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穿透支原体P35蛋白对细胞因子的诱生作用

中华微生物学和免疫学杂志 2004年第9期24卷 707-710页

作者：朱翠明吴移谋万艳平余敏君南华大学微生物学与免疫学教研室衡阳421001

目的　构建pQE31/p35原核细胞表达载体 ,研究穿透支原体 (Mpe)相对分子质量 (Mr)为 35× 10 3 蛋白 (P35 )诱生巨噬细胞 (MΦ)分泌TNF α、IL 1β、IL 6等细胞因子 (CKs)的作用。方法　PCR扩增p35全长 10 0 2bp基因片段 ,克隆至pQE31原... 详细信息

目的　构建pQE31/p35原核细胞表达载体 ,研究穿透支原体 (Mpe)相对分子质量 (Mr)为 35× 10 3 蛋白 (P35 )诱生巨噬细胞 (MΦ)分泌TNF α、IL 1β、IL 6等细胞因子 (CKs)的作用。方法　PCR扩增p35全长 10 0 2bp基因片段 ,克隆至pQE31原核细胞表达载体 ,用PCR介导的突变将p35基因中两个“TGA”终止密码子定点突变为“TGG” ,使其在大肠杆菌 (E .coli)中编码表达色氨酸。IPTG诱导pQE31/p35在E .coli中表达目的蛋白rP35 ,用Ni NTASpin亲和纯化 ,Westernblot鉴定表达产物。用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测P35刺激小鼠MΦ分泌TNF α、IL 1β和IL 6的量。结果　PCR扩增出约 1kb的DNA片段 ,克隆至pQE31载体 ,筛选到阳性克隆pQE31/p35 ,p35基因中两个“TGA”终止密码子成功突变成“TGG”。IPTG诱导pQE31/p35在E .coli中表达出Mr 约 37× 10 3 的蛋白质 ,Westernblot鉴定其为rP35。ELISA结果表明 ,P35能刺激小鼠MΦ分泌大量的TNF α、IL 1β和IL 6。结论　P35能诱导MΦ分泌TNF α、IL 1β、IL

关键词： IL-6 TNF-α 细胞因子 IL-1β 分泌支原体蛋白 IPTG 密码子表达载体

泌尿生殖道支原体临床分离株对7种抗菌药物的耐药性研究

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中国抗生素杂志 2003年第9期28卷 548-551页

作者：胡四海陈超群吴移谋杨胜辉谭立志南华大学微生物学与免疫学教研室衡阳421001

目的　比较 7种抗生素对泌尿生殖道支原体临床分离株的抗菌作用 ,指导临床用药。方法　采用直接肉汤药盘法测定了临床标本中 14 6株解脲脲原体 (Uu)和 92株人型支原体 (Mh)对 7种抗菌药物的耐药性。结果　 14 6株 Uu对四环素、多西环素... 详细信息

目的　比较 7种抗生素对泌尿生殖道支原体临床分离株的抗菌作用 ,指导临床用药。方法　采用直接肉汤药盘法测定了临床标本中 14 6株解脲脲原体 (Uu)和 92株人型支原体 (Mh)对 7种抗菌药物的耐药性。结果　 14 6株 Uu对四环素、多西环素、米诺环素、罗红霉素、阿齐霉素、交沙霉素、氧氟沙星的耐药率分别为 34.2 %、2 4 .7%、2 8.1%、8.9%、4 .8%、11.0 %、和 2 8.8%。92株 Mh对四环素、多西环素、米诺环素、罗红霉素、阿齐霉素、交沙霉素、氧氟沙星的耐药率分别为 5 5 .5 %、2 5 .0 %、4 5 .7%、97.8%、10 0 %、8.7%、和16 .3%。耐四环素的 Uu和 Mh株对多西环素、米诺环素、交沙霉素以及氧氟沙星存在交叉耐药性。 85 0例 Uu和 Mh混合感染者对交沙霉素的耐药率最低 (8.1% )。结论　泌尿生殖道支原体的耐药性监测对指导临床治疗具有重要意义。

关键词：抗生索耐药性泌尿生殖道感染解脲脲原体人型支原体

SR9009联合吲哚丙酸通过核因子κB信号通路减轻C2C12成肌细胞的炎症反应

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中国组织工程研究 2025年第6期29卷 1220-1229页

作者：姬慧慧蒋旭张志敏邢运虹王亮亮李娜宋雨庭罗旭光崔慧林曹锡梅山西医科大学组织学与胚胎学教研室山西省晋中市030604 山西医科大学法医学院山西省晋中市030604 山西医科大学微生物免疫学教研室山西省晋中市030604 山西医科大学山西省临床级细胞治疗转化中试基地山西省晋中市030604

背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险。为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础。目的:探讨脂多糖刺激C2C12成... 详细信息

背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险。为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础。目的:探讨脂多糖刺激C2C12成肌细胞时吲哚丙酸、SR9009与核因子κB信号通路的关系。方法:①1μg/mL脂多糖刺激C2C12成肌细胞,RNA转录组测序结合KEGG通路富集分析信号通路。②CCK-8法检测C2C12成肌细胞活性,筛选吲哚丙酸的最佳给药浓度;然后将细胞分为空白对照组、脂多糖(1μg/mL)组、SR9009(10μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸(80μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸+SR9009+脂多糖组,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素6水平,RT-qPCR检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。③siRNA敲减Rev-erbα,RT-qPCR评估敲减效率,检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达。结果与结论:①与空白对照组比较,脂多糖时间依赖性抑制成肌细胞融合形成肌管,白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达水平升高,细胞上清液中白细胞介素6水平显著升高;KEGG通路分析支持脂多糖刺激激活核因子κB信号通路。②吲哚丙酸浓度>80μmol/L时抑制C2C12成肌细胞活性;吲哚丙酸和SR9009通过抑制核因子κB信号通路发挥抗炎作用,降低白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值低于脂多糖组。SR9009联合吲哚丙酸显著降低脂多糖诱导的炎症,Toll样受体4、CD14、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达水平进一步下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值显著低于吲哚丙酸+脂多糖组和SR9009+脂多糖组。③Rev-erbα随脂多糖刺激时间依赖性升高;siRNA敲减Rev-erbα效率达58%以上,成功敲减Rev-erbα后添加脂多糖,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达较脂多糖组显著上调。④结果说明,Rev-erbα可以作为调节炎症反应的靶点,SR9009靶向激活Rev-erbα联合吲哚丙酸能抑制核因子κB信号通路显著减轻C2C12成肌细胞的炎症反应,联合抗炎效果优于单独干预。

关键词： Rev-erbα SR9009 吲哚丙酸脂多糖核因子κB信号通路 C2C12成肌细胞

GFP-hDaxx融合蛋白高表达下调活化巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第12期23卷 961-963页

作者：万艳平谭立志刘安元余敏君占利生粟盛梅南华大学微生物学与免疫学教研室湖南衡阳421001

目的　研究GFP hDaxx融合蛋白瞬时高表达对活化巨噬细胞分泌活性的影响。方法构建GFP hDaxx融合蛋白真核细胞表达载体pEGFP/hDaxx。将其质粒转染巨噬细胞 ,用荧光显微镜观察GFP hDaxx融合蛋白或GFP的表达与定位 ,并利用Westernblot检测... 详细信息

目的　研究GFP hDaxx融合蛋白瞬时高表达对活化巨噬细胞分泌活性的影响。方法构建GFP hDaxx融合蛋白真核细胞表达载体pEGFP/hDaxx。将其质粒转染巨噬细胞 ,用荧光显微镜观察GFP hDaxx融合蛋白或GFP的表达与定位 ,并利用Westernblot检测表达产物。通过GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞内的瞬时高表达 ,在LPS诱导激活巨噬细胞后 0 .5h、4h、12h时 ,测定活化巨噬细胞分泌细胞因子TNF α和IL 1β的含量。结果　GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞内瞬时高表达且定位于细胞核 ,GFP定位于细胞核与细胞浆。GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌TNF α和IL 1β量明显降低 (在 4h及 12h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1)。结论　hDaxx瞬时高表达可下调活化巨噬细胞分泌细胞因子TNF α和IL 1β。

关键词： GFP-hDaxx融合蛋白活化巨噬细胞分泌 TNF-α IL-1β

Study of isolation of fluoroquinolone-resistant Ureaplasma urealyticum and identification of mutant sites

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Chinese Medical Journal 2002年第10期115卷 133-135,157页

作者：张文波吴移谋尹卫国余敏君南华大学基础医学院微生物学教研室湖南衡阳421001

To study the resistance mechanism of clinical isolates of Ureaplasma urealyticum resistant to fluoroquinolones Methods Thirteen isolates of Ureaplasma urealyticum resistant to six fluoroquinolones were selected out of 184 clinical isolates and their QRDRs (quinolone resistance determining region) gyrA, gyrB, parC and parE were amplified by PCR Sequencing results were compared to those susceptible reference strains and a comparison of deduced amino acid sequences were performed Results Sequence comparison revealed a C to A change at 87nt of gyrA QRDR leading to the substitution of Asp95 with glutamic acid and a C to T change at 50nt of parC QRDR leading to the substitution of Ser80 with leucine Conclusion These results suggest that a C to A change at 87nt of gyrA QRDR and a C to T change at 50nt of parC QRDR are associated with fluoroquinolone resistance of Ureaplasma urealyticum

关键词： Ureaplasma urealyticum · genes structural · mutation · drug resistance microbial · fluoroquinolone

信号肽和辅助性T细胞表位增强HBV核心抗原DNA疫苗诱导的免疫应答

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生物化学与生物物理学报 2002年第3期34卷 341-346页

作者：赵平赵兰娟曹洁洪海燕戚中田第二军医大学微生物学教研室第二军医大学微生物学教研室上海200433

为增强HBVDNA疫苗的免疫效率 ,于HBV核心抗原 (HBcAg)基因 5′末端引入人IL 2信号肽和一个通用型辅助性T淋巴细胞表位基因 ,并构建成DNA疫苗 ,转染COS7细胞后经ELISA检测出分泌型HBcAg。通过肌肉注射途径分别将这种DNA疫苗和编码天然HB... 详细信息

为增强HBVDNA疫苗的免疫效率 ,于HBV核心抗原 (HBcAg)基因 5′末端引入人IL 2信号肽和一个通用型辅助性T淋巴细胞表位基因 ,并构建成DNA疫苗 ,转染COS7细胞后经ELISA检测出分泌型HBcAg。通过肌肉注射途径分别将这种DNA疫苗和编码天然HBcAg的DNA疫苗免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,结果表明前者诱导细胞和体液免疫应答的强度均明显超过后者 ,且更趋向于T辅助细胞 1(Th1)型免疫应答 ,故其对慢性HBV感染的治疗可能有潜在的应用价值

关键词：乙型肝炎病毒 DNA疫苗信号肽辅助性T淋巴细胞表位免疫应答

解脲脲原体拓扑异构酶基因突变与耐喹诺酮类药物关系的研究

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中华检验医学杂志 2001年第6期24卷 346-349页

作者：张文波吴移谋尹卫国余敏君南华大学微生物学教研室衡阳421001

目的　探讨Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与解脲脲原体 (Uu)耐喹诺酮类药物的关系。方法　通过肉汤稀释法从 184株临床株中筛选出 13株对 6种喹诺酮类药物呈不同程度耐药Uu株 ,应用聚合酶链反应扩增gyrA、gyrB、parC、parE基因 ,产物测序后与... 详细信息

目的　探讨Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与解脲脲原体 (Uu)耐喹诺酮类药物的关系。方法　通过肉汤稀释法从 184株临床株中筛选出 13株对 6种喹诺酮类药物呈不同程度耐药Uu株 ,应用聚合酶链反应扩增gyrA、gyrB、parC、parE基因 ,产物测序后与标准敏感株核苷酸序列进行比较。结果　Uu耐药株的最低抑菌浓度均高于相应的标准敏感株 4～ 32倍 ;序列比较发现gyrAQRDR第 87位碱基C到A的突变导致第 95位天冬氨酸被谷氨酸替代 ,parCQRDR第 5 0位碱基C到T的突变导致第 80位丝氨酸被亮氨酸替代 ,gyrB和parE编码的氨基酸序列没有改变。结论　gyrAQRDR第 87位碱基C到A的突变和parC第 5

关键词：解脲脲原体基因结构突变抗药性喹诺酮类药物

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单细胞转录组测序技术在帕金森病中的应用

中国组织工程研究 2025年第1期29卷 193-201页

作者：刘子瑜耿丹丹张润姣刘清李一博王宏方谢文梦王文钰郝佳欣王磊河北医科大学人体解剖与组织胚胎学教研室河北省石家庄市050017 河北医科大学神经与血管生物学教育部重点实验室河北省石家庄市050017

背景:帕金森病以中脑特别是黑质致密部为主要病理改变,导致患者运动和非运动功能受损。目前研究受制于细胞异质性,其发病机制仍需要更深入的阐明。近些年,单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)逐渐应用于神经退行性... 详细信息

背景:帕金森病以中脑特别是黑质致密部为主要病理改变,导致患者运动和非运动功能受损。目前研究受制于细胞异质性,其发病机制仍需要更深入的阐明。近些年,单细胞转录组测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)逐渐应用于神经退行性疾病中,对于理解细胞间异质性、疾病发展机制和治疗策略有重要意义。目的:综述近些年scRNA-seq技术应用于帕金森病的研究进展,为scRNA-seq在帕金森病诊断和治疗中应用提供理论基础。方法:由第一作者应用计算机系统检索中国知网、万方医学网数据库、PubMed、Web of Science数据库的相关文献,中文检索词为“单细胞RNA测序,帕金森病,细胞异质性,细胞亚型,多巴胺能神经元,胶质细胞”;英文检索词为“single-cell RNA-seq,Parkinson Disease,heterogeneity,subtypes,dopaminergic neurons,glial cells”,最终纳入71篇文献进行综述分析。结果与结论:(1)scRNA-seq是一种在单细胞水平上利用RNA测序对特定细胞群体进行基因表达谱定量的高通量实验技术,从分子水平揭示细胞奥秘。与传统的测序技术相比,scRNA-seq技术通过对细胞转录组进行自动聚类分析,从而揭示各种生理和病理情况下复杂组织中细胞类型多样性和特异性基因表达的变化。(2)通过scRNA-seq阐明多巴胺能神经元发育过程以及各种细胞亚型的独特功能特性,从而更好地了解具有潜在治疗作用的分子靶点。(3)利用scRNA-seq分析,提高了研究者对帕金森病胶质细胞反应的了解,从而全面表征了不同的细胞类型群体,并鉴定出与神经变性相关的胶质细胞亚群,绘制了有价值的单细胞图谱,作为未来研究的参考数据。(4)应用scRNA-seq检测胚胎小鼠以及干细胞,将有助于改善细胞治疗的体外分化方案和质量控制,以及评估干细胞衍生的中脑多巴胺能神经元的整体细胞质量和发育阶段。

关键词：单细胞转录组测序帕金森病神经退行性疾病细胞异质性综述

雷公藤多甙与白介素-10对人外周血树突细胞的影响(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第8期22卷 53-56页

作者：王胜军姚堃谢芳艺季晓辉中国 212001 南京 210029 南京医科大学微生物学和免疫学教研室南京医科大学微生物学和免疫学教研室镇江镇江医学院微生物学和免疫学教研室

目的:体外研究雷公藤多甙与白介素-10(IL-10)对人外周血树突细胞表面HLA-DR、CD80抗原表达及IL-12 p40蛋白表达和mRNA转录的影响。方法:采用GM-CSF、IL-4和TNFα体外培养体系获得人外周血树突细胞(DC),HLA-DR和CD80抗原的表达经免疫荧... 详细信息

目的:体外研究雷公藤多甙与白介素-10(IL-10)对人外周血树突细胞表面HLA-DR、CD80抗原表达及IL-12 p40蛋白表达和mRNA转录的影响。方法:采用GM-CSF、IL-4和TNFα体外培养体系获得人外周血树突细胞(DC),HLA-DR和CD80抗原的表达经免疫荧光染色后采用流式细胞仪进行分析,用酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应分别检测IL-12p40蛋白水平和mRNA的转录。结果:雷公藤多甙5-20mg/L显著下调HLA-DR和CD80抗原的表达,IL-10 50-200μg/L能抑制HLA-DR和CD80抗原的表达,并都具有剂量依赖关系;雷公藤多甙5-20mg/L和IL-10 50-200μg/L均能抑制DC分泌IL-12p40蛋白,同时经雷公藤多甙20mg/L和IL-10 200μg/L处理的DC中IL-12 p40 mRNA的表达受到显著抑制。结论:雷公藤多甙和IL-10能通过抑制DC表面分子的表达和IL-12的合成而发挥免疫抑制作用。

关键词：雷公藤树突细胞细胞培养 HLA-DR抗原 CD80抗原白介素-10 白介素-12 流式细胞术逆转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定