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白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响

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中国热带医学 2024年第8期24卷 907-913页

作者：覃燕春李莹胡欢周璐黄贞植吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳561113 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州贵阳561113

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应;制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb_CTL1蛋白(蚊唾液C型凝集素蛋白)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养,取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞,实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化,分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养,通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达,分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示,与未免疫组比较,rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖,刺激指数(stimulation index,SI)>2,P<0.0001;荷载rAalb_CTL1蛋白的混合淋巴细胞培养上清未影响BMDM细胞中DENV-2的复制,荷载rAlb-34k2-1蛋白的混合淋巴细胞培养上清可抑制BMDM中DENV-2复制(2^(-ΔΔCT) <0.5,P<0.05);与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞混合培养后,rAlb-34k2-1预处理的BMDM中DENV-2复制无差异。结论rAlb-34k2-1蛋白诱导的小鼠T淋巴细胞应答上清可抑制BMDM细胞中DENV-2的复制,为探究蚊唾液蛋白诱导免疫效应在蚊媒病毒致病中的作用提供前期实验基础。

关键词： rAlb-34k2-1蛋白 2型登革病毒细胞免疫应答

女性双相障碍患者不同生殖周期发作的临床特征和机制及诊疗研究进展

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中华精神科杂志 2024年第6期57卷 390-396页

作者：周洛慧苏颖芮柳绪珍孙静南京医科大学南京210029 南京医科大学附属脑科医院南京210029

生殖周期(围月经期、围产期、围绝经期)可能会影响女性双相障碍患者的病程,治疗过程中需要特殊考虑以权衡疗效。本文将围绕女性双相障碍不同生殖周期发作的临床特征、发病机制及诊疗进展作一综述。

关键词：双相情感障碍生殖周期围月经期围产期围绝经期

刚地弓形虫排泄/分泌抗原诱导卵巢癌细胞凋亡的机制探讨

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中国动物传染病学报 2024年

作者：何焱钊高思李佳洁杨勇刘红丽天津市儿童医院山西医科大学医学寄生虫学教研室

本研究通过分析刚地弓形虫排泄分泌抗原（Tg-ESA）对卵巢癌SKOV-3细胞的作用，来探究其抗卵巢癌的潜能及其机制，为卵巢癌的生物治疗提供理论基础。采用CCK-8法分析Tg-ESA是否影响SKOV-3细胞增殖；通过流式细胞术检测Tg-ESA作用的SKOV-... 详细信息

本研究通过分析刚地弓形虫排泄分泌抗原（Tg-ESA）对卵巢癌SKOV-3细胞的作用，来探究其抗卵巢癌的潜能及其机制，为卵巢癌的生物治疗提供理论基础。采用CCK-8法分析Tg-ESA是否影响SKOV-3细胞增殖；通过流式细胞术检测Tg-ESA作用的SKOV-3细胞凋亡情况及线粒体膜电位和活性氧（ROS）的变化；采用Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。CCK-8法结果显示，800 μg/mL Tg-ESA作用于SKOV-3细胞抑制细胞增殖（P < 0.05）；流式细胞术结果显示，与对照组相比，800 μg/mL和1 600 μg/mL浓度的Tg-ESA明显诱导了SKOV-3细胞凋亡（P < 0.05）；进一步研究发现Tg-ESA作用的SKOV-3细胞线粒体膜电位明显下降，而细胞内ROS的含量明显增加（P < 0.01）；Western blot结果显示800 μg/mL、1 600 μg/mL的Tg-ESA可以上调促凋亡蛋白Cleaved Caspase 9、Cleaved Caspase 3和Bax的表达，下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。Tg-ESA通过诱导细胞内活性氧含量升高及线粒体膜电位下降启动了细胞凋亡程序，并通过线粒体凋亡途径诱导SKOV-3细胞凋亡，从而达到抗卵巢癌的效果。

关键词：刚地弓形虫排泄分泌抗原人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡

微小隐孢子虫GP900^(829~1099)蛋白的表达及其对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 55-62页

作者：杨玲王龙王佳阳周坤铮闫宝龙赵威黄慧聪温州医科大学基础医学院寄生虫教研室浙江温州325035 江苏省扬州市中医院检验科扬州225002

目的初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900) 829~1 099aa片段(GP^(900^(829~1099)))通过核因子-κB (NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用。方法从NCBI数据库中获取... 详细信息

目的初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900) 829~1 099aa片段(GP^(900^(829~1099)))通过核因子-κB (NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用。方法从NCBI数据库中获取微小隐孢子虫GP^(900^(829~1099))氨基酸序列进行生物信息学分析。以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,PCR扩增gp900^(829~1099)基因片段,构建pET-32a-gp900^(829~1099)重组质粒并转化至BL21感受态细胞中诱导表达。纯化、超滤浓缩重组蛋白并去除内毒素。采用0.16、0.80、4.00、20.00、100.00、500.00μg/ml的GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激RAW264.7细胞24 h后,CCK-8法检测其对RAW264.7细胞活力的调节作用。以0.16、0.80、4.00μg/ml的GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激RAW264.7细胞,以PBS为对照组,脂多糖(1μg/ml)为阳性对照,24 h后流式细胞术检测CD86表达量,qPCR检测RAW264.7细胞中IL-6和TNF-α mRNA的相对转录水平,ELISA检测RAW264.7细胞培养上清中IL-6、TNF-α的表达水平。采用蛋白质免疫印迹分析NF-κB和MAPK信号通路中P65蛋白和细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白磷酸化水平。结果 GP^(900^(829~1099))蛋白二级结构中β转角占比9.23%,无规则卷曲占比64.58%,且含有较丰富的T、B细胞抗原表位。表达的GP^(900^(829~1099))重组蛋白的相对分子质量约为49 000。CCK-8结果显示,GP^(900^(829~1099))对细胞没有毒性作用,后续实验采用0.16、0.80和4.00μ/g/ml作为作用浓度。流式细胞术结果显示,CD86+的阳性表达率分别为(13.500±0.815)%、(18.670±0.657)%、(20.470±1.271)%,后两者均高于对照组的(14.500±0.872)%(t=3.818、3.872,P <0.05)。qPCR结果显示,0.16、0.80和4.00μg/ml组RAW264.7细胞的IL-6 mRNA相对转录水平分别为1.409±0.050、2.052±0.098和3.284±0.097,均高于对照组的1.010±0.096 (t=3.700、7.595、16.700,均P<0.05);TNF-α mRNA相对转录水平分别为1.077±0.034、1.440±0.021和2.378±0.037,后两者均高于对照组1.000±0.025(t=13.380、30.850,均P<0.05)。ELISA检测结果显示,RAW264.7细胞培养上清中,0.16、0.80和4.00μg/ml组IL-6的表达水平分别为(535.400±17.230)、(572.800±8.286)、(555.600±23.940) mg/L,均高于对照组的(454.400±18.630) mg/L (t=3.193、5.809、3.339,P<0.05);TNF-α细胞因子的表达水平分别为(351.800±12.270)、(386.400±10.250)、(489.800±10.540) mg/L,后两者均高于对照组的(324.200±11.070) mg/L (t=4.125、10.830,P<0.05)。蛋白质免疫印迹结果显示,0.16、0.80和4.00μg/ml组RAW264.7细胞p-P65、p-ERK蛋白的相对表达水平分别为2.294±0.254、1.714±0.205、1.877±0.309,1.522±0.054、1.760±0.066、1.582±0.027,均高于对照组的1.0±0.0 (t=5.100、3.489、2.836,9.737、11.450、21.900,均P<0.05)。结论不同浓度GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激巨噬细胞后,通过激活NF-κB和MAPK信号通路诱导巨噬细胞活化,通过促进TNF-α和IL-6 mRNA的转录参与巨噬细胞的免疫调节。

关键词：微小隐孢子虫微线体蛋白GP900 RAW264.7 NF-κB MAPK

自转录活性调节区测序技术在增强子发现研究中的应用

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遗传 2024年第8期46卷 589-602页

作者：王纪龙李青战廷正广西医科大学寄生虫学教研室南宁530021 广西医科大学细胞生物学教研室南宁530021 广西高校区域性疾病基础研究重点实验室(广西医科大学) 南宁530021

自转录活性调节区测序(self-transcribing active regulatory region sequencing,STARR-seq)是一种可发现并同时验证全基因组增强子活性的高通量测序方法。其原理为:将待验证序列插入质粒载体并电转入细胞中,该序列在作为增强子提高靶... 详细信息

自转录活性调节区测序(self-transcribing active regulatory region sequencing,STARR-seq)是一种可发现并同时验证全基因组增强子活性的高通量测序方法。其原理为:将待验证序列插入质粒载体并电转入细胞中,该序列在作为增强子提高靶基因转录的同时,其本身也作为靶基因被增强转录。通过对转录组进行测序,并对比未插入片段的测序结果,可获得增强子在基因组位置及活性的信息。在传统增强子研究方法中,通过对染色质开放区域和转录活性区域进行测序以预测增强子,但只能逐一验证预测结果,无法高通量验证增强子活性。STARR-seq技术解决了上述缺陷,可在对全基因组增强子高通量挖掘的同时,对其活性进行可靠的验证。自STARR-seq技术发明以来,已被广泛运用于不同物种与细胞中的增强子发现及活性验证研究。本文对传统增强子预测方法以及STARR-seq技术的基本原理、发展历史和具体运用进行了介绍,并对其发展前景进行展望,以期为后续增强子相关领域研究人员提供参考。

关键词：自转录活性区域测序增强子转录调控单核苷酸多态性

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PCOS患者妊娠期过量睾酮影响男性子代生殖发育的机制研究进展

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中华生殖与避孕杂志 2024年第5期44卷 541-547页

作者：连超周宇居蓉陈建泉南京医科大学附属江宁医院中心实验室南京210000 南京医科大学附属江宁医院妇产科南京210000

多囊卵巢综合征患者典型特征之一是体内高雄激素分泌。其妊娠期母体过量睾酮水平不仅影响女性后代生殖健康,也影响男性后代生殖健康。本文主要针对PCOS患者妊娠期母源性睾酮暴露影响男性胎儿生殖发育及精子发生的机制进行综述,为妊娠期... 详细信息

多囊卵巢综合征患者典型特征之一是体内高雄激素分泌。其妊娠期母体过量睾酮水平不仅影响女性后代生殖健康,也影响男性后代生殖健康。本文主要针对PCOS患者妊娠期母源性睾酮暴露影响男性胎儿生殖发育及精子发生的机制进行综述,为妊娠期高雄激素影响男性后代生殖健康的机制研究与临床干预提供参考。

关键词：睾酮精子发生多囊卵巢综合征 cAMP反应元件结合蛋白

股骨颈动力交叉钉系统动力棒偏移对早期临床结果的影响研究

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中华创伤骨科杂志 2024年第6期26卷 473-480页

作者：金宇杰周晓强李志强刘宇博徐人杰沈军张向鑫虞宵南京医科大学姑苏学院南京医科大学附属苏州医院苏州市立医院骨科苏州215000

目的:探讨股骨颈动力交叉钉系统(FNS)治疗中青年移位型股骨颈骨折过程中其动力棒偏移对术后早期临床结果的影响。方法:回顾性分析2019年12月至2023年1月期间苏州市立医院骨科采用FNS固定治疗的114例中青年移位型股骨颈骨折患者资料。根... 详细信息

目的:探讨股骨颈动力交叉钉系统(FNS)治疗中青年移位型股骨颈骨折过程中其动力棒偏移对术后早期临床结果的影响。方法:回顾性分析2019年12月至2023年1月期间苏州市立医院骨科采用FNS固定治疗的114例中青年移位型股骨颈骨折患者资料。根据术后FNS动力棒末端相对于股骨头颈中心轴线的偏移程度(W)不同分为两组:中心组(W≤20%)63例,男27例,女36例;年龄(46.4±8.0)岁。偏移组(W>20%)51例,男20例,女31例;年龄(45.1±9.8)岁。比较两组患者的术后患肢负重时间、骨折愈合时间、尖顶距、末次随访时股骨颈短缩程度、髋关节Harris评分、欧洲五维健康量表(EQ-5D-5L)效用值、并发症发生率及翻修手术率等。结果:两组患者术前一般资料及骨折复位质量比较差异均无统计学意义( P>0.05),具有可比性。两组患者术后患肢部分负重时间比较差异无统计学意义( P>0.05)。中心组患者术后患肢完全负重时间[15.0(14.0,16.0)周]、骨折愈合时间[14.0(12.0,15.0)周]显著短于偏移组患者[16.0(15.0,19.0)、15.0(13.0,17.0)周],尖顶距[(21.4±3.4)mm]显著小于偏移组患者[(23.5±2.7)mm],末次随访时髋关节Harris评分[(90.6±6.1)分]、EQ-5D-5L效用值[0.9(0.8,0.9)]显著高于偏移组患者[(87.7±6.2)分、0.9(0.8,0.9)],中重度股骨颈短缩发生率[25.4%(16/63)]、股骨头缺血性坏死发生率[0(0/63)]、翻修手术率[0(0/63)]显著低于偏移组患者[66.7%(34/51)、7.8%(4/51)、9.8%(5/51)],差异均有统计学意义( P< 0.05)。结论:FNS固定治疗中青年移位型股骨颈骨折时,将FNS动力棒尽可能靠近股骨头颈中心轴线置入可获得满意的临床疗效,并能降低翻修手术率。

关键词：股骨颈骨折骨折固定术,内骨钉股骨颈动力交叉钉系统

儿童高间接胆红素血症的UGT1A1基因突变谱

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中华肝脏病杂志 2024年第2期32卷 119-124页

作者：沈颖郭红梅郑玉灿郑必霞闫坤龙孔桂萍林谦金玉刘志峰李玫南京医科大学附属儿童医院消化科南京210008 南京医科大学附属儿童医院重点实验室南京210008

目的探讨尿苷二磷酸-葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)基因突变与儿童高间接胆红素血症表型的相关性。方法回顾性分析2013年7月至2019年11月于南京医科大学附属儿童医院消化科就诊的16例高间接胆红素血症患儿,分为Gilbert综合征(GS)、Crigle... 详细信息

目的探讨尿苷二磷酸-葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)基因突变与儿童高间接胆红素血症表型的相关性。方法回顾性分析2013年7月至2019年11月于南京医科大学附属儿童医院消化科就诊的16例高间接胆红素血症患儿,分为Gilbert综合征(GS)、Crigler-Najjar综合征II型(CNS-II)及UGT1A1基因突变无法解释的高间接胆红素血症组,比较其一般临床资料、基因突变位点信息的差别,并通过t检验分析探讨基因突变谱与胆红素水平的关系。结果16例高间接胆红素血症的患者中,10例为GS,3例为CNS-II,3例为UGT1A1基因突变无法解释的高间接胆红素血症。共检测到6个变异类型,其中c.211G>A占37.5%(6/16),c.1456T>G占62.5%(10/16),TATA占37.5%(6/16);与GS相比,CNS发病较早,且血清总胆红素(t=5.539,P0.05)和发病年龄(t=0.361,P>0.05)差异无统计学意义。UGT1A1基因变异的数量与血清胆红素水平之间无相关性,c.1456T>G纯合突变儿童的血清胆红素水平最高。结论儿童UGT1A1基因常见致病变异依次为c.1456T>G、c.211G>A、TATA,说明这些位点突变与儿童高间接胆红素血症的发生相关,对于儿童高间接胆红素血症病因分析,具有重要指导意义。

关键词：高间接胆红素血症诊断基因变异病因分析尿苷二磷酸-葡萄糖醛酸糖基转移酶1A1

[^(18)F]FDOPA放射标记合成工艺研究进展

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中国新药杂志 2024年第12期33卷 1233-1242页

作者：彭灿董国生李希臣李政韩雨霏张涛南京医科大学药学院核药学系南京211166 南京医科大学核医药临床转化中心南京210029

正电子发射断层扫描(positron emission tomography,PET)放射性示踪剂6-[^(18)F]氟-3,4-二羟基-L-苯丙氨酸([^(18)F]6-fluoro-3,4-dihydroxy-L-phenylalanine,[^(18)F]FDOPA)广泛用于中枢神经系统疾病的多巴胺代谢成像,然而以高产率放射性合成高比活度的[^(18)F]FDOPA极其困难。近年来随着[^(18)F]FDOPA在脑肿瘤、神经内分泌肿瘤和婴儿期局灶性高胰岛素血症等恶性疾病中的广泛应用,迫切需要开发更优的[^(18)F]FDOPA合成方法以满足日益增长的临床需求。该综述总结了[^(18)F]FDOPA放射合成工艺的研究进展,并且详细介绍了由不同放射标记方法所获得[^(18)F]FDOPA的放射性化学产率、比活度、对映体纯度和合成时间,为优化[^(18)F]FDOPA的放射性合成提供参考,以期获得适用于临床研究的高放射性化学放化产率和纯度以及高比活度的[^(18)F]FDOPA。

关键词： 6-[^(18)F]氟-3,4-二羟基-L-苯丙氨酸正电子发射断层扫描放射化学合成放化产率中枢神经系统疾病