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质谱法分析2型糖尿病大鼠神经视网膜差异表达蛋白

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高等学校化学学报 2007年第11期28卷 2065-2072页

作者：王亚冬吴金道江中立王学浩刘超童明庆南京医科大学第一附属医院南京210029 南京医科大学生殖医学重点实验室南京210029

采用二维电泳(2DE)分离了正常SD大鼠和2型糖尿病模型大鼠神经视网膜组织总蛋白,并用ImageMaster5.0软件分析比较了正常组和糖尿病组2DE图像,正常组检测到3122±37(n=3)个蛋白质点;糖尿病组检测到2702±21(n=3)个蛋白质点.约150个蛋白质... 详细信息

采用二维电泳(2DE)分离了正常SD大鼠和2型糖尿病模型大鼠神经视网膜组织总蛋白,并用ImageMaster5.0软件分析比较了正常组和糖尿病组2DE图像,正常组检测到3122±37(n=3)个蛋白质点;糖尿病组检测到2702±21(n=3)个蛋白质点.约150个蛋白质点的表达水平在两组之间存在明显差异(P鉴定,其中7个蛋白已有报道与糖尿病视网膜病变(DR)相关,10个蛋白尚未见有报道.

关键词：糖尿病视网膜病变神经视网膜蛋白质组学二维凝胶电泳

Ⅱ型糖尿病大鼠神经视网膜组织中差异蛋白质分析

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分析化学 2010年第10期38卷 1462-1468页

作者：王亚冬童明庆崔毓贵张民英郭雪江王玲许志洋王富强南京医科大学第一附属医院南京医科大学基础医学院

以高脂饮食联合小剂量链脲菌素(Streptozotocin,STZ)注射方法诱导大鼠II型糖尿病(T2DM)模型为研究对象,采用比较蛋白质组学技术鉴定和分析早期糖尿病神经视网膜差异表达蛋白。通过联用液氮内研磨、冰浴超声、高速离心提取全蛋白技术,提... 详细信息

以高脂饮食联合小剂量链脲菌素(Streptozotocin,STZ)注射方法诱导大鼠II型糖尿病(T2DM)模型为研究对象,采用比较蛋白质组学技术鉴定和分析早期糖尿病神经视网膜差异表达蛋白。通过联用液氮内研磨、冰浴超声、高速离心提取全蛋白技术,提取每只大鼠神经视网膜全蛋白质总量约900μg。采用双向凝胶电泳(2-DE)分离技术,获得2500个以上可辩认的蛋白质斑点。通过蛋白质组学比对技术筛选出糖尿病状态下神经视网膜差异表达蛋白,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)和肽质量指纹图谱(PMF)鉴定出20个差异蛋白点。按照Gene Ontology(GO)分类体系,对差异蛋白归类分析,揭示其亚细胞定位和分子功能。应用Pathway Studio软件对差异表达蛋白的生物学意义进行分析,认为凋亡是早期糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)重要的细胞事件;AnnexinΙ、CRYAB、mtHsp70蛋白是与病理过程相关的关键蛋白,对研究DR致病机制有重要意义。

关键词：大鼠神经视网膜比较蛋白质组学双向凝胶电泳基质辅助激光解析电离飞行时间质谱糖尿病

江苏汉族人群全新STR基因座的遗传多态性分析

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南京医科大学学报（自然科学版） 2016年第11期36卷 1344-1347页

作者：陈奇潘猛张小燕居晓斌刘燕婷崔鹤周惠英南京医科大学第一附属医院司法鉴定所江苏南京210029

目的 :分析全新短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因座在江苏人群中的基因多态性和基因频率。方法 :2015年江苏省598例无血缘关系的汉族个体,利用STRtyper-10G Direct Kit试剂盒对9个STR位点进行扩增,自动基因分析仪进行片段... 详细信息

目的 :分析全新短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因座在江苏人群中的基因多态性和基因频率。方法 :2015年江苏省598例无血缘关系的汉族个体,利用STRtyper-10G Direct Kit试剂盒对9个STR位点进行扩增,自动基因分析仪进行片段分析并进行基因分型。结果:累积STR等位基因共发现111个,其中罕见等位基因13个。基因型频率大于0.08的基因型组合13个,其中D13S325基因座的等位基因型19/20的频率最高达到0.130 4,杂合度达到了0.851±0.068,随机个体相同表型偶合率为0.054±0.022,个体识别能力为0.946±0.022,多态信息总量为0.808±0.052,非父排除率达到了0.697±0.130。结论:通过大量的样本实验和等位基因频率总结,得到了江苏人群更多基因多样性的客观数据,以便在出现微变异等情况时满足进一步实际应用的需要。

关键词：亲权鉴定江苏人群基因多态性全新短串联重复序列

江苏人群12个非CODIS STR基因座的遗传多态性及在亲权鉴定中的应用

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南京医科大学学报（自然科学版） 2016年第11期36卷 1348-1350页

作者：居晓斌潘猛刘燕婷崔鹤周惠英顾民南京医科大学第一附属医院司法鉴定所江苏南京210029

目的：利用3130遗传基因测序仪的电泳图谱分析江苏人群D11S4463、D2S1776、D14S1434、D4S2408、D10S1043、D20S482、D12SATA63、D19S433等12个非CODIS STR基因座多态性分布,计算该12个基因座的基因频率（P）、个体鉴别能力（DP）、无... 详细信息

目的：利用3130遗传基因测序仪的电泳图谱分析江苏人群D11S4463、D2S1776、D14S1434、D4S2408、D10S1043、D20S482、D12SATA63、D19S433等12个非CODIS STR基因座多态性分布,计算该12个基因座的基因频率（P）、个体鉴别能力（DP）、无偏倚期望杂合度（H）、多态性信息总量（PIC）、二联体非父排除率（PEduo）和三联体非父排除率（PEtrio）,并评估其法医学应用价值。方法：利用PCR扩增,产物通过3130测序仪毛细管电泳。读出数据后用分析软件进行分析。结果：12个非CODIS STR基因座的频率分布在本组人群中均符合Hardy-Weinberg平衡。杂合度分布为0.707 6~0.804 6,个体鉴别能力为0.846 8~0.948 6,二联体非父排除率为0.278 6~0.482 6,三联体非父排除率为0.446 7~0.663 2,多态性信息总量为0.643 8~0.807 4。结论：通过大量的样本实验和等位基因频率的统计,得出等位基因多态性数据,用于比对验证,具有很好的辅助作用,在一些CPI值不足10 000及突变案例中具有重要的补充作用。

关键词：短串联重复序列亲权鉴定遗传多态性

mtDNA基因多态性分析在母系遗传鉴定中应用的研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2009年第12期29卷 1763-1764页

作者：居晓斌苏恩本陈子庆周惠英丁小健顾民南京医科大学第一附属医院司法鉴定所江苏南京210029

目的:探讨线粒体DNA中的HV1、HV2基因的序列多态性,并讨论其在母系遗传鉴定中的应用价值。方法:针对线粒体HV1、HV2基因位点采用文献报道引物,PCR扩增后应用直接测序技术研究其等位基因分布及频率。结果:一代母系遗传中可能有1～2个点突... 详细信息

目的:探讨线粒体DNA中的HV1、HV2基因的序列多态性,并讨论其在母系遗传鉴定中的应用价值。方法:针对线粒体HV1、HV2基因位点采用文献报道引物,PCR扩增后应用直接测序技术研究其等位基因分布及频率。结果:一代母系遗传中可能有1～2个点突变,而非母系遗传则突变点一定大于3个。结论:对于认定2个个体是否母子(女)关系或者是否有同一个母亲的案例具有很重要的意义。

关键词：线粒体DNA 控制区序列长度多态性母系亲权鉴定测序

长链非编码RNA BANCR在胃癌中表达及其对胃癌细胞迁移、侵袭的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2018年第12期38卷 1674-1678页

作者：崔鹤居晓斌叶琴潘猛周惠英南京医科大学第一附属医院司法鉴定所江苏南京210029

目的:检测长链非编码RNA BANCR在胃癌组织中的表达,并探讨其对胃癌细胞迁移、侵袭生物学行为的调控作用与相关机制。方法:采用荧光定量PCR(QPCR)和TCGA-STDA数据库分析胃癌组织和癌旁组织中BANCR的表达水平,采用小干扰RNA(siRNA)技术敲... 详细信息

目的:检测长链非编码RNA BANCR在胃癌组织中的表达,并探讨其对胃癌细胞迁移、侵袭生物学行为的调控作用与相关机制。方法:采用荧光定量PCR(QPCR)和TCGA-STDA数据库分析胃癌组织和癌旁组织中BANCR的表达水平,采用小干扰RNA(siRNA)技术敲低胃癌细胞MKN28 BANCR的表达,采用Transwell、QPCR检测MKN28细胞的迁移、侵袭情况以及肿瘤细胞转移相关标志物的表达水平变化。结果:胃癌组织中BANCR的表达水平呈明显上调。敲低BANCR表达后,MKN28细胞的迁移、侵袭能力被抑制,转移相关分子CDH1的表达量显著增加,而Vimentin的表达量显著降低。此外,敲低BANCR下调ZEB1表达,同时干扰miR-203能部分恢复ZEB1的表达水平。结论:BANCR在胃癌组织中呈高表达,其可能通过调节miR-203-ZEB1-CDH1轴促进胃癌细胞迁移和侵袭。

关键词：胃癌长链非编码RNA BANCR 迁移侵袭

江苏汉族24个Y-STR基因座遗传多态性及遗传关系研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2013年第10期33卷 1426-1429页

作者：潘猛居晓斌陈奇周蓉陈子庆周惠英南京医科大学第一附属医院司法鉴定所江苏南京210029

目的：分析24个Y染色体短串联重复序列（STR）基因座在江苏汉族群体的基因多态性、基因频率和其他地域人群之间的遗传距离。方法：取2011-2012年来自江苏省的262份无血缘关系的汉族个体，对24个STR位点进行复合扩增．ABI3130自动基因分... 详细信息

目的：分析24个Y染色体短串联重复序列（STR）基因座在江苏汉族群体的基因多态性、基因频率和其他地域人群之间的遗传距离。方法：取2011-2012年来自江苏省的262份无血缘关系的汉族个体，对24个STR位点进行复合扩增．ABI3130自动基因分析仪进行片段分析并进行基因分型。结果：共发现172个STR等位基因，其中DYS385b、DYS449基因座发现14种等位基因，单倍型共发现262个，单倍型多样性为0．9999，统计10个群体遗传距离Rst矩阵，提示江苏人群更偏向于以天津（-0．0018）、河南（-0．00176）、山西（-0．0016）为群体的中原人群，而与湖南（O．01754）和辽宁（0．01464）人群的遗传距离最远（P〈0．05）。结论：获得具有江苏汉族人群特征的遗传学和法医学客观基础数据，对建立具有江苏地区特点的Y—STR数据库有重要意义。

关键词： Y染色体短串联重复序列基因多态性遗传距离

应用3D生物打印的软骨支架修复关节软骨缺损

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中华骨科杂志 2020年第6期40卷 344-352页

作者：刘杨张啸罗春阳刘锋南京医科大学第一附属医院骨科南京210029

目的通过多喷头3D生物打印机制作软骨支架,按压配方式将支架植入关节软骨缺损区,修复动物模型的关节软骨缺损并观察效果。方法在软骨细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中加入适量的丝素蛋白(silk fibrion,SF),并加入交联剂聚乙二醇(... 详细信息

目的通过多喷头3D生物打印机制作软骨支架,按压配方式将支架植入关节软骨缺损区,修复动物模型的关节软骨缺损并观察效果。方法在软骨细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中加入适量的丝素蛋白(silk fibrion,SF),并加入交联剂聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)和骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)来配制生物墨水;用流变仪评估生物墨水的流变性能;使用傅立叶红外变换光谱鉴定生物墨水的蛋白质二级结构;利用装载有软骨生物墨水的加压喷头,打印厚2 mm,直径6 mm的组织工程支架;使用拉力机测量了组织工程支架的压缩模量;通过干失重法评估各个支架降解速率;CCK8及活死细胞染色评价支架上细胞的活力及增殖情况;实时荧光定量PCR评估体外培养28 d后支架上细胞软骨分化情况;按照自体软骨移植术的方式通过压配原理将支架嵌入动物关节软骨缺损区修复关节软骨缺损;用组织学染色及生化检测鉴定3个月后软骨修复效果。结果生物墨水均表现出剪切稀化的流动特性。含有丝素蛋白的生物墨水酰胺Ⅰ区吸收峰移至1623~1627 cm-1处。随着丝素蛋白含量增加,生物墨水的机械强度和降解性能提高,10%和15%打印支架等压缩模量分别达到(19.96±5.66)kpa和(26.87±10.68)kpa。各个生物墨水均无细胞明显细胞毒性。实时定量PCR表明,当丝素蛋白的含量达到10%~15%时,组织块中的骨髓间充质干细胞成软骨分化能力更强。体内研究:3个月后10%和15%的丝素蛋白生物支架sGAG/DNA含量分别为(0.25±0.01)μg/ng和(0.24±0.02)μg/ng,胶原/DNA含量分别为(17.71±0.83)ng/ng和(16.69±2.39)ng/ng,高浓度丝素蛋白打印的组织工程软骨能更好地修复关节软骨缺损。结论在含有10%和15%丝素蛋白生物墨水的3D生物打印支架中,骨髓间充质干细胞的软骨分化和细胞外基质(胶原蛋白和糖胺聚糖)的分泌均优于其他两种支架。不同支架的干细胞成软骨分化能力和细胞外基质分泌的变化,以及对关节软骨缺损的修复效果是由于支架力学性能的差异所致,并可以通过改变丝素蛋白的浓度优化。

关键词：组织工程软骨,关节细胞外基质丝素蛋白

G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1对BMSCs向内皮细胞分化的影响机制研究

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中国修复重建外科杂志 2018年第3期32卷 257-263页

作者：董献成殷建恽波吕斌殷国勇南京医科大学第一附属医院骨科南京210029

目的通过比较G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1(G protein coupled receptor kinase interacting protein 1,GIT1)野生型及GIT1基因敲除型小鼠BMSCs向内皮细胞分化过程,探讨GIT1影响血管形成的机制。方法 GIT1杂合子小鼠雌雄配对饲养,对... 详细信息

目的通过比较G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1(G protein coupled receptor kinase interacting protein 1,GIT1)野生型及GIT1基因敲除型小鼠BMSCs向内皮细胞分化过程,探讨GIT1影响血管形成的机制。方法 GIT1杂合子小鼠雌雄配对饲养,对获得的新生小鼠采用PCR法行基因型鉴定。取GIT1野生型与GIT1基因敲除型小鼠胫骨及股骨,分离培养BMSCs并传代。取第2代BMSCs分为4组,分别为野生型对照组(A组)、野生型实验组(A1组)、基因敲除型对照组(B组)、基因敲除型实验组(B1组);A1、B1组细胞采用内皮细胞诱导液培养,A、B组细胞进行常规培养。Western blot检测各组细胞VEGF受体2(VEGF receptor 2,VEGFR-2)、VEGFR-3、磷酸化VEGFR-2(phospho-VEGFR-2,p VEGFR-2)、p VEGFR-3蛋白表达;流式细胞仪检测各组内皮细胞标志物血管性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)、血小板内皮细胞黏附因子1(platelet-endothelial cell adhesion molecule 1,PECAM-1)、血管内皮黏钙蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-Cadherin)表达。另取GIT1野生型小鼠第2代BMSCs分为4组:Ⅰ组,原细胞培养液培养;Ⅱ组,细胞培养液中加入VEGFR-3阻断剂SAR131675;Ⅲ组,内皮细胞诱导液培养;Ⅳ组,内皮细胞诱导液中加入SAR131675。流式细胞仪检测各组内皮细胞标志物v WF、PECAM-1、VE-Cadherin表达。结果 Western blot检测示,A、A1、B、B1组细胞的VEGFR-2、p VEGFR-2蛋白表达无明显差异,A1组VEGFR-3、p VEGFR-3蛋白表达明显高于其余3组。流式细胞仪检测示,A1组v WF、PECAM-1及VE-Cadherin表达均显著高于A、B、B1组,B1组显著高于A、B组(P0.05)。阻断VEGFR-3实验中,Ⅲ组v WF、PECAM-1及VE-Cadherin表达均显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组,Ⅳ组高于Ⅰ、Ⅱ组(P0.05)。结论 GIT1通过VEGFR-3影响小鼠BMSCs向内皮细胞分化,进而影响血管形成。

关键词： G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白1 BMSCs 内皮细胞 VEGF受体3 小鼠