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2014-2015年广州759例儿童肠道病毒感染病原谱调查

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中华疾病控制杂志 2017年第6期21卷 567-571页

作者：赵崇泉郭勇晖沈永棋陈满君刘朵朵余楠南方医科大学珠江医院检验医学部广东广州510282 广东省突发传染病病原微生物重点实验室广东广州510282

目的调查2014-2015年我院759例儿童感染肠道病毒血清型的分布,了解广州地区肠道病毒(enterovirus,EV)病原谱。方法采集手足口病等疑似肠道病毒感染患儿肛拭子标本,采用荧光逆转录多聚酶链反应法(reverse transcriptase polymerase chain... 详细信息

目的调查2014-2015年我院759例儿童感染肠道病毒血清型的分布,了解广州地区肠道病毒(enterovirus,EV)病原谱。方法采集手足口病等疑似肠道病毒感染患儿肛拭子标本,采用荧光逆转录多聚酶链反应法(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测通用型、肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)柯萨奇病毒A组16型(coxsackie virus A group 16,CA16)核酸,巢式PCR法扩增VP1基因测序分型。结果 1 060例疑似感染者检出759例EV阳性(检出率71.6%);两年均检出11种血清型,2014年CA16、EV71、CA4、CA10和CA6位列前五位,CA16和EV71占77.1%;2015年CA6、EV71、CA10、CA16和CA2列前五位,CA6占51.7%;性别比为1.8~5.3;感染以病原谱不同,2015年病情普遍较2014年轻,两年均无死亡病例。EV71感染重症病例比率最高(12.7%),CA16、CA10、CA4和CA6偶见重症病例。结论广州主要流行十余种肠道病毒,两年病原谱不同,大部分感染引起疾病较轻。

关键词：肠道病毒属聚合酶链反应手足口病

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肠道病毒5’-非翻译区测序分型的应用评估

中华实验和临床病毒学杂志 2018年第5期32卷 488-491页

作者：唐诗欢谢争华刘朵朵袁颖陈满君范笑地丁细霞余楠南方医科大学珠江医院检验医学部广东省突发传染病病原微生物重点实验室广州510282

目的评估5’-非翻译区（5’-untranslated region，5’-UTR）扩增测序法对临床标本直接进行肠道病毒（enterovirus，EV）血清型分型的价值。方法收集实时荧光聚合酶链反应（real-time PCR）检测EV通用型核酸为阳性的肛拭518份、鼻拭148... 详细信息

目的评估5’-非翻译区（5’-untranslated region，5’-UTR）扩增测序法对临床标本直接进行肠道病毒（enterovirus，EV）血清型分型的价值。方法收集实时荧光聚合酶链反应（real-time PCR）检测EV通用型核酸为阳性的肛拭518份、鼻拭148份，采用5’-UTR区逆转录PCR（reverse transcription PCR，RT—PCR）对标本中的EV进行扩增、测序、比对及血清型分型，与VP1（viral protein1）区简并引物巢式PCR测序分型方法比较，两者不一致的标本经EV血清型特异性RT-PCR验证。结果666份EV通用型核酸为阳性的标本，5’-UTR和VP1区各分型成功553例（83．0％）和318例（47．7％），P〈0．001；以VP1法为参考，对肛拭中主要检出的血清型CoxA6（217例）、CoxA16（88例）、EVA71（40例）、CoxA10（28例）和CoxA4（27例），5’-UTR法敏感度（57．1％～100％）、特异度（67．4％～98．1％）以及方法一致性（kappa值0．188～0．847），均因血清型而异；对鼻拭中主要检出的血清型EVD68（15例），5’-UTR法敏感度100％，特异度91．1％，一致性差（kappa值0．217）。分型不一致标本，经CoxA6、CoxA16、EVA71、CoxA10和EVD68型特异性RT—PCR验证，大部分得以确认。以VP1法联合型特异性RT—PCR法为参考，5’-UTR法的敏感度和特异性以及与参考方法的一致性均提高。结论5’-UTR对肠道病毒的分型的敏感度和特异度因血清型而异，应用时应根据研究目的综合考虑。

关键词：肠道病毒 5’-非翻译区逆转录-聚合酶链式反应测序分型

白念珠菌感染特异性Csa2蛋白双抗体夹心ELISA体系的建立与评价

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第7期30卷 732-735页

作者：刘玲丽蔡建飘刘彩怡郭勇晖潘玉先王艳芳车小燕南方医科大学珠江医院检验医学部广东广州510282 突发传染病病原微生物医学重点实验室广东广州510282 海南省人民医院检验科海南海口570311 香港大学微生物系中国香港999077

目的以白念珠菌Csa2蛋白为靶标,建立双抗体夹心ELISA检测体系,评价该方法的检测灵敏度和特异性。方法构建pPIC9K-Csa2重组表达载体,电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达、纯化重组蛋白rCsa2。rCsa2蛋白分别免疫新西兰大白兔和豚鼠制备免... 详细信息

目的以白念珠菌Csa2蛋白为靶标,建立双抗体夹心ELISA检测体系,评价该方法的检测灵敏度和特异性。方法构建pPIC9K-Csa2重组表达载体,电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达、纯化重组蛋白rCsa2。rCsa2蛋白分别免疫新西兰大白兔和豚鼠制备免疫血清。以纯化兔多抗和豚鼠抗血清配对,利用棋盘滴定法,确定最佳实验条件,建立双抗体夹心ELISA检测系统。检测rCsa2和白念珠菌不同培养时间的上清,确定检测方法的灵敏度;检测其他3种念珠菌、5种曲霉、新型隐球菌和马尔尼菲青霉的培养上清,评价检测方法的特异性。结果成功构建表达载体并获得真核表达重组蛋白rCsa2,经SDS-PAGE鉴定相对分子质量(Mr)为13 300,符合预期值;Western blot法证实该蛋白可与特异性抗体结合。免疫动物获得高效价免疫血清,并以此成功建立双抗体夹心ELISA,可检测rCsa2蛋白的灵敏度约为240 pg/mL,并最早可检测到培养18 h的白念珠菌培养上清,与其他10种临床常见真菌的培养上清无交叉反应。结论建立了有较高的检测灵敏度和特异性的Csa2的双抗体夹心ELISA,为区别诊断白念珠菌感染提供新的方法。

关键词： Csa2蛋白白念珠菌双抗体夹心ELISA

手足口病相关肠道病毒感染血清中交叉抗体反应的初步鉴定

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中华疾病控制杂志 2015年第7期19卷 655-658页

作者：薛霖余楠郭勇晖潘玉先陈满君郭敏富宁南方医科大学珠江医院检验医学部广东广州510282 广东省病原微生物重点实验室广东广州510282

目的了解我国手足口病常见病毒感染患者血清中抗体交叉反应及保护性,为揭示手足口病二次感染保护机制提供依据。方法收集2010-2014年珠江医院经荧光定量PCR确诊为手足口病患儿血清,用间接免疫荧光鉴定非EV71肠道病毒感染血清与EV71病毒... 详细信息

目的了解我国手足口病常见病毒感染患者血清中抗体交叉反应及保护性,为揭示手足口病二次感染保护机制提供依据。方法收集2010-2014年珠江医院经荧光定量PCR确诊为手足口病患儿血清,用间接免疫荧光鉴定非EV71肠道病毒感染血清与EV71病毒感染细胞间结合,及EV71感染恢复期血清和抗EV71单克隆抗体与非EV71肠道病毒感染细胞的结合,对存在交叉结合反应的血清检测其交叉中和保护性。结果共收集149例非EV71肠道病毒感染血清,经鉴定其中54份标本无EV71混合感染及既往感染,血清型分别为CA6、CA10、CA9、CA5、CA16、CB3、CB5及未分型肠道病毒。46份(85.2%)非EV71感染血清Ig G抗体与EV71病毒感染细胞结合,具统计学意义(Z=-2.39,P=0.017),并对EV71病毒具弱中和活性。EV71感染血清及5株抗EV71单克隆抗体仅与CA16感染细胞结合。结论初步确定多种非EV71肠道病毒感染血清与EV71病毒存在交叉反应,且具有弱中和活性;而EV71感染血清对其他肠道病毒无交叉保护作用。首次证明抗EV71 VP2、VP4单抗可结合CA16病毒。

关键词：手足口病肠道病毒属交叉反应

悬浮芯片法调查广州腹泻病原体分布及临床特征分析

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实用医学杂志 2016年第22期32卷 3724-3727页

作者：林丽娟彭雅冰罗欣陈满君邓间开余楠南方医科大学珠江医院检验医学部广东省突发传染病病原微生物重点实验室广州市510282 广东省妇幼保健院检验科广州市511400

目的:了解引起腹泻病原体种类随季节、年龄的分布,病原体种类与症状、实验检查结果的关系。方法:收集2014-2015年腹泻者粪便326例,使用液相悬浮芯片法检测15种病原体。结果:诺如病毒GⅠ/GⅡ型(15.6%,51/326)、A组轮状病毒(14.4%,47/326... 详细信息

目的:了解引起腹泻病原体种类随季节、年龄的分布,病原体种类与症状、实验检查结果的关系。方法:收集2014-2015年腹泻者粪便326例,使用液相悬浮芯片法检测15种病原体。结果:诺如病毒GⅠ/GⅡ型(15.6%,51/326)、A组轮状病毒(14.4%,47/326)和弯曲菌(12.6%,41/326)检出最多。寄生虫20例(6.13%),合并感染51例(15.6%)。秋冬季以A组轮状病毒(13.2%,43/326)、诺如病毒GⅡ型(9.8%,32/326)、弯曲菌(9.5%,31/326)为主。儿童(病原检出率较成人高。病毒与细菌感染引起隐血(P病原体种类随季节、年龄分布的情况;细菌性与病毒性腹泻临床表现和实验检查有差异。

关键词：腹泻病原分布液相悬浮芯片法临床特征

白念珠菌Csa2蛋白双抗原夹心ELISA方法的建立及诊断价值

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中国热带医学 2019年第7期19卷 627-629,633页

作者：刘玲丽蔡建飘郭勇晖王艳芳车小燕南方医科大学珠江医院检验医学部突发传染病病原微生物医学重点实验室广东广州510282 海南省人民医院检验科海南海口570311 香港大学微生物系香港999077

目的建立以白念珠菌Csa2蛋白抗体为靶标的双抗原夹心ELISA,初步评价其鉴别诊断白念珠菌尿道感染的应用价值。方法通过间接免疫荧光染色定位Csa2蛋白在白念珠菌菌体分布情况;应用棋盘滴度法优化反应条件,建立双抗原夹心ELISA并进行方法... 详细信息

目的建立以白念珠菌Csa2蛋白抗体为靶标的双抗原夹心ELISA,初步评价其鉴别诊断白念珠菌尿道感染的应用价值。方法通过间接免疫荧光染色定位Csa2蛋白在白念珠菌菌体分布情况;应用棋盘滴度法优化反应条件,建立双抗原夹心ELISA并进行方法学评价;检测324例健康体检者血清,确定该方法的cutoff值;检测120例健康体检者及30例念珠菌属尿路感染患者血清,分析其诊断的灵敏性、特异性、阳性预测值、阴性预测值。结果 Csa2蛋白是一种特异性分布在白念珠菌菌丝态表面的蛋白;以0.1 μg/mL的rCsa2蛋白为包被抗原,1∶1 000稀释的rCsa2-HRP蛋白为检测抗原,建立双抗原夹心ELISA,可最低检测1∶16 000稀释的rCsa2蛋白免疫兔血清并不与正常兔血清发生反应;该方法的cutoff值为0.072,诊断白念珠菌尿路感染敏感性为65.2%(15/23),特异性为98.4%(125/127),阳性预测值88.2%(15/17),阴性预测值为94.0%(125/133)。结论成功建立检测白念珠菌特异性Csa2蛋白抗体双抗原夹心ELISA;初步评价该方法对诊断白念珠菌尿路感染具有较高的特异性,得出较高阳性预测值和阴性预测值;Csa2抗体靶标对区分白念珠菌感染和定植具有一定价值。

关键词：白念珠菌 Csa2抗体双抗原夹心ELISA 白念珠菌尿

双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p抗体

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南方医科大学学报 2013年第3期33卷 439-443页

作者：王艳芳曾磊陈学东郝卫杨梅蔡建飘王压娣袁国勇车小燕南方医科大学珠江医院检验医学部广东广州510282 香港大学微生物系

目的建立一种检测马尔尼菲青霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。方法利用毕赤酵母系统表达重组马尔尼菲青霉特异性甘露糖蛋白Mp1p,并利用改良过碘酸钠法标记Mp1p,经棋盘滴定法建立一种可检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心EL... 详细信息

目的建立一种检测马尔尼菲青霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。方法利用毕赤酵母系统表达重组马尔尼菲青霉特异性甘露糖蛋白Mp1p,并利用改良过碘酸钠法标记Mp1p,经棋盘滴定法建立一种可检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并检测100例健康人群对照血清、21例血培养确诊其他真菌感染病人血清和15例血培养确诊马尔尼菲青霉病人血清,联合本实验室前期建立的马尔尼菲青霉抗原检测方法评价其临床应用价值。结果成功建立一种检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,经健康人群对照及其他真菌感染病人血清评价特异度为100%(121/121),检测15例马尔尼菲青霉病人血清,Mp1p特异性抗体2例阳性,Mp1p特异性抗原12例阳性,Mp1p抗体与抗原联合检测可明显提高灵敏度,达到93.3%(14/15)。结论双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体具有高度的特异性,联合抗原检测可提高马尔尼菲青霉感染诊断率。

关键词：马尔尼菲青霉双抗原夹心ELISA法真菌 Mp1p 抗体检测

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人体感染蚯蚓1例的报道

国际检验医学杂志 2020年第4期41卷 511-512页

作者：范笑地兰萌欧锦霞秦思华陈学东余楠南方医科大学珠江医院检验医学部/广东省突发传染病病原微生物重点实验室

感染人体的寄生虫种类繁多,人感染蚯蚓并不多见,在南方地区报道较少.目前其诊断主要依赖于实验室检查,以形态学鉴定为主,临床检验人员对其形态特点不熟悉,易误诊.笔者报道南方地区人体感染蚯蚓1例,为检验诊断学及临床相关科室提供参考.

关键词：蚯蚓寄生虫蚯蚓病

探究黄热病毒NS1蛋白在感染早期的诊断价值

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病毒学报 2018年第3期34卷 356-361页

作者：刘朵朵陈月任瑞文郭勇晖温坤余楠南方医科大学珠江医院检验医学部、广东省突发传染病病原微生物重点实验室广州510282 广州军区疾病预防控制中心、广东省虫媒病毒性传染疾病应急技术研究中心广州510507

为了探讨黄热病毒（Yellow fever virus,YFV）非结构蛋白1（Nonstructural protein 1,NS1）在感染早期的诊断价值。颅内注射YFV-17D感染乳鼠,每日处死1窝,收集抗凝血。Vero细胞和C6/36细胞感染YFV-17D病毒后,每隔12h收集培养上清。分别... 详细信息

为了探讨黄热病毒（Yellow fever virus,YFV）非结构蛋白1（Nonstructural protein 1,NS1）在感染早期的诊断价值。颅内注射YFV-17D感染乳鼠,每日处死1窝,收集抗凝血。Vero细胞和C6/36细胞感染YFV-17D病毒后,每隔12h收集培养上清。分别采用荧光定量PCR和基于YFV NS1多克隆抗体的双抗体夹心酶联免疫（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）方法检测感染后乳鼠血液、C6/36和Vero细胞上清中YFV的扩增情况和NS1蛋白的分泌规律。乳鼠感染YFV-17D后第2d在血清中即可检测到YFV NS1,第3d血液中检测到YFV核酸。敏感细胞株在感染YFV-17D后第36h培养上清中可检测到YFV NS1,而48h后才能检测到YFV核酸。YFV NS1蛋白具有作为YFV感染早期的诊断靶标的潜在价值。

关键词：黄热病毒(YFV) 非结构蛋白1 多克隆抗体