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热休克蛋白27在大肠癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

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南方医科大学学报 2008年第1期28卷 41-44页

作者：赵亮李祖国丁彦青南方医科大学病理学教研室教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室广东省分子肿瘤病理重点实验室广东广州510515

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27mRNA和蛋白的表达... 详细信息

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27mRNA和蛋白的表达情况。结果在大肠癌组织中,热休克蛋白27的表达率与年龄、性别、淋巴结转移、临床分期无相关性(χ2test,P>0.05),但其过表达和大肠癌淋巴结转移显著负相关(Fisher'sexacttest,P=0.035)。应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测结果显示Hsp27基因和蛋白在高淋巴结转移潜能的SW620细胞中呈低表达,在低淋巴结转移潜能的SW480细胞中呈高表达。结论Hsp27和大肠癌肿瘤细胞的转移行为可能为负相关,可能在阻止其转移中发挥重要作用。

关键词：大肠癌热休克蛋白27 淋巴结转移

CXCR4／SDF-1对鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响

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第三军医大学学报 2009年第7期31卷 598-600页

作者：邱际华刘求真陈丽焦锋姚开泰南方医科大学肿瘤研究所教育部和广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白质组学重点实验室广东省分子肿瘤病理学重点实验室广州510515

目的观察鼻咽癌不同恶性程度的细胞中趋化因子受体CXCR4的表达,检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的增殖作用,SDF-1对CXCR4阳性肿瘤细胞的趋化作用,探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响。方法以鼻咽癌成瘤高转... 详细信息

目的观察鼻咽癌不同恶性程度的细胞中趋化因子受体CXCR4的表达,检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的增殖作用,SDF-1对CXCR4阳性肿瘤细胞的趋化作用,探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响。方法以鼻咽癌成瘤高转移细胞株5-8F及成瘤不转移细胞株6-10B为研究对象,采用Westernblot免疫印迹法检测鼻咽癌细胞株CXCR4蛋白的表达情况,SDF-1及CXCR4阻断剂AMD3100作用于两种细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力,体外迁徙实验检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的趋化作用。结果5-8F细胞株CXCR4蛋白的表达明显高于6-10B细胞株;SDF-1能明显增强5-8F细胞增殖与迁移能力,CXCR4阻断剂AMD3100作用后,5-8F细胞增殖与迁移能力明显降低;SDF-1对6-10B细胞的迁移及增殖能力无明显影响。结论CXCR4/SDF-1生物学轴与鼻咽癌细胞株的增殖与迁移有一定的关系,AMD3100可明显抑制鼻咽癌细胞的增殖与迁移能力。

关键词：鼻咽癌增殖迁移 CXCR4 SDF-1

结直肠癌转移动物模型血清中几种蛋白变化的观察

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中华病理学杂志 2007年第1期36卷 48-52页

作者：李祖国赵亮刘莉丁彦青南方医科大学病理学教研室教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室广东省分子病理重点实验室广州510515

目的建立可视化结直肠癌转移模型,并应用血清蛋白质组学技术分析可视化结直肠癌转移模型血清蛋白质的变化。方法用 pEGFP-N1绿色荧光蛋白基因转染具有转移能力的 SW480细胞株,在裸鼠皮下接种成瘤后,再原位接种于裸鼠右半结肠,利用整体... 详细信息

目的建立可视化结直肠癌转移模型,并应用血清蛋白质组学技术分析可视化结直肠癌转移模型血清蛋白质的变化。方法用 pEGFP-N1绿色荧光蛋白基因转染具有转移能力的 SW480细胞株,在裸鼠皮下接种成瘤后,再原位接种于裸鼠右半结肠,利用整体荧光成像系统观察结直肠癌原位成瘤及发生转移的情况。同时采集裸鼠原位成瘤后不同转移阶段的血清,进行双向电泳联合时间飞行质谱分析差异蛋白质,观察结直肠癌转移模型裸鼠癌转移前后血清蛋白的变化。结果获得稳定表达绿色荧光蛋白的 SW480-EGFP 细胞株,裸鼠皮下接种成瘤率为100%,原位种植成瘤率为10/10,区域淋巴结转移为10/10,肝转移率为4/10,肺转移率为3/10。通过血清蛋白质组学技术成功鉴定了5个在癌转移发生后血清内显著升高的血清蛋白:结合珠蛋白α链,载脂蛋白 A4,载脂蛋白E,免疫球蛋白κ型 V 区 L 链和转铁蛋白。结论成功建立结直肠癌可视化转移模型,利用不同转移阶段鼠血清进行双向电泳图谱差异分析筛选出5个在癌转移发生后血清中显著升高的蛋白可能是与结直肠癌转移相关的蛋白。

关键词：结直肠肿瘤肿瘤转移模型动物血蛋白质类

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环氧化酶2基因异常表达与大肠癌转移的关系

南方医科大学学报 2006年第10期26卷 1408-1411页

作者：李祖国刘腾飞谢卫兵周军余力丁彦青南方医科大学南方医院病理科广东省分子肿瘤病理重点实验室省部共建教育部重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的研究环氧化酶2在人大肠癌细胞系及大肠癌组织中的异常表达与意义。方法培养不同转移能力的人大肠癌细胞系SW480和SW620细胞,收集50例大肠癌石蜡组织,50例淋巴结转移性大肠癌石蜡组织;分别用免疫组织化学、Real-timePCR的方法研究环... 详细信息

目的研究环氧化酶2在人大肠癌细胞系及大肠癌组织中的异常表达与意义。方法培养不同转移能力的人大肠癌细胞系SW480和SW620细胞,收集50例大肠癌石蜡组织,50例淋巴结转移性大肠癌石蜡组织;分别用免疫组织化学、Real-timePCR的方法研究环氧化酶2在不同转移能力人大肠癌细胞系及原发人大肠癌组织和大肠淋巴结转移组织中的表达。结果环氧化酶2蛋白在SW480和SW620细胞株中均阳性表达;环氧化酶2mRNA在SW620比SW480细胞中表达增高,表达量的平均倍比关系为2.268。环氧化酶2蛋白在淋巴结转移癌组的异常表达高于原发大肠癌石蜡组织,相关性具有统计学意义(P<0.05)。结论环氧化酶2异常表达可能与大肠癌淋巴结转移相关。

关键词：环氧化酶2 大肠癌转移

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EBV全基因组芯片的制备及应用

南方医科大学学报 2009年第9期29卷 1812-1815页

作者：方唯意郑文岭马文丽刘真李欣姚开泰南方医科大学肿瘤研究所教育部和广东省共建人类重大疾病转录组和蛋白质组学重点实验室广东广州510515 南方医科大学分子生物研究所广东广州510515

目的鼻咽癌高发于中国南方,是一种恶性度较高的肿瘤,与EB病毒(EBV)关系非常密切。本研究利用前期已经设计和克隆好的EBV已知和预测的编码基因作为cDNA探针,构建EBV芯片,用于检测鼻咽癌组织中的EBV基因表达。方法85个EBV基因探针通过一... 详细信息

目的鼻咽癌高发于中国南方,是一种恶性度较高的肿瘤,与EB病毒(EBV)关系非常密切。本研究利用前期已经设计和克隆好的EBV已知和预测的编码基因作为cDNA探针,构建EBV芯片,用于检测鼻咽癌组织中的EBV基因表达。方法85个EBV基因探针通过一对设计于T/A克隆载体多克隆两端的引物进行PCR扩增。产物纯化后,与8000个人基因打印到同一张玻片上,建立EBV与人基因的检测芯片,随后用于检测鼻咽癌组织与正常鼻咽组织之间的基因表达差异,观测检测效果,以确定是否可以临床应用。结果在人的基因表达谱中,我们成功检测了大量的人基因表达。而在EBV阵列中,我们虽然得到了一些EBV基因表达的信号,但这些信号都非常微弱,没有明显可见的荧光,其表达强度无法与人的基因表达信号强度相比。结论虽然我们成功地构建了EBV芯片,但由于可能受到基因芯片检测的敏感性以及EBV基因在鼻咽癌中表达量的限制,不能用于临床检测,需要进一步改进研究方法。

关键词：鼻咽癌 EBV芯片人基因表达谱

人CDH22基因RNAi慢病毒载体的构建及稳定干扰CDH22基因的表达

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南方医科大学学报 2008年第4期28卷 589-592页

作者：周军李建明杨发达柳玉红丁彦青南方医科大学南方医院病理科南方医科大学病理学教研室教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室广东省分子肿瘤病理重点实验室广东广州510515

目的构建人CDH22基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默大肠癌细胞的CDH22基因表达,为研究CDH22在大肠癌转移中参与的信号转导机制提供研究基础。方法利用在线软件设计人CDH22基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核酸后克隆到pENTRTM/U... 详细信息

目的构建人CDH22基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默大肠癌细胞的CDH22基因表达,为研究CDH22在大肠癌转移中参与的信号转导机制提供研究基础。方法利用在线软件设计人CDH22基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核酸后克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,测序。得到的阳性重组子再与慢病毒载体进行重组,获得真核表达慢病毒干扰载体。在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助质粒和CDH22基因重组慢病毒载体导入293FT细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染大肠癌细胞SW480,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰CDH22基因的细胞亚系。结果成功构建CDH22真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒滴度为8×105U/ml。荧光定量PCR结果表明,所获得的细胞克隆11中CDH22 mRNA水平的表达显著降低。结论成功构建出CDH22基因慢病毒RNAi表达载体,并获得CDH22基因稳定干扰的大肠癌细胞亚系,为研究CDH22在大肠癌转移中的作用机制提供了研究基础。

关键词： CDH22 RNA干扰慢病毒结直肠癌

慢病毒介导的shRNA靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立

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南方医科大学学报 2011年第4期31卷 604-609页

作者：李川马纪张越安靓南方医科大学肿瘤研究所教育部和广东省共建重大疾病转录组与蛋白组学重点实验室广东广州510515

目的检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株。构建nestin基因的shRNA表达载体,建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株。方法应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平。构建带GFP的重... 详细信息

目的检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株。构建nestin基因的shRNA表达载体,建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株。方法应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平。构建带GFP的重组靶向nestin shRNA慢病毒表达质粒,筛选阳性克隆,测序鉴定。293T细胞包装病毒,收集病毒上清,测定滴度。经Real-time PCR内源筛靶,选择最佳靶点。将重组慢病毒感染5-8F细胞,Western blotting和Real-time PCR检测nestin的表达。结果在8种鼻咽癌细胞株中,5-8F细胞中nestin表达较高。PCR和测序验证重组质粒构建成功。慢病毒感染5-8F细胞后,与阴性对照组和空白组相比,nestin的mRNA和蛋白水平明显受到抑制。结论成功构建了干扰nestin的慢病毒重组质粒,并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8F鼻咽癌细胞株。

关键词： nestin 鼻咽癌细胞慢病毒重组质粒 RNA干扰

两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳分离效果的影响

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南方医科大学学报 2007年第1期27卷 5-8页

作者：赵亮丁彦青梁莉李欣李雪华吴丽莎南方医科大学病理学教研室武警医学院病理学教研室天津300162 南方医科大学教育部和广东省共建重大疾病转录组学及功能蛋白质组学重点实验室/广东省分子肿瘤病理重点实验室广东广州510515

目的评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础。方法分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技... 详细信息

目的评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础。方法分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白质,图像软件分析后,对其中3个差异蛋白质点行基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱鉴定。结果应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱。对直接溶解和热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,凝胶的平均蛋白质点数为675±46和702±49,平均匹配点数为573±42和623±52,匹配率为85.3%和89.6%,分析3块不同胶间蛋白质点在IEF方向的位置偏差为(0.85±0.30)mm和(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.02±0.18)mm和(0.97±0.12)mm。热SDS处理的2-DE胶蛋白质点质谱可获得高质量质谱图,并可以检测到相对低丰度的血清蛋白质。结论热SDS法是一种更有效的血清蛋白质样品制备方法,我们利用热SDS法处理血清样品建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱。

关键词：人血清蛋白质样品制备双向凝胶电泳蛋白质组

PRL-3基因的克隆及其原核表达载体的构建表达

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南方医科大学学报 2007年第5期27卷 641-643页

作者：周军李建明柳玉红丁彦青南方医科大学南方医院病理科/南方医科大学基础医学院病理学教研室/教育部广东省共建人类重大疾病转录组学和蛋白组学重点实验室/广东省分子肿瘤病理重点实验室广东广州510515

目的克隆人PRL-3基因并构建其原核表达载体。方法设计PRL-3特异性引物,提取人大肠癌细胞系SW480总RNA,用RT-PCR方法获取人PRL-3cDNA。经T-A克隆,通过双酶切鉴定及测序确认后,构建人PRL-3基因的原核表达载体pGEX-4T-1-PRL-3。结果成功扩... 详细信息

目的克隆人PRL-3基因并构建其原核表达载体。方法设计PRL-3特异性引物,提取人大肠癌细胞系SW480总RNA,用RT-PCR方法获取人PRL-3cDNA。经T-A克隆,通过双酶切鉴定及测序确认后,构建人PRL-3基因的原核表达载体pGEX-4T-1-PRL-3。结果成功扩增出人PRL-3全长cDNA,并构建pGEX-4T-1-PRL-3原核表达载体,测序结果表明PRL-3全长cDNA与GenBank中PRL-3序列完全一致,SDS-PAGE胶分析表明,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了重组蛋白。结论获得人PRL-3基因全长cDNA并构建其原核表达载体,使其在大肠杆菌中获得了高效表达,为深入研究PRL-3基因在大肠癌发生发展中的作用奠定了基础。

关键词：大肠癌 PRL-3 基因克隆原核表达