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从“风痰瘀虚”辨析儿童难治性肺炎支原体肺炎细胞因子风暴

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陕西中医 2025年第1期46卷 80-83,87页

作者：余欢蔡萌王孟清帅云飞湖南中医药大学第一附属医院、湖南中医药大学中医学国内一流建设学科湖南长沙410007 南方医科大学珠江医院儿科中心广东广州510280

难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)常由肺炎支原体肺炎进展而来,儿童发病率逐年升高,临床上迁延不愈容易并发多器官损伤。中医药辨治该病有一定优势,重归经典,与本病病理变化结合,提出细胞因子风暴是导致肺系重症症候群的主要原因,其特点与风... 详细信息

难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)常由肺炎支原体肺炎进展而来,儿童发病率逐年升高,临床上迁延不愈容易并发多器官损伤。中医药辨治该病有一定优势,重归经典,与本病病理变化结合,提出细胞因子风暴是导致肺系重症症候群的主要原因,其特点与风温之邪致病相类,痰瘀为病进之主因,虚象显现于疾病始末。现以“风痰瘀虚”为总纲,阐述儿童RMPP细胞因子风暴之治则治法,当分三期:细胞因子风暴前驱期,宣泻结合以平温热;风暴爆发期,化瘀逐痰以通肺络;细胞因子风暴缓解期,健脾益肺以养气阴,当灵活遣用方药,并结合中医外治之法以进一步提升疗效。

关键词：难治性肺炎支原体肺炎肺炎支原体感染细胞因子风暴儿童辨证论治

5溴脱氧尿苷和端粒酶逆转录酶标记肺干细胞在新生鼠高氧肺损伤中的作用

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中华儿科杂志 2006年第6期44卷 459-464页

作者：朱翠平杜江封志纯南方医科大学珠江医院儿科

目的探讨5溴脱氧尿苷(B rdu)和端粒酶逆转录酶(TERT)标记肺干细胞特点及其增殖、分化在肺发育和高氧肺损伤修复中的作用。方法(1)3 d新生鼠分为高氧组(95%左右氧气7 d)、高氧组siRNA干预组(高氧同时TGF-β1 siRNA经腹腔注入,隔日1次,共3... 详细信息

目的探讨5溴脱氧尿苷(B rdu)和端粒酶逆转录酶(TERT)标记肺干细胞特点及其增殖、分化在肺发育和高氧肺损伤修复中的作用。方法(1)3 d新生鼠分为高氧组(95%左右氧气7 d)、高氧组siRNA干预组(高氧同时TGF-β1 siRNA经腹腔注入,隔日1次,共3次)和正常对照组,处死前自腹腔注入B rdu。(2)免疫组化法检测B rdu和TERT阳性显色细胞,并分别使用碱性磷酸酶和辣根过氧化氢酶两种显色系统作B rdu/TERT和SPC抗体免疫双染。(3)分离新处死肺细胞,立即涂片,做B rdu和TERT免疫标记,计数阳性细胞百分比。结果(1)高氧组可见肺泡壁较薄、结构简单化、肺泡大小不均,有些肺泡融合、体积增加,肺泡腔有较多脱落的AEC II。(2)肺组织B rdu阳性显色部位主要在各级支气管黏膜下和肺间隔,支气管黏膜上皮及肺泡壁有散在分布,阳性细胞数量较少,多呈立方形、核大;TERT阳性显色在外周肺组织肺间隔和肺泡壁部位,数量明显少于B rdu[表达积分(1.61±0.83)vs.(0.62±0.55),P0.05]。(3)SPC分别和B rdu、TERT双染,可见少量阳性细胞。(4)肺细胞SPC免疫显色部位在胞浆,呈棕褐色,阳性细胞大小不一,高氧组和正常组显色细胞数无明显区别,阳性细胞百分比分别为80.3%、78.6%。(5)肺细胞B rdu阳性显色细胞明显少于SPC阳性细胞,体积明显大于未显色细胞,核形态主要为致密圆形,个别呈杆状;高氧组阳性细胞数略多于正常组,阳性细胞百分比分别为28.5%、21.4%。(6)TERT阳性显色细胞更为少见,阳性细胞体积多较小,核呈多种形态包括致密圆形、疏松圆形、杆状、分叶状;正常组和高氧组阳性细胞百分比分别为1.5%、2.3%。结论(1)B rdu和TERT可作为不同分化能力的肺干细胞标记,其中TERT更能反映肺干细胞特征或是成体肺干细胞标记更特异性的指标,B rdu标记从干细胞增殖分化尚保留干细胞特征的TAC。(2)高氧肺损伤时肺干细胞出现有限增殖分化。

关键词：高氧症干细胞肺疾病溴脱氧尿苷端粒末端转移酶

维生素D对高氧致新生鼠支气管肺发育不良的肺保护作用

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南方医科大学学报 2019年第7期39卷 816-822页

作者：陈慧陈欣欣陈剑锋赵宏王斌郑娓吕娟娟杜江南方医科大学珠江医院儿科中心

目的探讨维生素D对支气管肺发育不良的保护作用及其作用机制。方法应用高氧诱导的支气管肺发育不良新生小鼠模型,将36只幼鼠出生后立即给予实验处理,依据不同处理随机分为4组:空气+维生素D组,空气+生理盐水组,高氧+维生素D组,高氧+生理... 详细信息

目的探讨维生素D对支气管肺发育不良的保护作用及其作用机制。方法应用高氧诱导的支气管肺发育不良新生小鼠模型,将36只幼鼠出生后立即给予实验处理,依据不同处理随机分为4组:空气+维生素D组,空气+生理盐水组,高氧+维生素D组,高氧+生理盐水组。将各组实验鼠称重后处死,同时抽取心室内血液,采用ELISA方法测定血清维生素D水平。分离肺组织病理切片制作和组织细胞形态学检查取不同处理组小鼠的肺组织,光镜下观察并分析肺终末呼吸单位的组织形态;用图像分析软件对辐射状肺泡计数、肺泡次级间隔体积密度,比较不同处理组的肺终末呼吸单位损伤参数;取不同处理组实验小鼠的肺组织,提取总蛋白,采用Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF-R2水平。结果空气+生理盐水组和空气+维生素D组的体质量增长速率大于高氧+生理盐水组;空气+生理盐水组和空气+维生素D组的肺组织重量大于高氧+生理盐水组(P0.01)。与高氧+生理盐水组相比,高氧+维生素D(1250倍)组的次级突起计数显著升高(P0.01)。高氧+生理盐水组的VEGFR2表达量低于空气+生理盐水组(P<0.05),空气+维生素D组的VEGFR2表达量低于空气+生理盐水组(P<0.01);高氧+维生素D(1250倍)组的VEGFR2表达量高于高氧+生理盐水组(P<0.001)和高氧+维生素D(125倍)组(P<0.001),高氧+维生素D(125倍)组的表达量也高于高氧+生理盐水组(P<0.05)。但是,高氧+维生素D(1250倍)组的VEGFR2表达量高于高氧+生理盐水组与HE染色、辐射状肺泡计数以及次级突起计数的趋势相反。结论新生小鼠在支气管肺发育不良状态下增加维生素D可增加肺组织重量,为肺成熟提供物质基础,高浓度维生素D更有助于对肺的保护作用,有助于肺血管的生长。

关键词：维生素D 支气管肺发育不良肺保护

不同胎龄人胎脑室下区神经干细胞生长特征及增殖分化实验研究

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中华儿科杂志 2006年第7期44卷 500-504页

作者：尹晓娟巨容封志纯南方医科大学珠江医院儿科

目的探讨不同胎龄人胎脑室下区神经干细胞(NSCs)的生长特征。方法收集胎龄16～36周的胎儿90例,每例研究对象取室下区脑组织作为实验材料。所有研究对象产前经B超诊断患有先天性心脏病或消化道畸形,均无脑发育异常,孕妇及其丈夫要求终止... 详细信息

目的探讨不同胎龄人胎脑室下区神经干细胞(NSCs)的生长特征。方法收集胎龄16～36周的胎儿90例,每例研究对象取室下区脑组织作为实验材料。所有研究对象产前经B超诊断患有先天性心脏病或消化道畸形,均无脑发育异常,孕妇及其丈夫要求终止妊娠。采用免疫组化技术对人胎脑室下区NSCs的形态、存在方式以及数量进行检测,采用细胞培养技术对其进行培养、传代、分化观察,并应用免疫组化技术对培养及分化的细胞进行鉴定。结果人胎脑室下区NSCs具有星形、圆形、椭圆形及梭形等形态,以星形最多。细胞胞浆相对较少;核呈圆形,染色质疏松,1～4个核仁不等。可见NSCs对称分裂和不对称分裂现象,NSCs多数单个散在分布,有的NSCs与别的NSCs形成突触联系。不同胎龄人胎脑室下区NSCs随着胎龄的增加而减少(X2=4644．602,P<0．01)。不同胎龄以及同一胎龄不同个体的NSCs在上述方面存在一定的差别。从人胎脑室下区分离的细胞在无血清培养时呈悬浮状态生长,形成神经球。该细胞可传代培养,表达神经巢蛋白抗原(Nestin);而在含血清培养时能分化,分化细胞表达神经元细胞、少突及星形胶质细胞的特异性抗原。结论不同胎龄人胎脑室下区均存在NSCs,且在形态、存在方式及数量上存在一定的差异。不同胎龄人胎脑室下区均能在体外培养出NSCs。

关键词：脑室干细胞胎儿细胞分化

自噬和线粒体辅酶Q对急性脓毒症大鼠胰腺外分泌功能的影响

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中华危重病急救医学 2015年第2期27卷 86-91页

作者：陈胜利黄锦达曾其毅贾玉娥王金华南方医科大学附属珠江医院儿科广东广州510280

目的探讨自噬对急性脓毒症大鼠胰腺外分泌功能的影响，以及线粒体辅酶Q（Mito Q）是否通过自噬对急性脓毒症大鼠胰腺外分泌功能障碍起保护作用。方法实验1：将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组，每组10只。所有大鼠腹腔注射脂多糖... 详细信息

目的探讨自噬对急性脓毒症大鼠胰腺外分泌功能的影响，以及线粒体辅酶Q（Mito Q）是否通过自噬对急性脓毒症大鼠胰腺外分泌功能障碍起保护作用。方法实验1：将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组，每组10只。所有大鼠腹腔注射脂多糖（LPS）10mg／kg，1h后分别经尾静脉注射自噬特异性抑制剂渥曼青霉素（Wortmannin）2mg／kg（LPS＋Wortmannin组）、MitoQ6．5μmol／kg（LPS＋MitoQ组）或等量生理盐水（LPS组）。观察LPS后12h内动物存活情况。实验2：将100只雄性SD大鼠按随机数字表法分为10组：对照4h、6h、12h组，LPS4h、6h、12h组，LPS＋Wortmannin4h组，Wortmannin4h组，LPS＋Mito06h组，MitoQ6h组，每组10只，制模及给药方法同实验1。在相应时间点留取大鼠血标本，用速率法测定血清淀粉酶含量；取胰腺组织，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测活性氧（ROS）含量，蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测自噬相关基因LC3蛋白表达，镜下观察胰腺组织病理学改变。结果①LPS＋Wortmannin组大鼠存活时间明显短于LPS组（h：7．50±0．64比11．90±0．13，X^2=19．847，P=0．001）；LPS＋MitoQ组大鼠存活时间与LPS组无差异（h：11．60±0．24比11．90±0．13，x。=1．055，P=0．137）。②LPS6h组、LPS＋Wortmannin4h组、LPS＋MitoQ6h组血淀粉酶含量明显高于同时间点对照组（U／L：2881．00±550．12比2099．20±249．57，3672．00±779．24比2081．36±245．18，2975．20±687．03比2099．20±249．57，均P〈0．05），LPS12h组血淀粉酶含量明显低于同时间点对照组（U／L：794．00±218．71比2086．80±261．75，P〈0．01）；LPS6h和12h组、LPS＋Wortmannin4h组、LPS＋MitoO6h组胰腺组织ROS含量均明显高于同时间点对照组（kU／L：3．18±1．06比1．78±0．37，3．63±1．08比1．85±0．41，3．14±0．98比1．65±0．34，3．17±1．03比1．78±0．37，均P〈0．05）。LPS＋Wortmannin4h组血淀粉酶和胰腺组织ROS含量均明显高于同时间点LPS组（U／L：3672．00±779．24比2432．20±442．85，kU／L：3．14±0．98比1．87±0．42，均P〈O．05），而LPS＋MitoQ6h组血淀粉酶和胰腺组织ROS含量与同时间点LPS组无差异（U／L：2975．20±687．03比2881．00±550．12，kU/L：3．17±1．03比3．18±1．06，均P〉0．05）。光镜下观察，LPS6h和12h组、LPS＋Wortmannin4h组、LPS＋MitoO6h组均可见明显胰腺病理改变；电镜下观察，LPS6h后自噬体增多，MitoQ干预后自噬体数量与相应时间点LPS组无差异，而给予Wortmannin后未见自噬体。WesternBlot检测显示，LPS6h和12h组、LPS＋MitoQ6h组LC3蛋白表达均明显高于同时间点对照组（A值：0．34±0．02比0．17±0．02，0．37±0．03比0．18±0．04，0．36±0．02比0．17±0．02，均P〈0．05），但LPS12h组和LPS＋MitoQ6h组LC3蛋白表达与LPS6h组比较均无差异（均P〉0．05）。结论自噬对脓毒症大鼠胰腺外分泌功能障碍起保护作用，且自噬能力或自噬体形成速率可能是胰腺是否出现外分泌功能障碍的机制之一；而线粒体靶向抗氧化剂MitoQ对脓毒症大鼠胰腺外分泌功能障碍无保护作用。

关键词：自噬线粒体辅酶Q 胰腺外分泌脓毒症大鼠

C/EBPβ介导NPHP1敲低的肾小管上皮细胞TNF-α通路下游炎症因子的表达

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南方医科大学学报 2024年第1期44卷 156-165页

作者：黄丹梅刘雅清李丹彤张静兰杨翌晨孙良忠南方医科大学南方医院儿科广东广州510515

目的探讨NPHP1基因缺陷肾小管上皮细胞TNF-α信号通路激活及其调控的炎症因子表达。方法使用重组慢病毒LV-NPHP1-RNAi构建敲低NPHP1表达的人近端肾小管细胞株(HK2)细胞(NPHP1^(KD)HK2)。通过实时荧光定量PCR、Western blot、酶联免疫吸... 详细信息

目的探讨NPHP1基因缺陷肾小管上皮细胞TNF-α信号通路激活及其调控的炎症因子表达。方法使用重组慢病毒LV-NPHP1-RNAi构建敲低NPHP1表达的人近端肾小管细胞株(HK2)细胞(NPHP1^(KD)HK2)。通过实时荧光定量PCR、Western blot、酶联免疫吸附实验法检测各细胞株TNF-α表达、p38和C/EBPβ激活状态及其调控炎症因子CXCL5、CCL20、IL-1β、IL-6、MCP-1等表达情况。通过构建siRNA敲低野生型和NPHP1^(KD)HK2细胞C/EBPβ表达,观察上述指标变化。结果敲低NPHP1表达后,NPHP1^(KD)HK2细胞TNF-α、C/EBPβ、CXCL5、IL-1β和IL-6的mRNA表达量增加(P<0.05);Western blotting结果显示,phospho-p38、C/EBPβ表达上调(P<0.05);培养液上清IL-6水平增加(P<0.05)。使用siRNA敲低C/EBPβ表达后,NPHP1KDHK2细胞CSF2、CCL20、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平下调(P<0.05);Western blot显示phospho-p38表达下调(P<0.05);培养液上清IL-6水平下降(P<0.001)。结论NPHP1基因缺陷的NPHP1KDHK2细胞中TNF-α信号通路被激活,其调控的下游印证因子表达上调。C/EBPβ可能是介导NPHP1KDHK2细胞TNF-α信号通路相关炎症因子表达的关键转录因子。

关键词：肾单位肾痨 TNF-α C/EBPβ 炎症因子 NPHP1

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当归多糖对抗LY294002引发的血小板凋亡的研究

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中国实验血液学杂志 2019年第4期27卷 1208-1214页

作者：魏会灵刘持翔陈世超杨默南方医科大学南方医院儿科广东广州510515 南方医科大学南方医院输血科广东广州510515

目的:研究当归多糖(angelicapolysaccharide,APS)对体外冷藏保存血小板的抗凋亡作用及其机制。方法:将血小板样本分为4组:4℃冷藏的血小板空白对照组、4℃冷藏保存血小板APS处理组、LY294002处理组和LY294002加APS共同处理组。采用流式... 详细信息

目的:研究当归多糖(angelicapolysaccharide,APS)对体外冷藏保存血小板的抗凋亡作用及其机制。方法:将血小板样本分为4组:4℃冷藏的血小板空白对照组、4℃冷藏保存血小板APS处理组、LY294002处理组和LY294002加APS共同处理组。采用流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白CD41、CD61的表达及血小板凋亡率、凋亡蛋白酶Caspase-3的表达以及线粒体膜电位的变化。Westernblot检测分析APS通过PI3K/AKT信号通路抗血小板凋亡的作用机制。结果:LY294002组血小板凋亡率明显提高,血小板膜糖蛋白CD41、CD61的表达活性随着LY294002作用浓度的升高逐渐下降(r=-0.953);与空白对照组相比,LY294002组的血小板凋亡率明显升高(P<0.05),而LY294002和APS共同处理组的血小板凋亡率较前者下降(P<0.05),这提示,APS对体外冷藏血小板具有抗凋亡作用。APS还能降低血小板凋亡蛋白酶Caspase-3的表达和抑制线粒体膜电位的降低,以及刺激血小板PI3K/AKT通路的活化。结论:APS对体外冷藏保存的血小板具有抗凋亡作用,其机制可能与活化PI3K/AKT信号通路,减少细胞凋亡蛋白酶Caspase-3的表达和稳定线粒体膜电位有关。

关键词：血小板保存当归多糖(APS) LY294002

FK506和CSA对异体造血干细胞在粒单白血病小鼠存活及其血清IL-2和IL-4水平的影响

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四川大学学报（医学版） 2009年第3期40卷 478-480页

作者：陈静李春富南方医科大学南方医院儿科广州510515

目的探讨环孢霉素A(CSA)和FK506对造血干细胞异体移植及其对IL-2和IL-4表达的影响。方法用WEHI23细胞从尾静脉注入建立小鼠粒单白血病模型。取绿色荧光蛋白转基因鼠的骨髓,体外扩增纯化培养造血干细胞(HSC),移植入粒单白血病小鼠,观察FK... 详细信息

目的探讨环孢霉素A(CSA)和FK506对造血干细胞异体移植及其对IL-2和IL-4表达的影响。方法用WEHI23细胞从尾静脉注入建立小鼠粒单白血病模型。取绿色荧光蛋白转基因鼠的骨髓,体外扩增纯化培养造血干细胞(HSC),移植入粒单白血病小鼠,观察FK506和CSA对植入细胞的存活及其对IL-2和IL-4水平的影响。结果植入的HSC在正常小鼠和粒单白血病模型小鼠仅存活1周,而在经CSA和FK506处理的粒单白血病鼠,HSC可存活至2周,且后者的存活数较前者增多。此外,IL-2、IL-4水平在FK506和CSA处理组亦较正常和模型小鼠组下调(P<0.05)。结论FK506能有效抑制宿主对植入HSC的排斥作用,其机制可能与降低IL-2、IL-4水平有关。

关键词：粒单白血病小鼠模型造血干细胞细胞移植 IL-2 IL-4

重型地中海贫血异基因造血干细胞移植后嵌合体状态分析

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中华儿科杂志 2008年第9期46卷 706-707页

作者：何岳林冯晓勤石磊吴学东张玉明白静任玉琼李春富广州南方医科大学南方医院儿科 510515

异基因造血干细胞移植是目前根治重型地中海贫血（简称地贫）的惟一方法。移植失败的原因除相关的并发症外，主要是移植后排斥，致使患者自身骨髓恢复，恢复无效造血。1999—2004年，我院进行了40例移植，其中13例出现不稳定嵌合体状态。

关键词：异基因造血干细胞移植移植后排斥地中海贫血嵌合体状态重型骨髓恢复无效造血