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藤黄酸下调蛋白C受体表达杀伤三阴性乳腺癌干细胞的作用机制

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中国组织工程研究 2025年第23期29卷 4888-4898页

作者：李溯王清华达梦婷杨蕊陈道桢南京医科大学附属无锡妇幼保健院优生优育医学遗传研究所江苏省无锡市214002 江南大学附属妇产医院优生优育医学遗传研究所江苏省无锡市214002 青海大学附属医院乳腺疾病诊疗中心青海省西宁市810000 青海省海东市第二人民医院院长办公室青海省海东市810600

背景:藤黄酸对乳腺癌具有很强的细胞毒性,可有效杀伤三阴性乳腺癌干细胞,但潜在的机制尚不清楚。目的:探讨藤黄酸对三阴性乳腺癌干细胞的杀伤作用及可能的机制。方法:使用PharmMapper数据库预测藤黄酸的靶点蛋白,使用String网站构建各... 详细信息

背景:藤黄酸对乳腺癌具有很强的细胞毒性,可有效杀伤三阴性乳腺癌干细胞,但潜在的机制尚不清楚。目的:探讨藤黄酸对三阴性乳腺癌干细胞的杀伤作用及可能的机制。方法:使用PharmMapper数据库预测藤黄酸的靶点蛋白,使用String网站构建各药物靶点蛋白互作网络关系,使用Cytoscape软件构建活性成分-作用靶点网络,通过R语言软件对潜在靶点进行KEGG信号通路富集分析。采用CCK-8法检测不同浓度藤黄酸对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231活力的影响,筛选适宜的作用浓度。采用细胞球培养法富集MDA-MB-231细胞干细胞,经过不同浓度(0,0.5,1.0,2.0μmol/L)藤黄酸作用24 h,TUNEL荧光染色与流式细胞仪检测干细胞凋亡,qPCR与Western blot检测蛋白C受体表达,Western blot检测p-PI3K、p-AKT、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达;将干细胞分4组培养:空白对照组(干细胞不做任何处理)、siRNA-NC组、siRNA-蛋白C受体组和siRNA-蛋白C受体+PI3K激动剂组,培养36 h后,采用Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达。结果与结论:(1)网络药理学发现,三阴性乳腺癌干细胞标志物蛋白C受体是藤黄酸的作用靶点之一;KEGG富集分析涉及细胞凋亡、上皮生长因子受体、RAS和PI3K-AKT信号通路等;(2)CCK-8检测结果显示,藤黄酸可抑制MDA-MB-231细胞活力,半数抑制浓度IC50值为(1.18±0.34)μmol/L,因此后续实验选择浓度0.5,1.0,2.0μmol/L;(3)TUNEL荧光染色和流式细胞术检测证实,藤黄酸以剂量依赖的方式诱导三阴性乳腺癌干细胞凋亡(P <0.05);qPCR和Western blot检测证实,藤黄酸可下调蛋白C受体mRNA和蛋白表达,下调Caspase-3、p-PI3K和p-AKT蛋白表达,上调Cleaved Caspase-3蛋白表达(P <0.05);siRNA-蛋白C受体转染实验也进一步证实,敲低三阴性乳腺癌干细胞蛋白C受体表达可提升Cleaved Caspase-3蛋白表达(P <0.05)、下调PI3K/AKT信号通路磷酸化水平(P <0.05),而应用PI3K激动剂740 Y-P能够降低Cleaved Caspase-3蛋白表达(P <0.05)、提升p-PI3K和p-AKT的磷酸化水平(P <0.05),一定程度上改善细胞凋亡情况;(4)结果表明,藤黄酸可能通过下调蛋白C受体来发挥三阴性乳腺癌及干细胞杀伤及诱导凋亡作用,进一步的分子机制可能和PI3K/AKT信号通路抑制有关。

关键词：三阴性乳腺癌干细胞网络药理学藤黄酸分子机制信号通路

miR-146a对糖尿病视网膜病变炎症反应的抑制作用

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中华实验眼科杂志 2020年第9期38卷 733-739页

作者：顾顺詹鹏飞王文娟王晓露魏婷婷朱凌鹏王杨宁致殷丽谢田华姚勇南京医科大学附属无锡人民医院眼科 214023 南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心 214023

目的研究微小RNA-146a(miR-146a)对高糖诱导的人视网膜内皮细胞炎症反应的调控作用及其机制。方法收集2013年10—12月在南京医科大学附属无锡人民医院就诊的单纯糖尿病患者57例和糖尿病视网膜病变(DR)患者40例。另选取41名健康者作为正... 详细信息

目的研究微小RNA-146a(miR-146a)对高糖诱导的人视网膜内皮细胞炎症反应的调控作用及其机制。方法收集2013年10—12月在南京医科大学附属无锡人民医院就诊的单纯糖尿病患者57例和糖尿病视网膜病变(DR)患者40例。另选取41名健康者作为正常对照。收集受检者的一般检查结果,并采集受检者静脉抗凝血各5 ml。体外培养人视网膜内皮细胞(HREC)系,分为高糖组和正常对照组,分别采用含30 mmol/L葡萄糖的DMEM培养液和正常DMEM培养液培养。采用荧光定量PCR法分别检测各组受检者外周血和体外培养HREC中miR-146a的表达水平。分别用lipofectamine2000装载50 nmol/L miR-146a模拟物、模拟物对照剂和miR-146a抑制物、抑制物对照剂转染HREC。采用荧光定量PCR法检测各转染组细胞中miR-146a和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达水平。采用Western blot法检测核因子кB(NF-кB)p65和NF-кB p65Ser536蛋白相对表达量。结果糖尿病组和DR组miR-146a相对表达量分别为0.36±0.08和0.27±0.08,明显低于正常对照组的1.00±0.16,差异均有统计学意义(均P<0.01)。在高糖组HREC细胞中miR-146a相对表达量为0.37±0.11,明显低于正常对照组的1.00±0.18,差异有统计学意义(t=5.57,P<0.01)。miR-146a模拟物组miR-146a mRNA的相对表达量为2 540.00±105.00,明显高于模拟物对照组的61.00±17.90;miR-146a抑制物组miR-146a mRNA的相对表达量为0.04±0.01,明显低于抑制物对照组的0.88±0.04,差异均有统计学意义(t=23.23、17.12,均P<0.01)。miR-146a模拟物组ICAM-1 mRNA的相对表达量为0.35±0.12,明显低于模拟物对照组的1.00±0.13;miR-146a抑制物组ICAM-1 mRNA的相对表达量为2.74±0.48,明显高于抑制物对照组的1.00±0.16,差异均有统计学意义(t=3.58、3.37,均P<0.05)。miR-146a模拟物组NF-кB p65Ser536蛋白相对表达量为0.43±0.03,明显低于模拟物对照组的1.07±0.09,差异有统计学意义(t=6.74,P<0.01)。miR-146a抑制物组NF-кB p65Ser536蛋白相对表达量为2.08±0.12,明显高于抑制物对照组的1.00±0.01,差异有统计学意义(t=8.76,P<0.01)。结论 miR-146a能够通过抑制NF-кB磷酸化水平和ICAM-1的表达,减轻DR的炎症反应。

关键词：糖尿病视网膜病变微小RNA-146a 人视网膜内皮细胞细胞间黏附分子核因子κB

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家庭参与型远程护理在产妇产褥期中的应用

循证护理 2025年第1期 177-181页

作者：刘锦玲季晔姚慧顾馨徐楠范维莹南京医科大学附属无锡人民医院南京医科大学无锡医学中心无锡市人民医院

目的：探讨家庭参与型远程护理模式在产褥期的应用效果。方法：采用便利抽样法，选取2024年1月—4月在江苏省某三级甲等医院分娩的200名产妇，将1月—2月分娩的产妇作为对照组，3月—4月分娩的产妇作为试验组，每组100人。对照组给予常... 详细信息

目的：探讨家庭参与型远程护理模式在产褥期的应用效果。方法：采用便利抽样法，选取2024年1月—4月在江苏省某三级甲等医院分娩的200名产妇，将1月—2月分娩的产妇作为对照组，3月—4月分娩的产妇作为试验组，每组100人。对照组给予常规出院宣教和定期电话随访，试验组在常规出院宣教和电话随访的基础上给予家庭参与型远程护理进行干预。干预6周后，比较两组产妇的育儿胜任感评分、爱丁堡产后抑郁评分、纯母乳喂养率、凝血指标和产妇满意度。结果：两组产妇的育儿胜任感评分、爱丁堡产后抑郁评分、纯母乳喂养率和产妇满意度评分、凝血指标比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：家庭参与型远程护理模式有助于提高产妇的育儿胜任感和纯母乳喂养率，减少产后抑郁的发生，改善凝血指标，降低静脉血栓的发生率，提高产妇满意度。

关键词：家庭参与型远程护理产褥期母乳喂养产后抑郁育儿胜任感

Keep式下肢功能锻炼操在宫颈癌术后预防下肢淋巴水肿中的应用

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循证护理 2025年第1期 153-156页

作者：朱滢钰陈志芳南京医科大学附属无锡人民医院南京医科大学无锡医学中心无锡市人民医院

目的：探讨Keep式下肢功能锻炼操在宫颈癌术后病人下肢淋巴水肿预防中的应用效果。方法：选取2020年4月—2022年10月在无锡市某三级甲等医院行宫颈癌根治性切除联合盆腔淋巴结清扫术的108例病人，采用随机数字表法分为对照组与观察组，... 详细信息

目的：探讨Keep式下肢功能锻炼操在宫颈癌术后病人下肢淋巴水肿预防中的应用效果。方法：选取2020年4月—2022年10月在无锡市某三级甲等医院行宫颈癌根治性切除联合盆腔淋巴结清扫术的108例病人，采用随机数字表法分为对照组与观察组，每组54例。对照组实施常规健康宣教，观察组实施常规健康宣教结合Keep式下肢功能锻炼操干预，比较两组病人术后6个月下肢周径、下肢淋巴水肿发生率及淋巴水肿相关症状发生率，比较病人住院和出院6个月满意度。结果：术后6个月，观察组大腿、小腿周径均小于对照组，下肢淋巴水肿相关症状总发生率低于对照组，出院6个月满意度高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：将Keep式下肢功能锻炼操用于宫颈癌病人术后护理中，有助于减少下肢淋巴水肿相关症状的发生，提高病人生活质量及出院满意度。

关键词： Keep式下肢功能锻炼操宫颈癌下肢淋巴水肿护理

身体活动水平对2型糖尿病患者颈动脉内膜中层厚度增厚的影响研究

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中国全科医学 2025年第6期28卷 697-704页

作者：孙珍珍崔茜楼青青陈晓栋方丹姚平袁晓丹南京中医药大学附属医院内分泌科江苏省南京市210004 南京医科大学附属常州第二人民医院内分泌科江苏省常州市213000 海南医学院第一附属医院代谢性疾病临床医学研究中心海南省海口市570102 南京中医药大学附属中西医结合医院心血管内科江苏省南京市210028 南京中医药大学护理学院江苏省南京市210023 南京中医药大学附属中西医结合医院内分泌科江苏省南京市210028 南京中医药大学附属中西医结合医院公共卫生科江苏省南京市210028

背景心血管疾病是2型糖尿病(T2DM)患者的主要死亡原因,颈动脉内膜中层厚度(CIMT)增厚可预测心血管疾病的发生。中高水平的身体活动(PA)可改善患者的血糖水平并降低心血管疾病的发生率和死亡风险。探讨这一可改变的生活方式与CIMT的关系... 详细信息

背景心血管疾病是2型糖尿病(T2DM)患者的主要死亡原因,颈动脉内膜中层厚度(CIMT)增厚可预测心血管疾病的发生。中高水平的身体活动(PA)可改善患者的血糖水平并降低心血管疾病的发生率和死亡风险。探讨这一可改变的生活方式与CIMT的关系可能是预防心血管疾病的有效策略。目的分析不同PA水平与T2DM患者CIMT增厚的关系,为患者推荐个性化活动方案提供科学依据。方法本研究为横断面研究,选取2019年1月—2022年2月于江苏省两家三级甲等医院内分泌门诊就诊的3099例T2DM患者为研究对象,采用国际身体活动量表(IPAQ)短问卷评估患者的PA水平,将患者分为轻度及以下PA组、中度PA组和高强度PA组。通过二元Logistic回归分析探讨PA与CIMT增厚的关系,并按照不同肥胖程度和血压、血脂及糖化达标状况进行分层分析。将PA水平作为连续变量绘制限制性立方样条评价PA与CIMT增厚的剂量反应关系。结果与轻度及以下PA患者(n=981)相比,中度(n=1389)和高强度(n=729)PA患者的年龄较小,糖化血红蛋白(HbA_(1c))和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平较高(P0.05);而在肥胖患者(n=708)中仅中度PA与CIMT增厚相关(OR=0.614,95%CI=0.382~0.987,P<0.05);血压、血脂及糖化3项指标均不达标(n=324)和仅1项指标达标(n=1416)的患者,中度PA与发生CIMT增厚呈负相关(P<0.05)。结论PA水平与CIMT增厚存在剂量反应关系,中度PA与CIMT增厚呈负相关,尤其是在肥胖、血压、血脂及糖化控制较差的人群中,而高强度PA对CIMT的影响不显著。

关键词：糖尿病,2型身体活动颈动脉内膜中膜厚度横断面研究江苏省

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结直肠癌的免疫治疗

生物化学与生物物理进展 2024年第10期51卷 2570-2586页

作者：许浩然赵肖仪聂贺王慧张清淋占强南京医科大学附属无锡人民医院消化内科无锡市人民医院南京医科大学无锡医学中心国家消化系统疾病临床研究中心(西安)江苏省分中心无锡214023

改善结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者的预后具有重要的临床和社会意义。免疫治疗是一种新兴的肿瘤治疗方式,免疫检查点抑制剂已在DNA错配修复缺陷/高微卫星不稳定型CRC的治疗中实现了良好的临床转化,占绝大多数的DNA错配修复完整/... 详细信息

改善结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者的预后具有重要的临床和社会意义。免疫治疗是一种新兴的肿瘤治疗方式,免疫检查点抑制剂已在DNA错配修复缺陷/高微卫星不稳定型CRC的治疗中实现了良好的临床转化,占绝大多数的DNA错配修复完整/微卫星稳定型CRC患者却很难在该疗法中获益。免疫疫苗、过继性细胞疗法等其他免疫疗法的临床研究也在积极推进中,虽然展示了一定的良性结果,但仍面临着难以有效突破肿瘤抑制性微环境等诸多问题而未能获得实质性进展。本文以各种免疫治疗方案相关的临床试验为主线进行综述,以期明确CRC免疫治疗的进展,为更优治疗方案的探索提供依据。

关键词：结直肠癌免疫治疗免疫检查点抑制剂免疫疫苗过继性细胞疗法

前列腺素E2受体对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞炎症小体活化和细胞损伤作用

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中华眼底病杂志 2021年第8期37卷 623-631页

作者：张忠红姚勇谢田华吴美丽邹健王晓露南京医科大学附属无锡人民医院眼科 214023 东南大学附属中大医院眼科南京210009 南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心 214023

目的观察前列腺素E2(PGE2)4种受体(EP1-4R)对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)中炎症小体活化和细胞损伤作用。方法将hRMEC分为正常组、高糖组,分别置于含5.5、30.0mmol/L葡萄糖的Dulbecco改良Eagle培养基中培养。采用流式细胞... 详细信息

目的观察前列腺素E2(PGE2)4种受体(EP1-4R)对高糖环境中人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)中炎症小体活化和细胞损伤作用。方法将hRMEC分为正常组、高糖组,分别置于含5.5、30.0mmol/L葡萄糖的Dulbecco改良Eagle培养基中培养。采用流式细胞仪观察高糖组、正常组的细胞凋亡率;酶链免疫吸附试验(ELISA)检测hRMEC细胞培养上清液中PGE2水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞环氧化酶2(COX2)、的蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测hRMEC中HP1-4RmRNA的表达。高糖组细胞培养后72h后,将其再分为对照组、PGE2组、EP1-4激动剂组、PGE2+EPMR1-4抑制剂组、二甲基亚砜组。根据组别,各组给予相应的激动剂或抑制剂继续培养24 h。采用qRT-PCR检测各组细胞核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白(NLRP3)、白细胞介素(IL)-1P前体(pro-IL-1β)mRNA的表达;ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;Western blot检测各组细胞活化的半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase)-1蛋白表达。同时对高糖环境的hRMEC给予IL-1β刺激24h,检测其细胞培养上清液中LDH的活性。结果高糖组ЫШЕС细胞凋亡率、C0X2蛋白表达、PGE2蛋白含量较正常组明显升高,并呈时间依赖性。与正常组比较,高糖组hRMEC中EP1R、ЕР2R、ЕР4蛋R白及mRNA表达水平较正常组升高(P0.05);EPMR激动剂组:(t=1.807、1.477、0.302、1.926,P>0.05)。与PGE2组比较,PGE2+Ep2R抑制剂组hRMEC中NLRP3 mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(t=2.812,P<0.05);PGE2+EP3R抑制剂组hRMEC中pro-IL-ipmRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(t=4.113,Р<0.01)。PGE2组、ЕР2R激动剂组、ЕР2R激动剂组细胞培养上清液中IL-1β的蛋白含量较对照组明显升高,差异有统计学意义(t=5.155、4.136、4.817,P<0.01);PGE2+EP2R抑制剂组和PGE2+EP4R抑制剂组细胞培养上清液中IL-1β的蛋白含量较PGE2组明显降低,差异有统计学意义(t=1.964、4.765,P<0.05)。PGE2组和EP2R激动剂组hRMEC中活化的Caspase-1蛋白表达较对照组明显增多,差异有统计学意义(P=5.332、4.889,P<0.05);PGE2+EP2R抑制剂组hRMEC中活化的Caspase-1蛋白表达较PGE2组明显降低,差异有统计学意义(t=6.699,P<0.01)。PGE2组和EP2R激动剂组细胞培养上清液中LDH活性较对照组明显升高,差异有统计学意义(t=4.908、4.225,P<0.05);PGE2+EP2R抑制剂组细胞培养上清液中LDH活性较PGE2组明显降低,差异有统计学意义(t=5.301,P<0.01)。与对照组比较,高糖环境hRMEC细胞培养上清液中LDH活性明显升高,差异有统计学意义(t=3.499,P<0.05)。结论PGE2的4种受体对NLRP3及其效应分子均有不同程度活化作用,其中EP2R主要介导了高糖环境下hRMEC的损伤。

关键词：受体,前列腺素E 视网膜微血管内皮细胞 NLRP3炎症小体

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蛋白质芯片在过敏性疾病诊断中的应用

中国免疫学杂志 2023年第2期39卷 410-414,420页

作者：李青青崔玉宝(指导) 南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心无锡214023

全球超过30%人口患有过敏性疾病,过敏体质者在接触过敏原后会产生IgE抗体,再次接触过敏原后,机体的不同器官会产生速发型过敏反应或迟发型过敏反应。体外检测过敏原特异性IgE是过敏性疾病诊断的重要手段,20世纪80年代以来,分子生物学技... 详细信息

全球超过30%人口患有过敏性疾病,过敏体质者在接触过敏原后会产生IgE抗体,再次接触过敏原后,机体的不同器官会产生速发型过敏反应或迟发型过敏反应。体外检测过敏原特异性IgE是过敏性疾病诊断的重要手段,20世纪80年代以来,分子生物学技术的迅猛发展加速了过敏原分子的鉴定。大量过敏原的鉴定、表征及重组过敏原的生产为分子诊断技术进入临床奠定了坚实基础。近年来,微阵列技术被证实可将过敏原蛋白应用于芯片进行快速的血清学诊断,使用患者少量血清即可得到可靠的检测结果。本文讲述过敏原粗提取物用于过敏性疾病诊断中的不足。重组过敏原的发展、应用促进了组分分辨诊断概念进入临床,介绍了过敏原芯片的发展和应用、过敏原芯片在过敏性疾病中的诊断和应用,并对其将来的发展趋势进行了展望。

关键词：过敏性疾病过敏原 IgE 组分分辨诊断微阵列芯片

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人脑胶质母细胞瘤细胞系U87的单克隆细胞构建及异质性研究

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医学研究生学报 2019年第11期32卷 1150-1157页

作者：蒋迎娣殷莹浦浙宁张博龚玲丽胡亚玲纪丽汪京京张真豪邹健南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心

目的人胶质母细胞瘤细胞细胞系U87被作为胶质母细胞瘤(GBM)异质性研究的模型,但从基因水平探讨其异质性来源的研究较少。文章旨在构建人胶质母细胞瘤细胞系U87单克隆细胞株,检测不同单克隆细胞株的表型和遗传背景差异,并探讨产生表型差... 详细信息

目的人胶质母细胞瘤细胞细胞系U87被作为胶质母细胞瘤(GBM)异质性研究的模型,但从基因水平探讨其异质性来源的研究较少。文章旨在构建人胶质母细胞瘤细胞系U87单克隆细胞株,检测不同单克隆细胞株的表型和遗传背景差异,并探讨产生表型差异的分子机制。方法利用小分子荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)作为筛选标记,有限稀释法构建U87单克隆细胞株,并挑选具有典型形态特征的2株单克隆化细胞,经短串联重复序列(STR)鉴定后进行后续研究。采用CCK-8、EdU掺入法增殖实验和和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;肿瘤干细胞成球实验检测细胞成球能力;免疫荧光和CCK-8法黏附实验检测细胞黏附能力;3D侵袭实验检测细胞侵袭能力;Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞对化疗药物的敏感性;转录组测序(RNA-seq)对细胞进行测序及生物信息学分析;qRT-PCR验证富集通路中代表性差异基因mRNA表达量。结果构建了形态较为均一U87单克隆细胞株CF5和G11。其中CF5小而短粗,G11大而细长。CCK-8增殖实验结果显示,CF5细胞增殖能力较U87、G11明显增强,U87较G11明显增强(P研究GBM异质性和基因功能奠定了基础。

关键词：胶质母细胞瘤人脑胶质母细胞瘤细胞系U87 单克隆细胞株肿瘤异质性表型转录组测序