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基于FRET原理的TEV酶活性检测方法的探索

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药物生物技术 2024年第1期31卷 1-8页

作者：王婧瑶祝佳慧续敏王盛李家璜华子春中国药科大学生物药物学院江苏南京211198 南京大学生命科学学院江苏南京210023 江苏省产业技术研究院医药生物技术研究所/常州南京大学高新技术研究院江苏常州213164 南京吉芮康生物科技研究院江苏南京210032

文章开发了一种基于荧光蛋白的FRET检测技术,探索其在研究TEV蛋白酶活性等方面的应用。在青色荧光蛋白(Cerulean)和黄色荧光蛋白(Citrine)之间插入TEV酶特异性识别位点,构建基于FRET原理的重组底物。在细菌内、外两个体系中,通过酶切前... 详细信息

文章开发了一种基于荧光蛋白的FRET检测技术,探索其在研究TEV蛋白酶活性等方面的应用。在青色荧光蛋白(Cerulean)和黄色荧光蛋白(Citrine)之间插入TEV酶特异性识别位点,构建基于FRET原理的重组底物。在细菌内、外两个体系中,通过酶切前后SDS-PAGE分析及底物荧光强度的变化,对TEV蛋白酶活性的差异进行表征,以此验证该方法的可行性。随着酶含量的增加,基于FRET原理的底物被切割效果明显增强。且在细菌内、细菌外两个体系中,阳性对照均显示出更低的荧光强度。蛋白酶类FRET底物可以在细菌内和细菌外完成对野生型TEV酶及变体的酶活比较,揭示了其在酶活检测以及筛选方面的应用前景,并为进一步开发其他蛋白酶活性检测技术提供了参考和借鉴。

关键词： TEV酶荧光共振能量转移技术(FRET) 重组蛋白蛋白表达与纯化青色荧光蛋白黄色荧光蛋白

基于结构计算设计提高费氏弧菌LuxR蛋白转录激活能力的策略

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药物生物技术 2024年第3期31卷 221-227页

作者：徐依聪李家璜华子春中国药科大学生物药物学院江苏南京211198 南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室江苏南京210033 常州南京大学高新技术研究院江苏省产业技术研究院医药生物技术研究所江苏常州213164 江苏省生物化学与分子生物学学会江苏南京210019 南京吉芮康生物科技研究院江苏南京211899

采用理性设计策略提高费氏弧菌转录因子LuxR蛋白的转录激活能力。利用蛋白质建模和分子对接方法构建了LuxR同源二聚体-3-oxo-C6-HSL复合物,进一步采用分子动力学模拟并进行结合自由能分析,寻找影响LuxR活性的潜在突变位点,最终借助虚拟... 详细信息

采用理性设计策略提高费氏弧菌转录因子LuxR蛋白的转录激活能力。利用蛋白质建模和分子对接方法构建了LuxR同源二聚体-3-oxo-C6-HSL复合物,进一步采用分子动力学模拟并进行结合自由能分析,寻找影响LuxR活性的潜在突变位点,最终借助虚拟饱和突变筛选有利突变体,并通过构建LuxR突变质粒验证突变体的转录激活能力。研究结果显示,Ser54对LuxR二聚化有重要影响,而虚拟饱和突变提示S54L、S54F、S54W与S54Y 4个突变能够提升LuxR二聚体的稳定性,这可能有助于提升其转录激活能力;实验验证发现当3-oxo-C6-HSL的浓度为10^(-5)mol/L时,S54W和S54L能够将LuxR的活性提高至WT的1.4倍。成功利用计算机辅助设计技术筛选出高活性LuxR突变体,为LuxR蛋白家族以及其他二聚体蛋白的改造提供新思路。

关键词： LuxR蛋白理性设计分子动力学模拟结合自由能虚拟饱和突变定点突变

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沙门氏菌介导的肿瘤靶向治疗研究进展

药学学报 2024年第1期59卷 17-24页

作者：吕昭睿李东仪朱宇阳黄荷淇李浩楠华子春中国药科大学生物药物学院江苏南京211198 南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室江苏南京210023 南京吉芮康生物科技研究院江苏南京210032

沙门氏菌用于肿瘤治疗是近年来新兴的一种肿瘤靶向治疗策略,因其良好的肿瘤靶向性和一定的安全性而受到人们的关注。为了进一步优化其治疗效果,科学家们尝试对沙门氏菌进行改造,包括对其进行减毒改造以及利用其荷载药物等。本文对沙门... 详细信息

沙门氏菌用于肿瘤治疗是近年来新兴的一种肿瘤靶向治疗策略,因其良好的肿瘤靶向性和一定的安全性而受到人们的关注。为了进一步优化其治疗效果,科学家们尝试对沙门氏菌进行改造,包括对其进行减毒改造以及利用其荷载药物等。本文对沙门氏菌靶向治疗肿瘤的机制和研究进展进行了总结,并介绍了对其进行改造优化的策略和相关进展,同时对沙门氏菌治疗肿瘤的优势、目前面临的问题及未来发展方向进行了分析,以期为该领域的后续研究提供思路。

关键词：沙门氏菌肿瘤靶向治疗减毒溶瘤细菌

瓜蒌皮提取物对冠心病模型大鼠胆汁酸代谢的影响

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中国中药杂志 2024年第16期49卷 4488-4498页

作者：夏凯柔张潇予赵雨姗魏浩郭盛张黄琴刘培南京中医药大学、江苏省方剂高技术研究重点实验室江苏省中药资源产业化过程协同创新中、心中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学第三临床医学院江苏省中医药研究院江苏南京210028

基于冠心病(CHD)大鼠模型和代谢组学探讨瓜蒌皮改善CHD的潜在作用机制。采用高脂饮食结合盐酸异丙肾上腺素(ISO)皮下注射复制CHD大鼠模型,比较瓜蒌皮给药后模型动物血清中乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶MB(CK-... 详细信息

基于冠心病(CHD)大鼠模型和代谢组学探讨瓜蒌皮改善CHD的潜在作用机制。采用高脂饮食结合盐酸异丙肾上腺素(ISO)皮下注射复制CHD大鼠模型,比较瓜蒌皮给药后模型动物血清中乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、肌酸激酶(CK)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)的水平及心脏病理变化,通过LTQ-Orbitrap-MS结合主成分分析研究瓜蒌皮对CHD大鼠粪便中内源性代谢产物的影响,并应用HMDB数据库及MetaboAnalyst在线通路富集工具进行生物标志物的鉴定和代谢通路富集分析。进一步检测不同组别大鼠粪便和血清中胆汁酸的含量。结果显示,与空白组比较,CHD大鼠血清中心肌损伤标志物(CK、LDH、cTnⅠ、CK-MB)和炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、hs-CRP)均显著上升,瓜蒌皮提取物给药后可显著改善CHD大鼠的心肌损伤和炎性浸润。非靶向代谢组学分析筛选出初级胆汁酸生物合成代谢通路。胆汁酸靶向代谢组学表明CHD大鼠粪便中总胆汁酸、初级胆汁酸、次级胆汁酸、游离胆汁酸水平显著低于正常大鼠,瓜蒌皮提取物能显著提高总胆汁酸、初级胆汁酸和游离胆汁酸的粪便排泄。CHD大鼠血清中总胆汁酸、初级胆汁酸、次级胆汁酸、游离胆汁酸水平显著高于正常大鼠,瓜蒌皮提取物能显著降低血液循环中总胆汁酸、初级胆汁酸、次级胆汁酸和游离胆汁酸的水平。增加胆汁酸粪便排泄和降低血液循环胆汁酸水平有助于改善CHD,维持适当的胆汁酸代谢是瓜蒌皮改善CHD的作用机制之一。

关键词：瓜蒌皮宽胸散结冠心病代谢组学胆汁酸代谢

甘肃陇南不同品种油橄榄叶化学成分系统表征及抗氧化活性研究

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中国油脂 2024年

作者：赵强宏邹诚王文亮王惠明瞿城陇南市经济林研究院油橄榄研究所南京中医药大学药学院陇南市经济林研究院

甘肃陇南是我国主要的油橄榄种植基地，加工副产物油橄榄叶生物资源量丰富。为了更好地开发利用油橄榄叶，采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱和超高效液相色谱-三重四极杆/复合线性离子阱质谱分析技术定性定量分析甘肃陇南不同品... 详细信息

甘肃陇南是我国主要的油橄榄种植基地，加工副产物油橄榄叶生物资源量丰富。为了更好地开发利用油橄榄叶，采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱和超高效液相色谱-三重四极杆/复合线性离子阱质谱分析技术定性定量分析甘肃陇南不同品种油橄榄叶提取物中化学成分，整合体外抗氧化活性初步评价甘肃陇南不同品种油橄榄叶药用价值。结果表明，从甘肃陇南油橄榄叶提取物中主要鉴定了73个化学成分，其中萜类成分39个，黄酮类15个，苯乙醇类7个，挥发油类5个，脂肪酸类2个，苯甲酸类1个，苯丙素类1个，其他类3个。不同品种27批油橄榄叶提取物中的11种主要成分总含量存在一定差异，陇南武都和礼县的油橄榄叶提取物总含量分别为1351.49 μg/g～2942.01 μg/g和925.96 μg/g～2617.04 μg/g；其中，木犀草素-7-O-芸香糖苷、女贞苷、木犀草苷、野漆树苷含量在不同品种油橄榄叶提取物中含量较高。整体上，陇南礼县的油橄榄叶提取物抗氧化活性强于陇南武都，阿尔波萨钠和陇育1号抗氧化活性相对较优，通过系统表征甘肃陇南油橄榄叶中化学成分物质组，揭示了不同来源油橄榄叶提取物之间的含量差异，为后续油橄榄叶提取物的质量控制和产品开发奠定了理论基础。

关键词：油橄榄叶化学成分定性定量黄酮类成分抗氧化

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丹参药渣木质素降解菌的分离及酶学特性

生物技术通报 2024年

作者：杨秉乾恽辰珂常思源郭盛张森南京中医药大学江苏省中药资源产业化过程协同创新中心南京科技职业学院江苏省生物基平台化合物催化工程技术研究开发中心

【目的】筛选可降解丹参（Salvia miltiorrhiza）药渣木质素的菌株并探究其酶学特性，以筛得菌株降解丹参药渣木质素以提高纤维素的酶解效率。【方法】以丹参药渣表面自然生长的菌株为筛菌来源，通过碱性木素培养基和愈创木酚培养基进... 详细信息

【目的】筛选可降解丹参（Salvia miltiorrhiza）药渣木质素的菌株并探究其酶学特性，以筛得菌株降解丹参药渣木质素以提高纤维素的酶解效率。【方法】以丹参药渣表面自然生长的菌株为筛菌来源，通过碱性木素培养基和愈创木酚培养基进行初筛和复筛，利用添加丹参药渣的培养基验证产酶能力，优选产漆酶菌株。通过ITS序列分析对菌株进行鉴定。对分离菌株漆酶酶学特性进行研究。采用NREL法测定木质纤维素含量，利用商业纤维素酶探究酶解效果。【结果】筛选出一株产漆酶且耐受丹参药渣的真菌MY-5，经ITS序列鉴定为猬木霉（Trichoderma erinaceum）。对漆酶酶学性质进行考察，漆酶最适反应温度为50℃，60℃下保温24 h后酶活保持在85.3%,4℃低温贮藏25 d酶活保持在80.7%；最适pH为5，在pH 4-8时保温24 h活性保持在90%以上；添加Cu2+、Mg2+和香兰素提高了漆酶活性，其中5 mmol/L Cu2+提高至1.68倍；添加4%丹参药渣保温24 h后漆酶仍能保持90.6%的酶活。液态发酵20 d后丹参药渣木质素的降解率达到了36.3%，葡萄糖产量和最大产率分别提高了62.6%和81.0%。【结论】筛选得一株产漆酶菌株猬木霉MY-5，其漆酶热稳定性、低温贮藏稳定性、pH稳定性及丹参药渣耐受性良好，可以有效降解丹参药渣木质素，提高纤维素的酶解效率。

关键词：丹参药渣猬木霉漆酶酶学特性木质素降解

药用植物资源多糖类成分相对分子质量与其功效关联性的分析与展望

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中国中药杂志 2024年第5期49卷 1186-1195页

作者：姚安妮汤燕罗大英李张涵杨正兰王珺姝包纯洁段嘉伦南京中医药大学中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程中心江苏省中药资源产业化过程协同创新中心江苏省方剂高技术研究重点实验室江苏南京210023 南京中医院大学医学院·整合医学学院江苏南京210023

药用植物多糖是从药用植物中提取得到的一种高分子多聚物。从结构上看,它是由不同单糖以糖苷键形式连接形成的复杂长链,一般具有直链和支链结构,且相对分子质量变化幅度较大。现代研究显示,药用植物资源多糖类成分的生物活性与其相对分... 详细信息

药用植物多糖是从药用植物中提取得到的一种高分子多聚物。从结构上看,它是由不同单糖以糖苷键形式连接形成的复杂长链,一般具有直链和支链结构,且相对分子质量变化幅度较大。现代研究显示,药用植物资源多糖类成分的生物活性与其相对分子质量大小密切相关。该研究梳理了不同相对分子质量药用植物资源多糖类成分的制备途径和检测方法,总结并分析了不同相对分子质量药用植物多糖功效与其相对分子质量关联性的一般经验。作者认为高相对分子质量多糖(>100 kDa)主要在免疫调节方面起主导作用;中等相对分子质量多糖(10~100 kDa)在免疫调节、保护肝脏等方面起主导作用;低相对分子质量多糖(生物活性与应用价值。

关键词：药用植物资源多糖相对分子质量功效关联性

基于GC-MS代谢组学的牛黄解毒片配伍减毒机制研究

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南京中医药大学学报 2024年第8期40卷 823-830页

作者：马袁静许伟辰单进军李永明吴骁南京中医药大学医学院江苏南京210023 南京中医药大学药学院江苏省方剂研究重点实验室/江苏省方剂高技术研究重点实验室/中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心/江苏省中药资源产业化过程协同创新中心江苏南京210023

目的采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)的代谢组学技术探讨牛黄解毒片复方配伍的减毒作用及机制。方法将24只小鼠随机分为空白组、雄黄组(1.0 g·kg^(-1))和牛黄解毒片组(7.8 g·kg^(-1)),每组8只,连续口服给药14 d,采集各组小鼠的肝脏和肾... 详细信息

目的采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)的代谢组学技术探讨牛黄解毒片复方配伍的减毒作用及机制。方法将24只小鼠随机分为空白组、雄黄组(1.0 g·kg^(-1))和牛黄解毒片组(7.8 g·kg^(-1)),每组8只,连续口服给药14 d,采集各组小鼠的肝脏和肾脏,观察病理形态学变化;测定肝脏中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肾脏中肌酐(Cr)、尿酸(UA)的含量;GC-MS代谢组学分析肝脏和肾脏中内源性代谢物的差异。结果与雄黄组比较,牛黄解毒片组小鼠肝脏中ALT、AST和肾脏中Cr、UA含量发生显著变化(P生物标志物,涉及谷氨酰胺和谷氨酸代谢、精氨酸的生物合成、色氨酸代谢、酪氨酸和色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢等通路。结论牛黄解毒片复方配伍降低了雄黄的肝肾毒性,减毒作用可能与回调氨基酸代谢有关。

关键词：雄黄牛黄解毒片配伍减毒代谢组学气相色谱-质谱联用氨基酸代谢

中药活性成分作为药物递送纳米载体的研究进展

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中草药 2024年第16期55卷 5678-5691页

作者：韩静包纯洁段嘉伦南京中医药大学中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程中心江苏省中药资源产业化过程协同创新中心江苏省方剂高技术研究重点实验室江苏南京210023 南京中医药大学医学院江苏南京210023

随着对中药药效物质研究的不断深入,萜类、生物碱类、黄酮类、醌类、多糖等中药活性成分不仅具备显著的药理活性,而且展现出作为药物递送纳米载体的潜能。这些成分可以通过自组装、共组装或人工合成等形成胶束、聚合物、脂质体、纳米粒... 详细信息

随着对中药药效物质研究的不断深入,萜类、生物碱类、黄酮类、醌类、多糖等中药活性成分不仅具备显著的药理活性,而且展现出作为药物递送纳米载体的潜能。这些成分可以通过自组装、共组装或人工合成等形成胶束、聚合物、脂质体、纳米粒、水凝胶、乳液等多种药物递送纳米载体,从而提高药效、改善药性、实现药物共递释、减少不良反应。通过对近年来中药活性成分作为纳米载体材料在药物递送系统中的应用进行总结,分析了这些化合物形成药物递送纳米载体的机制,并展望了中药活性成分作为纳米载体材料在药物递送系统领域的发展潜力。有助于为中药活性成分实现“药辅合一”开辟新的研究方向,为中药现代化提供新的研究热点。

关键词：中药活性成分药物递送纳米载体药辅合一自组装中药制剂甘草酸人参皂苷喜树碱葛根素白及多糖