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半乳糖凝集素10在不同类型鼻息肉中的表达及其发病机制中的作用

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2020年第9期55卷 837-844页

作者：李春花刘肖吴文霞王耀洁艾誉峰刘红兵南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科 330006

目的检测半乳糖凝集素10(Galectin-10)在不同程度嗜酸粒细胞浸润的鼻息肉中的表达差异,探讨Galectin-10是否可作为嗜酸粒细胞性鼻息肉(eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps,ECRSwNP)的新型标志物,及其在ECRSwNP发病机制中的作用。方法纳入2018年11月至2019年4月在南昌大学第二附属医院住院行鼻内镜手术的患者共36例进行回顾性分析,其中男20例,女16例;年龄为14~74岁。36例患者分为3组:ECRSwNP组11例;非嗜酸粒细胞性鼻息肉(noneosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps,non-ECRSwNP)组15例;对照组单纯鼻中隔偏曲患者10例。采用HE染色对CRSwNP进行组织学评估并将其分为ECRSwNP和non-ECRSwNP。根据患者有无变应性鼻炎,将CRSwNP患者分为AR组及非AR组(non-AR),将CRSwNP与对照组根据是否属于特应性状态分为特应性状态阳性组(Atopy)及阴性组(non-Atopy)。免疫组织化学测定Galectin-10在ECRSwNP、non-ECRSwNP及对照组组织中的阳性定位及半定量表达、蛋白免疫印迹(Western Blot)检测Galectin-10蛋白分别在3组中的表达水平、实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测Galectin-10 mRNA在3组中的不同表达;分析Galectin-10的表达与临床因素,如合并变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)、特应性状态是否相关。运用IBM SPSS 19.0及Graphpad prism 7.0对实验数据进行处理与作图。结果免疫组织化学染色结果提示Galectin-10主要位于嗜酸粒细胞,与non-ECRSwNP组(0.028±0.004)和对照组(0.025±0.004)相比,ECRSwNP组中Galectin-10的半定量表达(0.051±0.003)更高,差异有统计学意义(t值分别为3.862、5.137,P值均0.05)。Western Blot法检测Galectin-10蛋白的表达发现,与non-ECRSwNP组和对照组相比,ECRSwNP组中Galectin-10蛋白的表达更高,差异有统计学意义(t值分别为25.351、27.376,P值均0.05)。Galectin-10 mRNA在3组中的表达:与non-ECRSwNP组(1.188±0.054)和对照组(1.020±0.142)相比,ECRSwNP组Galectin-10 mRNA表达量(2.413±0.303)较高,差异有统计学意义(t值分别为3.973、4.156,P值均0.05)。采用免疫组织化学方法检测组间Galectin-10蛋白的半定量表达差异,结果显示AR组与non-AR组比较,Galectin-10的表达差异无统计学意义(P值均>0.05),特应性状态阳性组(Atopy)与特应性状态阴性组(non-Atopy)相比,Galectin-10的表达差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论Galectin-10在ECRSwNP中表达升高,但是在AR与non-AR以及在特应性状态阳性组(Atopy)与特应性状态阴性组(non-Atopy)患者间差异无统计学意义,提示Galectin-10可作为ECRSwNP的新型生物标志物,并可能在非变态反应诱发的ECRSwNP发病机制中具有意义。

关键词： Charcot-Leyden晶体 Galectin-10 鼻窦炎鼻息肉嗜酸粒细胞

趋化因子受体3 RNA干扰慢病毒载体的构建及对嗜酸粒细胞作用的初步研究

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2013年第4期48卷 316-321页

作者：朱新华廖兵王心悦刘轲刘月辉南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科 330006

目的构建趋化因子受体3（chemokine receptor3，CCR3）基因RNA干扰（RNA interference，RNAi）慢病毒表达载体，了解其对嗜酸粒细胞的作用。方法针对小鼠CCR3基因序列，设计出RNAi的靶序列，退火形成双链DNA，与经MluI、SacI、EcoRI、Hi... 详细信息

目的构建趋化因子受体3（chemokine receptor3，CCR3）基因RNA干扰（RNA interference，RNAi）慢病毒表达载体，了解其对嗜酸粒细胞的作用。方法针对小鼠CCR3基因序列，设计出RNAi的靶序列，退火形成双链DNA，与经MluI、SacI、EcoRI、HindIll、BamHI和XhoI进行酶切后的pLVX—shRNA2一m载体连接产生短发夹RNA（shoa hairpin RNA，shRNA）慢病毒载体。应用shRNA慢病毒载体转染293T细胞及嗜酸粒细胞，测定病毒滴度，实时定量聚合酶链反应检测嗜酸粒细胞中CCR3基因mRNA的表达情况。结果成功构建了shRNA—mCCR3慢病毒载体，经测序与设计合成的靶向链完全一致。荧光显微镜下观察293T细胞感染效率大于90％，病毒滴度为4×10。TU／ml；对嗜酸粒细胞CCR3基因沉默效率为86．7％。结论成功构建CCR3基因RNAi慢病毒表达载体，为后续感染嗜酸粒细胞，探索其在变应性鼻炎发生和发展中的作用奠定了基础。

关键词： RNA干扰受体 CCR3 慢病毒属嗜酸细胞

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原发性和继发性喉结核的临床特征比较分析

临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2021年第1期35卷 38-41页

作者：艾誉峰刘红兵徐红刘月辉李俐华南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科南昌330006

目的:探讨原发性和继发性喉结核的临床模式、诊断和治疗。方法:回顾性分析103例确诊为喉结核的患者,从病例记录中获得人口学特征、生活方式、临床特征、诊断和治疗。结果:103例患者中,64例被诊断为原发性喉结核,39例被诊断为继发性喉结... 详细信息

目的:探讨原发性和继发性喉结核的临床模式、诊断和治疗。方法:回顾性分析103例确诊为喉结核的患者,从病例记录中获得人口学特征、生活方式、临床特征、诊断和治疗。结果:103例患者中,64例被诊断为原发性喉结核,39例被诊断为继发性喉结核。最常见的症状是声音嘶哑和吞咽困难。声带是最常见的侵犯部位。大多数原发性喉结核病患者表现为单发、增生病变。继发性喉结核表现为溃疡、水肿、多部位病变。所有喉结核患者均给予系统的抗结核治疗。如果患者出现喉梗阻,则考虑手术治疗。结论:原发性、继发性喉结核的临床表现、体征存在差异。喉结核容易误诊为喉炎、喉肿瘤,应进行病理学检查,以明确诊断。

关键词：结核喉临床特征误诊

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IL-8在慢性鼻窦炎中的表达及作用

临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2021年第8期35卷 765-768页

作者：王耀洁李春花刘红兵南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科南昌330006

白细胞介素8(IL-8)是CXC趋化因子的一员,可由单核细胞、巨噬细胞和成纤维细胞等多种细胞释放。它在气道炎症中起重要作用,与哮喘、支气管扩张[1-2]等疾病都有着密切的联系。IL-8有个很重要的功能,就是趋化中性粒细胞,促进中性粒细胞的... 详细信息

白细胞介素8(IL-8)是CXC趋化因子的一员,可由单核细胞、巨噬细胞和成纤维细胞等多种细胞释放。它在气道炎症中起重要作用,与哮喘、支气管扩张[1-2]等疾病都有着密切的联系。IL-8有个很重要的功能,就是趋化中性粒细胞,促进中性粒细胞的募集、抗菌功能和延长体外存活时间。除此之外,IL-8还具有参与血管生成、趋化嗜酸粒细胞及T淋巴细胞[3-5]等作用。

关键词：白细胞介素8 鼻窦炎

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细菌感染在慢性鼻窦炎发病机制中的作用

临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2021年第2期35卷 189-192页

作者：刘肖刘红兵李春花南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科南昌330006

慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)是鼻窦黏膜慢性炎症性疾病,是耳鼻咽喉头颈外科的常见病,中国人群CRS总体患病率约为8%。CRS给患者的生活带来极大的困扰,造成极大的社会经济负担[1]。CRS是一种高度异质性疾病,其病因和发病机制... 详细信息

慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)是鼻窦黏膜慢性炎症性疾病,是耳鼻咽喉头颈外科的常见病,中国人群CRS总体患病率约为8%。CRS给患者的生活带来极大的困扰,造成极大的社会经济负担[1]。CRS是一种高度异质性疾病,其病因和发病机制涉及局部和全身因素,以及环境、微生物、遗传等多因素[2]。CRS微生物学研究发现,病毒、真菌、生物膜和细菌定植是CRS潜在的致病因素[3]。细菌感染是急性鼻窦炎的致病因素已成为共识,但细菌在CRS发病中的作用并不完全清楚,常规细菌培养发现致病菌可以分泌毒素诱发炎症因子的释放、破坏鼻腔上皮的完整性和纤毛清除功能。

关键词：鼻窦炎细菌感染发病机制

应用16SrRNA基因测序技术研究慢性鼻窦炎微生物学的进展

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2021年第7期35卷 658-661页

作者：刘肖刘红兵李春花南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科南昌330006

慢性鼻窦炎(CRS)定义为一种鼻窦黏膜慢性炎症性疾病,其病程超过12周,是耳鼻咽喉头颈外科的常见病,中国人群中CRS总体患病率约为8%[1]。CRS会引起鼻塞、流涕、面部胀痛、嗅觉下降或丧失等明显身体不适,这些症状可持续存在,严重影响患者... 详细信息

慢性鼻窦炎(CRS)定义为一种鼻窦黏膜慢性炎症性疾病,其病程超过12周,是耳鼻咽喉头颈外科的常见病,中国人群中CRS总体患病率约为8%[1]。CRS会引起鼻塞、流涕、面部胀痛、嗅觉下降或丧失等明显身体不适,这些症状可持续存在,严重影响患者生活、工作,给社会经济造成极大的负担[2]。尽管进行了大量研究,但CRS的病因仍不完全清楚,其涉及环境、宿主、微生物等多种因素[3]。

关键词：鼻窦炎微生物学 16SrRNA基因高通量测序

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喉部血管肉瘤一例

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2020年第4期55卷 406-407页

作者：李春花刘肖刘红兵廖兵罗璝南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科 330006

本文报道了我科收治的1例喉部血管肉瘤病例。患者老年男性,以声音嘶哑3年余入院,入院初步诊断为喉部新生物,术前病理提示:右侧声带考虑假肉瘤性改变。在全麻下经支撑喉镜CO2激光声带新生物切除术,术后病理示声带血管肉瘤,再次在全麻下... 详细信息

本文报道了我科收治的1例喉部血管肉瘤病例。患者老年男性,以声音嘶哑3年余入院,入院初步诊断为喉部新生物,术前病理提示:右侧声带考虑假肉瘤性改变。在全麻下经支撑喉镜CO2激光声带新生物切除术,术后病理示声带血管肉瘤,再次在全麻下经支撑喉镜CO2激光喉部分切除术,密切随访16个月无复发。

关键词：血管肉瘤支撑喉镜喉部分切除术右侧声带老年男性声音嘶哑 CO2激光术前病理

慢病毒介导的siRNA靶向CD47基因对人喉癌细胞Hep-2增殖、凋亡的影响

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解放军医学杂志 2013年第8期38卷 634-638页

作者：高树峰张少容徐莲李黎万俊杨春平刘建国汪美群刘月辉南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科南昌330006

目的探究慢病毒载体介导siRNA抑制CD47基因表达后对人喉癌细胞株Hep-2体外增殖凋亡的影响。方法构建慢病毒载体,将靶向CD47基因的siRNA慢病毒转染至Hep-2细胞;用荧光显微镜行细胞形态学变化观察;RT-PCR检测细胞CD47 mRNA表达的变化;West... 详细信息

目的探究慢病毒载体介导siRNA抑制CD47基因表达后对人喉癌细胞株Hep-2体外增殖凋亡的影响。方法构建慢病毒载体,将靶向CD47基因的siRNA慢病毒转染至Hep-2细胞;用荧光显微镜行细胞形态学变化观察;RT-PCR检测细胞CD47 mRNA表达的变化;Western blotting检测CD47蛋白表达的变化情况;MTT法检测细胞的增殖凋亡情况。结果 CD47-siRNA慢病毒转染Hep-2细胞后,形态学观察显示CD47-siRNA能有效抑制Hep-2细胞增殖,细胞变形明显,体积变小,可见细胞坏死及凋亡。RT-PCR和Western blotting检测显示,CD47的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）,使CD47 mRNA表达减少76%~82%,CD47蛋白表达减少77%;慢病毒转染细胞在48h后MTT检测细胞凋亡率明显提高（P〈0.01）。结论慢病毒介导的siRNA干扰CD47基因表达后,明显抑制了喉癌Hep-2细胞CD47的表达并且诱导了Hep-2凋亡。

关键词： CD47 慢病毒载体 RNA干扰 Hep-2细胞基因沉默

慢病毒介导的小鼠CCR3基因RNAi载体的构建及其在肥大细胞中的表达

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2019年第7期33卷 628-634页

作者：朱新华彭海森江银丽伍书红唐思艺刘月辉南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科

目的:构建筛选靶向趋化因子受体3(CCR3)-RNA干扰慢病毒表达载体,感染小鼠肥大细胞,观察该基因在肥大细胞中的表达及该病毒载体的干扰效率,为研究变应性鼻炎的发病机制奠定基础。方法:首先构建3对CCR3-短发夹RNA(CCR3-shRNA)序列,然后在s... 详细信息

目的:构建筛选靶向趋化因子受体3(CCR3)-RNA干扰慢病毒表达载体,感染小鼠肥大细胞,观察该基因在肥大细胞中的表达及该病毒载体的干扰效率,为研究变应性鼻炎的发病机制奠定基础。方法:首先构建3对CCR3-短发夹RNA(CCR3-shRNA)序列,然后在shRNA慢病毒载体中分别插入3对双链的shRNA oligo,3个shRNA慢病毒重组质粒构建成功后,将重组载体和病毒包装的辅助质粒共转染293T细胞,从而获得慢病毒质粒,并将其转染入体外培养及纯化小鼠骨髓源性的肥大细胞。qRT-PCR检测肥大细胞CCR3mRNA的表达,Western Blot检测肥大细胞CCR3蛋白的表达。结果:经测序证实,成功构建CCR3-shRNA的慢病毒载体,转染293T细胞并进行病毒包装,最终获取高纯度的PDSO19-PL-CCR3慢病毒质粒,病毒滴度为3.7×10^8 TU/ml。以该慢病毒质粒感染小鼠肥大细胞,qRT-PCR和Western Blot检测示:CCR3-shRNA降低了小鼠肥大细胞的CCR3基因在mRNA和蛋白水平的表达。结论:成功构建了CCR3基因RNAi慢病毒表达载体质粒,发现其下调了小鼠肥大细胞CCR3基因mRNA及蛋白水平的表达,为进一步研究其在变应性鼻炎发病机制中的作用打下了基础。

关键词：趋化因子受体3 RNA干扰慢病毒肥大细胞