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一种实验室去除噬菌体制剂内毒素方法的建立

病毒学报 2024年第4期40卷 823-829页

作者：袁文源林焱朱伟云国家动物消化道营养国际联合研究中心江苏省消化道营养与动物健康重点实验室南京农业大学消化道微生物研究室南京210095

内毒素是革兰氏阴性菌被噬菌体裂解时释放的外膜脂多糖,是噬菌体制剂中的主要污染物,可能引发机体严重免疫反应。因此,去除内毒素对于噬菌体应用非常重要。在本文中,我们采用了透析法、超滤法及两者结合的方法分别去除噬菌体制剂中的内... 详细信息

内毒素是革兰氏阴性菌被噬菌体裂解时释放的外膜脂多糖,是噬菌体制剂中的主要污染物,可能引发机体严重免疫反应。因此,去除内毒素对于噬菌体应用非常重要。在本文中,我们采用了透析法、超滤法及两者结合的方法分别去除噬菌体制剂中的内毒素,并检测不同方法处理后噬菌体制剂中内毒素浓度及噬菌体滴度。结果显示,三种方法均能有效去除噬菌体制剂中的内毒素,其中透析法48h去除内毒素的效果最优,去除率达到99.9%以上。此外,超滤法得到的噬菌体回收率显著低于透析法,且每噬菌斑形成单位内毒素含量更高。超滤和透析结合的方法能在牺牲部分回收率的情况下节省时间,且内毒素去除率也能达到99%以上。综上,本文建立了一种通过透析去除噬菌体制剂内毒素的方法,与传统超滤法相比,具有操作简便、成本低、回收率高的优点,可以作为实验室去除噬菌体制剂内毒素的可行方法。

关键词：噬菌体内毒素透析超滤

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2’-岩藻糖基乳糖缓解LPS诱导的细胞炎症应答和屏障损伤的功能研究

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南京农业大学学报 2024年

作者：孙伟乐李轩慕春龙朱伟云南京农业大学动物消化道营养国际联合研究中心/江苏省消化道营养与动物健康重点实验室/南京农业大学动物科技学院消化道微生物研究室

[目的]本文旨在探究2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)对LPS诱导的仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症和屏障功能的影响。[方法]以IPEC-J2为细胞模型，首先通过预试验对LPS和2’-FL的处理浓度分别进行筛选，最终选择100 μg·mL-1LPS诱导细胞促炎反... 详细信息

[目的]本文旨在探究2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)对LPS诱导的仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症和屏障功能的影响。[方法]以IPEC-J2为细胞模型，首先通过预试验对LPS和2’-FL的处理浓度分别进行筛选，最终选择100 μg·mL-1LPS诱导细胞促炎反应，接着通过不同浓度2’-FL干预(20 μg·mL-1、100 μg·mL-1)来探究其对LPS诱导IPEC-J2的促炎反应和屏障功能受损的调节作用。因而，此试验分为六组：对照组(CON)、LPS组(100 μg·mL-1LPS)、FL20组(20 μg·mL-12’-FL)、FL100组(100 μg·mL-12’-FL)、SF20组(100 μg·mL-1LPS+20 μg·mL-12’-FL)和SF100组(100 μg·mL-1LPS+100 μg·mL-12’-FL)。试验处理24 h后，测定各组细胞活力、紧密连接蛋白、炎症因子和炎症相关通路的基因表达水平以及通过Western blot检测NF-κB、Myd88、Claudin-1和Occludin蛋白的相对表达量。[结果]与CON组相比，LPS组显著降低了IPEC-J2细胞活性(P＜0.05)；显著上调了促炎因子IL-6、IL-8 及炎症通路NF-κB、Myd88和CD14的基因表达(P＜0.05);下调了抗炎因子IL-4的基因表达(P＜0.05); 同时显著下调了紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-3、Claudin-4、ZO-1、ZO-2和Occludin的基因表达(P＜0.05)。与CON组相比，FL20组还显著提高了Claudin-1、Claudin-3、Claudin-4和ZO-2紧密连接蛋白的表达(P＜0.05)。与LPS组相比， SF20组和SF100组显著提高了IPEC-J2细胞活性(P＜0.05)；显著下调了促炎因子IL-8和上调了抗炎因子IL-4和IL-10基因表达(P＜0.05)；显著下调了炎症通路基因NF-κB、Myd88和CD14(P＜0.05)；显著上调了紧密连接基因Claudin-1、Claudin-3、Claudin-4、ZO-1、ZO-2、Occludin(P＜0.05)。Western blot结果发现，与CON组相比，只有LPS组的NF-κB显著上调(P＜0.05)。与LPS组相比，SF20组的NF-κB、Myd88蛋白表达量有降低，Claudin-1和Occludin蛋白表达量有升高，但差异都不显著。[结论] LPS处理促进了IPEC-J2细胞的促炎反应并造成了屏障功能受损，2’-FL干预减弱了LPS刺激的促炎信号通路，进而改善了LPS引起的屏障功能受损。本研究揭示了2’-FL参与调节肠道炎症和屏障功能的可能机制，为利用2’-FL促进肠道健康提供了新的见解和参考依据。

关键词： 2’-岩藻基乳糖猪小肠上皮细胞紧密连接蛋白炎症因子

猪结肠源分离菌对结肠炎小鼠肠道细胞因子和转录因子表达的调节

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微生物学通报 2024年第7期51卷 2599-2613页

作者：凌乙丹程颖州潘龙慕春龙朱伟云南京农业大学动物科技学院、消化道微生物研究室、江苏省消化道营养与动物健康重点实验室、动物消化道营养国际联合研究中心江苏南京210095

【背景】哺乳动物消化道中的微生物对肠道稳态的维持十分重要,但肠道细菌在调节细胞因子表达等方面发挥的调节作用还有待研究。【目的】探究猪肠道不同分离菌株在结肠炎模型中对细胞因子和转录因子的调节差异。【方法】从猪结肠分离培... 详细信息

【背景】哺乳动物消化道中的微生物对肠道稳态的维持十分重要,但肠道细菌在调节细胞因子表达等方面发挥的调节作用还有待研究。【目的】探究猪肠道不同分离菌株在结肠炎模型中对细胞因子和转录因子的调节差异。【方法】从猪结肠分离培养单菌,在脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的Caco-2细胞炎症模型中,用细菌上清液孵育细胞;进一步试验采用葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠模型,用细菌悬浮液进行灌胃,检测细菌处理后Caco-2细胞和小鼠结肠组织中细胞因子和转录因子基因表达、细胞生长率、小鼠体重等指标。【结果】从猪结肠中分离得到6株菌,分别属于Enterococcus、Lactobacillus、Sharpea和Mitsuokella。在LPS诱导炎症Caco-2细胞炎症模型中,LactobacillusamylovorusLGM显著下调白细胞介素(interleukin,IL)-4和IL-17的mRNA表达(P道结肠炎的调节作用不同,这与不同菌株对细胞因子基因表达的调节有关。Lactobacillus amylovorus LGM通过上调结肠中的转录因子Foxp3和GATA-3可以发挥一定程度的抗炎症作用。

关键词：肠道微生物猪乳酸菌结肠炎细胞因子

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灌服肠内酯对哺乳羔羊瘤胃发酵参数和消化道发育的影响

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畜牧与兽医 2024年第6期56卷 49-54页

作者：刘宁莫佳琪王翊菲黄士翰刘军花国家动物消化道营养国际联合研究中心/江苏省消化道营养与动物健康重点试验室南京农业大学动物科技学院消化道微生物研究室江苏南京210095

本研究旨在探讨灌服肠内酯对羔羊瘤胃发酵和胃肠道发育的影响。试验选取14只健康12日龄湖羊羔羊,随机均分为两组,对照组灌服生理盐水,灌服肠内酯组于每天10:00进行口腔灌服处理,预饲期3 d,正试期为28 d。试验过程中羔羊自由采食1∶9冲... 详细信息

本研究旨在探讨灌服肠内酯对羔羊瘤胃发酵和胃肠道发育的影响。试验选取14只健康12日龄湖羊羔羊,随机均分为两组,对照组灌服生理盐水,灌服肠内酯组于每天10:00进行口腔灌服处理,预饲期3 d,正试期为28 d。试验过程中羔羊自由采食1∶9冲泡的山羊奶粉并自由饮水,每天记录羔羊采食量,每周称重,羔羊在42日龄时屠宰采样,采取瘤胃和小肠组织样品,以及瘤胃液样品,分别用于组织形态学和挥发性脂肪酸分析。结果:与对照组相比,口腔灌服肠内酯显著提高了羔羊5周龄平均日增重(P健康生长发育打下坚实基础。

关键词：肠内酯瘤胃发酵消化道发育羔羊

饲粮中添加蛋白酶对猪生长性能、营养物质消化率和血清生化指标影响的Meta分析

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饲料工业 2024年第4期45卷 30-37页

作者：孟成明刘子昱慕春龙朱伟云山东省畜牧总站山东济南250100 动物消化道营养国际联合研究中心江苏省消化道营养与动物健康重点实验室南京农业大学消化道微生物研究室江苏南京210095

研究采用Meta分析,旨在评价饲粮中添加蛋白酶对猪生长性能、营养物质消化率和血清生化指标的影响。通过检索中国知网、PubMed和Web of Science数据库,筛选饲粮中添加蛋白酶对猪生长性能、营养物质消化率和血清生化指标影响的随机对照试... 详细信息

研究采用Meta分析,旨在评价饲粮中添加蛋白酶对猪生长性能、营养物质消化率和血清生化指标的影响。通过检索中国知网、PubMed和Web of Science数据库,筛选饲粮中添加蛋白酶对猪生长性能、营养物质消化率和血清生化指标影响的随机对照试验。自2013至2023年,筛选获得22篇文献纳入研究,所纳入总样本1818例,使用R包(Meta)进行相关数据分析。选择标准化均数差(SMD)作为效应指标。结果表明:相较于对照组,饲粮中添加蛋白酶显著提高了猪的平均日采食量(SMD=0.11,95%CI=0.01~0.21)和平均日增重(SMD=0.43,95%CI=0.28~0.57),降低了料重比(SMD=-0.33,95%CI=-0.48~-0.18),提高了饲粮中干物质(SMD=0.27,95%CI=0.15~0.39)和粗蛋白(SMD=0.42,95%CI=0.32~0.53)的消化率,降低了血清中尿素氮含量(SMD=-0.17,95%CI=-0.28~-0.05)。综上,饲粮中添加蛋白酶可以改善猪的生长性能,提高营养物质消化率,降低血清中尿素氮水平。

关键词：蛋白酶猪生长性能营养物质消化率 Meta分析

姜酚和百里香酚对白羽肉鸡小肠形态结构和屏障功能的影响

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南京农业大学学报 2024年第1期47卷 87-95页

作者：尹莉丽吴建民陈露赵文轩汪晶朱伟云南京农业大学动物科技学院/国家动物消化道营养国际联合研究中心江苏南京210095

[目的]本试验旨在研究日粮添加姜酚、百里香酚及其组合对白羽肉鸡小肠形态、免疫功能及肠道屏障的影响。[方法]将200只1日龄AA白羽肉鸡随机分为4组,每组5个重复,每个重复10只,试验期为42 d。4个处理组如下:对照组(Con组,基础日粮)、姜酚... 详细信息

[目的]本试验旨在研究日粮添加姜酚、百里香酚及其组合对白羽肉鸡小肠形态、免疫功能及肠道屏障的影响。[方法]将200只1日龄AA白羽肉鸡随机分为4组,每组5个重复,每个重复10只,试验期为42 d。4个处理组如下:对照组(Con组,基础日粮)、姜酚组(Gin组,基础日粮+60 mg·kg^(-1)姜酚)、百里香酚组(Thy组,基础日粮+30 mg·kg^(-1)百里香酚)及姜百组(Gin+Thy组,基础日粮+30 mg·kg^(-1)姜酚+15 mg·kg^(-1)百里香酚)。在试验期第42天,采集肉鸡的空肠和回肠制作切片并观察,取空肠和回肠黏膜以测定免疫球蛋白含量、细胞因子含量、抗氧化酶活性、紧密连接和抗氧化相关基因表达。[结果]与对照组相比,姜百组肉鸡回肠绒毛高度(VH)有增加的趋势(P=0.063),绒毛高度/隐窝深度(V/C)值显著提高(P道形态和肠道屏障促进肠道健康。

关键词：姜酚百里香酚肉鸡肠道形态肠道屏障

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不同包被缓释尿素的瘤胃缓释效果的评价

南京农业大学学报 2024年第1期47卷 157-165页

作者：曹力文冯春燕温世宝郑文金申军士毛胜勇朱伟云国家动物消化道营养国际联合研究中心/南京农业大学动物科技学院消化道微生物研究室江苏南京210095 上海美农生物科技股份有限公司上海201807

[目的]本文旨在通过体外批次发酵、瘤胃灌注和持续动态人工瘤胃模拟系统等不同方法评价包被缓释尿素的瘤胃缓释效果。[方法]体外发酵试验:选取1种普通尿素和4种商业包被缓释尿素,体外培养24 h,采集不同时间点(0、1、3、6、9、12、24 h)... 详细信息

[目的]本文旨在通过体外批次发酵、瘤胃灌注和持续动态人工瘤胃模拟系统等不同方法评价包被缓释尿素的瘤胃缓释效果。[方法]体外发酵试验:选取1种普通尿素和4种商业包被缓释尿素,体外培养24 h,采集不同时间点(0、1、3、6、9、12、24 h)发酵液测定氨氮浓度,将筛选出缓释效果最好的缓释尿素用于进一步的研究。瘤胃灌注试验:12只体重(平均27.6 kg)相近的安装有瘤胃瘘管的育肥公湖羊,随机平均分为2组,分别向瘤胃中灌注剂量为日干物质采食量0.5%的普通尿素或日采食量0.55%的缓释尿素(等氮当量),灌注后不同时间点(0、1、3、6、9、12和24 h)采集瘤胃液,测定pH值和氨氮浓度。人工瘤胃试验:在基础日粮中分别添加3.5%的豆粕(普通日粮组)、0.5%的普通尿素(普通尿素组)和0.55%的缓释尿素(缓释尿素组),使用玉米补充普通尿素和缓释尿素组能量的缺乏;试验重复3次,每次持续7 d(4 d适应期和3 d采样期),采样期每天早上投料前后不同时间点采集发酵液和溢流液,测定发酵参数和微生物蛋白浓度。[结果]体外发酵试验:在发酵开始的9、12 h,缓释尿素A组的氨氮浓度显著低于普通尿素组和其余3个缓释尿素处理组(P微生物蛋白的浓度(P动物瘤胃灌注条件下同样表现出较好的缓释效果。在人工瘤胃发酵试验中添加缓释尿素A能够改善瘤胃发酵,促进微生物蛋白的合成,但对生长性能和瘤胃菌群的影响仍需动物饲养试验做进一步的验证。

关键词：包被缓释尿素体外发酵瘤胃灌注持续动态人工瘤胃模拟系统发酵参数

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橙皮苷、百里香酚、迷迭香酸及其联合添加对肉仔鸡肠道免疫和抗氧化功能的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：刘瑞雪丁雪东党苗苗汪晶朱伟云南京农业大学动物科技学院/国家动物消化道营养国际联合研究中心

[目的]试验旨在研究橙皮苷、百里香酚、迷迭香酸及其联合添加对肉仔鸡肠道免疫和抗氧化功能的影响。[方法]选用1日龄爱拔益加肉鸡，随机分为5组，每组6个重复，每个重复8只。5组试验鸡分别饲喂基础饲粮（Con group，对照组）以及在基础... 详细信息

[目的]试验旨在研究橙皮苷、百里香酚、迷迭香酸及其联合添加对肉仔鸡肠道免疫和抗氧化功能的影响。[方法]选用1日龄爱拔益加肉鸡，随机分为5组，每组6个重复，每个重复8只。5组试验鸡分别饲喂基础饲粮（Con group，对照组）以及在基础饲粮中添加40 mg·kg-1橙皮苷（Hes group，橙皮苷组）、40 mg·kg-1百里香酚（Thy group，百里香酚组）、20 mg·kg-1迷迭香酸（RA group，迷迭香酸组）和40 mg·kg-1橙皮苷+40 mg·kg-1百里香酚+20 mg·kg-1迷迭香酸（HTR group，联合组），试验期42 d。[结果]与对照组相比，联合组肉仔鸡的法氏囊指数显著增加（P联合添加橙皮苷、百里香酚和迷迭香酸能够增加肉仔鸡法氏囊指数，降低血清中细胞因子的含量，提高机体和黏膜的免疫能力，增强肠道黏膜的抗氧化能力。

关键词：肉仔鸡橙皮苷百里香酚迷迭香酸抗氧化功能免疫功能

水公牛和荷斯坦奶公牛养分消化、瘤胃发酵及血液生化指标的比较研究

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畜牧与兽医 2024年第3期56卷 17-22页

作者：王宇郑欣怡古青弘郑文金林波申军士南京农业大学动物科技学院消化道微生物研究室/江苏省消化道营养与动物健康重点实验室/国家动物消化道营养国际联合研究中心江苏南京210095 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

本试验旨在探究饲喂相同日粮条件下,比较水公牛与荷斯坦奶公牛养分表观消化率、瘤胃发酵参数和血液生化指标的不同。试验选取健康且状况良好的水公牛和荷斯坦奶公牛各6头,单栏饲养,自由采食和饮水,试验分为预试期16 d,采样期6 d,每天测... 详细信息

本试验旨在探究饲喂相同日粮条件下,比较水公牛与荷斯坦奶公牛养分表观消化率、瘤胃发酵参数和血液生化指标的不同。试验选取健康且状况良好的水公牛和荷斯坦奶公牛各6头,单栏饲养,自由采食和饮水,试验分为预试期16 d,采样期6 d,每天测定采食量,采样期分别采集瘤胃液、饲料、粪便和血液样品用于瘤胃发酵参数、养分消化率、血液生化等指标的测定。结果表明:荷斯坦奶公牛对日粮中干物质、有机物、粗蛋白、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维等养分摄入量极显著高于水公牛(P消化率显著高于荷斯坦奶公牛(P消化率无显著差异(P>0.05);水公牛组瘤胃pH值显著高于荷斯坦奶公牛组(P0.05);水公牛组血液中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、白蛋白、碱性磷酸酶、尿素、甘油三酯和白蛋白/球蛋白比含量显著高于荷斯坦奶公牛组(P0.05)。试验结果表明:在本试验日粮饲养条件下,荷斯坦奶公牛对于日粮养分摄入量以及瘤胃乙酸、丁酸等挥发性脂肪酸产量均大于水公牛,具有较好的增重潜力。

关键词：水公牛荷斯坦奶公牛养分消化瘤胃发酵参数血液生化指标