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白藜芦醇对轮状病毒感染猪肠上皮细胞IPEC-J2的抑制效应

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 4213-4225页

作者：彭宁梁雅旭龙菲余东明钟翔南京农业大学动物科技学院南京210095

旨在研究白藜芦醇对轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)感染猪肠上皮细胞的抗病毒作用。本试验以猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,先测定不同白藜芦醇浓度对IPEC-J2细胞活力的影响,再根据是否用PoRV或白藜芦醇(100μmol·L^(-1))处理IPE... 详细信息

旨在研究白藜芦醇对轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)感染猪肠上皮细胞的抗病毒作用。本试验以猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,先测定不同白藜芦醇浓度对IPEC-J2细胞活力的影响,再根据是否用PoRV或白藜芦醇(100μmol·L^(-1))处理IPEC-J2细胞,分别设置阴性对照组、PoRV感染组和不同时间段添加白藜芦醇+PoRV感染组。通过实时荧光定量PCR技术、病毒滴度测定法和蛋白免疫印迹法检测PoRV在IPEC-J2细胞的复制与增殖情况。结果表明:1)在PoRV感染IPEC-J2的后期和全期添加白藜芦醇(100μmol·L^(-1))可显著抑制PoRV的感染和复制(P<0.05);2)与PoRV感染组相比,在PoRV感染IPEC-J2的全期添加白藜芦醇(100μmol·L^(-1))可极显著抑制IPEC-J2细胞上清液中炎症细胞因子IL-1β、IL-10、TNF-α和IFN-β的含量(P<0.01),后期添加白藜芦醇可显著抑制IL-10和IFN-β的含量(P<0.05);后期和全期添加白藜芦醇极显著抑制了IPEC-J2细胞中的免疫相关因子MDA5、RIG-I、TRIF、MAVS、LGALS9、EIF2 AK 2、IRF 9和IFI44L的mRNA相对表达量(P<0.01),极显著抑制了IPEC-J2细胞中可变剪接因子SRPK1、SRPK2、HNRNPC和HNRNPR的mRNA相对表达量(P<0.01);3)与阴性对照组相比,PoRV感染显著促进了IPEC-J2细胞中LGALS 9的5号外显子和EF2AK 2的2号外显子发生外显子跳跃,而在PoRV感染IPEC-J2的后期和全期添加白藜芦醇(100μmol·L^(-1))可显著抑制靶基因发生外显子跳跃。综上证实,本研究添加100μmol·L^(-1)白藜芦醇可抑制PoRV对IPEC-J2细胞的感染和复制,且在PoRV感染后的维持阶段发挥作用,可为预防和治疗仔猪病毒性腹泻提供新的依据和参考。

关键词：白藜芦醇猪轮状病毒抗病毒可变剪接

一株新型鸭呼肠孤病毒的分离及抗体检测的间接ELISA建立

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畜牧兽医学报 2024年

作者：徐晨晨马旭杰宋素泉闫丽萍南京农业大学动物医学院

新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus， NDRV）能造成多品种雏鸭肝、脾的出血坏死，并造成免疫抑制，给我国的水禽养殖业造成了严重经济损失，但市场上仍无商品化检测试剂盒。基于此，本研究通过蚀斑纯化从临床病料中成功分离到一株... 详细信息

新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus， NDRV）能造成多品种雏鸭肝、脾的出血坏死，并造成免疫抑制，给我国的水禽养殖业造成了严重经济损失，但市场上仍无商品化检测试剂盒。基于此，本研究通过蚀斑纯化从临床病料中成功分离到一株纯净的新型鸭呼肠孤病毒（命名为E232株），并以原核表达的σC蛋白为包被原建立了能够检测NDRV血清抗体的间接ELISA。遗传进化分析结果显示，E232株属于NDRV，且与其他NDRV毒株的核苷酸同源性为96.4%～98.9%。动物回归试验结果表明，E232株发病率达到100%，发病雏鸭的脾出现严重肿胀、出血、坏死，泄殖腔排毒量和咽部排毒量均在感染后第5天达到高峰。建立的间接ELISA具有良好的特异性，与其他鸭病病原阳性血清均无交叉反应；检测NDRV阳性血清最低检出效价为1:6 400，批内重复变异系数为1.53%～7.24%，批间重复变异系数为1.84%～8.30%，检测236份临床血清样品的阳性率为80.93%。综上，本研究E232株的成功分离，丰富了我国NDRV流行病学信息库；间接ELISA的成功建立，为临床NDRV防控提供了良好的技术手段。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定 σC蛋白间接ELISA

基于高分辨率熔解曲线检测MD肿瘤微卫星不稳定性

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 759-769页

作者：史泽风李翎旭郭译文廖云孙昭宇王来荣杨德吉姚大伟南京农业大学动物医学院南京210095

本研究旨在通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)方法检测马立克病(Marek′s disease,MD)肿瘤中存在的微卫星不稳定现象(microsatellite instability,MSI)。通过临床症状、病理剖检、组织病理学、PCR及测序确定为马立克... 详细信息

本研究旨在通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)方法检测马立克病(Marek′s disease,MD)肿瘤中存在的微卫星不稳定现象(microsatellite instability,MSI)。通过临床症状、病理剖检、组织病理学、PCR及测序确定为马立克病。采集5只发病鸡的肌肉、肝、脾、血液及肿瘤组织,提取DNA,采用15对扩增微卫星DNA序列的引物进行HRM检测,得到归一化处理的差异熔解曲线,比较分析各组织熔解曲线的差异,分析15个微卫星标记是否存在基因突变(即MSI)。结果表明,发病鸡的各种临床、病理表现符合为马立克病的特征,病毒meq基因序列与近年来国内流行的MDV强毒株有较高的同源性。HRM分析结果显示,MD发病鸡的肌肉、肝、脾、血液、肿瘤组织中微卫星标记PCR扩增后的熔解曲线存在明显的差异,即存在MSI现象,而且不同的病鸡个体和不同的微卫星标记发生MSI的频率不同。15个微卫星标记在5只鸡的病料中存在MSI的微卫星标记的个数分别为14、7、5、3和1。在15个微卫星标记中,MCWO200、MCW0220这两个微卫星标记在所有的病鸡中都存在MSI,而ADL0158微卫星标记在所有的病鸡中都不存在MSI。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和测序分析进一步证明这些微卫星PCR扩增片段确实存在片段大小不同,碱基序列中存在微卫星重复单位的增多、减少或基因片段的插入或缺失。结果提示,通过HRM分析可以检测MD肿瘤中的MSI现象,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。

关键词：高分辨率熔解曲线马立克病微卫星不稳定性肿瘤

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我国猪链球菌对常用抗菌药物耐药性的Meta分析

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畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 3163-3176页

作者：田思瑾赵佳琪王晓明王丽平黄金虎南京农业大学动物医学院南京210095

旨在系统分析近年来我国猪链球菌对常用抗菌药物的耐药情况、地区差异及变化规律,为我国猪链球菌耐药性的监测、抗菌药物的合理使用以及新药开发等提供科学指导。搜集和整理现有文献,进行Meta分析,包括设立纳入与排除标准,对相关文献进... 详细信息

旨在系统分析近年来我国猪链球菌对常用抗菌药物的耐药情况、地区差异及变化规律,为我国猪链球菌耐药性的监测、抗菌药物的合理使用以及新药开发等提供科学指导。搜集和整理现有文献,进行Meta分析,包括设立纳入与排除标准,对相关文献进行纳入和排除筛选,然后建立我国猪链球菌对常用抗菌药物耐药状况的数据库,并对数据库内文献进行质量评价、异质性检验、发表偏倚检验、亚组分析等步骤并进行统计学计算。结果显示:我国猪链球菌对20种常用抗菌药物呈现不同的耐药情况:对四环素类和林可胺类的耐药率最高(>80%),分别是四环素91%、林可霉素84%、多西环素81%、克林霉素81%;对氨基糖苷类、大环内酯类和磺胺类的耐药率为50%~80%,分别是红霉素76%、卡那霉素75%、阿奇霉素74%、链霉素70%、复方新诺明65%、庆大霉素64%、阿米卡星55%;耐药率为10%~40%的有β-内酰胺类、酰胺醇类、氟喹诺酮类,分别是恩诺沙星37%、氟苯尼考31%、环丙沙星30%、青霉素24%、氯霉素24%、氨苄西林13%、头孢噻呋12%;耐药率低于10%的有万古霉素,耐药率为4%。亚组分析结果显示,全国猪链球菌的耐药率呈现明显的地区和时间差异。猪链球菌对大部分抗菌药物产生了不同程度的耐药性,猪链球菌的耐药情况日趋严重,需要加强对我国猪链球菌耐药性的监测。

关键词：猪链球菌抗菌药物耐药性 Meta分析

湖羊MSTRG.96141.1转录本表达特征分析及在卵巢颗粒细胞凋亡中调控机制

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南京农业大学学报 2024年

作者：姚晓磊王汉斌刘智琳张艳丽魏宗友南京农业大学动物科技学院太仓市畜牧兽医站

[目的]本文旨在探究长链非编码RNA（long no-coding RNA，lncRNA）MSTRG.96141.1转录本表达特征及参与湖羊卵巢颗粒细胞凋亡（granulosa cell，GC）的调控机制。[方法]挖掘课题组前期高低繁湖羊(高繁，High prolificacy FecBB，HPBB；... 详细信息

[目的]本文旨在探究长链非编码RNA（long no-coding RNA，lncRNA）MSTRG.96141.1转录本表达特征及参与湖羊卵巢颗粒细胞凋亡（granulosa cell，GC）的调控机制。[方法]挖掘课题组前期高低繁湖羊(高繁，High prolificacy FecBB，HPBB；低繁，Low Prolificacy FecBB，LPBB)健康优势卵泡（> 5 mm）全转录组测序数据，鉴定到差异miR-3957-3p，采用生物信息学、双荧光素酶报告等方法确定与miR-3957-3p存在靶向关系的lncRNA；在此基础上，以湖羊GC为模型，采用过表达/干扰、qRT-PCR、FSIH、细胞流式术等技术，分析其表达特征和对湖羊GC凋亡的影响。[结果]miR-3957-3p表达水平HPBB组显著低于LPBB组；lncRNA（MSTRG.96141.1）与miR-3957-3p存在靶向关系；该转录本在湖羊生殖器官中的卵巢上表达最高，HPBB组显著高于LPBB组；进一步在湖羊卵巢GC中检测到该转录本的阳性信号，且定位于GC细胞质；干扰MSTRG.96141.1上调BAX基因mRNA表达水平和BAX:Bcl-2比率，进而促进湖羊GC凋亡；过表达miR-3957-3p上调BAX基因mRNA表达水平和BAX:Bcl-2比率，下调Bcl-2基因mRNA表达水平，进而促进湖羊GC凋亡；干扰miR-3957-3p则与之相反。[结论]MSTRG.96141.1通过吸附miR-3957-3p参与调控湖羊GC凋亡，进而影响卵泡发育。而MSTRG.96141.1能否作为湖羊繁殖力的分子标记，还需要进一步探究。

关键词：湖羊卵巢颗粒细胞 MSTRG.96141.1 miR-3957-3p 细胞凋亡

甜菜碱对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质和抗氧化能力的影响

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1085-1094页

作者：片慧芳杜旭彬李妍张雨辰何惠虞德兵南京农业大学动物科技学院南京210095 南京农业大学动物医学院南京210095 泰兴市鹏源养殖有限公司泰州225400

旨在研究甜菜碱对产蛋后期蛋鸡生产性能及抗氧化功能的影响。选择108只500日龄的海兰褐壳蛋鸡,随机分为3组,每组3个重复,每个重复12只。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮的基础上分别添加1 000、3 000 mg·kg^(-1)甜菜碱,试验期42 ... 详细信息

旨在研究甜菜碱对产蛋后期蛋鸡生产性能及抗氧化功能的影响。选择108只500日龄的海兰褐壳蛋鸡,随机分为3组,每组3个重复,每个重复12只。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮的基础上分别添加1 000、3 000 mg·kg^(-1)甜菜碱,试验期42 d。试验结束时,采集鸡蛋、血清、卵巢和小黄卵泡颗粒细胞。结果发现:1)与对照组相比,日粮添加甜菜碱线性提高了产蛋后期蛋鸡的产蛋率和平均蛋重(PL<0.01),且线性提高了蛋白高度、蛋黄颜色、蛋黄重量(PL<0.05)。2)与对照组相比,日粮中添加甜菜碱,血清中Prog水平呈显著线性升高(PL<0.01),FSH和LH水平呈线性和二次升高(PL<0.01;PQ<0.05)。3)日粮中添加甜菜碱,线性提升了产蛋后期蛋鸡血清中SOD、GSH-Px活性和卵巢中T-AOC水平、SOD和CAT活性,线性降低了MDA水平(PL<0.05),同时线性和二次曲线提升了血清中T-AOC水平和CAT活性,降低了MDA含量(PL<0.01;PQ<0.01)。此外,日粮中添加甜菜碱线性提高颗粒细胞中SOD、HO-1基因表达量(PL<0.01),二次曲线提高了Nrf2基因的表达水平(PQ<0.01),线性和二次曲线提高了NQO1基因的表达水平(PL<0.01;PQ<0.01),且显著提升了CAT基因的表达水平(P<0.05)。综上,日粮中添加甜菜碱能够增加血清中的激素水平和血清、卵巢中抗氧化酶的活性,促进小黄卵泡颗粒细胞抗氧化相关基因的表达,提高其抗氧化能力,进而提高产蛋后期蛋鸡的生产性能,且高剂量的添加效果优于低剂量。

关键词：甜菜碱产蛋后期蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞抗氧化性能

生成式人工智能技术的多元风险及其协同治理研究

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图书馆建设 2024年

作者：徐磊南京农业大学人文与社会发展学院

生成式人工智能技术所生成的内容在质量、效率以及多样性等方面已经有了显著的进步。生成式人工智能技术的关键在于大模型，基础在于数据，核心在于算法，而实现则在于算力。当前，生成式人工智能技术伴随着数据信息泄露、模型算法安全... 详细信息

生成式人工智能技术所生成的内容在质量、效率以及多样性等方面已经有了显著的进步。生成式人工智能技术的关键在于大模型，基础在于数据，核心在于算法，而实现则在于算力。当前，生成式人工智能技术伴随着数据信息泄露、模型算法安全、生成内容偏颇、技术违法滥用等风险。这些风险严重地影响着生成式人工智能技术的健康发展。因此，生成式人工智能服务提供者、生成式人工智能服务使用者、国家有关主管部门以及社会各界等多元治理主体应当共同参与和相互配合，在生成式人工智能技术研发和服务提供等全流程采取适当的治理措施，在有效应对现实违法行为或潜在安全风险的同时，最大限度地规范生成式人工智能技术及服务，推动生成式人工智能的创新发展。

关键词：生成式人工智能技术大模型数据 ChatGPT 协同治理

甲烷马赛球菌DZ1对小鼠血清氧化三甲胺和炎症因子、肝脏抗氧化能力及盲肠微生物区系的影响

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畜牧兽医学报 2024年第10期 4679-4689页

作者：占小秀刘鹏宇向小娥毛胜勇金巍南京农业大学反刍动物营养与饲料工程技术研究中心南京农业大学消化道微生物研究室南京农业大学动物科学类国家级实验教学中心

甲烷马赛球菌是哺乳动物消化道中的固有菌群，能够利用三甲胺（TMA）生成甲烷，然而其对宿主的作用机制尚不十分清楚。本文旨在利用小鼠模型研究灌胃甲烷马赛球菌菌株DZ1活菌对小鼠血清氧化三甲胺（TMAO）和炎症因子、肝抗氧化能力及盲... 详细信息

甲烷马赛球菌是哺乳动物消化道中的固有菌群，能够利用三甲胺（TMA）生成甲烷，然而其对宿主的作用机制尚不十分清楚。本文旨在利用小鼠模型研究灌胃甲烷马赛球菌菌株DZ1活菌对小鼠血清氧化三甲胺（TMAO）和炎症因子、肝抗氧化能力及盲肠微生物区系的影响。试验采用14只5周龄雄性C57BL/6J小鼠（体重18.4±1.1 g）,随机分为对照组（n=7）和处理组（n=7）,单笼饲养。处理组每天灌胃200μL DZ1菌液(1.09×10～9个细胞·mL-1),对照组每天灌胃200μL无菌PBS溶液，试验期4周。结果显示，与对照组相比，处理组小鼠日增重和采食量没有显著变化（P>0.05）。处理组小鼠血清TMAO浓度和炎症因子水平显著降低（P<0.05）。处理组小鼠肝中超氧化酶歧化酶（SOD）活性显著升高（P=0.035）,肝总抗氧化能力（T-AOC）显著提高（P=0.039）。盲肠细菌16S rRNA基因测序结果显示，处理组和对照组菌群结构没有显著差异（ANOSIM,P=0.161）。处理组中疣微菌门（Verrucomicrobia）的相对丰度有降低的趋势（P=0.064）,Lawsonibacter属、瘤胃球菌属（Ruminococcus）和阿克曼菌属（Akkermansia）等的相对丰度显著降低（P<0.05）。综上，灌胃甲烷马赛球菌菌株DZ1未显著影响小鼠盲肠细菌区系结构，但降低了小鼠血清TMAO和炎症因子水平，提高了肝组织总抗氧化能力。

关键词：氧化三甲胺(TMAO) 甲烷马赛球菌肠道微生物炎症因子抗氧化能力

单病毒示踪SADS-CoV通过网格蛋白介导的内吞入胞

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病毒学报 2024年

作者：洪文广安达裴义杨永乐李燕单衍可黄耀伟刘斐南京农业大学动物医学院浙江省湘湖实验室华南农业大学兽医学院

猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine acute diarrhoea syndrome coronavirus, SADS-CoV）是一种能够引起仔猪急性腹泻的新发冠状病毒，因其在体外广泛的物种嗜性，具有潜在的跨种传播风险。本研究首先利用单病毒示踪技术平台实现了对SADS-... 详细信息

猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine acute diarrhoea syndrome coronavirus, SADS-CoV）是一种能够引起仔猪急性腹泻的新发冠状病毒，因其在体外广泛的物种嗜性，具有潜在的跨种传播风险。本研究首先利用单病毒示踪技术平台实现了对SADS-CoV入胞动态过程的可视化；接着，结合网格蛋白介导的内吞途径（Clathrin-mediated endocytosis, CME）抑制剂（氯丙嗪）和表皮生长因子通路底物15突变体质粒确定了SADS-CoV依赖CME的入胞路径。通过对SADS-CoV依赖CME的入胞动态事件进行可视化分析，发现SADS-CoV入胞后形成的网格蛋白包被的囊泡（Clathrin-coated vesicle, CCV）发生了去包被的现象，并进一步发现SADS-CoV依赖CME内化后可快速进入早期内体，同时CME介导SADS-CoV入胞后的CCV去包被现象是发生在早期内体中。综上，本研究基于单病毒示踪技术，解析了SADS-CoV依赖CME内化后快速进入早期内体中发生CCV去包被的动态过程，进一步加深了对SADS-CoV感染过程的理解，同时也为抗病毒药物的研发提供了理论依据。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒网格蛋白内吞单病毒示踪