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PdbSPL28基因过量表达提高山新杨对叶斑病的抗性

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林业科学 2024年第10期60卷 56-66页

作者：韩峭子陈文文陈赢男尹佟明林木遗传育种国家重点实验室现代南方林业协同创新中心林木遗传与生物技术教育部重点实验室江苏省林木遗传和高效培育重点实验室南京林业大学南京210037

【目的】SPL(SQUAMOSA promoter-binding protein-like)是植物特有的一类转录因子,对植物生长发育以及天然免疫反应至关重要。本研究通过在山新杨中过表达PdbSPL28基因,分析比较野生型和转基因山新杨在抗病方面的表型差异,探究PdbSPL28... 详细信息

【目的】SPL(SQUAMOSA promoter-binding protein-like)是植物特有的一类转录因子,对植物生长发育以及天然免疫反应至关重要。本研究通过在山新杨中过表达PdbSPL28基因,分析比较野生型和转基因山新杨在抗病方面的表型差异,探究PdbSPL28基因的生物学功能及其对杨树抗病性的影响,为深入解析该基因调控杨树抗病性的分子机制提供基础。【方法】利用同源克隆获得山新杨PdbSPL28基因完整ORF序列,并利用DNA人工合成技术对该基因ORF中的miR156作用位点进行序列改造,采用酶切、连接反应分别将改造前和改造后的PdbSPL28基因序列构建过表达载体;采用Gateway技术构建亚细胞定位载体,利用烟草叶片瞬时转化系统分析PdbSPL28蛋白亚细胞定位;利用农杆菌介导的叶盘转化法获得PdbSPL28基因过量表达的转基因山新杨,基于刺伤接种法和石蜡切片技术,观察野生型和转基因山新杨对2种间座壳属病原菌(Diaporthe nobilis和***)的抗性差异及叶片解剖结构变化并测定病情指数;制备病原菌***孢子悬浮液,接种野生型和2个过表达株系的离体叶片,在接种后不同时间点采集样品,通过液质联用方法检测茉莉酸含量变化。【结果】山新杨PdbSPL28基因ORF全长1341 bp,序列中含有1个miR156作用位点;PdbSPL28蛋白含有保守的SBP结构域,定位于细胞核。对PdbSPL28基因ORF中miR156作用位点改造后,成功获得6个该基因过量表达的转基因株系。与野生型相比,PdbSPL28过表达山新杨对2种间座壳属病原菌的抗性明显增强。茉莉酸测定结果显示:在接种前,PdbSPL28过表达株系叶片中茉莉酸含量高于WT;但在接种96 h时,过表达株系茉莉酸含量极显著低于WT。【结论】对miR156作用位点进行序列改造,可以提高获得PdbSPL28基因过量表达转基因山新杨的概率;PdbSPL28基因过表达可以提高山新杨对间座壳属真菌引起的叶斑病抗性,茉莉酸信号途径可能在过表达株系响应***侵染过程中发挥重要作用。

关键词：山新杨 SPL28基因过量表达叶斑病间座壳属

玉米肽包埋维生素 D 微胶囊的稳定性及结构鉴定

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中国粮油学报 2024年

作者：王华蕾刘睿张新雪孟甘露侯俊财刘文颖东北农业大学乳品科学教育部重点实验室中国食品发酵工业研究院有限公司北京市蛋白功能肽工程技术研究中心

以玉米肽为壁材，用维生素D油做芯材，吐温-20做乳化剂，并使用喷雾干燥法得到了玉米肽包埋维生素D微胶囊，研究考察了玉米肽微胶囊的氨基酸组成、分子质量分布、潜在的功能活性肽段，并在不同温度、pH和不同体外消化方式下观察玉米肽... 详细信息

以玉米肽为壁材，用维生素D油做芯材，吐温-20做乳化剂，并使用喷雾干燥法得到了玉米肽包埋维生素D微胶囊，研究考察了玉米肽微胶囊的氨基酸组成、分子质量分布、潜在的功能活性肽段，并在不同温度、pH和不同体外消化方式下观察玉米肽维生素D微胶囊的稳定性。研究发现，玉米肽微胶囊含有丰富的氨基酸，可以为人体提供所需营养，其中丙氨酸和亮氨酸含量较高。玉米肽维生素D微胶囊中主要为分子质量小于1000u 的小肽，所占比例为95.52%，这些小分子的肽更易被人体吸收。本次共鉴定出28条肽段，都是数量为20个氨基酸以下的短肽。玉米肽微胶囊在不同温度、pH和体外消化方式下都表现出良好的稳定性。研究为玉米肽维生素D 微胶囊应用于营养保健食品奠定了基础，为其在食品中的多元化开发利用提供了思路。

关键词：玉米肽维生素D 微胶囊结构稳定性

水解对低盐鸭肉肌原纤维蛋白结构和功能特性的影响

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食品工业科技 2024年第2期45卷 84-91页

作者：何蜀峰李孟孟孙杨赢宁波大学食品科学与工程学院浙江宁波315800 浙江省动物蛋白食品精深加工技术重点实验室浙江宁波315800

为研究水解时间(0、20、40、60、80 min)对低盐溶液中鸭肉肌原纤维蛋白的结构和功能特性的影响,本文用胰蛋白酶水解鸭肉肌原纤维蛋白(Myofibrillar protein,MP),通过分析水解处理后的水解度、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium ... 详细信息

为研究水解时间(0、20、40、60、80 min)对低盐溶液中鸭肉肌原纤维蛋白的结构和功能特性的影响,本文用胰蛋白酶水解鸭肉肌原纤维蛋白(Myofibrillar protein,MP),通过分析水解处理后的水解度、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、溶解度、表面疏水性、二级结构、荧光光谱、Zeta电位和乳化性,对水解物的结构和功能特性进行评估。结果表明:在低盐溶液中,随着水解时间的延长,溶解度显著升高(P蛋白结构变化显著,α-螺旋含量减少,内源性色氨酸荧光强度明显高于未水解组,且Zeta电位绝对值升高。综上所述,在低盐溶液中,水解40 min可以有效改善鸭肉MP的结构和功能特性。

关键词：鸭肉肌原纤维蛋白水解低盐溶解度乳化性蛋白结构

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陆地棉CLE基因家族的鉴定及GhCLE13参与调控棉花抗旱性的功能分析

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作物学报 2024年

作者：戎宇轩惠留洋王沛琦孙思敏张献龙袁道军杨细燕华中农业大学作物遗传改良全国重点实验室/湖北洪山实验室

CLAVATA3/Embryo surrounding region-related (CLE)小肽家族是植物中最大的小肽激素家族，在植物中广泛存在，且参与植物多个重要的生命活动。本研究对陆地棉CLE基因家族进行了鉴定，并对GhCLE基因家族成员进行基因结构、启动子顺式作... 详细信息

CLAVATA3/Embryo surrounding region-related (CLE)小肽家族是植物中最大的小肽激素家族，在植物中广泛存在，且参与植物多个重要的生命活动。本研究对陆地棉CLE基因家族进行了鉴定，并对GhCLE基因家族成员进行基因结构、启动子顺式作用元件、蛋白质理化性质、系统发育的分析；通过RNA-seq数据构建了GhCLE基因家族成员在陆地棉各组织的表达谱及干旱处理下的表达模式，并筛选在棉花根系特异表达且受干旱诱导的CLE基因；最后通过VIGS技术对筛选出的GhCLE基因进行了抗旱功能的验证。结果显示，在陆地棉全基因组共鉴定出40个GhCLE基因，GhCLE基因结构较为简单，32个GhCLE基因没有内含子，所有基因编码的蛋白序列均包含12 aa长度的CLE结构域；GhCLE基因启动子区域包含多种光诱导响应、胁迫响应、激素响应和发育相关的顺式作用元件；GhCLE基因在陆地棉多个组织均有表达，筛选出了1个根系特异表达且受干旱诱导的GhCLE13-D-2基因。通过VIGS技术和MDA含量的测定和比较验证了GhCLE13-D-2基因提高棉花的抗旱性的功能。本研究为CLE小肽在植物抗逆方面的深入研究以及棉花种质创新提供了新的理论依据。

关键词：陆地棉 CLE小肽基因家族根系特异表达抗旱 GhCLE13-D-2

电针干预老年膝骨关节炎大鼠关节软骨及软骨下骨P53、P21的表达

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中国组织工程研究 2024年第8期28卷 1174-1179页

作者：黄夏荣胡莉芝孙光华彭昕珂廖瑛廖源刘静尹林伟钟培瑞彭婷周君屈萌艰南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学科湖南省衡阳市421001 南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学中心湖南省衡阳市421001 南华大学衡阳医学院附属第一医院康复医学实验室湖南省衡阳市421001 南华大学衡阳医学院附属第一医院肛肠科湖南省衡阳市421001 广州医科大学附属第六医院清远市人民医院康复科广东省清远市511500 康复医学四川省重点实验室四川省成都市610041

背景:膝骨关节炎的治疗方法有很多,其中电针作为一种重要的非药物治疗方法,治疗膝骨关节炎疗效确切,目前其确切的作用机制尚不明确。目的:探讨电针对老年大鼠膝骨关节炎关节软骨及软骨下骨P53、P21表达的影响。方法:青年组为8只6月龄SD... 详细信息

背景:膝骨关节炎的治疗方法有很多,其中电针作为一种重要的非药物治疗方法,治疗膝骨关节炎疗效确切,目前其确切的作用机制尚不明确。目的:探讨电针对老年大鼠膝骨关节炎关节软骨及软骨下骨P53、P21表达的影响。方法:青年组为8只6月龄SD雄性大鼠,16只24月龄SD雄性大鼠按随机抽样法分为老年组和电针组,每组8只。电针组大鼠接受电针刺激,每周5 d,1次/d,连续刺激8周,其余两组不做处理。8周后取材,ELISA法检测外周血Ⅱ型胶原C端肽水平,番红O-固绿染色对左膝关节软骨及软骨下骨进行形态学观察;改良Mankin’s评分评估膝关节软骨退变程度;显微CT检测左膝关节软骨及软骨下骨微结构;RT-qPCR、Western blot检测右膝关节软骨及软骨下骨基质金属蛋白酶13、P53、P21 mRNA及蛋白表达水平。结果与结论:①与青年组相比,老年组大鼠外周血Ⅱ型胶原C端肽水平升高(P蛋白酶13、P53、P21 mRNA表达升高(P蛋白表达升高(P结构介于青年组和老年组之间;Mankin’s评分降低(P蛋白酶13、P21 mRNA表达降低(P0.05);基质金属蛋白酶13、P53蛋白表达降低(P蛋白表达有下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05);③结果表明电针可能通过抑制P53和P21的表达而延缓老年大鼠关节软骨退变,并抑制关节软骨下骨骨质疏松,从而达到保护关节的作用延缓关节衰老。

关键词：电针膝骨关节炎软骨软骨下骨 P53蛋白 P21蛋白

硫化氢通过激活Akt抑制铁死亡减轻ox-HDL诱导的人脐静脉内皮细胞功能障碍

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中国病理生理杂志 2024年第6期40卷 961-970页

作者：王燕霞吴泽凡易琪龙刘宁雅姜志胜南华大学衡阳医学院心血管疾病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室动脉硬化性疾病湖南省国际科技创新合作基地湖南衡阳421001

目的:探讨硫化氢(H_(2)S)对氧化高密度脂蛋白(ox-HDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)铁死亡及内皮细胞功能损伤的作用及机制。方法:体外培养HUVECs,用200 mg/L ox-HDL、铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)、蛋白激酶B(PKB/Akt)激动剂SC7... 详细信息

目的:探讨硫化氢(H_(2)S)对氧化高密度脂蛋白(ox-HDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)铁死亡及内皮细胞功能损伤的作用及机制。方法:体外培养HUVECs,用200 mg/L ox-HDL、铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)、蛋白激酶B(PKB/Akt)激动剂SC79、Akt抑制剂MK-22062HCl(MK)和/或H_(2)S处理细胞24 h,Western blot检测相关蛋白,流式细胞术和免疫荧光染色检测细胞内活性氧(ROS)水平,铁离子检测试剂盒检测细胞内铁离子含量,单核细胞黏附实验检测单核细胞黏附到内皮细胞的数量。结果:与对照组相比,ox-HDL组酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)蛋白表达升高1.45倍(P蛋白表达降低29.79%(P功能相关蛋白IL-6、ICAM-1和TNF-α表达分别升高1.18倍、1.24倍和1.41倍(P蛋白表达下降35.24%(P蛋白ACSL4降低22.32%(P蛋白表达分别降低13.34%、9.83%和13.46%(P蛋白表达升高1.49倍(P蛋白表达降低21.28%,ACSL4蛋白表达增加1.16倍(P功能损伤。

关键词：硫化氢氧化高密度脂蛋白人脐静脉内皮细胞铁死亡 PI3K/Akt信号通路

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虾夷扇贝AMPK基因家族的鉴定及表达

水产学报 2024年第10期48卷 30-41页

作者：吕珍立黄晓文孙凤芝邢强王静刘平平安行健吕佳中国海洋大学海洋生物遗传与育种教育部重点实验室中国海洋大学方宗熙海洋生物进化与发育研究中心青岛海洋科学与技术国家试点实验室海洋生物学与生物技术功能实验室中国海洋大学海洋生命科学实验教学中心

为了解AMPK基因家族在虾夷扇贝中的特征、进化及生物学功能，实验采用比较基因组学及生物信息学的方法对虾夷扇贝AMPK基因家族进行了鉴定、基因与蛋白结构分析、系统发生分析以及时空表达分析，通过虾夷扇贝亚致死温度胁迫实验，研究了A... 详细信息

为了解AMPK基因家族在虾夷扇贝中的特征、进化及生物学功能，实验采用比较基因组学及生物信息学的方法对虾夷扇贝AMPK基因家族进行了鉴定、基因与蛋白结构分析、系统发生分析以及时空表达分析，通过虾夷扇贝亚致死温度胁迫实验，研究了AMPK基因家族在高温胁迫时的表达规律。结果显示，虾夷扇贝基因组中共存在3个AMPK家族基因，即PyAMPKα、PyAMPKβ、PyAMPKγ。时空表达分析发现，PyAMPK的3个家族基因在D型幼虫期之前均呈现较高的表达量，其中Py AMPKα基因在受精卵时期表达量最高，PyAMPKβ基因在囊胚时期表达量最高，PyAMPKγ基因在受精卵和2～8细胞时期的表达量达到最高水平。PyAMPK在虾夷扇贝成体器官中呈现不同的表达模式，其中肾脏表达量最高，其次是鳃。受高温胁迫后，肾脏和鳃中的PyAMPK基因短时间内呈现显著的上调表达，并随着时间延长呈现先上升后下降的趋势。研究表明，AMPK基因家族参与了虾夷扇贝早期胚胎发育过程的能量代谢调节以及机体面对高温胁迫的应激调节过程。本研究有助于理解贝类AMPK基因的功能和进化，并为深入阐明贝类应对高温胁迫时的能量调节机制提供理论基础。

关键词：虾夷扇贝 AMPK基因家族基因鉴定表达分析高温胁迫

功能化杯[4]芳烃对称硫醚衍生物的制备及其对铀的吸附行为

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中国有色金属学报 2019年第2期29卷 422-428页

作者：彭国文蒲移秋肖方竹余丽梅王成刘婕刘永南华大学化学化工学院衡阳421001 南华大学湖南省铀尾矿库退役治理工程技术研究中心衡阳421001 南华大学蛋白质结构与功能重点实验室衡阳421001 南华大学铀矿冶生物技术国防重点学科实验室衡阳421001

以1,3-二溴丙烷对对叔丁基杯[4]芳烃的下沿进行修饰,再利用Na_2S·9H_2O合成制备一种新型的吸附材料杯[4]芳烃对称硫醚衍生物,并研究其吸附铀的主要影响因素,即U(Ⅵ)溶液pH值、吸附剂投入量、铀初始浓度及反应时间,分析其吸附过程的反... 详细信息

以1,3-二溴丙烷对对叔丁基杯[4]芳烃的下沿进行修饰,再利用Na_2S·9H_2O合成制备一种新型的吸附材料杯[4]芳烃对称硫醚衍生物,并研究其吸附铀的主要影响因素,即U(Ⅵ)溶液pH值、吸附剂投入量、铀初始浓度及反应时间,分析其吸附过程的反应动力学和等温吸附规律。结果表明:当温度为25℃时,杯[4]芳烃对称硫醚衍生物吸附铀的最佳条件是pH值为4.0,铀初始浓度为20mg/L,杯[4]芳烃对称硫醚衍生物加入量为20mg以及吸附平衡时间为6h。杯[4]芳烃对称硫醚衍生物对铀的吸附动力学符合准二级动力学模型,吸附过程为化学吸附,相关系数为0.9998;Langmuir、D-R和Freundlich等温线均可较好地拟合吸附过程,说明该吸附体系是一个单层覆盖与多层吸附相结合的模式。红外谱图表明,杯[4]芳烃对称硫醚衍生物吸附一定质量的铀后,在817.82cm^(-1)和810.10 cm^(-1)处出现了铀酰离子的伸缩振动峰,且未发生主要的结构形态变化。

关键词：对叔丁基杯芳烃功能化修饰吸附行为铀

短期服用蛹虫草对不同状态小鼠的免疫调节作用

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食品科学 2024年第9期45卷 135-143页

作者：张美娜赵南南廖思晴王升厚王泽沈阳师范大学生命科学学院辽宁沈阳110034 辽宁省功能性蛹虫草重点实验室辽宁沈阳110034 沈阳市功能性蛹虫草产业技术研究院辽宁沈阳110034

为研究短期服用蛹虫草对不同状态小鼠的免疫调节作用,探讨其作为免疫调节剂的应用价值,将KM系小鼠随机分为低倍组(DB组)、高倍组(GB组)和对照组(CK组),DB组和GB组连续灌胃不同剂量蛹虫草水溶液21 d,CK组灌胃同等剂量蒸馏水。测定小鼠体... 详细信息

为研究短期服用蛹虫草对不同状态小鼠的免疫调节作用,探讨其作为免疫调节剂的应用价值,将KM系小鼠随机分为低倍组(DB组)、高倍组(GB组)和对照组(CK组),DB组和GB组连续灌胃不同剂量蛹虫草水溶液21 d,CK组灌胃同等剂量蒸馏水。测定小鼠体质量、脏器指数、血清免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)G、IgM、白细胞介素(interleukin,IL)-2和IL-10含量,外周血CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞亚群含量,肠道菌群组成结构及空肠Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2、TLR4、髓样分化因子88及核因子(nuclear factor)-κB表达量的变化。腹腔注射80 mg/kg mb环磷酰胺溶液诱导小鼠免疫抑制状态,在蛹虫草水溶液灌胃的第0、7、14、21天取材检测。结果显示,不同剂量蛹虫草对小鼠体质量、脏器指数、血清IgG、IgM、IL-2和IL-10水平、外周血CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞亚群含量均未产生显著影响(P>0.05)。蛹虫草可以上调小鼠肠道菌群Shannon指数和操作分类单元数量,增加肠道菌群多样性和丰富度。肠道益生菌Lactobacillus和Alistipes相对丰度明显升高(P<0.05),炎症促生菌Clostridium XIVa、Helicobacter及Lachnospiracea_incertae_sedis相对丰度显著降低(P<0.05)。不同剂量蛹虫草均引起小鼠空肠组织TLR4表达量显著降低(P<0.05),NF-κB表达量的降低程度与蛹虫草灌胃剂量呈正相关。蛹虫草能够提前恢复环磷酰胺导致的脏器损伤,显著提高免疫抑制小鼠IgM、IgG和IL-2水平(P<0.05),促进外周血CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞亚群的增殖。综上,短期服用蛹虫草可以降低肠道炎症的发生风险,不会引起正常免疫状态的失衡;蛹虫草可以通过增强体液免疫和细胞免疫促进机体免疫抑制状态的恢复,可用于免疫调节剂的开发和利用。

关键词：蛹虫草免疫调节肠道菌群免疫抑制