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全人源1型糖尿病自身抗原ZnT8特异性scFv抗体的制备及鉴定

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全人源1型糖尿病自身抗原ZnT8特异性scFv抗体的制备及鉴定

作者：吴倩南京医科大学

学位级别：硕士

1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)是由T淋巴细胞介导,以选择性破坏胰岛β细胞为特征的器官特异性自身免疫性疾病[1]。胰岛β细胞存在着多种自身抗原,如胰岛素,谷氨酸脱羧酶(GAD),酪氨酸磷酸酶和锌转运体8(ZnT8)。其中,ZnT8被认为是T1D的... 详细信息

1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)是由T淋巴细胞介导,以选择性破坏胰岛β细胞为特征的器官特异性自身免疫性疾病[1]。胰岛β细胞存在着多种自身抗原,如胰岛素,谷氨酸脱羧酶(GAD),酪氨酸磷酸酶和锌转运体8(ZnT8)。其中,ZnT8被认为是T1D的重要自身抗原,Wenzlau等发现部分T1D高危患者发病前2年即可检测到ZnT8抗体且长期维持在较高水平[2,3]。我们前期研究发现ZnT8存在着多个抗原表位可被相应的自身抗体识别,且ZnT8抗体水平与T1D的发展存在着显著的相关性[4]。ZnT是一组将锌离子由胞内转运出胞外的跨膜蛋白,与锌铁调控蛋白(Zrt/Irt-like protein,ZIP)共同维护细胞内外锌离子的平衡[5]。2004年,Cheimienti等首次在ZnT家族中发现ZnT8蛋白,它由SLC30A8基因编码,高度特异的表达在胰腺中,后进一步研究发现ZnT8特异的表达在胰岛β细胞上,在INS-1细胞中过表达ZnT8可促使锌离子的聚集并增强糖刺激后的胰岛素释放[6,7]。这些研究表明ZnT8在胰岛素的合成和分泌中发挥重要作用。目前,动物来源的ZnT8全分子抗体在科研中已逐渐显示其重要应用价值,而关于人源ZnT8抗体的构建及应用暂无报道。检测ZnT8抗体和ZnT8特异性CD8+T细胞是预测和诊断T1D的重要手段。针对ZnT8靶点的特异性治疗将成为阻止T1D进展的潜在方法[81。因此,研发人源ZnT8抗体对T1D的临床诊断及治疗试剂的研发将具有重要的价值。通过单链抗体(scFv)噬菌体库展示技术构建全人源T1D scFv噬菌体抗体库,筛选ZnT8特异性scFv抗体,并对其功能进行鉴定,将为T1D的诊断及治疗试剂的研发提供新的基础及思路。研究方法1.原核表达重组人ZnT8蛋白以ZnT8(SLC30A8)基因为模板,扩增ZnT8氨基端(l-74aa)及羧基端(268-369aa)基因,重叠PCR制备氨基羧基融合基因(N/C);以JH5.2质粒(美国Babara实验室惠赠,该质粒含ZnT8羧基端(268-369aa)二聚突变体基因,第一个羧基端的325位为Arg,第二个羧基端的325位为Trp,两段基因通过一段柔性肽链接)为模板,扩增ZnT8(Arg325Trp)基因。两段目的基因酶切后分别与pcold Ⅱ连接,连接产物转化入*** BL21感受态细胞获得阳性重组子,IPTG低温诱导表达后收集细胞沉淀,超声裂解沉淀后,上清用亲和柱纯化得到重组ZnT8蛋白,SDS-PAGE、Western blot 鉴定 ZnT8 重组蛋白。ELISA 检测 ZnT8(N/C)蛋白与商品化的多克隆ZnT8抗体结合的量效关系。2.构建全人源T1D scFv噬菌体抗体库取50位初诊T1D志愿者的外周血,采用放射免疫配体法检测ZnT8抗体水平,分离外周血单个核细胞(PBMC),提取细胞总RNA后逆转录为cDNA,通过人源scFv(single chain Fv fragment)抗体通用引物扩增重链及轻链可变区基因,再利用overlap-PCR法获得scFv基因;将scFv基因与pComb3XSS分别经SifI酶切,酶切产物连接后多次电转化入*** XL1-Blue感受态中,复苏细菌后加入辅助噬菌体VCSM13培养过夜,上清加入4%PEG8 000,3%NaCl,收集沉淀获得T1D scFv噬菌体抗体库。3.T1D自身抗原ZnT8特异性scFv抗体的筛选与表达以纯化的ZnT8(N/C)蛋白作为抗原,将制备好的scFv抗体库经过四轮“吸附—洗脱—扩增”,在最后一轮筛选得到的细菌集落中随机挑选单克隆,phage-ELISA鉴定后选择OD值较高的测序正确的克隆进达及纯化。4.T1D自身抗原ZnT8特异性scFv抗体的鉴定通过亲和力、Western Blot、ELISA、免疫组化方法等对纯化的scFv抗体进行特异性鉴定。研究结果1.将阳性重组质粒用pcoldⅡ测序引物进行PCR鉴定,ZnT8(N/C)基因扩增的片段大小为550 bp,ZnT8(Arg325Trp)基因扩增的片段大小为650bp,均与预期相符;将重组质粒转化入*** BL21,低温诱导表达后Western blot结果显示重组蛋白主要表达在细菌沉淀中。SDS-PAGE显示纯化后的ZnT8(N/C)蛋白分子量大小为20 kD,ZnT8(Arg325Trp)蛋白分子量大小为25 kD。ELISA结果表明ZnT8(N/C)蛋白能被商品化的ZnT8抗体识别,具有剂量依赖性,可以用于ZnT8抗体的筛选,其最适包被剂量为0.8μg/孔。2.两次PCR扩增后获得scFv基因(～750 bp),电转化入*** XL1-Blue感受态中,经辅助噬菌体感染后最终获得的

关键词： 1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D) 锌转运体 8(zinc transporter 8,ZnT8) 噬菌体抗体库单链抗体(single chain Fv fragment,scFv)

Nd:YAG激光和Er:YAG激光对根管内粪肠球菌杀灭效果的体外研究

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Nd:YAG激光和Er:YAG激光对根管内粪肠球菌杀灭效果的体外研究

作者：陈静文南京医科大学

学位级别：硕士

目的:根管治疗术是目前治疗牙髓病和根尖周病最有效的方法,彻底清除根管内感染物质是治疗成功的关键。粪肠球菌是根管治疗失败病例中最常检测到的微生物,难以通过传统消毒方法完全去除。本研究观察Nd:YAG激光、Er:YAG激光及两者联用对... 详细信息

目的:根管治疗术是目前治疗牙髓病和根尖周病最有效的方法,彻底清除根管内感染物质是治疗成功的关键。粪肠球菌是根管治疗失败病例中最常检测到的微生物,难以通过传统消毒方法完全去除。本研究观察Nd:YAG激光、Er:YAG激光及两者联用对根管内粪肠球菌的杀灭效果,为激光在根管消毒中的应用提供证据。方法:将粪肠球菌标准菌株(ATCC 29212)复苏、培养,配制菌悬液并调整浓度。收集直根管离体牙,截去牙冠使根管长度为10mm,根管预备至30/0.06,复合树脂封闭根尖孔。移取菌液制备感染根管模型。将感染根管随机分为5组。A组:0.9%Na Cl溶液组;B组:1%Na Cl O溶液组;C组:Nd:YAG激光组;D组:Er:YAG激光组;E组:Nd:YAG激光+Er:YAG激光组。每组随机选取一半感染模型处理,余下模型不做处理作为对照。用无菌纸尖在根管内取样,稀释后平板培养,细菌计数,并计算杀菌率。从各组处理样本中随机选择2个样本,加上2个未处理样本,劈开牙根,扫描电镜观察根管内壁。结果:细菌计数结果显示,B、C、D、E组杀菌率均显著高于A组(P0.05)。除C组和D组外,各组间杀菌率均有统计学差异(P<0.05)。扫描电镜结果显示,Er:YAG激光照射后,牙本质小管开放,根管内壁光滑。激光组及1%Na Cl O溶液组均有较好的根管消毒效果。结论:Nd:YAG激光和Er:YAG激光均有一定的粪肠球菌杀灭效果,Er:YAG激光还有良好的去除玷污层效果。两种激光联用能杀灭根管内约三分之二的粪肠球菌。激光与传统消毒方法相比有独特的优势,可作为传统消毒方法的补充,但尚不能取代之。

关键词： Nd:YAG激光 Er:YAG激光杀菌效果根管治疗

Rho激酶抑制剂法舒地尔对低氧性肺动脉高压大鼠干预作用的研究

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Rho激酶抑制剂法舒地尔对低氧性肺动脉高压大鼠干预作用的研究

作者：孙兴珍南京医科大学

学位级别：硕士

低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension，HPH)是一些心肺血管疾病最常见的并发症，以肺动脉压力增高、肺血管结构重建和右心室肥厚为特征，如不干预，病情日益加重，可导致右心衰竭而死亡。目前其发病机制尚不完全清楚，临... 详细信息

低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension，HPH)是一些心肺血管疾病最常见的并发症，以肺动脉压力增高、肺血管结构重建和右心室肥厚为特征，如不干预，病情日益加重，可导致右心衰竭而死亡。目前其发病机制尚不完全清楚，临床上也缺乏理想的治疗药物。因此，对HPH形成机制的研究及其研发有效的防治HPH的药物显得尤为必要。HPH是一个由多种分子和多种靶细胞相互作用的复杂过程，而其中何种因素在HPH的发生与发展阶段起关键作用，尚无明确的结论。近年来，Rho／Rho激酶信号转导通路与心肺血管疾病之间的关系受到了日益广泛的关注。有研究表明，选择性阻断该信号通路可以改善心肺血管损伤的进展和预后，然而其确切的作用机制尚不清楚。本研究观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对低氧性肺动脉高压大鼠肺血管结构变化的影响，并应用逆转录聚合酶链反应以及蛋白免疫印迹技术，从基因和蛋白质水平研究Rho激酶抑制剂法舒地尔对Rho／Rho激酶信号通路的作用及其机制，并研究该信号通路与HPH形成与发展的相关性，为研发新一代治疗药物提供有益的靶标，也为临床治疗HPH提供实验及理论依据。第一部分 Rho激酶抑制剂法舒地尔对低氧性肺动脉高压大鼠的作用——血流动力学与病理学研究目的：建立低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠模型，探讨HPH形成的病理机制，研究Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠形成HPH过程中肺动脉压增高及肺血管结构重建的影响。方法：72只雄性SD大鼠，随机均分为正常对照组、低氧模型组和法舒地尔干预组。采用常压间断低氧法[(10±0.5)％O，每天间断低氧8小时，每周6天，共21天]建立大鼠HPH模型。分别于低氧不同阶段(第3天、7天、14天和21天)测定各组大鼠平均肺动脉压力(mean pulmonary artery pressure，mPAP)、平均颈动脉压力(mean cervical arterial

关键词： Rho/Rho激酶 Rho激酶抑制剂法舒地尔肺动脉高压低氧性肺组织血管重建

前列腺素E1在心肺转流过程中对血小板功能影响的研究

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前列腺素E1在心肺转流过程中对血小板功能影响的研究

作者：桑永华南京医科大学

学位级别：硕士

目的从分子生物学及细胞生物学的角度,通过测定血小板花生四烯酸代谢过程中的相关指标和观察血小板超微结构,分析心肺转流(cardiopulmonary bypass,CPB)对血小板功能和结构的影响,探讨前列腺素E(PGE)在CPB过程中对血小板的保护作用。 ... 详细信息

目的从分子生物学及细胞生物学的角度,通过测定血小板花生四烯酸代谢过程中的相关指标和观察血小板超微结构,分析心肺转流(cardiopulmonary bypass,CPB)对血小板功能和结构的影响,探讨前列腺素E(PGE)在CPB过程中对血小板的保护作用。方法选取行CPB下瓣膜置换手术的风湿性心脏病患者24例,随机分成实验组(PGE干预组)和空白对照组,每组12例。实验组于麻醉诱导开始时从中心静脉持续匀速泵入PGE(10ng╱(kg·min))至CPB结束,对照组则持续匀速泵入等量生理盐水,其他条件相同。用放射-免疫法分别检测肝素化后(T1)、CPB 30min(T2)、CPB结束时(T3)和结束后1h(T4)动脉血中的血栓烷B(TXB)、6-酮-前列腺素F(6-K-PGF)的浓度,并用透射电镜观察T1、T2、T3时血小板超微结构的变化。测定各时间点血小板计数(BPC)。记录术后24小时心包纵隔引流量。实验数据使用STAT软件进行统计学分析。结果(1)两组中TXB、6-K-PGF在T2、T3时均较T1时明显升高(P＜0.01),T3时达到最高,T4时恢复至CPB前水平。(2)在T2、T3时实验组6-K-PGF明显高于对照组(P＜0.01),而TXB及二者比值TXB/6-K-PGF则明显低于对照组(P＜0.01)。(3)电镜观察中,对照组未活化(圆型和展平型)的血小板在CPB中(T2、T3)均较实验组明显减少,而活化(聚集型和树突型)的血小板较实验组明显增加(P＜0.01)。(4)CPB中两组BPC均显著降低,但实验组的降低程度明显低于对照组,差异有显著性。(5)实验组术后24小时的引流量少于对照组,差异有显著性(P＜0.05)。结论CPB期间的多种物理及生物因素可以引起血小板的活化,促进其黏附、聚集及释放,导致其形态及功能损害,影响术后凝血功能。PGE能明显抑制心肺转流中TXA的增高,增加PGI的生成,并保持二者比例的平衡,从而抑制CPB引起的血小板活化,降低血小板损耗,在一定程度上减轻凝血功能紊乱,有利于减少术后血液丢失。

关键词：前列腺素E1 心肺转流血栓烷B2 6-酮-前列腺素F1α 血小板超微结构

深低温停循环对大鼠脑皮层细胞凋亡影响的研究

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深低温停循环对大鼠脑皮层细胞凋亡影响的研究

作者：陶运明南京医科大学

学位级别：硕士

目的：深低温停循环和深低温低流量方法在心脏外科得到广泛应用，但其暂时或永久的神经系统并发症却高达4％-25％(平均8％)，而且安全时限在45-60分钟，限制了该方法的临床应用。近年来大量研究显示这些迟发性的神经系统并发症与脑缺血... 详细信息

目的：深低温停循环和深低温低流量方法在心脏外科得到广泛应用，但其暂时或永久的神经系统并发症却高达4％-25％(平均8％)，而且安全时限在45-60分钟，限制了该方法的临床应用。近年来大量研究显示这些迟发性的神经系统并发症与脑缺血诱发脑细胞的凋亡有关。本研究采用大鼠深低温颈总动脉阻断模型，应用流式细胞仪、电镜、原位缺口末端标记法(TUNEL)、免疫组化法(SABC)和RT-PCR技术分别检测深低温脑缺血对皮层神经细胞调亡的影响方法：第一部分深低温停循环脑保护大鼠模型的建立：SD大鼠20只，麻醉后气管插管辅助呼吸，用冰块将大鼠的体温降至(21±1)℃，阻断双侧颈总动脉，记录体温、心率、血压、血氧饱和度和血气分析，60分钟后恢复颈总动脉血流，用Longa等的5级评分标准评定4小时和24小时后大鼠神经系统损伤情况。第二部分深低温停循环对大鼠脑细胞凋亡影响的研究：SD大鼠30只，随机分为3组：深低温对照(DHC)组、常温对照(NTC)组和深低温停循环(DHCA)组，采用大鼠深低温双侧颈总动脉阻断后再灌注模型(深低温停循环脑保护大鼠模型)，在21℃时将双侧颈总动脉阻断60min再灌注24h后。(1)取大脑皮层细胞制成细胞悬液，流式细胞仪分析细胞凋亡改变，电镜观察细胞超微结构的变化;(2)用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞百分率;(3)免疫组化法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达。第三部分深低温停循环对大鼠脑细胞凋亡相关基因表达的影响：南京医科大学硕士学位用Rl’- PcR技术检测Bd一2、Bax和casPase一3皮层脑细胞mRNA的表达，检测PCR产物的密度百分率。用SPSSn.5统计分析实验结果。结果:(l)实验组4只大鼠复苏失败死亡，16只大鼠成活，死亡率为20%，4小时后Longa等的5级评分标准评定动物神经系统现象为1一2级，24小时后无神经系统受损表现;对照组无大鼠死亡，4小时后Longa等级评分为。级。 (2)流式细胞仪检测脑缺血后皮层细胞凋亡增加，DHC组、NTC组和DHCA组脑皮层细胞凋亡率分别为(2 .20士0.43)%、(19.23士1 .01)%和(4 .72士1 .02)%(P南京医科大学硕士学位低缺血脑细胞的凋亡，是保护神经细胞的重要方法之一。

关键词：大鼠深低温停循环脑保护凋亡 Caspase-3 Bax Bcl-2 基因表达神经细胞大脑皮层

基于倾向性评分匹配比较长效GnRH激动剂早卵泡期长方案和GnRH拮抗剂灵活方案累积活产率和达活产时间的研究

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基于倾向性评分匹配比较长效GnRH激动剂早卵泡期长方案和GnRH拮抗...

作者：张诗慧南京医科大学

学位级别：硕士

目的:比较长效Gn RH激动剂早卵泡期长方案和Gn RH拮抗剂灵活方案在正常卵巢反应人群中的累积活产率和达活产时间。方法:收集自2015年1月至2020年3月,在江苏省人民医院临床生殖医学中心采用长效Gn RH激动剂早卵泡期长方案和Gn RH拮抗剂... 详细信息

目的:比较长效Gn RH激动剂早卵泡期长方案和Gn RH拮抗剂灵活方案在正常卵巢反应人群中的累积活产率和达活产时间。方法:收集自2015年1月至2020年3月,在江苏省人民医院临床生殖医学中心采用长效Gn RH激动剂早卵泡期长方案和Gn RH拮抗剂灵活方案超促排卵进行IVF/ICSI治疗的11140对不孕夫妇的临床资料进行回顾性分析,其中长效Gn RH激动剂早卵泡期长方案组(激动剂组)纳入了3234对夫妇共4846个治疗周期,Gn RH拮抗剂灵活方案组(拮抗剂组)纳入了7906对夫妇共16927个治疗周期;排除了接受≥3次IVF/ICSI的226对夫妇(437个治疗周期)后,长效Gn RH激动剂早卵泡期长方案组实际纳入3121对夫妇共4687个治疗周期,Gn RH拮抗剂灵活方案组实际纳入7793对夫妇共16671个治疗周期。患者基本信息使用女性年龄、体重指数(BMI)、不孕年限、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、雌激素(Estradiol,E)、抗苗勒氏管激素(Anti-Mullerian hormone,AMH)、基础卵泡数(Antral follicles count,AFC)等促排卵相关指标行倾向性评分匹配最终得到长效Gn RH激动剂早卵泡期长方案组3051对夫妇共4581个治疗周期和Gn RH拮抗剂灵活方案组3051对夫妇共6256个治疗周期。倾向性评分匹配后,使用标准化差异对基线变量的平衡进行了检查,绝对值研究的主要终点为累积活产率和达活产时间,次要终点包括两组促性腺激素(Gonadotropin,Gn)刺激天数、Gn总量、平均获卵数、平均移植数、鲜胚移植比例、鲜胚移植周期和冻胚移植周期的种植率、临床妊娠率、活产率、卵巢过度刺激综合征发生率。结果:经过倾向性评分匹配,本研究共纳入6102对夫妇,其中长效Gn RH激动剂早卵泡期长方案组(以下简称激动剂组)纳入3051对夫妇共4581个治疗周期,Gn RH拮抗剂灵活方案组(以下简称拮抗剂组)纳入3051对夫妇冻6256个治疗周期。匹配后的两组在女性年龄、BMI、不孕年限、FSH、LH、E2、AMH、AFC等促排卵相关重要指标方面没有统计学差异(P>0.05),匹配后得到的人群实际是正常卵巢储备人群。激动剂组与拮抗剂组的Gn刺激天数(9.6±4.5 VS 7.6±3.0)和Gn刺激总量(1502.3±955.2 VS 1169.4±725.5)比较,激动剂组均大于拮抗剂组(P0.05),年龄≥35岁时,)激动剂组平均获卵数显著高于拮抗剂组(7.1±3.8 VS 6.0±3.7,P0.05),激动剂组的活产率显著高于拮抗剂组(41.67%VS27.39%,P0.05)。在卵裂期胚胎冻胚移植周期中,激动剂组种植率、临床妊娠率、活产率均低于拮抗剂组,但差异无统计学意义(P>0.05)。在囊胚冻胚移植周期中,激动剂组种植率、临床妊娠率、活产率均低于拮抗剂组(P复苏周期妊娠结局。

关键词：长效GnRH激动剂早卵泡期长方案 GnRH拮抗剂灵活方案累积活产率达第一次活产时间体外受精-胚胎移植

ZNF207基因在P19细胞诱导分化过程中表达水平的研究

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ZNF207基因在P19细胞诱导分化过程中表达水平的研究

作者：卓莉莉南京医科大学

学位级别：硕士

【目的】体外培养P19细胞，并诱导P19细胞向胚胎心肌样细胞分化。【方法】P19细胞经复苏、培养、传代后，在体外二甲基亚砜(DMSO)诱导下向心肌细胞分化，在光镜、倒置显微镜下观察细胞形态学变化。【结果】复苏后未分化的P19细胞大小均... 详细信息

【目的】体外培养P19细胞，并诱导P19细胞向胚胎心肌样细胞分化。【方法】P19细胞经复苏、培养、传代后，在体外二甲基亚砜(DMSO)诱导下向心肌细胞分化，在光镜、倒置显微镜下观察细胞形态学变化。【结果】复苏后未分化的P19细胞大小均匀、分散，胞体小，呈圆形，3～4 h开始有细胞贴壁，呈不规则扁平状，24h后细胞长满瓶底的50％左右，48h细胞生长密集。0.9％二甲基亚砜(DMSO)诱导4d，有细胞聚集体形成。诱导4d后，使细胞贴壁生长，以分散、克隆集落方式增殖。d8，可以看见心肌样搏动，随分化时间延长，细胞形态多样化，梭形细胞增多。【结论】P19细胞在0.9％DMSO诱导下已有向心肌细胞分化的趋势，有类似胚胎心肌样细胞形成。【目的】观察锌指蛋白207基因(ZNF207)在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化，探讨ZNF207基因与心肌细胞分化之间可能的关系。【方法】体外培养P19细胞，诱导细胞向心肌细胞分化，采用RT-PCR技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中ZNF207基因mRNA表达水平。【结果】ZNF207基因在P19细胞向心肌细胞分化的过程中均有表达，随细胞分化成熟，该基因表达水平逐渐升高。经统计学分析发现，在分化第0～2天该基因表达无差异;第2～10天表达持续性增高，各时间点之间均有差异，差异均有统计学意义(P＜0.05);第10～17天该基因稳定高表达，各时间点之间无差异。【结论】ZNF207基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中表达逐渐上调，可能有利于心肌细胞的分化和发育。

关键词： P19细胞心肌细胞细胞分化 ZNF207基因 P19细胞细胞分化

淮安地区急诊脓毒性休克患者1小时集束化治疗策略急诊医师实施依从性观察研究

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淮安地区急诊脓毒性休克患者1小时集束化治疗策略急诊医师实施依...

作者：徐亮南京医科大学

学位级别：硕士

目的了解淮安地区急诊脓毒性休克患者1 h集束化治疗策略实施依从性。材料与方法对2020年1月1日至2020年12月31日淮安急诊专科联盟中急诊中心收治的116例急诊脓毒性休克患者,行1 h集束化治疗策略实施依从性的前瞻性观察。所纳入的患者脓... 详细信息

目的了解淮安地区急诊脓毒性休克患者1 h集束化治疗策略实施依从性。材料与方法对2020年1月1日至2020年12月31日淮安急诊专科联盟中急诊中心收治的116例急诊脓毒性休克患者,行1 h集束化治疗策略实施依从性的前瞻性观察。所纳入的患者脓毒性休克诊断符合脓毒症3.0诊断的标准后,持续性低血压,且在容量复苏后仍需要升压药物维持平均动脉压≥65mm Hg,及动脉血乳酸>2mmol/L.结果研究期间淮安急诊专科联盟中共有7家急诊医学科参与研究。共283例急诊患者符合纳入标准,根据排除标准排除167例,最终纳入116例脓毒性休克患者。在纳入的116例急诊脓毒性休克患者中,平均年龄67.0岁(58.5±76.0),男性患者55例,占47.4%;肺部感染44例(37.9%)是脓毒性休克患者最常见感染部位,其他感染部位依次是胆系感染25例(21.6%)、泌尿系感染19例(16.4%)以及肠道感染8例(6.9%)等。纳入的116例脓毒性休克患者中,20例(17.2%)1 h内完成了乳酸水平监测、20例(17.2%)完成了抗生素前留取血培养、82例(70.7%)1h内使用了广谱抗生素、16例(13.8%)1h内液体复苏≥30 ml/kg以及57例(49.1%)复苏过程中使用了血管活性药物。根据1h集束化治疗策略是否完全实施,分为完全执行组13例(11.2%)和未完全执行组103例(88.8%)。与未完全执行组相比,完全执行组的液体复苏量明显增加(33.7[30.0～37.5]ml/kg vs.8.9[7.3～10.8]ml/kg,Z=-4.78,P院病死率[30.8%(4/13)比43.7%(45/103)]和28 d病死率[40.8%(4/13)比44.4%(48/103)]比较,组间比较无统计学差异(P值均>0.050)。结论脓毒性休克急诊患者1小时集束化治疗策略实施依从性差,需加强相关质量管理培训。1h集束化治疗策略完全执行组患者液体复苏量明显增多,平均动脉压明显升高以及乳酸显著降低。1h集束化治疗策略完全执行组与未完全执行组之间病死率虽然没有统计学意义,但完全执行组有病死率降低的趋势。

关键词：脓毒性休克 1小时集束化治疗策略依从性

急性失血性休克脑部磁共振灌注及波谱成像的实验研究

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急性失血性休克脑部磁共振灌注及波谱成像的实验研究

作者：佟琪南京医科大学

学位级别：硕士

目的利用磁共振灌注成像及波谱成像技术研究兔急性重度失血性休克及复苏后不同时间点脑部微循环及能量变化特点。方法本研究得到医院动物伦理委员会批准。20只新西兰大白兔（均为雄性，成年兔，2.5kg），按全身血量(70ml/kg)的40%-50%... 详细信息

目的利用磁共振灌注成像及波谱成像技术研究兔急性重度失血性休克及复苏后不同时间点脑部微循环及能量变化特点。方法本研究得到医院动物伦理委员会批准。20只新西兰大白兔（均为雄性，成年兔，2.5kg），按全身血量(70ml/kg)的40%-50%从右侧股动脉放血，使平均动脉压维持在30mmHg，建立失血性休克模型，成功率100%。随机分为休克组(n=10)和复苏组(n=10)。休克组不进行任何干预措施，复苏组于休克90min后给予自身血液回输。记录两组在正常状态、休克30min、90min、150min、复苏30min及复苏60min不同时间点的平均动脉压、心率、体温、呼吸频率，测定动脉血气（包括pH值，血红蛋白Hb，乳酸Lac等），并行头颅磁共振灌注及波谱扫描。采用重复测量数据的方差分析法分析。结果各测量指标球形检验的结果p值均复苏组与休克组30min、90min、150min不同时间点之间存在显著性差异（p复苏后显著下降（p复苏后显著升高（p复苏30min、60min均具有显著差异（p复苏各时点均未出现显著差异（p>0.05）。结论磁共振灌注成像及波谱成像技术能够有效观察兔急性重度失血性休克及复苏后脑部微循环及能量变化。

关键词：失血性休克脑微循环磁共振灌注成像磁共振波谱成像