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重组人胸腺素β4对急性放射损伤小鼠多组织中炎症小体和凋亡相关基因表达的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2024年第4期38卷 265-278页

作者：王勇懿叶雨萌李小宇王雪佳段敏杨雪枫左红艳郝延辉李杨周平坤南华大学公共卫生学院湖南衡阳421200 军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850

目的探讨重组人胸腺素β4(rh-Tβ4)对急性放射损伤小鼠小肠、肺和脑组织中炎症小体和凋亡相关基因表达的影响。方法C57BL/6N小鼠随机分为正常对照组、放射损伤模型组和模型+rh-Tβ4组。8 Gy 60Coγ射线单次全身照射小鼠制备急性放射损... 详细信息

目的探讨重组人胸腺素β4(rh-Tβ4)对急性放射损伤小鼠小肠、肺和脑组织中炎症小体和凋亡相关基因表达的影响。方法C57BL/6N小鼠随机分为正常对照组、放射损伤模型组和模型+rh-Tβ4组。8 Gy 60Coγ射线单次全身照射小鼠制备急性放射损伤模型,模型+rh-Tβ4组于照射后24 h立即ip给予rh-Tβ45μg·kg^(-1),每天1次,连续3 d。用放射免疫法检测小鼠小肠、肺和脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素18(IL^(-1)8)、IL-4、IL^(-1)3和转化生长因子β(TGF-β)等炎症细胞因子含量,用炎症小体和凋亡PCR芯片分别检测各组织中炎症小体和凋亡相关差异基因,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证部分差异基因。结果与正常对照组相比,模型组小鼠小肠、肺及脑组织中TNF-α,TGF-β和IL^(-1)8含量显著升高(P组织中TNF-α含量显著降低(P组织中TGF-β和IL^(-1)8含量显著降低(P组织中差异基因分别为13,9和11个;与模型组相比,模型+rh-Tβ4组小肠、肺和脑组织中差异基因分别为1,4和20个;与正常对照组相比,模型+rh-Tβ4组小肠、肺和脑组组织中差异基因分别为5,3和3个。RT-qPCR验证结果显示,组间存在显著差异且与PCR芯片变化趋势一致的基因为:小肠组织中,模型组炎症小体相关基因炎症小体负向调节基因Bcl2样1(Bcl2l1)mRNA较正常对照组显著下调(P组织中,模型组炎症小体相关基因NLR家族凋亡抑制蛋白1(Naip1)、炎症小体负向调节基因MEFV先天免疫调节因子(Mefv)及肿瘤坏死因子配体超家族成员11(Tnfsf11)mRNA较正常对照组显著上调(P组织中差异基因分别为3,6和12个,模型+rh-Tβ4组小肠、肺和脑组织中差异基因分别为10,4和1个;与模型组相比,模型+rh-Tβ4组小肠和肺组织中无差异基因,脑组织中差异基因4个。RT-qPCR验证结果示,组间存在显著差异且与PCR芯片变化趋势一致的基因为:肺组织中,模型组抗凋亡基因肿瘤坏死因子配体超家族成员10(Tnfsf10)mRNA较正常对照组显著上调(P组织中,模型组抗凋亡基因Tnfsf10 mRNA较正常对照组显著上调(P细胞因子表达,并可调节炎症小体和凋亡相关基因表达。

关键词：重组人胸腺素β4 放射损伤细胞因子炎症小体细胞凋亡

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双层含骨基质骨器官芯片的构建

中华创伤杂志 2024年第1期40卷 20-28页

作者：张浩周晨阳胡衍陈晓王晓林苏佳灿上海交通大学医学院附属新华医院骨科上海200092 上海大学转化医学研究院上海200444 上海交通大学电子信息与电气工程学院上海200240

目的构建双层含骨基质骨器官芯片并用于体外模拟成骨细胞和破骨细胞分化,为抗骨质疏松药物开发提供新平台。方法使用WorkSoild软件制作双层双通道骨器官芯片设计图,利用光刻技术制备浇注母版。以聚二甲基硅氧烷(PDMS)为原料,通过模具浇... 详细信息

目的构建双层含骨基质骨器官芯片并用于体外模拟成骨细胞和破骨细胞分化,为抗骨质疏松药物开发提供新平台。方法使用WorkSoild软件制作双层双通道骨器官芯片设计图,利用光刻技术制备浇注母版。以聚二甲基硅氧烷(PDMS)为原料,通过模具浇注制备芯片主体。以牛皮质骨片为间隔,分隔培养室4个通道进出口采用储液柱封闭。芯片验证实验分为成骨、破骨诱导组和成骨、破骨对照组,成骨、破骨诱导组将小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1和小鼠巨噬细胞RAW264.7分别接种于芯片上,成骨诱导14 d,破骨诱导7 d。成骨、破骨对照组为不进行诱导的MC3T3-E1细胞和RAW264.7细胞。观察指标包括:(1)芯片外观及密封性:芯片制备完成后拍照观察外观并通过密封实验观察密封性能。(2)生物相容性:MC3T3-E1细胞和RAW264.7细胞接种于芯片培养3 d及培养1、3、5 d后,分别采用钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶(AM/PI)染色和细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)实验观察细胞存活情况。(3)成骨分化情况:对成骨诱导组细胞进行碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色观察成骨细胞诱导情况。收集成骨诱导组和成骨对照组细胞RNA,qPCR检测成骨细胞标志基因Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(COL1A1)表达情况,观察成骨细胞分化程度和成骨能力。(4)破骨分化情况:对破骨诱导组细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞分化情况。提取破骨诱导组和破骨对照组细胞RNA进行破骨分化基因qPCR,检测破骨细胞标志基因TRAP、组织蛋白酶K(CTSK)和树突状细胞特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)表达水平。结果双层含骨基质骨器官芯片大小为3 cm×3 cm,整体透光,芯片系统结构对接紧凑,无渗液。钙黄绿素AM/PI染色结果显示,MC3T3-E1细胞和RAW264.7细胞培养3 d后,呈红色荧光死细胞极少。CCK-8实验结果显示,MC3T3-E1细胞和RAW264.7细胞培养5 d内,细胞活力均在90%以上,表明芯片生物相容性好,细胞可以正常存活并增殖。ALP染色和茜素红染色结果显示,成骨诱导14 d,成骨诱导组MC3T3-E1细胞成功分化为成骨细胞并产生钙化结节。qPCR结果显示,成骨诱导组MC3T3-E1细胞的RUNX2相对表达量为4.98±0.74,显著高于对照组的0.99±0.03(P细胞的OCN相对表达量为7.98±0.76,显著高于对照组的1.00±0.06(P细胞的COL1A1相对表达量为7.07±0.56,显著高于对照组的0.97±0.03(P细胞形成巨大的多核破骨细胞,破骨细胞表达大量TRAP蛋白。qPCR检测结果显示,破骨诱导组RAW264.7细胞的TRAP相对表达量为3.35±0.37,显著高于对照组的1.01±0.06(P细胞的CTSK相对表达量为3.46±0.79,显著高于对照组的1.01±0.05(P细胞的DC-STAMP相对表达量为1.92±0.12,显著高于对照组的0.98±0.08(P细胞分化诱导,有望为骨质疏松机制探究和药物筛选提供新的研究平台。

关键词：骨质疏松类器官骨重建成骨细胞破骨细胞器官芯片

基于网络药理学探讨清肺排毒汤治疗急性呼吸窘迫综合征的作用机制

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中药药理与临床 2024年

作者：杨文竹廖鑫娅何志弦汪金悦王兴西南交通大学生命科学与工程学院西南交通大学医学院

目的：基于网络药理学的方法研究清肺排毒汤对油酸Oleic acid，OA）+脂多糖（，LPS）诱导的急性呼吸窘迫综合征（Acute respiratory distress syndrome ，ARDS）的作用机制，并通过动物实验进行验证。方法：通过 TCMSP、TCMID 数据库筛... 详细信息

目的：基于网络药理学的方法研究清肺排毒汤对油酸Oleic acid，OA）+脂多糖（，LPS）诱导的急性呼吸窘迫综合征（Acute respiratory distress syndrome ，ARDS）的作用机制，并通过动物实验进行验证。方法：通过 TCMSP、TCMID 数据库筛选出清肺排毒汤活性成分及靶点；利用 GEO 和 CTD数据库筛选出 ARDS 相关潜在靶点；根据韦恩图获取清肺排毒汤与ARDS的交集靶点；利用 String 数据库构建交集靶点的蛋白互作网络（PPI）；通过David数据库对交集靶点进行基因本体论（GO）分析和基因组百科全书通路（KEGG）富集分析；采用Cytoscape软件构建药物-成分-靶点-通路网络图，选择一条关键通路进行动物实验验证。结果：其中筛选出清肺排毒汤治疗ARDS的化学成分 442个，关键蛋白105个。GO分析得到2790个条目，发现潜在靶点可以作用于活性氧代谢过程的调节、细胞对化学的应激反应、蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性的调节等生物过程；KEGG 通路分析共富集到 182 条通路，其中包括丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、PI3K-Akt信号通路、Kaposi肉瘤相关疱疹病毒感染、脂质和动脉粥样硬化等。动物实验结果显示，清肺排毒汤能下调ARDS大鼠肺组织中p-ERK及p-P38MAPK蛋白的表达。结论：本研究表明清肺排毒汤对 ARDS大鼠模型具有很好的保护作用，可通过抑制 MAPK 信号通路活化缓解大鼠ARDS。

关键词：清肺排毒汤急性呼吸窘迫综合征网络药理学丝裂原活化蛋白激酶信号通路

circRNA翻译多肽应用及工程化制备的研究进展

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中国临床解剖学杂志 2024年第3期42卷 356-358页

作者：杜坤朔杨天一贾淑惠王芳琳范军中国医科大学智能医学学院组织工程学教研室沈阳110122 中国医科大学护理学院沈阳110122 中国医科大学临床一系沈阳110122

环状RNA(circular RNA,circ RNA)是一类非编码RNA,多由外显子环化产生^([1]),具有丰度高,高度保守的特点。既往研究认为,cric RNA能够竞争性结合mi RNA(micro RNA)和蛋白,从而抑制其功能^([1]);circ RNA能够调节其宿主基因的转录效率,... 详细信息

环状RNA(circular RNA,circ RNA)是一类非编码RNA,多由外显子环化产生^([1]),具有丰度高,高度保守的特点。既往研究认为,cric RNA能够竞争性结合mi RNA(micro RNA)和蛋白,从而抑制其功能^([1]);circ RNA能够调节其宿主基因的转录效率,或者作为假基因形成的来源^([2])。近期研究发现,circ RNA能够与真核细胞的核糖体结合,启动翻译生成多肽,激活参与多种信号通路影响生物学功能。

关键词： circRNA circRNA翻译工程化

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MCC950调控巨噬细胞极化改善放射性肺损伤

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辐射研究与辐射工艺学报 2024年

作者：王贞路素丽何贵成杨惠乃爱桃曾慧湖南环境生物职业技术学院解剖教研室南华大学附属第一医院肿瘤科南华大学附属第一医院病理科南华大学附属第一医院超声科

探讨NLRP3特异性抑制剂MCC950对放射性肺损伤的改善作用及其可能机制。将36只7周雌性C57BL/6J小鼠随机分成对照组、辐照组和辐照+MCC950组。辐照组和辐照+MCC950组小鼠接受单次20 Gy剂量全胸廓辐照，对照组小鼠接受0 Gy剂量辐照。辐照+M... 详细信息

探讨NLRP3特异性抑制剂MCC950对放射性肺损伤的改善作用及其可能机制。将36只7周雌性C57BL/6J小鼠随机分成对照组、辐照组和辐照+MCC950组。辐照组和辐照+MCC950组小鼠接受单次20 Gy剂量全胸廓辐照，对照组小鼠接受0 Gy剂量辐照。辐照+MCC950组小鼠辐照后第二天给予MCC950药物干预，对照组及辐照组小鼠给予NS。辐照后12周检测小鼠肺系数以及肺干湿比。苏木精-伊红染色法检测小鼠肺损伤程度。蛋白免疫印迹检测巨噬细胞极化标记物、NLRP3炎性小体和炎症因子等分子蛋白表达变化。结果显示：与对照组相比，辐照组小鼠肺系数、肺干湿比以及肺损伤指标均显著升高，巨噬细胞M1型极化态标记物CD86表达明显增加，M2型极化态标记物CD163表达明显减少，NLRP3炎性小体（NLRP3、ASC和Caspase-1）和炎症因子（Pro-IL-1β、IL-1β、IL-18和TNF-a）表达均显著增加；而与辐照组小鼠相比，辐照+MCC950组小鼠肺系数、肺干湿比和肺组织炎性损伤均明显降低，CD86表达减少，CD163表达明显增加，NLRP3、ASC、Caspase-1、Pro-IL-1β、IL-1β、IL-18和TNF-a表达均明显减少。结果提示，MCC950可能是通过调控巨噬细胞极化进而改善放射性肺损伤，其有望成为放射性肺损伤的防治干预药物。

关键词： MCC950 NLRP3炎性小体巨噬细胞极化炎症因子放射性肺损伤

非小细胞肺癌微卫星(GT/CA)_(n)重复序列多态性的研究进展

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肿瘤防治研究 2024年第3期51卷 195-202页

作者：杨汶峻傅雨婷袁叶琴刘达蒋斌元南华大学衡阳医学院附属长沙中心医院检验科长沙410004 南华大学衡阳医学院附属长沙中心医院中心实验室长沙410004 南华大学衡阳医学院附属长沙中心医院呼吸与危重症医学科长沙410004

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌最主要的组织学类型,患者数量庞大且晚期患者疗效差,现有治疗手段虽取得巨大进展但仍面临挑战。肿瘤的发生伴随大量基因组序列的不稳定,(GT/CA)_(n)重复序列是一种常见的微卫星序列,参与了基因转录和DNA甲基... 详细信息

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌最主要的组织学类型,患者数量庞大且晚期患者疗效差,现有治疗手段虽取得巨大进展但仍面临挑战。肿瘤的发生伴随大量基因组序列的不稳定,(GT/CA)_(n)重复序列是一种常见的微卫星序列,参与了基因转录和DNA甲基化等调控过程。现有研究表明,NSCLC中(GT/CA)_(n)重复序列的多态性与EGFR、HO-1和HIF-1α基因的表达密切相关,可作为探索NSCLC发生发展的分子机制、开发诊疗预后分子标志物及相关表观遗传学研究的切入点。本文总结了NSCLC中微卫星(GT/CA)_(n)重复多态性的相关研究,希望能为NSCLC的相关研究提供参考。

关键词：非小细胞肺癌微卫星 (GT/CA)_(n)重复序列 EGFR

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神经血管耦合在骨修复中作用的研究进展

上海交通大学学报（医学版） 2024年第3期44卷 373-378页

作者：何姝航郭尚春陶诗聪上海交通大学医学院附属第六人民医院骨科上海200233 上海交通大学医学院附属第六人民医院临床医学院上海200233 上海市四肢显微外科研究所上海200233

骨修复是一个复杂的生理过程,骨内的神经通过释放生物活性分子以及与骨内细胞相互作用等方式调节骨组织再生。近年来,已经有研究尝试基于神经血管耦合进行生物材料设计,取得了有价值的成果。该文对神经与骨组织相互作用,以及利用神经血... 详细信息

骨修复是一个复杂的生理过程,骨内的神经通过释放生物活性分子以及与骨内细胞相互作用等方式调节骨组织再生。近年来,已经有研究尝试基于神经血管耦合进行生物材料设计,取得了有价值的成果。该文对神经与骨组织相互作用,以及利用神经血管耦合设计和制造可用于骨组织再生的生物活性材料的研究进展进行总结和探讨,为充分理解和利用神经血管耦合在骨修复中的功能提供新视角,为骨修复策略的研究及临床治疗提供新的思路。

关键词：神经血管耦合骨修复骨内神经骨组织工程

Wnt信号通路与自身免疫调节因子共同参与胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化

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中国组织工程研究 2024年第13期28卷 1996-2001页

作者：文廷浩李远迪何可可宋雯茜王先斌高杰苏敏胡蓉贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州省贵阳市550025 贵州医科大学转化医学研究中心贵州省贵阳市550025 贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州省贵阳市550025

背景:自身免疫调节因子(autoimmune regulator gene,Aire)及Wnt信号通路在小鼠胚胎干细胞多能性的维持及分化中都发挥着重要作用,但Wnt信号与Aire是否参与了小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化尚未可知。目的:探讨Wnt信号通路和自身... 详细信息

背景:自身免疫调节因子(autoimmune regulator gene,Aire)及Wnt信号通路在小鼠胚胎干细胞多能性的维持及分化中都发挥着重要作用,但Wnt信号与Aire是否参与了小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化尚未可知。目的:探讨Wnt信号通路和自身免疫调节因子与胚胎干细胞分化的关系。方法:采用两步分化方法定向诱导小鼠胚胎干细胞分化为内胚层再分化为胸腺上皮祖细胞,然后用Aire shRNA慢病毒感染小鼠胚胎干细胞,嘌呤霉素筛选单克隆稳定株,再采用两步分化方法进行诱导分化,分别于定向诱导分化第0,3,10天,采用细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot、Real-Time qPCR检测相关基因及蛋白的表达变化。结果与结论:①定向诱导分化第0天,免疫荧光染色显示SSEA1、OCT4表达呈阳性;②定向诱导分化第3天,免疫荧光染色显示SOX17、FOXA2表达呈双阳性;③定向诱导分化第10天,流式细胞术结果显示EPCAM1、K5、K8表达呈阳性;④与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达升高,Aire蛋白表达降低;⑤与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β及Aire mRNA表达升高;⑥与正常培养的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞相比,敲低Aire基因的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达水平降低。综上所述,Wnt信号通路和Aire共同参与了小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为小鼠胸腺上皮祖细胞的过程。

关键词： Wnt信号通路自身免疫调节因子胚胎干细胞胸腺上皮祖细胞内胚层细胞

血浆胞外囊泡源性circ0001874通过负向调控miR-515-5p介导胃癌MGC-803细胞免疫逃逸

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现代免疫学 2024年第3期44卷 256-263页

作者：刘昌化闫圣玉谢文彪单汉国彭肃南华大学衡阳医学院附属第二医院胃肠外科衡阳421001 南华大学衡阳医学院附属第二医院肛肠科衡阳421001

为探讨血浆胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)源性circ0001874对胃癌MGC-803细胞免疫逃逸的影响,收集89例胃癌患者癌组织及其癌旁组织,同时分离血液中的EV,并将circ0001874 siRNA干扰质粒、circ0001874过表达质粒及其相关阴性对照质... 详细信息

为探讨血浆胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)源性circ0001874对胃癌MGC-803细胞免疫逃逸的影响,收集89例胃癌患者癌组织及其癌旁组织,同时分离血液中的EV,并将circ0001874 siRNA干扰质粒、circ0001874过表达质粒及其相关阴性对照质粒转染至EV中,采用qRT-PCR检测circ0001874和miR-515-5p的表达水平。将miR-515-5p inhibitor及其阴性对照NC inhibitor转染至MGC-803细胞,再分别与EV共培养48 h,采用qRT-PCR检测各组细胞中circ0001874和miR-515-5p的表达水平,MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组细胞侵袭情况,Western blotting检测各组肿瘤细胞参与免疫逃逸的蛋白[凋亡相关因子配体(factor related apoptosis ligand,FasL)、吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)、PD-L2和PD-L1]表达水平。结果显示,与癌旁组织比较,胃癌组织中circ0001874表达水平升高(P细胞中miR-515-5p表达水平升高,细胞增殖活性,细胞侵袭数量及免疫逃逸蛋白FasL、PD-L1、PD-L2和IDO1表达水平降低(P细胞增殖、侵袭及免疫逃逸的影响。该研究提示,血浆EV源性circ0001874通过靶向负调控miR-515-5p促进胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭及免疫逃逸。

关键词：胃癌胞外囊泡 circ0001874 微小RNA-515-5p 免疫逃逸