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白细胞滤过技术在幼犬体外循环中的应用

白细胞滤过技术在幼犬体外循环中的应用

作者：孙剑南京医科大学

学位级别：硕士

目的：随着体外循环技术的进步和对其基础及临床研究的不断深入，体外循环(cardiopulmonary bypass，CPB)术后病人的各种并发症的发生率得到很大程度的降低，但CPB术后的器官组织功能障碍仍然是个常见的临床问题。因此，如何降低CPB中... 详细信息

目的：随着体外循环技术的进步和对其基础及临床研究的不断深入，体外循环(cardiopulmonary bypass，CPB)术后病人的各种并发症的发生率得到很大程度的降低，但CPB术后的器官组织功能障碍仍然是个常见的临床问题。因此，如何降低CPB中及其后的组织损伤，以及组织损伤发生的机理成为实验室和临床的研究重点。目前研究表明：CPB引起的系统性炎症反应是导致CPB后组织损伤的首要因素，而在这个损伤过程中，激活的中性粒细胞起着重要的作用。另外，未成熟组织在结构、功能和代谢各方面与成熟组织有着根本的不同，由于婴幼儿心脏手术的广泛深入开展，对CPB中未成熟组织的保护，也越来越引起大家的注意。基于如上理论依据，我们设想以幼犬建立CPB动物模型，在CPB动脉通路上放置白细胞滤过器，将CPB中的白细胞滤除，从根本上减少中性粒细胞激活的几率，观察是否可以减轻CPB中未成熟组织，特别是未成熟心肺组织的损伤。方法：将12只杂种幼犬(＜30天)随机分为两组：实验组(LD-CPB组，n=6)和对照组(NO-LD组，n=6)。针对幼犬建立CPB模型，NO-LD组常规建立CPB，而LD-CPB组的CPB动脉通路中加上白细胞滤过器。主动脉阻断60分钟(min)，整个CPB时间为180min。在体外循环(CPB)中动态观察心率和左心室收缩期末压力的变化，测量白细胞滤过器对血液成分的影响;在CPB开始前、主动脉阻断前及再灌注120min时取心、肺组织测量丙二醛(malondialdehyde，MDA)水平、髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性，同时自冠状静脉窦去静脉血液测量血清cTnI的含量以及手术后取心肺组织测其含水量，测量心肌中一氧化氮同功酶的活性和肺毛细血管通透性，用RT-PCR法观察心肌cNOSmRNA的基因表达，并且电镜观察心肺组织的超微结构变化。南京由科大学硕士学位论文结果显示：白细胞滤过器可以将血液中大多数白细胞滤过（滤过率为*** L 0．01），而对红细胞影响不大（滤过率仅为0．o3。 0．02）;恻血月板的滤过率也较高（0．59 t ***）。分别 i己录0B开始前，主动脉阻断前及其开放后 3 0分钟恤Zn厂60分钟和no分钟时的心率变化和左室收缩末期压，结果显示：m｛B组的左心室收缩期末压在再灌注后的恢复率明显大于 NO十D（P 硼．01），说明在0B中应用白细胞滤贩析以有利于左心功能的恢复。而心率的变化在两组间无显著性差异。 tb触清中和肺组织中的mA水平，在再灌注 12 om i n时均较转流前有所升高，而且两组间相比，NO－LD组mA的含量均明显大于＊－CPB组（P＜0．01，P＜0．01）;比较主动脉阻断前两组MDA 的含量发现：NO十D组也均较0B前明显升高，o且明显大于 LD－CPB组（P＜0．01，P＜0．01），说明在nB开始后，组织已受到氧自由基的侵害。也说明滤除白细胞可以减轻组织的脂质过氧化。检测。G肺组织中m 的活性友现：在CPB开始后W 含量均有升高，在主动脉阻断前和再灌注 12 om i n时，两组间的W 含量比较均有显著性差异（P＜0．o，P＜0．01;P＜0．01，P＜0．01）;与CPB前相比，主动脉阻断前的删含量，两组肺组织中的含量均增高，但 NO1D组升高的幅度明显高于＊｛PB组（P硼．01，尸＜0．“）;而。C肛U沮织中的肝0含量，洲－m组显著增高（尸＜o．01）， o LD｛PB组无明显差异（P司．11）。这说明中性粒细胞不是在主动脉阻断后才在组织中积聚，而是在nB开始后即已经开始大量积聚了，同时，鞭也说明应用白细胞滤过器可以减轻白细胞，特别中性粒细胞在组织中的积聚。再灌注 1umin时邮邹脉血测血清 cTnl浓度，两组血清 cTnl 浓度都高于正常值 0．6 t。g／l，但 NO1D组增高幅度明显高于 L卜CPB组（尸＜O．05〕。表明去白细月后可以减轻。。肌组织的损伤。 CPB术毕肺组织的BB值，乙D－CPB组（0．O861 O．0094）明显低于＊一二D组（0．2们1士0．0267），两者有显著性差异（尸＜0．01），＊南太医科人学硕士学位伦丈说明 NO＊D组的肺血管的通透性明显增

关键词：白细胞滤过体外循环未成熟心肺组织再灌注损伤

OX40L逆向信号对C57BL/6J小鼠主动脉内皮细胞胞内游离钙浓度的作用

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OX40L逆向信号对C57BL/6J小鼠主动脉内皮细胞胞内游离钙浓度的作用

作者：刘强南京医科大学

学位级别：硕士

背景近年来OX40/OX40L受体-配体信号途径参与动脉粥样硬化的发生、发展过程逐渐受到关注。共刺激分子OX40配体（OX40L/CD134L/gp34）,是参与免疫反应的辅助性分子,属肿瘤坏死因子（TNF）家族成员。OX40L主要表达在活化的抗原呈递细胞表... 详细信息

背景近年来OX40/OX40L受体-配体信号途径参与动脉粥样硬化的发生、发展过程逐渐受到关注。共刺激分子OX40配体（OX40L/CD134L/gp34）,是参与免疫反应的辅助性分子,属肿瘤坏死因子（TNF）家族成员。OX40L主要表达在活化的抗原呈递细胞表面,如树突状细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞,血管内皮细胞以及心脏、骨骼肌和肺等组织中。OX40L的受体OX40主要表达在活化的T细胞表面。OX40L与OX40结合后,通过OX40信号通路,促进活化后T细胞的存活、增殖和记忆性T细胞的产生,增强T细胞与其它细胞的粘附,传递抗原刺激信号,参与细胞的免疫活化过程。阻断OX40/OX40L作用不抑制全身免疫反应,成为治疗慢性炎症性疾病的目标之一。2005年,美国Jackson实验室首次报告了OX40L参与动脉粥样硬化的发生,抗OX40L抗体干预可抑制斑块形成、促进斑块稳定。在主动脉动脉粥样硬化斑块部位的内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞和淋巴细胞均有丰富的OX40L表达。斑块部位OX40L的局灶性表达增高,是仅仅增强共刺激分子信号的作用,还是另有其它的生物学效应?在斑块破裂中是否发挥作用?尚待研究。逆向信号通路是共刺激分子的重要特征,即除了配体/受体的正向信号,受体也可通过配体传递逆向信号。内皮细胞OX40L的一个重要特性是可直接介导T细胞或OX40+转染的T细胞向内皮细胞黏附,斑块内有大量T细胞集聚,斑块部位内皮细胞OX40L表达增高和OX40L逆向信号的激活,增强了内皮细胞与T细胞间的信息传递,导致内皮细胞内促斑块破裂因子与斑块稳定因子表达与释放的失平衡,可能是斑块破裂的触发因素之一。细胞内游离钙浓度([Ca])在内皮细胞的信号转导中起重要作用,内皮细胞[Ca]水平升高可以促进多种促栓塞和缩血管物质从内皮细胞释放,如内皮素、vWF、组织因子、前列腺素E2等。生理条件下,内皮细胞以动态方式维持[Ca]的平衡,通过抑制这些血管活性物质从内皮细胞分泌而维持内皮细胞的抗栓、非粘附等特性。TNF配体胞浆区氨基酸序列高度保守,其逆向信号的激活可诱导细胞内钙离子浓度增高。OX40L的逆向信号是否影响内皮细胞[Ca]的改变,尚不清楚。本论文将研究OX40L逆向信号的激活对动脉内皮细胞[Ca]的作用,为OX40/OX40L信号致血管病变机制提供实验数据。目的研究OX40L逆向信号对C57BL/6J小鼠主动脉内皮细胞胞内游离钙浓度的作用。方法1、内皮细胞培养8～12周的C57BL/6J小鼠,腹腔注射肝素钠1250U/只,20分钟后用7.5%的水合氯醛腹腔注射麻醉（约11.25g/kg体重）。依次切开皮肤、肌层、筋膜,暴露心肺和胸、腹主动脉,肾动脉分叉处剪断腹主动脉放血后,用1ml无菌注射器自左室心尖部灌注含1000U/ml肝素钠的磷酸盐缓冲液,冲洗主动脉至流出液变清亮为止。用血管夹钳夹血管一端,自另一端注入Ⅱ型胶原酶消化液,37℃消化45 min。用5 ml 20%胎牛血清-DMEM冲洗血管终止消化,收集冲洗液,1000 rpm/min离心5 min。调整细胞密度至10～5/ml后接种至I型鼠尾胶原包被的六孔板,添加1～2ml的内皮细胞培养液,5%CO孵育箱内37℃贴壁2 h。吸去未贴壁细胞及内皮细胞培养液,加1ml内皮细胞培养液,5%CO2,37℃孵育箱内培养3天。每2～3天更换培养液一次。2、内皮细胞鉴定当细胞呈汇合状态时取出备用,用冷甲醇固定细胞抗原,洗脱液细胞膜打孔,0.6% HO孵育灭活内源性过氧化物酶,封闭液封闭非特异性抗原。加入vWF抗体（1:400）、α- actin抗体（1:150）,4℃过夜。加入辣根过氧化酶标记的anti-rabbit二抗（1:200）,37℃反应60min。加入DAB反应液显色,观察阳性染色细胞的比例。3、内皮细胞OX40L表达细胞呈汇合状态时取出,100%冷甲醇﹣20℃固定细胞抗原20 min。磷酸盐缓冲液清洗后,室温下洗脱液细胞膜打孔15 min,随后用0.6% HO室温孵育15 min。磷酸盐缓冲液清洗后,用封闭液室温孵育45 min。加入OX40L抗体（1:200）,4℃过夜。磷酸盐缓冲液清洗后,加入辣根过氧化酶标记的anti-goat二抗（1:200）,37℃,60min。加入DAB反应液后避光反应2min左右,用磷酸盐缓冲液终止反应,观察阳性染色细胞的比例。4、OX40L逆向信号激活对内皮细胞[Ca]的作用将接种在激光共聚焦培养皿上的同批次内皮细胞,用DMEM培养24h,细胞分组（1）观察OX40对内皮细胞[Ca]的作用:内皮细胞分为对照组（内皮细胞未用OX40干预）、OX40干预组（内皮细胞分别用25 u

关键词： OX40L 细胞内游离钙主动脉内皮细胞 C57BL/6J小鼠

孕期大气污染物暴露对出生结局及生命早期神经行为发育的影响

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孕期大气污染物暴露对出生结局及生命早期神经行为发育的影响

作者：吉音文南京医科大学

学位级别：硕士

大气污染是世界范围内的重大环境问题,对人类健康造成广泛而有害的影响。全球疾病负担研究2010指出,世界范围内多达310万人死亡是由环境大气污染造成的。大气中的汚染物,尤以颗粒物(particulate matter,PM)为主,对健康造成的不利影响最... 详细信息

大气污染是世界范围内的重大环境问题,对人类健康造成广泛而有害的影响。全球疾病负担研究2010指出,世界范围内多达310万人死亡是由环境大气污染造成的。大气中的汚染物,尤以颗粒物(particulate matter,PM)为主,对健康造成的不利影响最为严重。许多研究表明,大气污染可能导致包括呼吸困难、哮喘、咳嗽、甚至会加重现有的呼吸和心肺功能损害这一系列健康问题。近年来,越来越多的研究开始聚焦在孕期大气污染物暴露对子代健康影响。胎儿期是生命发育的最早阶段,这一时期受到污染的有害刺激将直接影响后期的出生结局以及神经行为发育水平。不良出生结局中早产和低出生体重被报道是近年来我国新生儿死亡的主要原因。神经系统发挥着在身体各部位之间传送信号、接收反馈的作用,神经系统发育不良与儿童期的自闭症甚至老年期的阿尔兹海默症有关。国外尤其是欧美地区对大气污染与低出生体重、早产以及神经行为发育的关联研究已经有很多,但结果仍不一致。而国内此类的研究尤其是有关神经行为发育的研究仍罕见。江苏位于长三角沿岸,人口密集,属于经济和工业较发达地区,随着工业的迅猛发展和国民经济的快速提高,大气污染日益严重。南京作为苏南地区工业发达城市的代表,电厂、钢厂数量众多,燃煤量大,2013年雾霾天数达到242天;泰州作为苏中地区的代表,大气质量也不容乐观。研究具有典型代表的南京和泰州两地的孕期大气污染物暴露对子代健康的影响意义极其重大。因此,本课题旨在通过队列研究对南京及泰州地区幼儿的神经行为发育水平及早产、低出生体重、出生体重情况进行调查,探索孕期大气污染物暴露与出生结局和生命早期神经行为发育的关系,同时试图找出暴露的关键时间窗,为孕期做好大气污染的防护措施的必要性提供科学依据。[目的]通过队列研究调查孕期细颗粒物暴露对子代神经行为发育的影响情况以及孕期大气污染物暴露对出生结局影响情况,并探讨其暴露的关键时间窗。[方法]1.招募了 2008年1月至2014年12在南京市妇幼参加产检并进行分娩的1,080名孕妇,根据提供的末次月经时间推算出怀孕起始时间,并以每三个月为间隔划分孕早、孕中和孕晚期,结合研究期间南京地区9个国控点的细颗粒物(particulate matter of a diameter of 2.5 μm or less,PM2.5)监测数据,及调查问卷中提供的详细住址信息,利用反距离权重(Inverse distance weighted,IDW)的空间插值法估算出研究对象三个孕期及全孕期居住地上方的PM2.5暴露浓度值;跟踪随访记录出生信息,并使用Gesell发育量表在每个幼儿6个月、12个月、24个月进行神经行为评测并记录数值。运用多重线性回归(multiple linear regression,MLR)和广义估计方程(generalized estimated equation,GEE)两种统计学方法去分析孕期PM2.5暴露与子代生命早期神经行为发育情况之间的关联。2.于2013年1月至2016年12月,在泰州市妇幼保健院招募参与产检并有意愿在此分娩的孕妇,共计26,998例,对应每个孕妇怀孕期间监测站点PM2.5、二氧化氮(nitrogen dioxide,NO2)的浓度值和经过转化的家庭住址经纬度信息,通过IDW法估算出每个孕妇孕早期、孕中期、孕晚期以及整个孕期居住区域上方的PM2.5、NO2的暴露浓度,采用Logistic回归法分析孕期暴露于大气污染物与子代早产和足月低出生体重之间的关联。[结果11.多重线性回归的结果显示:调整协变量后,孕早期每增加100 μg/m3的PM2.5暴露浓度,子代6个月的适应性发育商下降3.98分,(β=-3.98,95%CI:-6.37～-1.59),子代12个月的适应性发育商下降3.40分,(β=-3.40,95%CI:-6.37～-1.59),子代24个月的适应性发育商下降2.15分,(β=-2.15,95%CI:-4.21～-0.10)。利用GEE模型进行统计分析发现,孕早和孕中期每增加100μg/m3的PM2.5暴露浓度,分别使子代2岁以内的适应性发育商降低 2.9 分和 1.1 分(β=-2.9,95%CI:-4.9～-1.0;β=-1.1,95%CI:-2.1～-0.1)。2.多污染物Logistic回归调整模型结果显示,控制另外污染物的影响后,孕中期 NO2暴露浓度与(13.5—20.9 μg/m3)组相比,(29.9—44.4 μg/m3)组早产的风险增加59%(aRR=1.59,95%C1:1.44～1.75),足月低出生体重风险增加12%(aRR=1.12,95%CI:1.02～1.23);孕晚期NO2暴露浓度与(11.3—22.3 μg/m3)组相比,(33.7—61.8μg/m3)组早产

关键词：大气污染物孕期出生结局神经行为发育回顾性队列研究

缺氧对人近曲肾小管上皮细胞表达和分泌renalase蛋白的影响

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缺氧对人近曲肾小管上皮细胞表达和分泌renalase蛋白的影响

作者：邹林林南京医科大学

学位级别：硕士

缺氧对人近曲肾小管上皮细胞表达和分泌renalase蛋白的影响目的在模拟缺氧条件下培养人近曲肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)不同的时间,观察HK-2细胞在缺氧条件下的形态学变化,以及缺氧不同时间后Western blot、Realtime-PCR检测的HK-2细胞r... 详细信息

缺氧对人近曲肾小管上皮细胞表达和分泌renalase蛋白的影响目的在模拟缺氧条件下培养人近曲肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)不同的时间,观察HK-2细胞在缺氧条件下的形态学变化,以及缺氧不同时间后Western blot、Realtime-PCR检测的HK-2细胞renalase表达水平的变化,探索缺氧对HK-2细胞renalase蛋白表达的影响。方法复苏冻存的HK-2细胞,采用传代后的第2-5代细胞进行实验,进行实验前用无血清DMEM培养细胞12 h使细胞同步化。利用密闭的细胞培养罐模拟缺氧环境,并检测其缺氧效果。然后建立体外HK-2细胞的缺氧培养方案(缺氧实验组与正常氧对照组)。正常氧组培养条件为95% O2+5% CO2,缺氧组细胞置于1% O2+5% CO2+94% N2密闭培养罐内培养,37℃培养6h、12h、24h、48h,通过倒置显微镜观察上述时间点HK-2细胞的形态学变化、死亡细胞记数等指标。收集培养液和细胞,用ELISA方法检测细胞上清液中renalase蛋白的含量;提取HK-2细胞的总RNA,应用实时荧光定量-聚合酶链反应法(real-time PCR)进行定量分析,研究HK-2细胞在缺氧不同时间点renalase mRNA的表达变化;提取细胞内总蛋白,应用Western blot方法检测缺氧条件下renalase蛋白的表达水平,并分别与正常氧下培养的细胞做比较。用SPSS软件进行数据统计分析。结果1. HK-2细胞缺氧培养6h、12h、24h、48h后细胞数目和形态学的改变:随着缺氧时间的延长,细胞生长速度减慢,视野内细胞减少,48h缺氧组细胞约减少至48h对照组细胞的80%,且细胞出现皱缩变形。2. HK-2细胞缺氧培养6h、12h、24h、48h后上清液中renalase蛋白的含量低于最低检测低限0.0625μg/ml。3. HK-2细胞缺氧培养6h、12h、24h、48h后renalase mRNA表达水平的改变:缺氧6h组renalase mRNA相对表达率为1.25,表达略有增高,但差异无统计学意义(P>0.05),缺氧12h组为1.96,表达显著增高(P0.05)。4. HK-2细胞缺氧培养6h、12h、24h、48h后renalase蛋白表达水平的改变:与正常氧组对照,缺氧6h、12h、24h、48h组,renalase蛋白表达均有所升高,并随时间呈现先逐渐增高后降低的趋势,其中6h组renalase蛋白表达水平和对照组比较无显著性差异(P>0.05);12h和24h renalase蛋白表达水平与对照组比较有显著性差异(P0.05)。结论在24小时内,缺氧使HK-2细胞renalase蛋白的表达与分泌增高,并且以24h最为明显,后出现逐渐降低趋势。这种缺氧后renalase表达水平的变化可能对研究肾脏缺血后renalase表达的变化有所帮助。

关键词：缺氧 renalase HK-2细胞

Nd:YAG激光和Er:YAG激光对根管内粪肠球菌杀灭效果的体外研究

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Nd:YAG激光和Er:YAG激光对根管内粪肠球菌杀灭效果的体外研究

作者：陈静文南京医科大学

学位级别：硕士

目的:根管治疗术是目前治疗牙髓病和根尖周病最有效的方法,彻底清除根管内感染物质是治疗成功的关键。粪肠球菌是根管治疗失败病例中最常检测到的微生物,难以通过传统消毒方法完全去除。本研究观察Nd:YAG激光、Er:YAG激光及两者联用对... 详细信息

目的:根管治疗术是目前治疗牙髓病和根尖周病最有效的方法,彻底清除根管内感染物质是治疗成功的关键。粪肠球菌是根管治疗失败病例中最常检测到的微生物,难以通过传统消毒方法完全去除。本研究观察Nd:YAG激光、Er:YAG激光及两者联用对根管内粪肠球菌的杀灭效果,为激光在根管消毒中的应用提供证据。方法:将粪肠球菌标准菌株(ATCC 29212)复苏、培养,配制菌悬液并调整浓度。收集直根管离体牙,截去牙冠使根管长度为10mm,根管预备至30/0.06,复合树脂封闭根尖孔。移取菌液制备感染根管模型。将感染根管随机分为5组。A组:0.9%Na Cl溶液组;B组:1%Na Cl O溶液组;C组:Nd:YAG激光组;D组:Er:YAG激光组;E组:Nd:YAG激光+Er:YAG激光组。每组随机选取一半感染模型处理,余下模型不做处理作为对照。用无菌纸尖在根管内取样,稀释后平板培养,细菌计数,并计算杀菌率。从各组处理样本中随机选择2个样本,加上2个未处理样本,劈开牙根,扫描电镜观察根管内壁。结果:细菌计数结果显示,B、C、D、E组杀菌率均显著高于A组(P0.05)。除C组和D组外,各组间杀菌率均有统计学差异(P<0.05)。扫描电镜结果显示,Er:YAG激光照射后,牙本质小管开放,根管内壁光滑。激光组及1%Na Cl O溶液组均有较好的根管消毒效果。结论:Nd:YAG激光和Er:YAG激光均有一定的粪肠球菌杀灭效果,Er:YAG激光还有良好的去除玷污层效果。两种激光联用能杀灭根管内约三分之二的粪肠球菌。激光与传统消毒方法相比有独特的优势,可作为传统消毒方法的补充,但尚不能取代之。

关键词： Nd:YAG激光 Er:YAG激光杀菌效果根管治疗

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多光子显微镜用于食管癌诊断的离体研究

多光子显微镜用于食管癌诊断的离体研究

作者：马丽梅南京医科大学

学位级别：硕士

背景：食管癌是严重威胁人类健康的常见恶性肿瘤,总五年生存率低于20%。因此,探索食管癌的早期诊断及合理的治疗方法,改善患者的生活质量和延长存活时间,是摆在我们面前的一个严峻的难题和挑战。近些年来,由于电子胃镜、色素内镜、超声... 详细信息

背景：食管癌是严重威胁人类健康的常见恶性肿瘤,总五年生存率低于20%。因此,探索食管癌的早期诊断及合理的治疗方法,改善患者的生活质量和延长存活时间,是摆在我们面前的一个严峻的难题和挑战。近些年来,由于电子胃镜、色素内镜、超声内镜、放大内镜、窄带成像技术、荧光内镜、激光共聚焦显微镜的应用,使食管癌诊断率大大提高,但最终的确诊仍需病理诊断。术前活检,临床上存在出血、针道、转移、病理流程费时等缺点;而术后组织病理学诊断,需要取材及随后的组织固定、包埋、切片、染色等步骤。多光子显微镜(Multiphoton microscopy, MPM)技术基于非线性光学和飞秒激光镭射之上的多光子“光学活检”,通过利用活体组织中细胞本身产生的自体荧光及胶原组织产生的第二谐波,可以实时快速地获得肿瘤实质的组织结构、细胞形态以及肿瘤间质在肿瘤侵袭转移中胶原的反应变化。细胞本身产生的自体荧光来自细胞内的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide, NADH)及黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide, FAD)。多光子“光学活检”不仅可以捕获肿瘤的组织学特征,而且可以反映肿瘤细胞的代谢水平以及周围间质中胶原信号的变化。MPM无需传统病理多重步骤,是一种实时快速的诊断方法,具有实时、无损、穿透率高及分辨率高等优势。MPM有望成为肿瘤的实时诊断工具。目的：1,比较正常兔食管组织,VX2食管鳞癌组织及紫杉醇支架治疗后的食管组织MPM下的成像特点;2,总结出人正常食管组织,食管高级别上皮内瘤变及食管鳞癌的MPM下的成像特点;3,运用以上总结出的特点,扩大样本量计算MPM诊断效能即敏感度,特异度及准确性。方法：1,新西兰兔24只(购自江苏南京市青龙山动物繁殖场,合格证号：SCXK(苏)2007-0008),3月龄,均为雄性,体重1.8-2.0g,动物体健,颗粒饲料喂养,将VX2(兔鳞状上皮来源的癌细胞)组织块注射入兔后腿肌肉内,约2周后长成癌细胞肿块,将肿块在无菌条件下取出并剪碎成小块冻存于-80℃超低温冰箱;2,将肿瘤组织块注射入兔食管内：采用内镜下动物造模的方法,将组织块取出复苏,剪碎至约1mm大小,通过注射针在内镜下将组织块注射入食管粘膜下层。通过超细内镜检查确定狭窄超过2/3管腔时满足植入支架适应症,通过支架输送器经口将支架植入病变部位,两周后猝死新西兰兔;3,取正常的兔食管组织,成瘤的食管癌组织及支架置入治疗后的食管癌组织分为三组,将组织行冰冻切片,在MPM下成像及病理成像,收集图像。比较成像特点;4,收集人正常食管组织、高级别上皮内瘤变组织及食管鳞癌组织,制作成冰冻切片,在MPM下成像及病理成像,总结出MPM成像特点;5,扩大样本量,用以上总结出的MPM成像特点,以病理为金标准,计算MPM的诊断效能。结果：1,成功的总结出正常的兔食管组织,成瘤的食管癌组织及支架置入治疗后的食管病变组织的MPM成像特点,三组胶原蛋白的平均光密度为正常食管组织的胶原纤维的光密度为16.15±5.73,肿瘤组为1.46±1.20,支架置入术后组为4.16±2.17,P<0.05,差异有统计学意义;2,MPM可以成功区分正常食管组织、高级别上皮内瘤变组织及食管鳞癌组织,三组NADH/FAD的比值为食管鳞癌的NADH/FAD比值是3.36±0.28食管高级别上皮内瘤变NADH/FAD比值是2.85±0.19正常食管组织的NADH/FAD比值是1.91±0.12,P<0.05,差异有统计学意义;3,得出MPM诊断效能：敏感度：95%,特异度为：94.44%,阳性预测值97.08%,阴性预测值90.67%,准确度：94.81%。结论：1,MPM可以区分正常的食管组织、食管癌组织及支架置入后的组织;2,MPM可以诊断出人正常的食管组织,食管高级别上皮内瘤变的组织及食管癌组织;3,MPM的诊断效能比较高,可实现实时诊断,具有可观的发展前景。

关键词：食管癌多光子显微镜双光子成像二次谐波

再次肺移植治疗肺移植术后闭塞性细支气管炎综合征（附5例报道）

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再次肺移植治疗肺移植术后闭塞性细支气管炎综合征（附5例报道）

作者：蒋华驰南京医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨再次肺移植治疗肺移植术后慢性闭塞性细支气管炎的疗效。方法:对无锡市人民医院五例肺移植术后出现慢性闭塞性细支气管炎综合征的患者进行二次移植。五名受者原发病均诊断为终末期肺病包括间质性肿炎1例,支气管扩张1例,原发性... 详细信息

目的:探讨再次肺移植治疗肺移植术后慢性闭塞性细支气管炎的疗效。方法:对无锡市人民医院五例肺移植术后出现慢性闭塞性细支气管炎综合征的患者进行二次移植。五名受者原发病均诊断为终末期肺病包括间质性肿炎1例,支气管扩张1例,原发性肺动脉高压1例,骨髓移植术后慢性闭塞性细支气管炎1例,慢性阻塞性肺疾病1例,初次移植手术顺利。5名受者术后肺功能进行性下降,分别于术后9个月、2年、3年、5年、12年因慢性闭塞性细支气管炎综合征进行二次移植,包括2例序贯式双肺移植及3例单肺移植,其中1例双肺移植在体外膜肺氧合辅助下完成。结果:5名受者再次移植手术过程顺利,其中病例1于术后8d、因肺部感染死亡,病例2术中出现心脏骤停,于术后4d因复苏后综合征导致多脏器功能衰竭死亡,其余3名受者随访至今恢复良好,肺功能明显改善。结论:再次肺移植是肺移植术后慢性闭塞性细支气管炎综合征有效治疗方法,而何种病人受益最大需要进一步研究。

关键词：再次肺移植闭塞性细支气管炎综合征肺移植

无痛取卵术联合应用丁卡因胶浆对患者围术期及临床结局的影响

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无痛取卵术联合应用丁卡因胶浆对患者围术期及临床结局的影响

作者：周琳琳南京医科大学

学位级别：硕士

背景:近年来,不孕症的发病率逐年增加,我国不孕症的发病率约为12-15%。作为不孕症的重要治疗手段之一,以IVF-ET(In Vitro Fertilization&Embryo Transfer,体外受精-胚胎移植)为主要代表的辅助生殖技术成功率高,得到患者的广泛接受。为... 详细信息

背景:近年来,不孕症的发病率逐年增加,我国不孕症的发病率约为12-15%。作为不孕症的重要治疗手段之一,以IVF-ET(In Vitro Fertilization&Embryo Transfer,体外受精-胚胎移植)为主要代表的辅助生殖技术成功率高,得到患者的广泛接受。为满足患者对治疗舒适度的追求,采用一种既简便又安全的麻醉镇痛方式非常必要。结合目前主流的静脉麻醉方式,本实验拟丁卡因联合静脉麻醉胶浆,提高取卵过程中的安全性和病人的舒适度。理论上,丁卡因胶浆性质稳定,可提供优秀的局部镇痛效果,另外凝胶制剂的润滑作用有利于手术进行,同时丁卡因的应用可能减少手术中静脉麻醉药物的使用,降低其对卵母细胞的潜在危害。因此,我们将通过临床实验研究丁卡因胶浆对取卵患者围手术期的影响,并初步探究对其临床结局的影响。方法:1.经上海市第十人民医院生殖伦理委员会批准(批件号:SHSY-RPIEC-19-01/01)。2017年8月至2018年6月,在上海市第十人民医院生殖中心行体外受精-胚胎移植的符合实验入组标准的受试者70例,根据受试者实际情况采用十院生殖中心标准微刺激方案、长方案、短方案及拮抗剂方案行促排卵,共70个周期。随机单盲纳入实验组(A组,n=35)与对照组(B组,n=35)。2.实验组A组:术前10min在阴道穹隆挤入一只8g的丁卡因胶浆,丙泊酚进行麻醉诱导和维持,舒芬太尼镇痛。对照组B组:单纯应用丙泊酚进行麻醉诱导和维持,舒芬太尼镇痛。3.比较两组受试者麻醉过程中丙泊酚及舒芬太尼总量,手术中血流动力学指标,手术时间,麻醉时间,苏醒时间,术后受试者VAS评分(Visual Analogue Scale,视觉模拟评分),术后满意度评分及术中不良反应,研究丁卡因胶浆对受试者术中及术后的短期影响。4.比较两组受试者获卵数,受精率,优胚率,临床妊娠率,研究丁卡因胶浆对受试者临床结局影响。结果:1.实验组A组受试者丙泊酚用量低于对照组B组受试者,手术时间,麻醉时间均低于B组,以上差异具有统计学意义(P0.05)。3.A组术后满意度高于B组,差异具有统计学意义(P>0.05),两组术后VAS评分差异无统计学意义(P>0.05)。4.A组、B组受试者的获卵数,受精率,优胚率,临床妊娠率均无统计学差异(P>0.05)。结论:1.丁卡因胶浆复合静脉麻醉减少术中镇静剂的用量,减少手术时间,具有临床意义。2.丁卡因胶浆不影响术中血流动力学,不增加不良反应,不影响麻醉复苏,是安全、可行的。3.使用丁卡因胶浆可提高患者术后满意度,缓解术后疼痛。4.静脉麻醉联合使用丁卡因胶浆对受试者的临床结局无明显不良影响。

关键词： IVF-ET 取卵术丁卡因静脉麻醉