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颗粒酶A诱导Caspases非依赖性细胞死亡

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细胞生物学杂志 2004年第6期26卷 571-574页

作者：缪家文李芳秋南京军区南京总医院全军医学检验中心南京大学医学院临床学院南京210002

颗粒酶A(granzyme A,GzmA),是存在于细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和天然杀伤细胞(NK细胞)的细胞毒颗粒中含量最多的一种丝氨酸蛋白酶,在穿孔素(perforin)协同作用下通过颗粒胞吐(granule exocytosis)释放进入在杀伤细胞和靶细胞之间形成的免... 详细信息

颗粒酶A(granzyme A,GzmA),是存在于细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和天然杀伤细胞(NK细胞)的细胞毒颗粒中含量最多的一种丝氨酸蛋白酶,在穿孔素(perforin)协同作用下通过颗粒胞吐(granule exocytosis)释放进入在杀伤细胞和靶细胞之间形成的免疫突触(immunological synapse),然后进入靶细胞的细胞浆,并在细胞核聚集,诱导一种caspases非依赖性细胞死亡。GzmA靶向作用于一种与内质网结合的特殊的复合体——SET复合体,其包含3种GzmA底物:核小体装配蛋白SET、DNA结合蛋白HMG-2、具有碱基切除修复作用的核酸内切酶Apel。SET复合体还含有一种抑癌蛋白pp32和一种具有脱氧核糖核酸酶(DNase)活性的NM23-H1。当GzmA作用于SET复合体时释放出NM23-H1并激活其DNase活性,也阻断了Apel对DNA损伤的修复作用,在DNA上形成单链的缺刻。这是一种新发现的由GzmA诱导的细胞凋亡途径。

关键词：颗粒酶A Caspases非依赖性细胞死亡丝氨酸蛋白酶 SET复合体细胞凋亡免疫效应分子

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亲环素A抗原表位在三维结构中的初步定位

南京大学学报（自然科学版） 2002年第2期38卷 187-191页

作者：严明李芳秋武建国南京大学医学临床学院南京军区南京总医院全军医学检验中心南京210002

以抗人亲环素A单克隆抗体D4作捕获抗体 ,用噬菌体展示文库鉴定出亲环素A模拟抗原表位的氨基酸序列为WSLQSFL ,在亲环素A的一级结构中没有相同的序列 ,提示亲环素A抗原表位为构象型的 .亲环素A的三维空间结构已测定 ,利用RasMol等蛋白质... 详细信息

以抗人亲环素A单克隆抗体D4作捕获抗体 ,用噬菌体展示文库鉴定出亲环素A模拟抗原表位的氨基酸序列为WSLQSFL ,在亲环素A的一级结构中没有相同的序列 ,提示亲环素A抗原表位为构象型的 .亲环素A的三维空间结构已测定 ,利用RasMol等蛋白质三维结构观察软件 ,可以初步确定亲环素A的抗原表位的空间位置。

关键词：三维结构定位亲环素A 抗原表位噬菌体肽库亲和淘筛环孢素蛋白质免疫机制

分泌型细胞毒性途径在维持免疫细胞平衡中的作用

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中国免疫学杂志 2006年第8期22卷 783-784,F0003,F0004页

作者：黄桂春李芳秋南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院全军医学检验中心江苏210002

免疫细胞的平衡在生命活动中非常重要。机体不断接受各种微生物抗原和自身抗原的刺激并激活免疫应答，在急性T细胞应答过程中，特异性淋巴细胞亚群迅速增生，但增生的淋巴细胞必须在抗原攻击停止时快速消减，这样才能维持免疫活性细胞... 详细信息

免疫细胞的平衡在生命活动中非常重要。机体不断接受各种微生物抗原和自身抗原的刺激并激活免疫应答，在急性T细胞应答过程中，特异性淋巴细胞亚群迅速增生，但增生的淋巴细胞必须在抗原攻击停止时快速消减，这样才能维持免疫活性细胞的动态平衡。当这种平衡被打破，就会发生严重疾病。正常情况下，机体通过一系列途径来维持免疫细胞平衡，其中起主要作用的是分泌型细胞毒性途径和非分泌型细胞毒性途径。

关键词：细胞平衡细胞毒性免疫细胞非分泌型淋巴细胞亚群免疫活性细胞自身抗原微生物抗原 T细胞应答生命活动

生理浓度抗氧化剂对高密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用

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南京大学学报（自然科学版） 2003年第2期39卷 277-280页

作者：张春妮施鸿飞季晶韩晓冬刘小传汪俊军南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院全军医学检验中心南京210002 南京大学医学院南京210093

　观察、比较了生理浓度VitC、VitE和白蛋白对体外Cu2+氧化高密度脂蛋白(HDL)的抑制能力.在体外Cu2+氧化HDL的反应体系中,同时加入生理浓度的VitC、VitE或白蛋白,通过检测硫代巴比妥酸值(TBARS)和氧化延滞时间的变化,分析3种抗氧化剂对... 详细信息

　观察、比较了生理浓度VitC、VitE和白蛋白对体外Cu2+氧化高密度脂蛋白(HDL)的抑制能力.在体外Cu2+氧化HDL的反应体系中,同时加入生理浓度的VitC、VitE或白蛋白,通过检测硫代巴比妥酸值(TBARS)和氧化延滞时间的变化,分析3种抗氧化剂对HDL氧化的抑制作用.结果发现,3种抗氧化剂均明显降低HDL的脂质过氧化程度,延长氧化延滞时间,其中以白蛋白作用最为显著.结果提示白蛋白是比VitC和VitE更强的HDL抗氧化剂.

关键词：生理浓度抑制作用高密度脂蛋白氧化修饰抗氧化剂动脉粥样硬化氧化延滞时间脂质过氧化

人血清氧化低密度脂蛋白自身抗体的提取和初步鉴定

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临床检验杂志 2006年第1期24卷 4-6页

作者：汪俊军朱雁飞强红娟张春妮南京军区南京总医院全军医学检验中心南京210002 南京大学医学院

目的提取和鉴定人血清氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)自身抗体。方法采用溴化氰活化的Sepharose4B交联Ox-LDL制备免疫吸附层析柱,从正常人血清中提取抗Ox-LDL自身抗体,采用ELISA法鉴定其免疫反应性,散射免疫比浊法分析自身抗体种类。结果用Na... 详细信息

目的提取和鉴定人血清氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)自身抗体。方法采用溴化氰活化的Sepharose4B交联Ox-LDL制备免疫吸附层析柱,从正常人血清中提取抗Ox-LDL自身抗体,采用ELISA法鉴定其免疫反应性,散射免疫比浊法分析自身抗体种类。结果用NaHCO3、醋酸盐和KCNS溶液洗脱,分别收集洗脱峰。8份正常人血清中均收集到Ox-LDL自身抗体,与Ox-LDL均具有良好的反应性。自身抗体种类中以IgG为主,其次为IgM。结论此法提取的抗Ox-LDL自身抗体同Ox-LDL具有良好的反应能力。

关键词：低密度脂蛋白氧化修饰自身抗体动脉粥样硬化

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早孕妇女蜕膜中淋巴细胞抗原的分析

南京大学学报（自然科学版） 1998年第5期34卷 624-626页

作者：史利宁王艾丽张敏南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院全军医学检验中心

检测早孕蜕膜中淋巴细胞抗原的表达。以几种抗淋巴细胞表面标志的单克隆抗体，采用花环标记、碱磷酶抗碱磷酶（ＡＰＡＡＰ）法，对２３例早孕蜕膜组织中的淋巴细胞进行测定。早孕蜕膜淋巴细胞中ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ１６＋及Ｂ细胞... 详细信息

检测早孕蜕膜中淋巴细胞抗原的表达。以几种抗淋巴细胞表面标志的单克隆抗体，采用花环标记、碱磷酶抗碱磷酶（ＡＰＡＡＰ）法，对２３例早孕蜕膜组织中的淋巴细胞进行测定。早孕蜕膜淋巴细胞中ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ１６＋及Ｂ细胞百分率（ｘ±ｓ）分别为２９．５２±６．８０％、２３．６０±４．８０％、２０．９１±４．０６％、１．０７±１．００％、７．８１±２．５６％，ＣＤ４／ＣＤ８为１．２±０．２，ＣＤ３－淋巴细胞呈大颗粒淋巴细胞（ＬＧＬ）形态。早孕蜕膜中存在较多ＣＤ３－、ＣＤ１６－形态呈ＬＧＬ的ＮＫ细胞，ＣＤ４＋细胞与ＣＤ８＋细胞的比值较正常外周血明显降低。

关键词：早孕蜕膜淋巴细胞抗原

Id3启动子/荧光素酶基因载体的构建及其在WEHI-231细胞中的活性表达

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南京大学学报（自然科学版） 2006年第2期42卷 176-183页

作者：李晓军秦喜九美水口纯一郎南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院全军医学检验中心南京210002 东京医科大学免疫系

用PCR法从WEHI-231细胞基因组DNA扩增小鼠Ida（mId3）基因5’端含启动子序列的不同长度的DNA片段（mId3-pf）亚克隆至荧光索酶（Luc）报道基因载体PGV-B2，构建由mid3基因启动子片段控制的Luc报道基因重组载体mid3-pf／PGV—B2．用电穿... 详细信息

用PCR法从WEHI-231细胞基因组DNA扩增小鼠Ida（mId3）基因5’端含启动子序列的不同长度的DNA片段（mId3-pf）亚克隆至荧光索酶（Luc）报道基因载体PGV-B2，构建由mid3基因启动子片段控制的Luc报道基因重组载体mid3-pf／PGV—B2．用电穿孔术将mId3-pf／PGV-B2导人培养的WEHI-231细胞，用抗小鼠IgM抗体刺激转染后的WEHI-231细胞，24h后测定胞内Luc活性．结果表明，4种Luc报道基因重组载体转染细胞均表现较高的mId3启动子活性，与空载体转染细胞相比，启动子活性分别升高25-60倍．抗IgM抗体刺激细胞后，Id3启动子活性较未刺激细胞均呈明显增高趋势，增高幅度可达2倍左右．表明抗IgM抗体诱导WEHI231细胞Id3的上调表达与Id3转录活性的升高有关．

关键词：分化抑制因子(Id) B细胞抗原受体(BCR) WEHI-231细胞抗IgM抗体

重组人钙调素的表达及其McAb的制备与精子CaM定位

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南京大学学报（自然科学版） 1999年第2期35卷 196-199页

作者：郭大文李晓军武建国杨毓华李保仝南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院全军医学检验中心

用基因重组技术构建人钙调素基因Ⅲ（ｈＣａＭⅢｃＤＮＡ）表达载体ｐＢＶ／ｈＣａＭⅢ，并在大肠杆菌ＤＨ５α中经热诱导获得可溶性ＣａＭ蛋白的高效表达．将纯化的重组ｈＣａＭ与异型双功能剂ＳＰＤＰ及鼠血清白蛋白（ＭＳＡ）交联，... 详细信息

用基因重组技术构建人钙调素基因Ⅲ（ｈＣａＭⅢｃＤＮＡ）表达载体ｐＢＶ／ｈＣａＭⅢ，并在大肠杆菌ＤＨ５α中经热诱导获得可溶性ＣａＭ蛋白的高效表达．将纯化的重组ｈＣａＭ与异型双功能剂ＳＰＤＰ及鼠血清白蛋白（ＭＳＡ）交联，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，用常规细胞融合技术制备单克隆抗体（ＭｃＡｂ），得到３株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞．间接ＥＬＩＳＡ和斑点免疫结果证实，三种单克隆抗体均与自制的ｒｈＣａＭ和ＣａＭ标准品起特异反应．用免疫组化法对精子中ＣａＭ定位，发现ＣａＭ主要分布于精子头颈部，不育组ＣａＭ＋精子率（（４５．０±７．５）％）显著低于生育组（（６８．５±１０．５）％）．

关键词：钙调素基因表达单克隆抗体精子 CaM 定位

应用大号生物型臼杯行髋关节翻修对髋关节旋转中心和股骨偏心距的影响研究

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中国修复重建外科杂志 2017年第2期31卷 139-143页

作者：杨超张雷陈烁周利武赵建宁南京大学医学院临床学院南京210000 南京军区南京总医院骨科南京210002

目的探讨应用大号生物型臼杯(Jumbo臼杯)行髋关节翻修术后髋关节旋转中心(hip center of rotation,COR)和股骨偏心距的变化。方法回顾性分析2010年1月—2015年5月应用Jumbo臼杯行髋关节翻修术的23例患者临床资料,其中8例联合颗粒骨植骨... 详细信息

目的探讨应用大号生物型臼杯(Jumbo臼杯)行髋关节翻修术后髋关节旋转中心(hip center of rotation,COR)和股骨偏心距的变化。方法回顾性分析2010年1月—2015年5月应用Jumbo臼杯行髋关节翻修术的23例患者临床资料,其中8例联合颗粒骨植骨,10例联合颗粒骨植骨并结构性植骨。男10例,女13例;年龄51~77岁,平均65.4岁。初次人工全髋关节置换术至翻修术间隔1~24年,平均8.57年。髋关节翻修原因:无菌性松动21例,假体周围感染2例。患者Harris评分为(43.04±5.05)分,疼痛视觉模拟评分(VAS)为(5.70±0.97)分。骨缺损根据Paprosky分型标准,Ⅰ型5例,ⅡA型5例,ⅡB型3例,ⅡC型6例,ⅢA型4例。双髋X线片测量示,健侧股骨偏心距为(40.65±4.09)mm,患侧为(44.04±5.08)mm,比较差异有统计学意义(t=4.098,P=0.000);10例(43.48%)股骨偏心距重建,13例(56.52%)未重建;10例(43.48%)COR重建,11例(47.83%)COR上移,2例(8.69%)COR下移。结果术后切口均Ⅰ期愈合,无感染、血管损伤、下肢深静脉血栓形成、关节脱位、假体周围骨折等并发症发生。患者均获随访,随访时间12~76个月,平均22.48个月。术后1年Harris评分为(82.09±4.53)分,VAS评分为(0.74±0.62)分,与术前比较差异均有统计学意义(t=37.831,P=0.000;t=22.318,P=0.000)。X线片复查示,翻修术后1年患侧股骨偏心距为(43.87±3.57)mm,与术前比较差异无统计学意义(t=0.250,P=0.805),与健侧比较差异有统计学意义(t=5.591,P=0.000)。翻修术后患侧股骨偏心距重建16例(69.57%),未重建7例(30.43%);15例(65.22%)COR重建,8例(34.78%)COR上移。结论单纯应用Jumbo臼杯行髋关节翻修术可能导致COR上移和股骨偏心距增加。合理安放Jumbo臼杯以及正确处理髋臼骨缺损,能够最大限度恢复COR和股骨偏心距,获得良好近期疗效,假体稳定性可。

关键词：大号生物型臼杯股骨偏心距髋关节旋转中心全髋关节置换翻修术