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不同刚度Ⅰ型胶原凝胶三维环境调控NK细胞免疫功能

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四川大学学报（医学版） 2024年第1期55卷 81-86页

作者：龙世棋吴翠芳曾柱贵州医科大学基础医学院/生物与工程学院免疫学教研室贵阳550029

目的构建不同刚度Ⅰ型胶原凝胶并探讨其三维(three-dimensional,3D)培养环境对自然杀伤(natural killer,NK)细胞形态、自由迁移能力以及细胞杀伤功能的影响。方法分离Sprague Dawley(SD)大鼠鼠尾Ⅰ型胶原蛋白并制备不同刚度的胶原凝胶,... 详细信息

目的构建不同刚度Ⅰ型胶原凝胶并探讨其三维(three-dimensional,3D)培养环境对自然杀伤(natural killer,NK)细胞形态、自由迁移能力以及细胞杀伤功能的影响。方法分离Sprague Dawley(SD)大鼠鼠尾Ⅰ型胶原蛋白并制备不同刚度的胶原凝胶,通过激光共聚焦显微镜观察其微结构,流变仪测量平台期的储能模量表征其刚度。将NK-92MI细胞培养于不同刚度Ⅰ型胶原凝胶中,倒置显微镜观察NK-92MI细胞的形态,高内涵成像系统记录NK-92MI细胞的自由迁移过程,分析迁移速度和距离。不同刚度的Ⅰ型胶原凝胶培养NK-92MI细胞24、48 h,再与人结直肠腺癌上皮细胞(DLD-1)共培养后,用CCK8法检测DLD-1细胞增殖率,分析NK-92MI细胞的细胞杀伤能力。结果成功制备出刚度为(10.97±2.10)Pa的低刚度Ⅰ型胶原凝胶和刚度为(114.50±3.40)Pa的高刚度Ⅰ型胶原凝胶。与在低刚度Ⅰ型胶原凝胶中相比,在高刚度Ⅰ型胶原凝胶中,NK-92MI细胞呈现更细长的形态(P学意义。与低刚度Ⅰ型胶原凝胶相比,高刚度Ⅰ型胶原凝胶培养24 h的NK-92MI细胞可促进DLD-1细胞增殖〔增殖率(46.39±12.79)%vs.(65.87±4.45)%,P学意义。结论不同刚度Ⅰ型胶原凝胶3D培养环境可改变NK-92MI细胞的形态、迁移能力以及杀伤功能。该研究为探索和理解生物力学微环境影响NK细胞免疫应答机制提供了研究基础,为优化免疫治疗方案提供理论依据。

关键词： Ⅰ型胶原细胞外基质力学杀伤细胞免疫应答

白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响

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中国热带医学 2024年第08期 907-913页

作者：覃燕春李莹胡欢周璐黄贞植吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒（dengue virus type 2, DENV-2）感染小鼠骨髓来源巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages, BMDM）的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-3... 详细信息

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒（dengue virus type 2, DENV-2）感染小鼠骨髓来源巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages, BMDM）的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应；制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb＿CTL1蛋白（蚊唾液C型凝集素蛋白）的抗原提呈细胞（antigen presenting cell, APC），与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养，取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞，实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR, qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化，分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养，通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达，分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示，与未免疫组比较，rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖，刺激指数（stimulation index, SI）>2,P免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞混合培养后，rAlb-34k2-1预处理的BMDM中DENV-2复制无差异。结论 rAlb-34k2-1蛋白诱导的小鼠T淋巴细胞应答上清可抑制BMDM细胞中DENV-2的复制，为探究蚊唾液蛋白诱导免疫效应在蚊媒病毒致病中的作用提供前期实验基础。

关键词： rAlb-34k2-1蛋白 2型登革病毒细胞免疫应答

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疟原虫内膜复合体蛋白研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 111-116,120页

作者：韩竹茜朱晓彤中国医科大学基础医学院免疫教研室辽宁沈阳110122

疟疾是由疟原虫感染所致的全球危害最严重的三大传染病之一。疟原虫的裂殖子、动合子和子孢子均具有特征性的内膜复合体(IMC)。IMC定位于质膜下,在胞质侧与膜下网络紧密相连。IMC在细胞分裂过程中提供支撑骨架,维持细胞的形态和稳定性,... 详细信息

疟疾是由疟原虫感染所致的全球危害最严重的三大传染病之一。疟原虫的裂殖子、动合子和子孢子均具有特征性的内膜复合体(IMC)。IMC定位于质膜下,在胞质侧与膜下网络紧密相连。IMC在细胞分裂过程中提供支撑骨架,维持细胞的形态和稳定性,参与疟原虫发育和入侵宿主细胞等过程。深入研究IMC蛋白的结构、功能和转录调控机制,对研发相应的抑制剂或阻断剂以阻断疟疾传播有重要意义。本文就近年来IMC蛋白结构及其转录调控机制的研究进展进行综述。

关键词：疟原虫内膜复合体肺泡蛋白棕榈酰化磷酸化

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过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中TLR9的表达研究

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西安交通大学学报(医学版) 2024年第2期45卷 250-257页

作者：田慧梅何韶衡张慧云锦州医科大学基础医学院免疫教研室锦州医科大学附属第一医院变态反应与临床免疫中心

目的探究过敏性鼻炎(allergy rhinitis, AR)、过敏性哮喘(allergy asthma, AA)、AR合并AA(AR combined with AA,ARA)患者外周血和致敏小鼠血液或肺组织B淋巴细胞(B细胞)中Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)的表达及过敏原对其表达的影响。方法招募来自锦州医科大学附属第一医院门诊和发作急性期住院的100例志愿者，包括点刺实验阴性的19例健康对照(health control, HC)志愿者、点刺实验阳性的40例AR患者、26例AA患者、15例ARA患者。流式分析仪检测经屋尘螨过敏原提取物(home dust mite allergen extract, HDME)、大籽蒿过敏原提取物(Artemisia sieversiana wild allergen extract, ASWE)、梧桐过敏原提取物(Platanus pollen allergen extract, PPE)刺激前后患者外周血B细胞中TLR9的表达；并采用野生(WT)小鼠和FcεRI基因敲除(FcεRI-KO)小鼠建立AR和AA致敏模型，检测过敏原以及FcεRI对B细胞中TLR9表达的影响。结果 AR、AA、ARA患者外周血B细胞中TLR9的表达和平均荧光强度(mean fluorescence intensity, MFI)均较HC组有所增高；过敏原激发后，AR、AA患者血液B细胞中TLR9的表达和MFI升高(P学意义，而几乎每组MFI均升高；与NS对照组相比，过敏原激发后FcεRI基因敲除的AA小鼠肺组织中TLR9+B细胞表达差异无统计学意义，但其MFI升高。FcεRI-KO小鼠与WT小鼠相比，过敏原激发后B细胞中TLR9+MFI较低。结论 B细胞中TLR9可能参与AR、AA的发生，检测B细胞中TLR9的表达可能成为诊断AR、AA的新方向。

关键词： Toll样受体(TLR9) B淋巴细胞(B细胞) 过敏性鼻炎(AR) 过敏性哮喘(AA)

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全局性DNA去甲基化参与男性减数分裂重组调控

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科学通报 2024年第4期69卷 476-478页

作者：陈军薛盛恩赵小阳常港深圳大学医学部深圳518060 南方医科大学基础医学院广州510515

精子发生是一个复杂的发育过程,基因突变或表观遗传变异对精子发生功能的破坏可导致男性不育[1~3].在精子发生过程中,减数分裂是生殖细胞获得遗传多样性的关键,其中涉及一系列重要事件,包括前细线期精母细胞中DNA的复制、细线期中DNA双... 详细信息

精子发生是一个复杂的发育过程,基因突变或表观遗传变异对精子发生功能的破坏可导致男性不育[1~3].在精子发生过程中,减数分裂是生殖细胞获得遗传多样性的关键,其中涉及一系列重要事件,包括前细线期精母细胞中DNA的复制、细线期中DNA双链断裂(DSBs)的形成、合子期及粗线期中发生的减数分裂重组,以及联会复合体在双线期的解离[2,4,5].随着单细胞测序技术在生殖发育领域的应用,先前的研究已初步绘制了人类精子发生过程的基因转录图谱[6~8].

关键词：男性不育联会复合体基因突变精子发生生殖发育减数分裂精母细胞细线期

高通量测序揭示系统性红斑狼疮B细胞异常的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第7期44卷 641-645页

作者：夏彦祺赵晗段荦袁慧慧首都医科大学基础医学院免疫学系北京100069

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以致病性自身抗体和免疫复合物形成并介导多器官损伤的急性或慢性自身免疫病,好发于育龄期女性,具有显著异质性。自身反应性B细胞过度活化产生自身抗体是SLE全身免疫病理损伤的... 详细信息

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以致病性自身抗体和免疫复合物形成并介导多器官损伤的急性或慢性自身免疫病,好发于育龄期女性,具有显著异质性。自身反应性B细胞过度活化产生自身抗体是SLE全身免疫病理损伤的重要原因,靶向B细胞治疗SLE的显著疗效提示其在疾病发生和进展中的重要作用。由于自身反应性B细胞参与疾病进展的具体机制和标志分子尚不明确,目前,B细胞耗竭疗法均是针对总的B细胞群体,无法靶向清除自身反应性B细胞。随着科学技术手段的进步,高通量测序技术为研究SLE B细胞异常提供了新思路。本综述重点就高通量测序揭示B细胞受体新的异常、新的B细胞亚群和B细胞相关治疗靶点等在SLE中的作用进展进行总结和讨论,为深入了解SLE的发病机制和探讨治疗方法提供借鉴。

关键词：系统性红斑狼疮高通量测序 B细胞亚群 B细胞受体自身免疫

过表达海马LINGO-1对小鼠学习和记忆能力及海马各亚区Spinophilin+树突棘的影响

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陆军军医大学学报 2024年第2期46卷 118-127页

作者：王舜蒋林何琦杨浩王依滢周宇宁梁芯张毅晁凤蕾张蕾唐勇重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位... 详细信息

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位注射携带绿色荧光的空载腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV),LINGO-1过表达组小鼠海马立体定位注射同时携带绿色荧光和LINGO-1过表达载体的AAV。运用Morris水迷宫评估小鼠的空间学习和记忆能力,荧光定量PCR及免疫荧光染色方法分别检测小鼠海马内LINGO-1基因表达水平和各亚区荧光强度,体视学三维定量小鼠海马各亚区体积及Spinophilin+树突棘总数。结果对照组和LINGO-1过表达组病毒注射前后体质量差异无统计学意义;LINGO-1过表达诱导小鼠海马LINGO-1的mRNA水平升高、荧光强度增强(P学习与记忆能力。

关键词： LINGO-1 树突棘突触海马学习记忆

头颈部鳞状细胞癌巨噬细胞关键基因的筛选分析

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中国临床解剖学杂志 2024年第2期42卷 174-180页

作者：侯晓睿李浩坤宋贻芳常若水薛小磊张千兵吴砂王妮莎南方医科大学基础医学院免疫学教研室广东省功能蛋白质组学重点实验室广州510515 南方医科大学南方医院病理科广州510515 南方医科大学基础医学院肿瘤研究所广州510515 国家医学基础实验教学示范中心广州510515 南方医科大学基础医学院生物化学教研室广州510515

目的应用生物信息学的方法分析筛选头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)巨噬细胞中的潜在关键基因,为HNSCC的预后提供靶点。方法基于在线数据库,利用一致流形近似与投影(UMAP)降维,捕获巨噬细胞群;进一步通过t-分布随机近邻嵌入(tSNE)聚类降维分... 详细信息

目的应用生物信息学的方法分析筛选头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)巨噬细胞中的潜在关键基因,为HNSCC的预后提供靶点。方法基于在线数据库,利用一致流形近似与投影(UMAP)降维,捕获巨噬细胞群;进一步通过t-分布随机近邻嵌入(tSNE)聚类降维分析肿瘤组织与正常组织细胞群分布的变化并筛选差异基因的表达;运用Monocle包对关键风险基因在不同发育阶段细胞中的表达情况进行分析;利用Kaplan-Meier Plotter在线数据平台分析生存曲线;运用空间转录组技术验证关键基因在组织中的表达映射;多色荧光免疫组化进行临床样本的验证。结果捕获得到7个巨噬细胞亚群,其中第1亚群仅存在于肿瘤组织中且分泌型磷蛋白1(SPP1)基因高富集。SPP1高表达趋向巨噬细胞M2型极化并处于细胞分化的终末阶段。SPP1+巨噬细胞糖酵解、缺氧、上皮间质化、血管生成等功能活跃,与HNSCC患者的预后呈负相关。结论 SPP1可能成为HNSCC中有价值的预后生物标志物。

关键词：头颈部鳞状细胞癌分泌型磷蛋白1(SPP1) 肿瘤相关巨噬细胞

乳酸对类风湿关节炎患者外周血CD4+T细胞亚群的调控作用

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北京大学学报（医学版） 2024年第3期56卷 519-525页

作者：黄会娜赵静赵祥格白自然李霞王冠大连医科大学基础医学院免疫学教研室辽宁大连116044 北京大学人民医院风湿免疫科北京100044

目的:研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清乳酸水平及其与疾病活动度的关系,分析乳酸对RA患者外周血中CD4+T细胞的活化、分泌细胞因子能力以及对CD4+T细胞亚群的作用。方法:选择大连医科大学附属第二医院风湿免疫科2019... 详细信息

目的:研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清乳酸水平及其与疾病活动度的关系,分析乳酸对RA患者外周血中CD4+T细胞的活化、分泌细胞因子能力以及对CD4+T细胞亚群的作用。方法:选择大连医科大学附属第二医院风湿免疫科2019年10月至2021年9月连续收治的RA患者作为病例组,同期与RA患者性别年龄相匹配的大连医科大学附属第二医院体检中心健康人(healthy control,HC)作为对照组,收集两组外周血,乳酸检测试剂盒检测上清液中乳酸含量,并分析其与RA患者疾病评分的相关性。用乳酸刺激后,通过流式细胞术检测所有病例组RA患者外周血中CD4+T细胞的活化水平、CD4+T细胞亚群的比例以及CD4+T细胞分泌的细胞因子。结果:RA患者(n=66)的血清乳酸水平[(5.13±1.01)mmol/L vs.(1.72±0.91)mmol/L,P5 mmol/L较浓度≤5 mmol/L的类风湿因子(rheumatoid factor,RF)[197.50(26.03,783.00)IU/mL vs.29.30(0.00,102.60)IU/mL,P0.05]和抗环瓜氨酸多肽(cyclic citrullinated peptied,CCP)抗体[82.35(17.70,137.00)RU/mL vs.68.60(25.95,119.70)RU/mL,P>0.05]的表达差异无统计学意义。与对照组HC相比,乳酸处理组的RA患者CD4+T细胞表面PD-1(46.15%±8.54%vs.41.67%±9.98%,P<0.001)、诱导共刺激分子(inducible costimulatory molecule,ICOS)(25.77%±8.60%vs.18.65%±7.94%,P<0.01)和CD25(25.89%±5.80%vs.22.25%±4.59%,P<0.01)的表达明显升高;乳酸处理组的RA患者CD4+T细胞中Th17(4.62%±1.74%vs.2.93%±1.92%,P<0.05)、外周辅助性T(peripheral helper T,Tph)细胞(28.02%±6.28%vs.20.32%±5.82%,P<0.01)的比例升高;乳酸处理组的RA患者CD4+T细胞中IL-21(5.73%±1.59%vs.4.75%±1.71%,P<0.05)的表达上调。结论:RA患者血清乳酸水平升高,促进了RA患者CD4+T细胞活化和分泌IL-21,以及上调了RA患者Th17、Tph细胞的比例。

关键词：类风湿关节炎乳酸 CD4+T细胞外周辅助性T细胞