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下调miR-208a通过靶向SFRP1介导Wnt信号通路对结直肠癌细胞5-FU耐药的改善作用

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吉林大学学报（医学版） 2024年第4期50卷 947-955页

作者：胡兵兵罗康宁彭肃周煜中陈茂良刘昌化南华大学衡阳医学院附属第二医院血管疝儿外科湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院附属第二医院胃肠外科湖南衡阳421001

目的:探讨下调微小RNA-208a(miR-208a)对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,阐明其相关分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测结直肠癌5-FU耐药细胞株HT-29/5-FU及其亲本HT-29细胞中miR-208a和分泌型卷曲相关蛋白1(S... 详细信息

目的:探讨下调微小RNA-208a(miR-208a)对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,阐明其相关分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测结直肠癌5-FU耐药细胞株HT-29/5-FU及其亲本HT-29细胞中miR-208a和分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)mRNA表达水平。以HT-29/5-FU细胞为研究对象,将miR-208a抑制物(miR-208a inhibitor)质粒及其阴性对照质粒(inbibitor-NC)和SFRP1小干扰质粒(si-SFRP1)及其阴性对照质粒(si-NC)分别或同时转染至HT-29/5-FU细胞中,联合5-FU处理,将细胞分为空白组、inhibitor-NC组、miR-208a inhibitor组、miR-208a inhibitor+si-NC组和miR-208a inhibitor+si-SFRP1组。MTT法检测各组细胞增殖活性并计算耐药指数,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测不同浓度5-FU作用后各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中SFRP1、β-连环蛋白(β-catenin)、P-糖蛋白(P-gp)和ATP结合盒B亚家族成员1转运蛋白(ABCB1)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-208a与SFRP1的靶向关系。结果:与HT-29细胞比较,HT-29/5-FU细胞中miR-208a表达水平升高(P<0.05),SFRP1 mRNA表达水平降低(P<0.05)。与inhibitor-NC组比较,miR-208a inhibitor组细胞增殖活性降低(P<0.05),耐药指数降低,细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中β-catenin、P-gp和ABCB1蛋白表达水平降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验提示SFRP1是miR-208a靶基因,且miR-208a可负向调控SFRP1的表达。与miR-208a inhibitor+si-NC组比较,miR-208a inhibitor+si-SFRP1组细胞增殖活性升高(P<0.05),耐药指数升高,细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞中β-catenin、P-gp和ABCB1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:下调miR-208a可通过靶向上调SFRP1表达抑制Wnt信号通路的转导,进而改善HT-29/5-FU细胞对5-FU的耐药。

关键词：结直肠肿瘤微小RNA-208a 分泌型卷曲相关蛋白1 Wnt信号通路 5-氟尿嘧啶耐药性

前蛋白转化酶枯草溶菌素9在慢性肝病的作用与机制研究进展

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中国普通外科杂志 2024年第1期33卷 114-121页

作者：方开晗彭秀达费书珂南华大学衡阳医学院附属第二医院肝胆胰脾外科湖南衡阳421001

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是一种主要由肝脏合成的丝氨酸蛋白酶,在胃肠道、胰腺、肾脏和中枢神经系统中也有表达。PCSK9参与脂质代谢调节的肝细胞内外分子靶点众多,在肝脏中主要通过与肝细胞膜表面低密度脂蛋白受体(LDLR)结合靶... 详细信息

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是一种主要由肝脏合成的丝氨酸蛋白酶,在胃肠道、胰腺、肾脏和中枢神经系统中也有表达。PCSK9参与脂质代谢调节的肝细胞内外分子靶点众多,在肝脏中主要通过与肝细胞膜表面低密度脂蛋白受体(LDLR)结合靶向溶酶体降解,升高血浆低密度脂蛋白胆固醇水平。既往PCSK9在家族性遗传性高胆固醇血症、动脉粥样硬化、心肌梗死、肿瘤等疾病中得到广泛关注,并促进PCSK9抑制剂的快速研发,在治疗高胆固醇血症、降低心血管疾病风险中发挥重要作用。随着PCSK9研究的深入及慢性肝病发病率的逐渐提高,PCSK9与慢性肝病发生发展的关系也逐渐被揭示。基于上述背景,本文阐述PCSK9在多种临床常见慢性肝脏疾病(酒精性肝病、非酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、病毒性肝炎以及肝癌)中所发挥的作用,以期为慢性肝脏疾病的临床诊疗提供新思路。

关键词：肝疾病前蛋白转化酶9 脂类代谢综述

MOTS-c肽对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用

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安徽医科大学学报 2024年第8期59卷 1405-1410页

作者：王毓彭建业朱明燕南华大学衡阳医学院附属第二医院检验科衡阳421001 南华大学衡阳医学院附属第二医院心血管内科衡阳421001

目的探讨线粒体衍生肽MOTS-c对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌的保护作用,并阐明其作用机制。方法将SD大鼠随机分成假手术组(sham组)、模型组(MIRI组)、MOTS-c组和MOTS-c+PGC-1α抑制剂SR-18292组(MOTS-c+SR-18292组),每组10只。... 详细信息

目的探讨线粒体衍生肽MOTS-c对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌的保护作用,并阐明其作用机制。方法将SD大鼠随机分成假手术组(sham组)、模型组(MIRI组)、MOTS-c组和MOTS-c+PGC-1α抑制剂SR-18292组(MOTS-c+SR-18292组),每组10只。采用冠状动脉前降支结扎法建立大鼠MIRI模型。各组大鼠于术前1 h及术后即刻经尾静脉给予MOTS-c肽(1 mg/kg)、SR-18292(20 mg/kg)和等体积浓度为1%的二甲基亚砜干预。术后24 h,采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察各组心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色观察各组心肌组织病理变化;原位末端标记法(TUNEL)染色检测各组心肌组织凋亡水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)和生化试剂盒测定各组血清中心肌损伤标志物和氧化指标水平;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组心肌组织线粒体DNA(mtDNA)相对拷贝数;Western blot检测各组心肌组织中线粒体生物合成相关蛋白表达水平。结果与sham组比较,MIRI组大鼠心肌损伤严重,心肌组织梗死面积和凋亡水平升高(P<0.05),心肌组织mtDNA相对拷贝数降低(P<0.05),血清中CK-MB、LDH、cTnI及心肌组织中MDA含量升高(P<0.05),而SOD含量及PGC-1α、NRF-1、TFAM等蛋白表达水平降低(P<0.05)。与MIRI组比较,MOTS-c组大鼠心肌损伤明显改善,心肌组织梗死面积和凋亡水平降低(P<0.05),心肌组织mtDNA相对拷贝数升高(P<0.05),血清中CK-MB、LDH、cTnI及心肌组织中MDA含量降低(P<0.05),而SOD含量及PGC-1α、NRF-1、TFAM等蛋白表达水平升高(P<0.05)。与MOTS-c组比较,MOTS-c+SR-18292组大鼠心肌组织梗死面积和凋亡水平升高(P<0.05),心肌组织mtDNA相对拷贝数降低(P<0.05),血清中CK-MB、LDH、cTnI及心肌组织中MDA含量升高(P<0.05),而SOD含量及PGC-1α、NRF-1、TFAM等蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 MOTS-c肽可促进心肌细胞线粒体生物合成,抑制心肌细胞凋亡,改善MIRI大鼠心肌损伤,其机制可能与上调PGC-1α表达有关。

关键词： MOTS-c肽心肌缺血再灌注心肌损伤线粒体生物合成过氧化物酶体增殖受体γ辅激活因子α

miR-301b-3p在肾透明细胞癌组织中表达及其对肾透明细胞癌细胞恶性生物学的影响

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中国老年学杂志 2024年第20期 4993-4999页

作者：费良玉王昕禧符浩唐亚纯段斌南华大学衡阳医学院附属南华医院肾内科南华大学衡阳医学院附属南华医院泌尿外科

目的探讨微小RNA(miR)-301b-3p在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中表达及其对ccRCC细胞恶性生物学的影响。方法基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析miR-301b-3p在ccRCC组织中的表达水平，并分析其与ccRCC患者预后的关系。采用实时荧光定量-... 详细信息

目的探讨微小RNA(miR)-301b-3p在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中表达及其对ccRCC细胞恶性生物学的影响。方法基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析miR-301b-3p在ccRCC组织中的表达水平，并分析其与ccRCC患者预后的关系。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测71例ccRCC组织及5种ccRCC细胞系中miR-301b-3p表达水平。以miR-301b-3p表达量最高的ccRCC细胞系Caki-1为研究对象，将miR-301b-3p inhibitor及其阴性对照inhibitor-NC转染至Caki-1中，CCK-8法检测细胞增殖活性；流式细胞术检测细胞凋亡水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭能力；Western印迹检测细胞中B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2和剪切的胱天蛋白酶(cleaved-Caspase)-3蛋白表达水平。采用生物信息学方法对miR-301b-3p下游靶基因进行预测，并进一步结合Pearson相关性分析和预后分析结果筛选miR-301b-3p关键靶基因。结果 TCGA数据库分析结果显示，miR-301b-3p在ccRCC组织中明显高表达(P<0.05),且其高表达与ccRCC患者不良预后相关(P<0.05)。qRT-PCR结果显示，miR-301b-3p在人ccRCC组织及细胞系中明显高表达(P<0.05);下调miR-301b-3p表达可显著抑制Caki-1细胞增殖、迁移和侵袭，并明显促进细胞凋亡，明显上调Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达，明显下调Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。生物信息学分析结果显示，三结构域蛋白(TRIM)2、非七激酶子同源物(SOS)2和核受体亚家族3C族成员(NR3C)2可能是miR-301b-3p参与调控ccRCC细胞恶性生物行为的下游关键靶基因。结论 miR-301b-3p在ccRCC组织中高表达，其表达下调可显著抑制ccRCC细胞的恶性生物学行为。

关键词：肾透明细胞癌微小RNA(miR)-301b-3p 增殖凋亡迁移侵袭

山奈酚靶向B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1抑制肾透明细胞癌细胞生物行为

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中国老年学杂志 2024年第6期44卷 1397-1405页

作者：陈选才符浩唐亚纯唐昕祝乐喜李雪峰朱子贵南华大学衡阳医学院附属南华医院泌尿外科湖南衡阳421002 南华大学附属第一医院肿瘤科湖南衡阳421002 南华大学衡阳医学院附属南华医院重症医学科

目的探讨山奈酚(Kaempferol)靶向B淋巴细胞瘤2相关蛋白(BCL2)A1抑制肾透明细胞癌(ccRCC)细胞的作用机制。方法将ccRCC细胞(ACHN和769-P)分成Vector组(转染空载质粒)或Control组(正常培养)、Kaempferol组(Kaempferol处理细胞)和Kaempferol+BCL2A1组(转染BCL2A1并用Kaempferol处理)。生物信息学预测Kaempferol靶点并分析其与临床不良表型之间关系。噻唑蓝(MTT)检测不同浓度Kaempferol处理细胞的活力。CCK-8试剂盒和克隆形成检测细胞增殖能力。Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。裸鼠移植瘤实验检测Kaempferol体内抑制细胞增殖能力。免疫组化检测增殖细胞抗原Ki67。Western印迹检测BCL2A1及上皮细胞间质转化(EMT)相关蛋白表达。结果生物信息学数据库和软件分析显示,Kaempferol靶向BCL2A1,BCL2A1在ccRCC组织中表达上调且与临床不良表型有关。Kaempferol浓度和时间依赖性明显抑制ccRCC细胞BCL2A1蛋白表达(P<0.05)。以120或150μmol/L浓度分别作用ACHN、769-P细胞后,细胞活力明显下降(P<0.05)。以相应浓度Kaempferol作用细胞后,ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05)。Kaempferol组移植瘤体积、重量、Ki67相对表达量和BCL2A1蛋白表达明显小于Control组(P<0.05)。与Vector组相比,BCL2A1组中BCL2A1蛋白表达明显增加(P<0.05)。与Control组相比,Kaempferol组中BCL2A1蛋白表达、增殖细胞、克隆细胞、迁移和侵袭细胞数明显减少(P<0.05);与Kaempferol组相比,Kaempferol+BCL2A1组上述指标明显增多(P<0.05)。细胞经Kaempferol干预后,E-cadherin蛋白表达明显增加,N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显减少,而BCL2A1可明显逆转Kaempferol对EMT相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论 Kaempferol可抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过靶向调节BCL2A1蛋白表达,影响EMT相关蛋白表达实现的。

关键词：肾透明细胞癌山奈酚 B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1 生物学行为

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外泌体在老年骨科疾病中治疗应用的研究进展

中国老年学杂志 2024年第5期44卷 1267-1273页

作者：侯德淼唐梓晋李卓熊礼顺晏怡果南华大学衡阳医学院附属第一医院脊柱外科湖南衡阳421001

干细胞外泌体(Exo)的应用和临床治疗潜力已成为再生医学研究的新主流。干细胞Exo富含细胞因子、生长因子、信号脂质和调控小分子RNA(miRNA),在骨科系统、心血管系统、免疫系统、中枢神经等系统疾病的诊断和治疗中发挥着越来越重要的作... 详细信息

干细胞外泌体(Exo)的应用和临床治疗潜力已成为再生医学研究的新主流。干细胞Exo富含细胞因子、生长因子、信号脂质和调控小分子RNA(miRNA),在骨科系统、心血管系统、免疫系统、中枢神经等系统疾病的诊断和治疗中发挥着越来越重要的作用。间充质干细胞(MSCs)是目前研究中最常用的细胞类型之一,是治疗人类疾病的一种基于细胞的实验疗法。干细胞衍生的细胞外囊泡(EV),包括Exo和微囊泡(MV)。

关键词：干细胞外泌体骨科疾病

去泛素化酶OTUB2通过诱导DDX54活性增加中性粒细胞外诱捕网的形成以及促进结直肠癌细胞活力和侵袭能力

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安徽医科大学学报 2024年第3期59卷 463-472页

作者：蒋良君李卫南华大学衡阳医学院附属南华医院消化内科衡阳421002 南华大学衡阳医学院附属南华医院肝胆外科衡阳421002

目的探讨含OTU结构域的泛素醛结合蛋白2(OTUB2)影响RNA解螺旋酶54(DDX54)的活性及其对中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的形成和结直肠癌(CRC)细胞活力、侵袭的影响。方法分离CRC患者和健康对照组的外周血中性粒细胞,并使用佛波酯(PMA)或脱... 详细信息

目的探讨含OTU结构域的泛素醛结合蛋白2(OTUB2)影响RNA解螺旋酶54(DDX54)的活性及其对中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的形成和结直肠癌(CRC)细胞活力、侵袭的影响。方法分离CRC患者和健康对照组的外周血中性粒细胞,并使用佛波酯(PMA)或脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)刺激中性粒细胞4 h;Western blot检测NETs标记物髓过氧化物酶(MPO)和瓜氨酸组蛋白H3(Cit-H3)的表达;干预SW480细胞中OTUB2或DDX54的表达并将其和中性粒细胞共培养,细胞分为如下组:对照组(不做任何处理),NETs组、vector组、OTUB2组、NETs+si-OTUB2组(SW480细胞、转染了vector、OTUB2过表达质粒和si-OTUB2的SW480细胞分别与PMA处理的中性粒细胞共培养),OTUB2+DNaseⅠ组(转染了OTUB2过表达质粒的SW480细胞与DNaseⅠ处理的中性粒细胞共培养),si-OTUB2组、OTUB2+si-NC组和OTUB2+si-DDX54组(转染了si-OTUB2、OTUB2过表达质粒和si-NC、OTUB2过表达质粒和si-DDX54的SW480细胞分别与中性粒细胞共培养)。ELISA检测SW480细胞上清液中MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3的浓度;MTT和Transwell检测SW480细胞活力和侵袭能力;RNA测序筛选OTUB2调控的下游基因并使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫共沉淀(co-IP)和谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和纯化(GST-pull-down)、His-tag pull-down实验验证DDX54和OTUB2的相互作用。结果与健康对照相比,CRC患者外周血中NETs的形成增加。与对照组相比,NETs组CRC细胞活力和侵袭增加(P<0.05)。与vector组比较,OTUB2组MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3的浓度增加,细胞活力和侵袭增加(P<0.05);而与OTUB2组比较,OTUB2+DNaseⅠ组MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3的浓度减少,细胞活力和侵袭减少(P<0.05)。Co-IP实验、GST pull down实验和His-tag pull down实验表明OTUB2和DDX54之间存在相互作用。与OTUB2+si-NC组比较,OTUB2+si-DDX54组MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3的浓度减少,细胞活力和侵袭减少(P<0.05)。结论去泛素化酶OTUB2可以通过上调DDX54的增加NETs的形成并促进CRC细胞活力和侵袭。

关键词：去泛素化 OTUB2 DDX54 中性粒细胞胞外诱捕网结直肠癌中性粒细胞

抗菌肽LL⁃37在骨质疏松症中的作用机制研究进展

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中国骨质疏松杂志 2024年第3期30卷 454-457页

作者：冷鹏唐晓军南华大学衡阳医学院南华大学附属第二医院脊柱外科湖南衡阳421001

抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPS)是一种宿主防御肽,既往主要关注其抗细菌及抗病毒作用,进一步研究发现AMPS可在成骨、破骨、免疫、促进血管生成等多个途径调控骨代谢、参与骨质疏松症的发生发展。本文旨在总结AMPS在骨代谢中的调... 详细信息

抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPS)是一种宿主防御肽,既往主要关注其抗细菌及抗病毒作用,进一步研究发现AMPS可在成骨、破骨、免疫、促进血管生成等多个途径调控骨代谢、参与骨质疏松症的发生发展。本文旨在总结AMPS在骨代谢中的调控机制,探讨其对骨质疏松症的影响为AMPS治疗骨质疏松症提供理论依据。

关键词：抗菌肽LL⁃37 骨质疏松症骨代谢

主动脉夹层术后患者出院准备度现状及相关影响因素探讨

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中国科技期刊数据库医药 2024年第3期 0092-0095页

作者：伍娟罗娟全翠芳许丽君尹金芝南华大学附属第一医院胸心血管外科湖南衡阳421001

通过建立核心指标集和多层模糊综合评价模型,对主动脉夹层术后患者出院准备度进行综合评价。定量评估患者出院准备度,探讨影响患者出院准备度的因素。方法分析急性StanfordA型主动脉夹层术后患者的临床资料,提取影响出院准备度的关键... 详细信息

通过建立核心指标集和多层模糊综合评价模型,对主动脉夹层术后患者出院准备度进行综合评价。定量评估患者出院准备度,探讨影响患者出院准备度的因素。方法分析急性StanfordA型主动脉夹层术后患者的临床资料,提取影响出院准备度的关键指标。基于核心指标集之间的关系,运用层次分析法建立层次结构模型。采用定性与定量相结合的评价方法,构建多层模糊综合评价模型,对出院准备度进行评估。结果本研究提取了影响主动脉夹层术后出院准备度的核心指标集。采用专家评价和两两比较的方法,为集内各核心指标分配权重。多层模糊综合评价模型兼顾完整指标集和不完整指标集,有效地应用于出院准备度评价。该研究为急性StanfordA型主动脉夹层患者出院准备度的评估提供了见解,使量化评估成为可能,并解决与指标相关的差异。结论本研究确定了影响主动脉夹层术后患者出院准备度的核心指标并对其进行了加权。建立多层次模糊综合评价模型,对出院准备度进行系统评价。该方法有助于准确评估患者出院准备度,有助于改善术后护理管理。

关键词：主动脉夹层出院准备度核心指标集多层模糊综合评价手术效果