组)和30(H组)盐度水体中,通过行为分析和16S rDNA测序探究其游泳行为特征和肠道菌群组成结构。M组弓背青鳉处于大运动状态时间显著低于H组。各盐度组弓背青鳉肠道的优势菌群均为变形菌门,属水平上,M组中Haloferula总丰度显著高于L组和H组(P<0.05);不同盐度组中弓背青鳉肠道丰度(ACE指数、Chao1指数)无显著差异,H组香农指数显著高于M组(P<0.05),L组辛普森指数显著高于M组(P<0.05);Beta多样性分析表明,不同盐度组弓背青鳉肠道菌群之间有一定的差异。PICRUSt2功能预测表明,弓背青鳉肠道菌群涉及6个主代谢通路,新陈代谢为最主要的功能。弓背青鳉对0~30盐度具有较好的适应能力,盐度变化可引起肠道菌群结构的变化,结果为阐明弓背青鳉广盐性适应机制提供了理论依据,有助于弓背青鳉的进一步开发。

关键词：弓背青鳉盐度行为肠道菌群

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琥珀酰化修饰对马氏珠母贝植核免疫的影响

广东海洋大学学报 2024年第2期44卷 39-45页

作者：梁海鹰陈洁张美珍广东海洋大学水产学院广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广东湛江524088

【目的】研究蛋白质琥珀酰化修饰在马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)植核后免疫应答中的作用,为阐明珍珠贝植核反应的分子调控机制提供理论依据。【方法】通过对马氏珠母贝注射琥珀酸钠模拟提高琥珀酰化修饰水平,检测马氏珠母贝... 详细信息

【目的】研究蛋白质琥珀酰化修饰在马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)植核后免疫应答中的作用,为阐明珍珠贝植核反应的分子调控机制提供理论依据。【方法】通过对马氏珠母贝注射琥珀酸钠模拟提高琥珀酰化修饰水平,检测马氏珠母贝植核后鳃组织总蛋白琥珀酰化程度、免疫相关基因表达、抗氧化相关酶酶活以及珍珠贝的存活率和留核率。【结果与结论】注射琥珀酸钠后,鳃组织琥珀酰化修饰水平在12 h和72 h显著上升;使用实时荧光定量PCR检测胁迫应激相关基因的时序表达,胁迫应激相关因子SOD和Caspase2在6 h表达量显著上调,NF-κB和IRAK1在48 h表达量显著上调,TRAF3和IκK的表达量在96 h显著上调(P 增强;抗氧化相关酶、过氧化物酶和谷胱甘肽活性都在96 h出现显著上调(P 增强。与对照组[磷酸盐缓冲溶液(PBS)+植核]和植核组相比,实验组(琥珀酸钠+植核)中珍珠贝的存活率在7 d和45 d存在显著差异,在60 d留核率显著上升(P <0.05)。结果说明,琥珀酰化修饰参与了马氏珠母贝的植核免疫反应,注射琥珀酸钠可以提高受体贝的免疫活力,并提高其在植核后的存活率和留核率。

关键词：马氏珠母贝植核免疫琥珀酰化修饰琥珀酸钠

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鰤鱼诺卡氏菌多重PCR 分型方法的建立与应用

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大连海洋大学学报 2024年

作者：李雨豪陈宝鑫费晴林冠英黄婷夏立群广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东海洋大学深圳研究院广东省水生动物健康评估工程技术研究中心深圳海水经济动物种苗健康评价公共技术服务平台广西壮族自治区水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室

为建立一种鰤鱼诺卡氏菌（Nocardia seriolae）多重PCR的分型方法，对已公布的20个鰤鱼诺卡氏菌全基因组数据进行对比分析，筛选鰤鱼诺卡氏菌种内差异基因片段并设计PCR引物，经单重PCR验证确认后进行引物组合、引物配比优化，构建鰤鱼... 详细信息

为建立一种鰤鱼诺卡氏菌（Nocardia seriolae）多重PCR的分型方法，对已公布的20个鰤鱼诺卡氏菌全基因组数据进行对比分析，筛选鰤鱼诺卡氏菌种内差异基因片段并设计PCR引物，经单重PCR验证确认后进行引物组合、引物配比优化，构建鰤鱼诺卡氏菌的多重PCR菌株分型方法，并对该菌株分型方法进行灵敏度分析和病例应用。结果表明：在实验中构建的多重PCR菌株分型方法可用于鰤鱼诺卡氏菌培养物和感染鱼样分型，并确认鰤鱼诺卡氏菌ArsC、AraC、ISOPREN、ALAT、IclR基因片段具有种内差异；其中多重PCR引物组合①（ISOPREN-F/R、ALAT-F/R、IclR -F/R）引物最优配比为ISOPREN-F/R:ALAT-F/R:IclR-F/R=2:1:2，灵敏度达125 pg/μL，组合②（AraC-F/R、ALAT-F/R、IclR-F/R）引物最佳配比为AraC-F/R:ALAT-F/R:IclR-F/R=1:1:1，灵敏度达500 pg/μL，组合③（ArsC-F/R、ALAT-F/R、IclR-F/R）引物最佳配比为ArsC-F/R:ALAT-F/R:IclR-F/R=1:2:2，灵敏度达500 pg/μL。研究表明，本研究中建立的鰤鱼诺卡氏菌的多重PCR菌株分型方法，可在1-2小时内完成鰤鱼诺卡氏菌的菌株分型鉴定，为水产实践中鰤鱼诺卡氏菌感染病例的菌株分型提供快速、准确、实用的鉴定方法，可助力于鱼类诺卡氏菌病的防控。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌多重PCR 菌株分型

珠江口万山群岛黄鳍棘鲷食性随年龄的变化特征

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中国水产科学 2024年第2期31卷 219-231页

作者：杨禧越刘永李纯厚唐广隆张达娟游奕来潘淑芳郑秋实肖雅元吴鹏中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室广东珠江口生态系统野外科学观测研究站广东省渔业生态环境重点实验室天津市水产生态及养殖重点实验室天津农学院水产学院广东珠海淇澳-担杆岛省级自然保护区管理处

黄鳍棘鲷(Acanthopagruslatus)是我国东南沿海地区分布的特色经济鱼类和增殖放流鱼类,研究黄鳍棘鲷的食性变化特征有助于了解其的食物来源及其在食物网中的功能地位。通过胃含物形态学和18SrRNA基因高通量测序的方法分析了万山群岛海域... 详细信息

黄鳍棘鲷(Acanthopagruslatus)是我国东南沿海地区分布的特色经济鱼类和增殖放流鱼类,研究黄鳍棘鲷的食性变化特征有助于了解其的食物来源及其在食物网中的功能地位。通过胃含物形态学和18SrRNA基因高通量测序的方法分析了万山群岛海域不同年龄(1～3龄)黄鳍棘鲷的食性变化特征。形态学鉴定发现黄鳍棘鲷胃含物中有贝类、蟹类和食糜。18S rRNA基因高通量测序共鉴定出黄鳍棘鲷胃含物中有真核生物16门84种,黄鳍棘鲷主要的食物来源为节肢动物门的锈斑蟳(Charybdis feriatus)和腹针胸刺水蚤(Centropages abdominalis),软体动物门的变化短齿蛤(Brachidontesvariabilis),脊索动物门的圆吻海鰶(Nematalosanasus),红藻门的条斑紫菜(Neopyropia yezoensis),其共占总食物来源的66.73%。万山群岛黄鳍棘鲷主要以动物性饵料为食,对植物性饵料的摄食相对较少。对1～3龄黄鳍棘鲷食性的研究发现,随着年龄的增加,黄鳍棘鲷的主要摄食种类逐渐由节肢动物门和软体动物门转向脊索动物门,摄食的生物物种数量逐渐减少。研究结果为万山群岛黄鳍棘鲷的摄食生态研究提供基础数据。

关键词：黄鳍棘鲷高通量测序技术食性胃含物体长