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光固化水凝胶负载骨髓间充质干细胞修复大鼠颅骨缺损

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口腔疾病防治 2024年第5期32卷 330-340页

作者：丁梦李强李筱叶贺敖戴卓董衡牟永斌南京大学医学院附属口腔医院南京市口腔医院南京大学口腔医学研究所江苏南京210008

目的探讨新型甲基丙烯酸酐化明胶(gelatin methacryloyl,GelMA)/骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)复合水凝胶应用于大鼠颅骨缺损区的成骨性能,为骨再生生物材料的应用提供实验依据。方法本研究经南京大学动... 详细信息

目的探讨新型甲基丙烯酸酐化明胶(gelatin methacryloyl,GelMA)/骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)复合水凝胶应用于大鼠颅骨缺损区的成骨性能,为骨再生生物材料的应用提供实验依据。方法本研究经南京大学动物伦理委员会批准。通过组合光引发剂苯基(2,4,6-三甲基苯甲酰基)磷酸锂[lthium phenyl(2,4,6-trimethylbenzoyl)phosphinate,LAP]、GelMA、BMSCs构建光固化复合生物水凝胶GelMA/BMSCs,扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)和能量色散X射线光谱仪(energy disper-sive X-ray spectroscopy,EDX)检测GelMA凝胶表面微观形态及元素构成,电子万能试验机测试凝胶压缩强度。将GelMA/BMSCs水凝胶在体外培养1、2、5 d后,通过CCK-8检测水凝胶包封的BMSCs细胞增殖活性,利用共聚焦显微成像技术观察其存活情况和细胞形态;在大鼠颅骨制备5 mm临界骨缺模型,经复合水凝胶治疗的为GelMA/BMSCs组,不做任何处理的为对照组。分别于术后第4、8周拍摄Micro-CT测算骨缺损面积和新生骨指标,第8周处死大鼠取缺损区颅骨样本进行H&E染色、Van Gieson染色和Goldner染色评价新生骨的质量。结果SEM观察到固化的GelMA内部呈现3D海绵状大孔凝胶网络,大孔形貌均匀,孔隙率为73.41%,孔径为(28.75±7.13)μm;EDX结果显示C和O均匀分布在水凝胶的网状大孔结构上;水凝胶压缩强度为152 kPa,GelMA/BMSCs培养第5天,镜下细胞形态铺展,从卵圆形变为梭形,CCK-8检测结果显示细胞增殖159.4%。术后第4周,Micro-CT三维重建图像显示对照组的骨缺损范围未见明显缩小,GelMA/BMSCs组骨缺损内部可见大量新骨生成;术后第8周,对照组骨缺损仍无明显变化,仅可见少量新生骨,GelMA/BMSCs组颅骨缺损基本愈合;第4周与第8周的定量分析发现,GelMA/BMSCs组大鼠颅骨缺损处新生骨量(new bone vol-ume,BV)、骨体积分数(new bone volume/total bone volume,BV/TV)、骨表面积(bone surface,BS)、骨表面积组织体积比(bone surface/total bone volume,BS/TV)均优于对照组(P<0.05)。第8周组织学染色结果显示GelMA/BMSCs组骨缺损处形成连续且致密的骨组织,而对照组仅在缺损边缘可见少量不连续新骨生成,缺损处主要为纤维结缔组织。结论光固化水凝胶的干细胞疗法具有良好生物安全性,在诱导大鼠颅骨缺损区新骨形成的同时促进骨成熟,具有潜在的临床转化前景。

关键词：骨缺损骨组织工程支架水凝胶 GelMA水凝胶骨髓间充质干细胞干细胞疗法光固化骨再生骨修复

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直接胰管镜下活检及胰管内射频消融诊治混合型胰腺导管内乳头状黏液瘤1例(含视频)

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中华消化内镜杂志 2024年第1期41卷 68-70页

作者：李豪君汤蓓刘风展薇李雯吕瑛王雷沈珊珊南京大学医学院附属鼓楼医院消化科南京210008

不能耐受或拒绝外科手术的主胰管型/混合型胰腺导管内乳头状黏液瘤(intraductal papillary mucinous neoplasm,IPMN)目前缺乏有效的治疗方式。报道一例既往未确诊病因的复发性胰腺炎患者,经直接胰管镜观察及活检确诊混合型IPMN,并进行... 详细信息

不能耐受或拒绝外科手术的主胰管型/混合型胰腺导管内乳头状黏液瘤(intraductal papillary mucinous neoplasm,IPMN)目前缺乏有效的治疗方式。报道一例既往未确诊病因的复发性胰腺炎患者,经直接胰管镜观察及活检确诊混合型IPMN,并进行多次胰管内射频消融姑息性治疗,术后随访20个月,未再发胰腺炎,疾病较前无进展。直接胰管镜下活检及胰管内射频消融治疗作为IPMN的姑息性内镜治疗方式存在巨大的潜在价值。

关键词：胰腺导管内肿瘤胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤直接胰管镜射频消融

经皮联合经直肠全覆膜自膨式金属支架置入治疗胰腺感染性坏死1例(含视频)

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中华消化内镜杂志 2024年第2期41卷 152-154页

作者：刘明东沈永华朱浩窦晓坛王雷南京大学医学院附属鼓楼医院消化科南京210008

胰腺感染性坏死是急性胰腺炎后期重要的死亡原因,各种形式的引流和清创是治疗的关键措施。目前超声内镜引导下经胃壁置入金属支架已广泛应用,远离胃壁时则需要联合经皮穿刺引流。采用经皮联合经直肠置入全覆膜自膨式金属支架的方法成功... 详细信息

胰腺感染性坏死是急性胰腺炎后期重要的死亡原因,各种形式的引流和清创是治疗的关键措施。目前超声内镜引导下经胃壁置入金属支架已广泛应用,远离胃壁时则需要联合经皮穿刺引流。采用经皮联合经直肠置入全覆膜自膨式金属支架的方法成功治愈1例胰腺感染性坏死,为拓展胰腺感染性坏死的内镜介入途径做出了全新的尝试。

关键词：支架胰腺炎,急性坏死性经皮联合经直肠途径

注水内镜黏膜切除术对比传统内镜黏膜切除术的研究进展

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中华消化内镜杂志 2024年第4期41卷 323-327页

作者：赵贝王运荣吴欣荣孙文琦窦晓坛邹晓平王雷陈敏南京大学医学院附属鼓楼医院消化科南京210008

结直肠息肉是发生结直肠癌的高危因素,早期息肉切除是预防结直肠癌的重要干预措施。内镜黏膜切除术(endoscopic mucosal resection,EMR)是常规切除结直肠息肉的方法。目前常用的传统内镜黏膜切除术(conventional endoscopic mucosal res... 详细信息

结直肠息肉是发生结直肠癌的高危因素,早期息肉切除是预防结直肠癌的重要干预措施。内镜黏膜切除术(endoscopic mucosal resection,EMR)是常规切除结直肠息肉的方法。目前常用的传统内镜黏膜切除术(conventional endoscopic mucosal resection,CEMR)是通过注射缓冲液到黏膜下层,使黏膜与黏膜下层和固有肌层分开从而切除息肉,而注水EMR(underwater endoscopic mucosal resection,UEMR)是一种相对新颖的技术,通过注水代替黏膜下注射对黏膜病变进行切除。现比较UEMR和CEMR,以判断UEMR的疗效及安全性。

关键词：肠息肉结肠镜检查黏膜切除术安全性切除深度

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虚拟现实技术在消化内镜培训中的应用与实践

中华消化内镜杂志 2024年第3期41卷 189-192页

作者：李逸凡吴欣荣王维维赵贝王运荣孙文琦邹晓平陈敏王雷南京大学医学院附属鼓楼医院消化科南京210008

消化内镜操作在消化系统疾病诊断和治疗中具有极其重要的作用。虚拟现实技术是一种可以创建和体验虚拟世界的计算机仿真系统,它利用计算机生成一种模拟环境,使用户沉浸到该环境中。虚拟现实消化内镜系统能帮助初学者较快掌握消化内镜诊... 详细信息

消化内镜操作在消化系统疾病诊断和治疗中具有极其重要的作用。虚拟现实技术是一种可以创建和体验虚拟世界的计算机仿真系统,它利用计算机生成一种模拟环境,使用户沉浸到该环境中。虚拟现实消化内镜系统能帮助初学者较快掌握消化内镜诊疗操作的基本技能,使各级消化内镜培训中心的规范化教学成为可能。主要论述虚拟现实技术在消化内镜培训中的发展与应用。

关键词：虚拟现实消化内镜模拟培训应用

内镜黏膜下剥离术中8字环辅助牵引的效果及安全性初探

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中华消化内镜杂志 2024年第1期41卷 65-67页

作者：朱丹丹窦晓坛郭慧敏陈敏王雷于成功南京大学医学院附属鼓楼医院消化科南京210008

为了评价内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)中使用8字环辅助牵引的效果及安全性,2021年7月至2022年1月间,因胃部病变在南京大学医学院附属鼓楼医院行8字环辅助牵引下ESD治疗的总共13例病例(共15处病灶)纳入回顾... 详细信息

为了评价内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)中使用8字环辅助牵引的效果及安全性,2021年7月至2022年1月间,因胃部病变在南京大学医学院附属鼓楼医院行8字环辅助牵引下ESD治疗的总共13例病例(共15处病灶)纳入回顾性分析,结果显示13例均成功完成8字环辅助牵引下ESD,中位手术时间56min,单位时间切除面积(0.20±0.02)cm^(2)/min,病灶整块切除率93.3%(14/15),完全切除率80.0%(12/15),治愈性切除率80.0%(12/15),无术中及术后穿孔,无迟发性出血,无其他严重并发症及死亡病例。初步结果提示,8字环辅助牵引作为一种新型内牵引技术,操作简便,能够有效提高剥离效率,减少并发症发生,值得临床进一步研究和推广。

关键词：胃肠内窥镜内镜黏膜下剥离术辅助牵引 8字环

金黄地鼠不同病理状态颊囊黏膜的近红外荧光成像差异分析

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华西口腔医学杂志 2024年

作者：谢狄亚单丹妮张磊陈盛那潆予王志勇南京大学医学院附属口腔医院南京市口腔医院南京大学口腔医学研究所南京红花社区卫生服务中心口腔科

目的探讨分析吲哚菁绿（ICG）近红外荧光（NIF）成像技术对口腔潜在恶性疾患及口腔鳞状细胞癌早期诊断的可行性。方法利用二甲基苯并蒽丙酮溶液，给予金黄地鼠颊囊黏膜不同时间的局部刺激，诱导建立轻/中度异常增生、重度异常增生、... 详细信息

目的探讨分析吲哚菁绿（ICG）近红外荧光（NIF）成像技术对口腔潜在恶性疾患及口腔鳞状细胞癌早期诊断的可行性。方法利用二甲基苯并蒽丙酮溶液，给予金黄地鼠颊囊黏膜不同时间的局部刺激，诱导建立轻/中度异常增生、重度异常增生、鳞状细胞癌等病理状态的颊黏膜病变模型。采用ICG-NIF技术对病变组织进行荧光信号定量分析，免疫组织化学染色法对不同病理状态黏膜的微血管密度（MVD）、微淋巴管密度（MLVD）进行分析。结果 ICG-NIF荧光定量分析结果显示，实验组中黏膜病变组织的荧光强度均高于正常黏膜，差异具有统计学意义（P<0.05），且实验组中黏膜病变恶性程度越高，其荧光强度越高。组织学分析显示，随着黏膜病变恶性程度增加，MVD增加（P<0.05）,MLVD减小（P<0.05）。结论金黄地鼠异常增生的颊部黏膜病变与正常黏膜组织间具有ICG-NIF荧光信号差异，荧光定量分析方法具有辅助鉴别的临床应用潜能。

关键词：吲哚菁绿近红外荧光成像口腔潜在恶性疾患口腔鳞状细胞癌

细胞间黏附分子-1在强直性脊柱炎间充质干细胞黏附与迁移中的作用及其机制

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中华医学杂志 2024年第25期104卷 2350-2358页

作者：王开阳陆景顺宋晨宇乔木常梦寒李耀李久坤唐邹立鲍虹达邱勇钱邦平南京大学医学院附属鼓楼医院骨科脊柱外科南京

目的探讨细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在强直性脊柱炎(AS)骨髓间充质干细胞(MSCs)黏附与迁移中的作用及其机制。方法回顾性收集2021年10月至2022年10月南京大学医学院附属鼓楼医院AS和胸腰椎骨折患者(作为对照, HC组)术中骨髓组织和韧带组... 详细信息

目的探讨细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在强直性脊柱炎(AS)骨髓间充质干细胞(MSCs)黏附与迁移中的作用及其机制。方法回顾性收集2021年10月至2022年10月南京大学医学院附属鼓楼医院AS和胸腰椎骨折患者(作为对照, HC组)术中骨髓组织和韧带组织, 采用Ficoll分离法, 分离培养MSCs。高分辨率显微镜观察细胞形态, 并采用免疫荧光染色对比分析AS与HC组MSCs的细胞骨架差异。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和流式细胞术分析AS与对照组的组织ICAM-1表达。Transwell迁移实验及伤口愈合实验计算两组MSCs的迁移个数和迁移面积差异, 评估两组细胞的迁移速率。结果取AS组患者(2男1女, 年龄分别为33、37、32岁)和对照组患者(2男1女, 年龄分别为35、32、38岁)骨髓和棘间韧带组织。明场和荧光染色观察到AS-MSCs相较于HC-MSCs细胞形态宽大。棘间韧带免疫荧光染色结果显示AS患者表达更多的ICAM-1(68.38±3.42比48.31±2.43)和CD105(37.97±2.16比23.36±2.06)(均P<0.001)。通过Western印迹法和RT-qPCR结果分析, AS-MSCs的ICAM-1的蛋白表达和转录水平均明显高于HC组(均P<0.001)。流式细胞术验证AS-MSCs的ICAM-1的荧光强度值高于HC-MSCs(924.30±54.99比636.47±40.03, P=0.002)。在细胞黏附效率上, AS-MSCs在黏附初期与HC-MSCs无差异[0.5 h:(1 496±213)比(1 205±163)个, P=0.133], 后期AS-MSCs的黏附效率高于HC-MSCs[1 h:(2 894±172)比(1 908±155)个, P=0.002;2 h:(4 540±286)比(3 334±188)个, P=0.004;3 h:(5 212±281)比(4 208±303)个, P=0.014]。细胞迁移实验证明AS-MSCs的迁移能力比HC-MSCs更强[(5 449±172)比(4 016±155)个, P<0.001], 并且使用ICAM-1抑制剂A-205804后, 对于AS-MSCs迁移速率的抑制效率高于HC-MSCs[(2 145±239)比(3 539±316)个, P=0.004]。结论 ICAM-1异常表达对于MSCs黏附和迁移有显著影响, AS-MSCs的ICAM-1表达显著性增加, 进而增加了AS-MSCs的迁移速率。

关键词：脊柱炎, 强直性间充质干细胞细胞黏附细胞间黏附分子-1 细胞迁移

活性氧响应的纳米颗粒对炎性环境下牙龈成纤维细胞功能的影响及机制

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口腔疾病防治 2024年第4期32卷 257-265页

作者：邱心一宋璐彤任双双苗雷英南京大学医学院附属口腔医院南京市口腔医院牙体牙髓病科江苏南京210008

目的探讨在牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis-lipopolysaccharide,P.g-LPS)诱导的牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)炎症环境下,活性氧(reactive oxygen species,ROS)响应型纳米颗粒PssL-NAC对HGFs内ROS、炎症因子、胶原蛋白生成、细胞迁移功能以及Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路蛋白表达的影响。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。通过响应ROS的硫缩酮键(thioketal,TK)连接聚己内酯(polycaprolactone,PCL)的疏水端和聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)的亲水端,水相油相自主装的方式得到内部包裹油溶性的抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine-NAC)的PssL-NAC微球,制备NAC水溶液,并使用透射电镜观察验证纳米粒子合成成功。在提取的HGFs中分别加入P.g-LPS(0、5、10μg/mL),P.g-LPS(0、5、10μg/mL)+NAC,P.g-LPS(0、5、10μg/mL)+PssL-NAC,共聚焦显微镜观察不同组别细胞内ROS水平,确定后续实验使用的P.g-LPS浓度。将HGFs随机分为空白对照组(对照组,不做处理),P.g-LPS组(P.g-LPS处理细胞),NAC组(P.g-LPS+NAC处理细胞),PssL-NAC组(P.g-LPS+PssL-NAC处理细胞)。通过细胞增殖与毒性实验验证PssL-NAC的生物安全性。使用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐探针与细胞共孵育通过荧光实时定量检测细胞内炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen 1,COL1)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen 3,COL3)的基因水平;通过划痕实验观察PssL-NAC对牙龈成纤维细胞的迁移功能的影响;通过免疫印迹法检测TLR4-NFκB信号通路相关蛋白的表达。结果 PssL-NAC具有良好生物相容性,对HGFs的细胞增殖能力无显著影响(P>0.05);在P.g-LPS浓度升高的条件下,PssL-NAC能维持细胞内大约两倍对照组的ROS水平(P0.05),并降低TLR4-NF-κB通路中TLR4(P<0.001)、p65(P=0.006)、p-p65(P=0.017)蛋白的表达。结论PssL-NAC维持细胞内适宜浓度ROS,通过TLR4-NF-κB通路减轻P.g-LPS诱导的细胞炎症,并恢复炎症条件下的细胞胶原生成和细胞迁移功能。

关键词：牙龈成纤维细胞活性氧牙龈卟啉单胞菌脂多糖炎症细胞迁移纳米颗粒胶原