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结核分枝杆菌c-di-AMP磷酸二酯酶的重组腺病毒的构建及其诱导的体液免疫应答

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中国人兽共患病学报 2025年

作者：胡家豪宁唤唤董梦娟路延之代婷张从玥徐子晴王姝予周正言柏银兰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室空军军医大学基础医学院学员队空军军医大学军事医学创新中心宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系延安大学生命科学学院

目的构建表达结核分枝杆菌（Mtb）c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒（rAd）并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的MtbCnpB编码基因克隆入质粒pcADV，获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞，并用Westernblot鉴定表达... 详细信息

目的构建表达结核分枝杆菌（Mtb）c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒（rAd）并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的MtbCnpB编码基因克隆入质粒pcADV，获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞，并用Westernblot鉴定表达。重组pcADV-CnpB与骨架质粒共转染HEK293T细胞包装获得重组腺病毒rAd-CnpB，以HEK293T细胞扩增rAd-CnpB，Westernblot和免疫荧光检测rAd-CnpB表达目的蛋白。以rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠，收集小鼠血清与肺泡灌洗液（BALF），ELISA检测抗原特异性抗体水平。结果酶切和测序鉴定表明重组质粒pcADV-CnpB构建成功，该质粒能够在真核细胞中表达。在HEK293T细胞内包装并获得rAd-CnpB，大量扩增并纯化获得滴度为5.53×1010PFU/mL的rAd-CnpB。rAd-CnpB可在HEK293T细胞中表达目的蛋白CnpB。rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠，可诱导BALF中CnpB特异性IgG与分泌型IgA水平的增加，同时诱导血清中产生高水平的CnpB特异性IgG。结论成功构建表达Mtb c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒rAd-CnpB，并且rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导抗原特异性体液免疫与黏膜免疫应答，可用于结核病新疫苗策略的研究。

关键词：结核分枝杆菌重组腺病毒 c-di-AMP 磷酸二酯酶黏膜免疫

金刚烷胺抗人呼吸道合胞病毒感染的体内外研究

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中国抗生素杂志 2025年

作者：陈芳张勇沈胡艳张平平林思宇侯长周张淋牟荣罗语思张科贵州医科大学基础医学院贵州省微生物组与传染性疾病防控重点实验室/病毒研究所/现代病原生物学特色重点实验室/人体寄生虫学教研室贵州中医药大学药学院贵州医科大学附属医院急诊ICU 贵州医科大学附属医院六盘水医院急诊科

目的研究离子通道阻断剂金刚烷胺在体内外抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus, HRSV)感染的活性。方法以MTT方法测定金刚烷胺对HEp-2细胞的半数毒性浓度，分别将30、60、90和120μmol/L金刚烷胺加入已感染RSV的HE... 详细信息

目的研究离子通道阻断剂金刚烷胺在体内外抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus, HRSV)感染的活性。方法以MTT方法测定金刚烷胺对HEp-2细胞的半数毒性浓度，分别将30、60、90和120μmol/L金刚烷胺加入已感染RSV的HEp-2细胞上清，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验和免疫荧光实验评估金刚烷胺的体外抗病毒活性。将Balb/c小鼠分为Mock组、GZ08-18攻毒组、GZ08-18攻毒加10 mg/kg金刚烷胺治疗组、GZ08-18攻毒加20 mg/kg金刚烷胺治疗组和GZ08-18攻毒加50 mg/kg利巴韦林治疗组。通过小鼠体重变化、存活情况、肺指数、肺泡灌洗液病毒滴度、肺切片免疫荧光、肺组织病理损伤和炎症因子变化等评估金刚烷胺的体内抗病毒活性。结果体外实验qRT-PCR和免疫荧光结果显示不同浓度金刚烷胺处理后，病毒滴度与病毒融合蛋白表达均显著下降，且具量效依赖性。体内实验结果示，与GZ08-18攻毒组相比，金刚烷胺治疗后小鼠体重下降减缓，存活率显著提高，肺指数和病毒滴度在20 mg/kg金刚烷胺治疗组显著降低，肺组织切片病毒融合蛋白免疫荧光强度明显降低，相关炎症因子表达水平显著下调。肺组织病理切片的H&E染色结果示金刚烷胺明显抑制小鼠肺组织损伤。结论金刚烷胺在体内外均可显著抑制RSV感染。

关键词：人呼吸道合胞病毒金刚烷胺抗病毒离子通道

康复治疗学专业基础医学课程的教学分析与改革探究

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中国康复医学杂志 2025年第1期 120-122页

作者：刘守国耿阿燕张戎周莎南京医科大学第一附属医院康复医学中心/南京医科大学康复医学院南京医科大学基础医学院基础医学实验教学中心南京医科大学基础医学院病原生物学系

随着社会的发展和进步，国家对康复治疗技术人才的需求不断增加；培养专业的康复治疗技术人才成为社会的迫切需求。康复治疗学作为一个新兴医学专业，近二十多年来在全国一百多所高等院校已陆续开办，但其课程设置和教学模式在不同高校...

随着社会的发展和进步，国家对康复治疗技术人才的需求不断增加；培养专业的康复治疗技术人才成为社会的迫切需求。康复治疗学作为一个新兴医学专业，近二十多年来在全国一百多所高等院校已陆续开办，但其课程设置和教学模式在不同高校间存在诸多差异，教学质量及教学水平、学生理论水平及实践能力也参差不齐，因此，亟需进行专业的教学研究，这对提高我国康复治疗学专业教育水平和人才培养质量至关重要[1]。

关键词：

乙胺嘧啶对巨噬细胞叶酸水平及免疫功能的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2021年第2期39卷 210-217页

作者：秦敏邵天业赵成思缪婷婷张戎邱竞帆王勇南京医科大学基础医学院病原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室南京211166

目的探讨抗弓形虫药物乙胺嘧啶对巨噬细胞叶酸水平和免疫功能的影响。方法将小鼠巨噬细胞RAW264.7(1×10^(4)个/孔)接种于96孔板中,用0(对照组)、0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00、50.00、100.00、500.00和1 000.00μmol/L... 详细信息

目的探讨抗弓形虫药物乙胺嘧啶对巨噬细胞叶酸水平和免疫功能的影响。方法将小鼠巨噬细胞RAW264.7(1×10^(4)个/孔)接种于96孔板中,用0(对照组)、0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00、50.00、100.00、500.00和1 000.00μmol/L的乙胺嘧啶分别处理24 h后,CCK8检测细胞活性抑制率。将RAW264.7细胞(5×10^(5)个/孔)接种于6孔板中,弓形虫RH株速殖子感染后3 h,用0(对照组)、0.10、1.00、10.00和100.00μmol/L的乙胺嘧啶分别处理24 h,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测弓形虫速殖子的二氢叶酸还原酶的表达。TRIzol试剂提取RAW264.7细胞的总RNA, qRT-PCR检测巨噬细胞二氢叶酸还原酶和炎症因子基因的表达,Western blotting检测巨噬细胞DHFR的蛋白表达,全自动化学发光免疫分析仪检测胞内活性叶酸水平。用BLAST对速殖子DHFR蛋白和小鼠巨噬细胞DHFR蛋白的氨基酸序列进行同源比对。用无叶酸培养基预处理RAW264.7细胞48 h,随后用100μmol/L的乙胺嘧啶处理24 h, qRT-PCR检测无叶酸条件下巨噬细胞炎症因子基因的表达。两组之间比较采用t检验,多重比较采用单因素方差分析。结果 CCK8检测结果显示,乙胺嘧啶的细胞活性抑制率具有剂量依赖效应,在0.01~0.10μmol/L时可促进巨噬细胞的轻度增殖,浓度高于0.10μmol/L时显示有抑制细胞增殖作用。qRT-PCR检测结果显示,0.10、1.00、10.00和100.00μmol/L组弓形虫二氢叶酸还原酶m RNA相对转录水平分别为1.190±0.054、1.460±0.206、0.468±0.077和0.399±0.073, 1μmol/L组高于对照组,10.00和100.00μmol/L组均低于对照组(P学发光免疫分析结果显示,100.00μmol/L组巨噬细胞的胞内活性叶酸水平为(10.600±2.930) nmol/L,高于对照组(P<0.01)。100μmol/L乙胺嘧啶处理后,巨噬细胞炎症相关指标TNF-α、i NOS、Arg-1和IL-1β的mRNA相对转录水平分别为2.230±0.100、11.800±1.350、3.610±0.256和7.810±0.987,均高于对照组(P<0.05或0.01)。乙胺嘧啶处理后,无叶酸培养组RAW264.7细胞TNF-α、i NOS、Arg-1和IL-1β的mRNA相对转录水平分别为2.460±0.026、1.330±0.091、0.974±0.141和0.997±0.018, i NOS、Arg-1和IL-1β低于含叶酸正常组(P<0.05或0.01), TNF-α高于含叶酸正常组(P<0.01)。结论乙胺嘧啶可以通过促进小鼠巨噬细胞二氢叶酸还原酶的表达,升高胞内活性叶酸水平,从而诱导巨噬细胞炎症因子基因表达。

关键词：乙胺嘧啶巨噬细胞叶酸二氢叶酸还原酶

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人体寄生虫学学科发展的历史性思考

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第5期27卷 448-454页

作者：季旻珺吴观陵南京医科大学病原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室南京210029

本文概要地回顾了人体寄生虫学自19世纪末至20世纪早期确立为生物医学的一个独立学科以来跌宕起伏的发展历程,经历了辉煌发展、遭遇挫折和下降,直至20世纪70年代后期以来的复苏和新发展。寄生虫学新的发展时期最显著的特点是寄生虫学的... 详细信息

本文概要地回顾了人体寄生虫学自19世纪末至20世纪早期确立为生物医学的一个独立学科以来跌宕起伏的发展历程,经历了辉煌发展、遭遇挫折和下降,直至20世纪70年代后期以来的复苏和新发展。寄生虫学新的发展时期最显著的特点是寄生虫学的研究融入了正在继续进行的生物学革命,以极快的速度将现代生物学新的理论、概念和技术引入寄生虫学和寄生虫病研究的许多领域,取得了引人瞩目的发展。现代生物学和医学新理论与高新技术成就的渗透,不仅在微观水平上对宿主-寄生虫相互关系作出更加深刻的诠释,而且也为发展新的寄生虫病防治策略提供了新的思路、理论依据和实用技术。尽管如此,作者明确指出,尽管寄生虫病仍然是一类分布广泛、对人类健康威胁甚大的疾病,但人体寄生虫学学科的发展,在现今世界范围内普遍受到忽视,包括医学教育中的寄生虫学教学日渐衰微的趋势已愈来愈受到人们的关注。在本文中作者还就我国寄生虫学学科发展需求、面临的挑战与机遇,我国寄生虫学学科发展战略思考、当前人体寄生虫学研究的主流思维及优先研究领域布局思考等问题发表了若干探讨性意见;作者还涉及了在我国寄生虫(病)学学科未来发展战略制定中一个不能回避的重要问题,即它的学科定位,特别是在医学教育中的学科当前定位带来的困惑及考虑。

关键词：人体寄生虫学学科发展战略思考

盐酸法舒地尔抗日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第3期29卷 183-188页

作者：郑丹梁跃进毛雯倩李冉王勇南京医科大学病原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室南京210029

目的观察Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化以及肝星状细胞(hepatic stel-late cells,HSCs)的影响。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机均分为3组,分别为健康对照组、感染组和干预组,感染组和干预组小鼠经腹部皮肤感... 详细信息

目的观察Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化以及肝星状细胞(hepatic stel-late cells,HSCs)的影响。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机均分为3组,分别为健康对照组、感染组和干预组,感染组和干预组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(14±2)/只,感染后6周,干预组给予盐酸法舒地尔(10 mg/kg)腹腔注射,2次/d,连续7 d,健康对照组和感染组注射等体积生理盐水。末次注射12 h后剖杀小鼠,分别取健康对照组和感染组小鼠肝脏固定、切片,苏木素-伊红(HE)染色或天狼星红染色后镜下观察。检测3组小鼠肝脏羟脯氨酸(hydrox-yproline,Hyp)含量,以及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原α1链(typeⅠcollagenα1,Col1α1)和上皮细胞转化序列2(epithelial cell transforming sequence 2,Ect2)的mRNA水平。采用原位灌注密度梯度离心法分离肝星状细胞,检测α-SMA、Col1α1和Ect2的mRNA水平。结果感染组小鼠肝内汇管区和虫卵肉芽肿周围炎症细胞浸润,胶原纤维增生。健康对照组、感染组和干预组每克肝湿重羟脯氨酸含量分别为(279.7±21.2)μg、(528.0±14.9)μg和(355.4±22.6)μg,干预组肝脏羟脯氨酸含量显著低于感染组(P<0.01)。干预组肝脏和肝星状细胞的α-SMA、Col1α1和Ect2的mRNA水平均显著低于感染组(均P<0.05)。结论盐酸法舒地尔对日本血吸虫感染小鼠肝纤维化有一定抑制作用。

关键词：日本血吸虫病肝纤维化盐酸法舒地尔 Rho激酶

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血管紧张素转换酶对淡色库蚊生殖的影响

中国血吸虫病防治杂志 2023年第3期35卷 251-257页

作者：王欢刘进开力买·艾尼郑俊楠沈波孙艳周丹南京医科大学基础医学院病原生物学系、江苏省现代病原生物学重点实验室江苏南京211166

目的探讨血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)在淡色库蚊(Culex pipiens pallens)生殖中的作用,为蚊媒种群控制靶标的选择提供科学依据。方法淡色库蚊于2009年采集于山东省唐口县。选择羽化后72 h雌、雄蚊,采用实时荧... 详细信息

目的探讨血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)在淡色库蚊(Culex pipiens pallens)生殖中的作用,为蚊媒种群控制靶标的选择提供科学依据。方法淡色库蚊于2009年采集于山东省唐口县。选择羽化后72 h雌、雄蚊,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time reverse transcription PCR,qPCR)技术检测雄蚊及吸血前(0 h)、吸血后(24、48、72 h)受精雌蚊全身和生殖组织中ACE基因表达水平。随后,选择羽化0~4 h的雌、雄库蚊各150只,分别分为野生(wild type,WT)组、RNA干扰-阴性对照(small interfering RNA-negative control group,siNC)组和RNA干扰-ACE(small interfering RNA-ACE group,siACE)组,每组50只。WT组淡色库蚊不作任何处理;siNC组和siACE组分别通过显微注射仪注射siNC和siACE至蚊血淋巴中,注射剂量为0.3μg/只。利用q PCR技术验证各组敲低效率,并观察各组生殖表型。结果羽化后72 h,雄蚊全身组织ACE表达量(5.467±1.006)高于雌蚊(1.199±0.241)(t=5.835,P=0.004);雄蚊生殖组织中ACE表达量最高(199.100±24.429),为剩余组织(1.057±0.340)的188.3倍(t=6.602,P=0.002)。吸血触发ACE在受精雌蚊全身组织中高表达,吸血后24 h(14.957±2.815)达到表达量高峰,为未吸血时(1.009±0.139)的14.8倍(P=0.002);雌蚊吸血后卵巢中ACE转录水平在卵黄合成期持续升高,在吸血后48 h(5.500±0.734)达高峰,是未吸血雌蚊(1.072±0.178)的5.1倍(P=0.002)。靶向ACE的小RNA干扰导致siACE组雌蚊中ACE表达量(0.430±0.070)较siNC组(1.002±0.070)降低57.2%(P=0.001),siACE组雄蚊ACE表达量(0.588±0.067)较siNC组(1.008±0.131)降低41.1%(P=0.016)。敲低ACE导致siACE组雌蚊产卵量[(94.000±27.386)只]较siNC组[(180.800±27.386)只]降低48.0%(P<0.001);与siACE组雄蚊交配的野生雌蚊产卵量[(104.500±20.965)只]较siNC组[(190.050±10.698)只]降低45.0%(P<0.001)。结论ACE表达降低可同时抑制雌、雄蚊虫生殖力,ACE可作为蚊媒种群抑制的潜在靶点。

关键词：淡色库蚊血管紧张素转换酶 RNA干扰生殖

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寄生虫虫源性成分对宿主的毒理与药理效应

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第5期40卷 561-571页

作者：徐志鹏季旻珺吴观陵南京医科大学病原生物学系南京211166 江苏省现代病原生物学重点实验室南京211166

近年来,一个新的转化医学命题——寄生虫虫源性成分对宿主的毒理与药理效应受到业内的广泛关注。从寄生虫-宿主长期进化过程形成的共适应角度深入理解寄生虫虫源分子对宿主产生的毒理与药理效应,不仅能加深从致病角度理解寄生虫的致病机... 详细信息

近年来,一个新的转化医学命题——寄生虫虫源性成分对宿主的毒理与药理效应受到业内的广泛关注。从寄生虫-宿主长期进化过程形成的共适应角度深入理解寄生虫虫源分子对宿主产生的毒理与药理效应,不仅能加深从致病角度理解寄生虫的致病机制,而且有利于从治病角度研发基于虫源性成分的转化应用,已经成为并将继续成为寄生虫学研究领域最热门的研究任务之一。本文回顾近年来几种重要的引起人兽共患病的寄生虫及其虫源性成分诱导及调节宿主免疫代谢相关疾病的毒理与药理效应,并就寄生虫学的研究发展方向提出建议。

关键词：寄生虫虫源性成分毒理效应药理效应 Treg细胞

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后血吸虫病传播阻断阶段：肝纤维化问题

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第6期33卷 404-406页

作者：王勇南京医科大学基础医学院病原生物学系江苏省现代病原生物学重点实验室南京201129

随着我国血吸虫病流行区逐渐达到传播阻断标准、进入后传播阻断阶段,血吸虫病肝纤维化正成为不容忽视的突出问题。在实现传播阻断和传播控制的地区,应适时调整血防工作的重点,将对血吸虫病肝纤维化的监测与干预纳入常规工作,以减少晚期... 详细信息

随着我国血吸虫病流行区逐渐达到传播阻断标准、进入后传播阻断阶段,血吸虫病肝纤维化正成为不容忽视的突出问题。在实现传播阻断和传播控制的地区,应适时调整血防工作的重点,将对血吸虫病肝纤维化的监测与干预纳入常规工作,以减少晚期血吸虫病的发生。

关键词：晚期血吸虫病传播阻断肝纤维化干预