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国外医学（免疫学分册） 1991年第1期14卷 9-12页

作者：季明春周瑶玺南京医学院微生物学教研室

长期培养的骨髓基质细胞分泌一种独立的细胞因子,能促进前体B 细胞增殖,现统一命名为白细胞介素7(IL-7)。本文综述了近两年来IL-7的编码基因、基因产物和生物活性等方面的研究概况,并就其研究和应用前景作了展望。

关键词：白细胞介素编码基因基因产物

重组慢病毒表达载体介导HIV-1 Vpr蛋白调控KSHV潜伏感染的初探

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第12期30卷 1097-1104页

作者：贾雪梅王平秦娣卢春南京医科大学微生物学与免疫学系 210029

目的利用慢病毒载体系统包装含人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）病毒蛋白R（Vpr）的重组慢病毒,使之感染原发性渗出性淋巴瘤（PEL）细胞BCBL-1,并检测Vpr蛋白对细胞中卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）潜伏感染与裂解性复制的影响.方法从... 详细信息

目的利用慢病毒载体系统包装含人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）病毒蛋白R（Vpr）的重组慢病毒,使之感染原发性渗出性淋巴瘤（PEL）细胞BCBL-1,并检测Vpr蛋白对细胞中卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）潜伏感染与裂解性复制的影响.方法从实验室先前构建的重组真核表达质粒pCI-neo-Vpr中扩增出Vpr基因,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen载体中构建成重组慢病毒质粒pHAGE-Vpr,利用脂质体将其与包装质粒psPAX2及包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,荧光显微镜观察293T细胞中绿色荧光蛋白（GFP）的表达,293T细胞培养上清经0.45 μm滤器过滤后即获得重组病毒悬液.慢病毒系列稀释后感染293T细胞,荧光计数法测定病毒滴度,逆转录PCR（RT-PCR）检测Vpr基因在293T细胞中的转录.以感染复数（MOI）为1的病毒量感染靶细胞BCBL-1,荧光显微镜观察靶细胞中GFP的表达,并利用RT-PCR和和免疫印迹（Western blot）技术分别检测Vpr基因在靶细胞中的转录和表达情况,同时检测KSHV裂解期基因复制与转录激活子（Rta）mRNA转录及蛋白表达.结果经酶切鉴定、核酸序列测定和293T细胞中GFP表达证实成功包装了携带HIV-1Vpr基因的重组慢病毒,滴度为4×107TU/ml.重组慢病毒感染BCBL-1细胞后,细胞中有GFP表达,RT-PCR和Western blot均能够在相应位置检测到目的基因Vpr的条带,并且Vpr降低了KSHV RtamRNA转录及蛋白表达水平.结论重组慢病毒介导的HIV-1 Vpr蛋白过表达能够抑制KSHV裂解性复制、增强病毒的潜伏感染.

关键词：慢病毒病毒蛋白R 卡波济肉瘤相关疱疹病毒复制

用多粘菌素B消除巨噬细胞实验中污染的LPS的作用

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上海免疫学杂志 1994年第3期14卷 181-182页

作者：潘静波叶天星张泳吴玉梅上海铁道医学院微生物学与免疫学教研室第二军医大学免疫学教研室同济大学环境工程系

用多粘菌素Ｂ消除巨噬细胞实验中污染的ＬＰＳ的作用上海铁道医学院微生物学与免疫学教研室（上海２０００７０）潘静波，叶天星，张泳，吴玉梅众所周知，细菌脂多糖（ＬＰＳ）是巨噬细胞（Ｍｇ）的强有力的激活剂，微量的ＬＰＳ即可激... 详细信息

用多粘菌素Ｂ消除巨噬细胞实验中污染的ＬＰＳ的作用上海铁道医学院微生物学与免疫学教研室（上海２０００７０）潘静波，叶天星，张泳，吴玉梅众所周知，细菌脂多糖（ＬＰＳ）是巨噬细胞（Ｍｇ）的强有力的激活剂，微量的ＬＰＳ即可激活Ｍ＆。那么，在研究一些不含ＬＰＳ...

关键词：多粘菌素巨噬细胞污染 LPS

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艰难梭菌荚膜的研究

微生物学通报 1988年第4期 168-170页

作者：王思一张雪萍范子文刘功云史俊华张建琼南京铁道医学院微生物学教研室南京铁道医学院微生物学教研室南京

本文采用提取细菌荚膜多糖的三种方法,提取艰难梭菌(Clostridium difficile)的荚膜多糖,经鉴定证实,该菌荚膜是由多糖和蛋白质两种成份组成。这不仅证明该菌存在荚膜,而且为进一步研究该菌的生物学特性提供了有利条件。

关键词：艰难梭菌荚膜多糖蛋白聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳

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化学发光免疫测定及其应用

南京铁道医学院学报 1987年第2期 57-62页

作者：田卫华南京铁道医学院微生物学教研室

1977年以来,人们把发光试剂鲁米诺（lu-minol）通过重氮化反应或戊二醛作用,使其内部某一基团活化,再与免疫系统结合,从而建立了化学发光免疫测定法(chemiluminesce-nt immuncassay（CLIA）,它是继荧光免疫分析（FIA）、放射免疫分析（... 详细信息

1977年以来,人们把发光试剂鲁米诺（lu-minol）通过重氮化反应或戊二醛作用,使其内部某一基团活化,再与免疫系统结合,从而建立了化学发光免疫测定法(chemiluminesce-nt immuncassay（CLIA）,它是继荧光免疫分析（FIA）、放射免疫分析（RIA）和酶免疫分析（EIA）后建立起来的第四种免疫标记检验技术。由于它的独特优点,受到了广泛重视,发展迅速。本文着重介绍CLTA及其应用。一、CLTA的主要优点（一）灵敏度高:这是它的主要优点。GLIA是一种超微量分析法,一般可测到Pico-mole(10-12M/L)数量级,最高可达10-18

关键词：鲁米诺抗原抗体反应免疫性化学发光免疫测定 CLIA 整机灵敏度系统灵敏度光强发光强度

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一种简单快速灵敏的病毒空斑试验

南京铁道医学院学报 1985年第1期 86-90页

作者：孟继鸿张建峰南京铁道医学院微生物学教研室

本文报道了一种新的动物病毒空斑技术即不需预先制备细胞单层的“细胞单层速成法”病毒空斑试验。用24孔组织培养板,把Vero细胞和水泡性口炎病毒Indiana株同时加入培养孔,使细胞的贴壁和病毒的吸附、单层的形成和空斑的产生同时进行,获... 详细信息

本文报道了一种新的动物病毒空斑技术即不需预先制备细胞单层的“细胞单层速成法”病毒空斑试验。用24孔组织培养板,把Vero细胞和水泡性口炎病毒Indiana株同时加入培养孔,使细胞的贴壁和病毒的吸附、单层的形成和空斑的产生同时进行,获得满意的结果,经与Dulbecco的常规单层法病毒空斑试验进行对比研究表明此法具有:(1)简单快速,(2)重复性好,灵敏性高于Dulbecco法;(3)半微量,经济节约;(4)福尔马林·结晶紫固定染色,空斑清晰易数;(5)有可能用于更多的细胞病毒系统等优点。

关键词：病毒空斑细胞单层结晶紫染色半微量组织培养水泡性口炎病毒

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辅助噬菌体扩增与定量条件的研究

南京铁道医学院学报 1999年第1期18卷 13-15页

作者：张建琼张雪萍林陵韩光明单祥年南京铁道医学院微生物免疫学教研室南京铁道医学院生物学教研室

对辅助噬菌体扩增、定量及保存条件进行研究。结果显示：分区划线接种辅助噬菌体可获得分隔良好的噬斑；大肠杆菌ＸＬ１－ｂｌｕｅ易发生变异，单个菌落接种于１０ｍｌＳＢ培养基，经３７℃１７０ｒ·ｍｉｎ１振荡培养４～７ｈ之间的... 详细信息

对辅助噬菌体扩增、定量及保存条件进行研究。结果显示：分区划线接种辅助噬菌体可获得分隔良好的噬斑；大肠杆菌ＸＬ１－ｂｌｕｅ易发生变异，单个菌落接种于１０ｍｌＳＢ培养基，经３７℃１７０ｒ·ｍｉｎ１振荡培养４～７ｈ之间的细菌，应通过微量菌斑形成实验鉴定敏感性后，再用于测定辅助噬菌体滴度，均可形成分隔良好的噬斑，不必精确测定细菌ＯＤ６００值，该菌液４℃储存可使用１星期不影响结果。辅助噬菌体应保存于－２０℃。

关键词：辅助噬菌体滴度扩增 4℃保存定量菌斑细菌大肠杆菌变异

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难辨梭菌所致腹泻快速诊断的研究

东南大学学报（医学版） 1989年第3期18卷 1-6页

作者：刘功云史俊华王思一张雪萍范子文张建琼陆全南京铁道医学院微生物学教研室

采用 SPA 协同凝集试验(CoA 法)直接从抗生素相关性腹泻(antibioticassociated diarrhea,AAD)病人粪便中检测难辨菌的毒素,以达到快速诊断的目的。与厌氢培养法、细胞毒素试验、CIE、ELISA 作比较,CoA 法简便、快速、显示了较高的特异... 详细信息

采用 SPA 协同凝集试验(CoA 法)直接从抗生素相关性腹泻(antibioticassociated diarrhea,AAD)病人粪便中检测难辨菌的毒素,以达到快速诊断的目的。与厌氢培养法、细胞毒素试验、CIE、ELISA 作比较,CoA 法简便、快速、显示了较高的特异性和敏感性,并且不需要特殊设备,易于推广应用,是一种快速早期诊断抗生素相关性腹泻的有效方法。

关键词：难辨梭菌 SPA协同凝集试验腹泻诊断

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发光免疫技术和应用

微生物学免疫学译刊 1988年第3期 28-34页

作者：田卫华南京铁道医学院微生物学教研室

自然界中,生物发光现象甚为普遍。从单细胞的细菌到高等动物,乃至人都有发光现象,只是强弱不同而已。古人对这些早有一定认识。近廿多年来,已能用生物发光技术测定许多种物质,然而化学发光的研究要晚些。1928年重要的发光物质鲁米那（1u... 详细信息

自然界中,生物发光现象甚为普遍。从单细胞的细菌到高等动物,乃至人都有发光现象,只是强弱不同而已。古人对这些早有一定认识。近廿多年来,已能用生物发光技术测定许多种物质,然而化学发光的研究要晚些。1928年重要的发光物质鲁米那（1u-minol,3-氨基苯=甲酰肼）发现后,逐渐建立了化学发光测定法。自1977年以来,人们成功地把化学发光反应试剂（鲁米那、异鲁米那及其衍生物、邻苯三酚,过氧化物酶、荧光素酶等）通过重氮化反应或与戊二醛、混合酐、碳化二亚胺等作用,使发光剂反应试剂与免疫体系（抗原或抗体）共价偶联,从而建立了化学发光免疫测定法（Chemiluminessent immunoassay CL-IA）,它是继荧光免疫测定（FIA）,放射免疫测定（RIA）和酶免疫测定（EIA）后发展起来的第四种免疫标记技术,该技术不断被发展、完善和应用,目前已有成套仪器和检测药合供应。下面就CLIA的优点、原理和方法学及应用作简单介绍。

关键词：过氧化物酶抗体反应抗原化学发光邻苯三酚发光反应免疫性苯酚鲁米那苯巴比妥 CLIA

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轮状病毒细胞培养的若干研究

南京铁道医学院学报 1993年第2期12卷 65-70页

作者：孟继鸿张建琼林陵南京铁道医学院微生物学教研室

轮状病毒(RV)细胞培养问题迄今尚未完全解决。为此,我们从筛选RV 敏感细胞和改变 RV 培养条件入手研究,发现恒河猴胚肾传代细胞 Frhk-4对不同血清型的人和动物 RV 标准株敏感,感染后有明显 CPE。将刀豆素 A(Con A)加入营养液中,在细胞... 详细信息

轮状病毒(RV)细胞培养问题迄今尚未完全解决。为此,我们从筛选RV 敏感细胞和改变 RV 培养条件入手研究,发现恒河猴胚肾传代细胞 Frhk-4对不同血清型的人和动物 RV 标准株敏感,感染后有明显 CPE。将刀豆素 A(Con A)加入营养液中,在细胞生长过程中预处理细胞时,能显著增加 Wa 株的空斑数目和增殖滴度,加速 CPE 的发展,而用 Con A 预处理病毒、加入病毒接种液或加入凝胶覆盖物时,则明显抑制 Wa 株的空斑形成。此外,我们发现,Wa 株经细胞培养多次传代后,有变异株产生,所分离到的3个克隆株的基因图谱与原始 Wa 株有明显差异。对此,国内外均未见报道。

关键词：轮状病毒细胞培养