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阳离子抗菌肽溶血性的研究进展

药物生物技术 2016年第6期23卷 535-539页

作者：李绘春荣炜炜钱康英陈玉清南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室江苏南京210000

阳离子抗菌肽是一类小分子多肽,具有抗细菌、抗真菌、病毒等微生物感染以及杀伤恶性肿瘤细胞等多种生物学功能,具有发展为新型抗菌、抗癌药物的重要应用前景。然而,抗菌肽的溶血毒性仍然是阻碍抗菌肽应用的关键因素。该文主要从螺旋度... 详细信息

阳离子抗菌肽是一类小分子多肽,具有抗细菌、抗真菌、病毒等微生物感染以及杀伤恶性肿瘤细胞等多种生物学功能,具有发展为新型抗菌、抗癌药物的重要应用前景。然而,抗菌肽的溶血毒性仍然是阻碍抗菌肽应用的关键因素。该文主要从螺旋度、两亲性、疏水性、电荷等阳离子抗菌肽自身的结构参数以及膜脂、膜蛋白、糖分子等红细胞膜的结构组分两方面对抗菌肽溶血机制的研究进展进行了综述,并简述了降低溶血性的研究进展,期望能有助于设计治疗潜力的抗菌肽应用于临床。

关键词：阳离子抗菌肽溶血性结构参数红细胞细胞膜

靶向碱基切除修复途径以克服结直肠癌细胞中的阿霉素耐药性

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南京师大学报（自然科学版） 2023年第2期46卷 61-69页

作者：王源源印学晨董云菲刘洁郭志刚何凌峰南京师范大学生命科学学院江苏省分子与医学生物技术重点实验室江苏南京210023

结直肠癌(CRC)具有非常高的发病率和死亡率,成为全球第三大最常见的恶性肿瘤和第二大最致命的癌症.阿霉素作为化学治疗药物,多年来一直广泛应用于癌症临床治疗,但由于其耐药性和副作用,治疗效果较为有限.已有研究证明,在癌细胞中DNA修... 详细信息

结直肠癌(CRC)具有非常高的发病率和死亡率,成为全球第三大最常见的恶性肿瘤和第二大最致命的癌症.阿霉素作为化学治疗药物,多年来一直广泛应用于癌症临床治疗,但由于其耐药性和副作用,治疗效果较为有限.已有研究证明,在癌细胞中DNA修复能力会大大增强,这在很大程度上会使得癌细胞在化学治疗药物引起的DNA损伤中存活下来.Flap核酸内切酶1(FEN1)在各种类型的癌细胞中表达较高,并在DNA损伤修复中起着关键作用.研究表明,FEN1抑制剂SC13显著增强了阿霉素的治疗效果,这种联合治疗可以通过激活cyclinD-CDK4-6/INK4/Rb通路进而抑制结直肠癌的细胞增殖,故靶向FEN1可为阿霉素在临床使用中提供一种新的策略.

关键词： DNA修复 FEN1 阿霉素结直肠癌肿瘤治疗

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结构特异性核酸内切酶FEN1及其与肿瘤的关系

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南京师大学报（自然科学版） 2014年第2期37卷 7-14页

作者：周婷高婷婷孙洪芳潘飞燕何凌峰郭志刚南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室江苏南京210023

FEN1是一种结构特异性的多功能核酸酶,具有5'->3'flap核酸内切酶(FEN)、缺口核酸内切酶(GEN)和核酸外切酶(EXO)三大酶切活力.在细胞内,FEN1在多条DNA代谢途径中起着重要作用,包括冈崎片段成熟、长片段碱基切除修复和端粒维持等.鉴于FEN... 详细信息

FEN1是一种结构特异性的多功能核酸酶,具有5'->3'flap核酸内切酶(FEN)、缺口核酸内切酶(GEN)和核酸外切酶(EXO)三大酶切活力.在细胞内,FEN1在多条DNA代谢途径中起着重要作用,包括冈崎片段成熟、长片段碱基切除修复和端粒维持等.鉴于FEN1的复杂功能,细胞内必定存在着一套精确调控机制,以确保FEN1在合适的时间与地点发挥作用.FEN1功能失调将导致基因组的稳定性和完整性下降,最终诱发包括肿瘤在内的多种染色体相关的疾病.本文主要针对FEN1的功能调控、功能失调与肿瘤的关系做一个综述.

关键词： FEN1 DNA损伤修复肿瘤 FEN1

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镉对HEK 293细胞线粒体损伤作用

中国公共卫生 2008年第12期24卷 1531-1533页

作者：毛伟平张娜娜魏传静周雷冯娟刘洪云南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室南京210046

目的探讨线粒体在镉诱导人胚胎肾细胞(HEK293)凋亡中的作用。方法分离HEK293细胞的线粒体,采用分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔(MPTP)的开放程度;电镜观察线粒体的形态改变;荧光分光光度法测定线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS)含量... 详细信息

目的探讨线粒体在镉诱导人胚胎肾细胞(HEK293)凋亡中的作用。方法分离HEK293细胞的线粒体,采用分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔(MPTP)的开放程度;电镜观察线粒体的形态改变;荧光分光光度法测定线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS)含量的变化;ATP酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)含量的测定。结果随着CdCl2浓度的增加,MPTP开放程度增加,并且这种增加能被MPTP特异性的抑制剂环孢素A(CsA)所抑制。电镜观察发现线粒体染镉后肿胀变形;中、高浓度CdCl2处理组线粒体膜电位都显著下降(P<0.05),ROS含量也显著增加(P<0.05和P<0.01)。在高浓度组,Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性下降,MDA含量随CdCl2处理浓度增高而增加,LDH、SOD、GSH-Px活性随CdCl2处理浓度增高而下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论CdCl2破坏线粒体结构,引起MPTP的开放,MMP的降低,ROS含量增加,引起多种与凋亡相关的应激性损伤的发生。

关键词：氯化镉线粒体膜通透性转运孔(MPTP) 线粒体膜电位活性氧凋亡

抗菌抗癌肽CM4N在大肠杆菌中的融合表达与活性鉴定

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药物生物技术 2008年第3期15卷 161-165页

作者：陈玉清秋雯焦波张杰张双全南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室江苏南京210046

为探讨内含肽intein在抗菌肽表达与纯化中的应用,采用递归PCR法合成CM4末端添加Asn的基因CM4N,克隆至***表达载体pTYB11中,构建了与intein的C端融合的表达载体pTYB11-CM4N。重组质粒转化至***21(DE3)中进行IPTG诱导表达,融合蛋白intein-... 详细信息

为探讨内含肽intein在抗菌肽表达与纯化中的应用,采用递归PCR法合成CM4末端添加Asn的基因CM4N,克隆至***表达载体pTYB11中,构建了与intein的C端融合的表达载体pTYB11-CM4N。重组质粒转化至***21(DE3)中进行IPTG诱导表达,融合蛋白intein-CM4N主要以可溶形式存在于胞内。利用载体中intein中的chitin结合域,将融合蛋白通过chitin亲和层析一步纯化,经DTT诱导intein的自我切割活性,实现CM4N在亲和柱上的切割与分离,透析冻干后得到了纯度95%以上的重组CM4N。活性检测结果显示,重组CM4N具有抗大肠杆菌、沙门氏菌和K562肿瘤细胞的活性。研究认为,内含肽在抗菌肽的基因工程中可能具有重要的应用前景。

关键词：抗菌肽CM4 原核表达 intein融合活性

前列腺癌细胞中多烯紫杉醇下调Smad3不依赖TGF-β1信号

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南京师大学报（自然科学版） 2016年第3期39卷 89-95页

作者：皮玉瑞李同辉陈秀彬刘平卢山南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室江苏南京210023

多烯紫杉醇(Docetaxel,DOC)来源于欧洲红豆杉针叶,作为紫杉烷类抗癌药物,已被广泛应用于多种癌症临床治疗中,但相关机理还有很多不清楚的地方.本研究主要通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹实验(Western blot)等方法观察有... 详细信息

多烯紫杉醇(Docetaxel,DOC)来源于欧洲红豆杉针叶,作为紫杉烷类抗癌药物,已被广泛应用于多种癌症临床治疗中,但相关机理还有很多不清楚的地方.本研究主要通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹实验(Western blot)等方法观察有TGF-b信号存在的前列腺癌细胞PC-3中DOC对Smad3表达水平的调控作用,再利用TGF-b RII缺失的前列腺癌细胞LNCa P来探讨不依赖TGF-b1信号时DOC对细胞生长、Smad3表达的影响及其分子机制.结果发现DOC不仅能以时间和浓度依赖方式下调PC-3细胞中Smad3的m RNA和蛋白表达水平,也能在LNCa P细胞中选择性地降低Smad3表达水平和抑制细胞生长,还能减少几乎不含TGF-b1的PC-3细胞中Smad3表达水平.同时,两种细胞中Stat1表达水平均受到DOC显著抑制,而且,Stat1和Smad3能相互结合形成复合体.进一步分析Smad3核心启动子区域也预测存在5个Stat1结合位点.这些结果说明DOC下调Smad3不依赖于TGF-b1信号通路,且可能是通过调控Stat1在Smad3启动子内的结合来作用.

关键词：多烯紫杉醇 Smad3 前列腺癌下调

蜂毒肽Melittin对小鼠红细胞溶血效应及影响机制分析

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南京师大学报（自然科学版） 2015年第2期38卷 86-92页

作者：石伟李彩云陈玉清南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室江苏南京210023

蜂毒肽Melittin是一种具有高效抗细菌、真菌、肿瘤细胞等多种生物学活性的抗菌肽,然而其溶血活性限制了其发展为高效抗菌抗癌药物的应用.本文深入分析了Melittin对小鼠红细胞的作用机制,探讨影响Melittin溶血活性的细胞机制.结果表明,Me... 详细信息

蜂毒肽Melittin是一种具有高效抗细菌、真菌、肿瘤细胞等多种生物学活性的抗菌肽,然而其溶血活性限制了其发展为高效抗菌抗癌药物的应用.本文深入分析了Melittin对小鼠红细胞的作用机制,探讨影响Melittin溶血活性的细胞机制.结果表明,Melittin可以引起红细胞膜上形成空洞,抑制细胞内ATPase的活性.红细胞膜中糖蛋白或糖脂糖链中的唾液酸参与Melittin的相互作用,介导Melittin的溶血活性.质膜胆固醇也影响Melittin与红细胞膜相互作用,降低溶血活性.研究还发现,外源添加D-葡萄糖和D-蔗糖能显著抑制Melittin的溶血活性.研究结果为降低抗菌肽溶血性以及推动抗菌肽的药物应用提供了重要理论基础.

关键词：蜂毒肽溶血性唾液酸碳水化合物胆固醇

血管紧张素Ⅱ诱导小鼠心肌肥大差异表达蛋白的鉴定与分析

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南京师大学报（自然科学版） 2018年第3期41卷 78-84页

作者：冯梦朱欣然郑盈盈张朝张茵南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室江苏南京210023

采用蛋白质组学方法研究血管紧张素(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导小鼠心肌肥大模型中心脏蛋白差异表达的变化情况并探讨其病理生理学意义.构建AngⅡ诱导的小鼠心肌肥大模型,提取小鼠的心脏蛋白,采用双向电泳技术分离差异表达的蛋白,凝胶考... 详细信息

采用蛋白质组学方法研究血管紧张素(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导小鼠心肌肥大模型中心脏蛋白差异表达的变化情况并探讨其病理生理学意义.构建AngⅡ诱导的小鼠心肌肥大模型,提取小鼠的心脏蛋白,采用双向电泳技术分离差异表达的蛋白,凝胶考染后切取差异蛋白点进行质谱检测(MALDI-TOF)分析,获取的数据采用Mascot软件在NCBInr数据库内检索.结果发现AngⅡ模型组小鼠心脏蛋白图谱中有34个蛋白点表达量与对照组有显著差异,质谱鉴定出14种差异表达的蛋白,其中高表达的蛋白有2个,低表达的蛋白有12个.AngⅡ诱导小鼠心肌肥大模型中表达有差异的蛋白主要与能量代谢、氧化应激和细胞骨架有关.

关键词：心肌肥大蛋白质组学线粒体能量代谢

细胞膜去极化通过激活MAPK信号通路促进原代肌母细胞增殖

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南京师大学报（自然科学版） 2020年第1期43卷 100-106页

作者：郑丽蓉许艳华曾卫卫陈宇琛范春娥陈华群南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室江苏南京210023

细胞膜去极化可促进某些细胞包括肌卫星细胞的增殖,但去极化对于肌母细胞的作用还不清楚.本文通过培养基中高浓度的钾离子(K^+)引发小鼠原代肌母细胞膜的去极化,采用直接计数法评估细胞的增殖能力.结果显示,在K^+浓度为25 mmol/L的培养... 详细信息

细胞膜去极化可促进某些细胞包括肌卫星细胞的增殖,但去极化对于肌母细胞的作用还不清楚.本文通过培养基中高浓度的钾离子(K^+)引发小鼠原代肌母细胞膜的去极化,采用直接计数法评估细胞的增殖能力.结果显示,在K^+浓度为25 mmol/L的培养基中培养24 h后,肌母细胞数量较常规培养基(5 mmol/L K^+)明显增加,但K^+高至50 mmol/L和100 mmol/L时对细胞增殖没有促进作用.通过流式细胞技术进行细胞周期分析显示,25 mmol/L K^+处理使G1期的细胞数量减少,S期的细胞数量增加.免疫荧光染色和Western blot研究发现,25 mmol/L K^+处理后,对肌母细胞的肌分化能力没有影响.进一步研究发现,25 mmol/L K^+明显促进了肌母细胞MAPK信号通路(ERK1/2)的激活,并与其促进细胞增殖的效应相关.MEK1/ERK1/2的两种抑制剂U0126和PD98059均可减弱细胞膜去极化引起的细胞增殖促进效应.综上,研究结果表明细胞膜去极化通过激活MAPK通路促进小鼠原代肌母细胞的增殖.

关键词：去极化肌母细胞细胞增殖 MAPK信号通路