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miR-34a通过激活lncRNA NORHA转录诱导猪卵巢颗粒细胞早期凋亡

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中国农业科学 2024年第5期57卷 1000-1009页

作者：王思琪周春雪李玉琦杜星潘增祥李齐发南京农业大学动物科技学院

【目的】探索miR-34a诱导GCs凋亡的RNA激活机制，为揭示猪卵泡闭锁的分子机理、筛选调控母猪繁殖的小核酸调节物提供依据。【方法】利用生物信息学方法分析猪miR-34a特征及其与潜在靶基因lncRNA NORHA启动子的结合情况。利用核质分离技... 详细信息

【目的】探索miR-34a诱导GCs凋亡的RNA激活机制，为揭示猪卵泡闭锁的分子机理、筛选调控母猪繁殖的小核酸调节物提供依据。【方法】利用生物信息学方法分析猪miR-34a特征及其与潜在靶基因lncRNA NORHA启动子的结合情况。利用核质分离技术分析猪GCs中miR-34a的亚细胞定位。qPCR检测miR-34a对猪GCs中NORHA、凋亡标志基因BCL-2和BAX表达的影响。利用荧光素酶活性分析验证miR-34a对NORHA启动子转录活性的靶向调控关系。利用染色质免疫沉淀(ChIP)检测miR-34a对猪GCs中NORHA启动子miRNA反应元件(MRE)处AGO2和组蛋白修饰因子富集情况。利用western blot和流式细胞术分析miR-34a通过NORHA对下游因子FOXO1的表达和细胞凋亡的调控作用。【结果】猪miR-34a为基因间miRNA，其序列在哺乳动物中具有高度保守性。亚细胞定位分析显示，miR-34a在猪GCs中细胞核与细胞质均有分布。生物信息学分析显示miR-34a的MRE位于NORHA启动子-194 nt至-173 nt处，且两者结合自由能为-23.9 kcal·mol-1。qPCR结果表明miR-34a显著上调猪GCs中NORHA的表达。荧光素酶活性分析显示，miR-34a极显著上调NORHA启动子报告载体活性，而对MRE突变型启动子活性没有显著影响。ChIP试验显示，miR-34a可增加NORHA启动子MRE处RNA诱导转录激活(RITA)复合物核心成员AGO2和转录激活型组蛋白H3K4me3的富集，而减少转录抑制型组蛋白H3K9me3的富集。共转试验显示，敲减NORHA可显著或极显著逆转由miR-34a过表达引起的FOXO1蛋白水平和早期凋亡率的上调，以及BCL-2/BAX比值的下调。【结论】细胞核miR-34a是猪GCs中的内源性小激活RNA(saRNA)，通过靶向激活促凋亡lncRNA NORHA的转录，诱导猪GCs早期凋亡(细胞膜完整)，可能参与猪卵泡闭锁的启动。

关键词：猪GCs凋亡 miR-34a saRNA NORHA

乳果糖-凝结芽孢杆菌合生素通过Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子-κB信号通路缓解脂多糖诱导的断奶仔猪肠道炎症

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动物营养学报 2024年第1期36卷 551-563页

作者：木颖琦赵祖艳杨运南姚文郑卫江南京农业大学动物科技学院南京210095

本试验旨在研究乳果糖-凝结芽孢杆菌合生素对脂多糖(LPS)诱导的断奶仔猪肠道炎症缓解作用的分子机制。试验选取24头健康、体重接近的27~28日龄“杜×长×大”三元杂交断奶阉公猪,随机分为4组,每组6个重复,每个重复1头猪。对照组(CON组)... 详细信息

本试验旨在研究乳果糖-凝结芽孢杆菌合生素对脂多糖(LPS)诱导的断奶仔猪肠道炎症缓解作用的分子机制。试验选取24头健康、体重接近的27~28日龄“杜×长×大”三元杂交断奶阉公猪,随机分为4组,每组6个重复,每个重复1头猪。对照组(CON组)和LPS组饲喂基础饲粮,金霉素组(CTC组)饲喂基础饲粮+75 mg/kg的金霉素,合生素组(SYN组)饲喂基础饲粮+10 g/kg的乳果糖和2×109 CFU/kg的凝结芽孢杆菌。试验期32 d。试验结束时,对LPS组、CTC组和SYN组仔猪腹腔注射100μg/kg BW LPS,CON组注射相同剂量的生理盐水;注射4 h后屠宰,采集血清和空肠黏膜样本,测定炎症细胞因子含量及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路相关基因和蛋白表达。结果表明:1)与CON组相比,LPS刺激不仅显著提高血清促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-12(IL-12)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及抗炎因子白细胞介素-10(IL-10)含量(P所述,在无抗饲粮中添加乳果糖-凝结芽孢杆菌合生素替代金霉素可通过抑制断奶仔猪空肠黏膜TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,降低TNF-α和IL-1βmRNA相对表达量,改善空肠和血清炎症细胞因子水平,从而缓解LPS诱导的应激反应,提高断奶仔猪的抗应激能力。

关键词：乳果糖凝结芽孢杆菌断奶仔猪脂多糖血清空肠

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高温储存豆粕对肉鸡生长、免疫功能与肠道屏障的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：隋启慧郭丽丽汪鹏邓先乐陈跃平温超周岩民南京农业大学动物科技学院

[目的]本试验旨在研究高温储存豆粕对肉鸡生长、免疫功能和肠道屏障的影响。[方法]将216只1日龄健康雄性爱拔益加（AA）肉仔鸡随机分成3组，每组6个重复，每重复12只鸡，分别饲喂由新鲜豆粕、高温储存14 d和28 d豆粕（储存温度：35 ℃±... 详细信息

[目的]本试验旨在研究高温储存豆粕对肉鸡生长、免疫功能和肠道屏障的影响。[方法]将216只1日龄健康雄性爱拔益加（AA）肉仔鸡随机分成3组，每组6个重复，每重复12只鸡，分别饲喂由新鲜豆粕、高温储存14 d和28 d豆粕（储存温度：35 ℃±0.2 ℃）配制的日粮。试验期21 d。试验结束后，每重复选取1只接近平均体重的肉鸡屠宰采样。[结果]与对照组相比，高温储存显著增加豆粕蛋白质羰基含量（P<0.05），显著降低巯基含量（P<0.05）；与高温储存14 d组相比，高温储存28 d组豆粕羰基含量显著增加（P<0.05），巯基含量显著降低（P<0.05）。与对照组相比，饲喂高温储存豆粕配制的日粮显著降低了肉鸡平均体重和平均日增重（P<0.05），提高了料重比（P<0.05），但对平均日采食量无显著影响；高温储存28 d豆粕组肉鸡法氏囊的器官指数显著降低（P<0.05）；高温储存豆粕组胸腺皮质变薄，皮质与髓质交界模糊，胸腺小体体积增大，数量增多；肝脏炎性细胞浸润部位增多、面积增大。高温储存豆粕组肉鸡空肠黏膜中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）和免疫球蛋白M（IgM）含量显著降低（P<0.05），高温储存28 d豆粕组空肠黏膜免疫球蛋白G（IgG）含量显著降低（P<0.05），回肠黏膜中sIgA、IgG和IgM含量显著降低（P<0.05）；高温储存豆粕组空肠黏膜中髓过氧化物酶（MPO）活性显著降低（P<0.05），高温储存28 d豆粕组回肠黏膜MPO活性显著降低（P<0.05）；高温储存28 d豆粕组空肠黏膜中白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量显著下降（P<0.05）；高温储存豆粕组肉鸡血清中二胺氧化酶（DAO）活性显著升高（P<0.05），但肠道屏障完整性相关基因表达量无显著变化。[结论]35 ℃高温储存使豆粕蛋白质发生氧化，降低了肉鸡前期生长性能，影响肉鸡的免疫机能和肠道屏障完整性，其影响程度随豆粕蛋白质氧化程度增高而线性增加。

关键词：储存豆粕肉鸡生长性能免疫功能肠道屏障

高温储存豆粕对肉鸡生长性能、血清生化和肌肉品质的影响

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中国粮油学报 2024年

作者：郭丽丽隋启慧汪鹏邓先乐陈跃平温超周岩民南京农业大学动物科技学院

（目的）本试验旨在研究高温储存豆粕对肉鸡生长性能、血清生化指标、胸肌肉品质及其抗氧化能力的影响。（方法）选用216只体重相近的1日龄健康雄性爱拔益加(AA)肉仔鸡（43±0.5）g，随机分为3组，每组6个重复，每个重复12只鸡。对照组... 详细信息

（目的）本试验旨在研究高温储存豆粕对肉鸡生长性能、血清生化指标、胸肌肉品质及其抗氧化能力的影响。（方法）选用216只体重相近的1日龄健康雄性爱拔益加(AA)肉仔鸡（43±0.5）g，随机分为3组，每组6个重复，每个重复12只鸡。对照组日粮由新鲜豆粕（-20 ℃存放）配制而成，试验各组日粮分别由（35±0.2）℃储存2周和4周的豆粕配制而成。试验期为42 d，其中1 ～21 d为试验前期，22 ～42 d为试验后期。（结果）结果表明：1）与对照组相比，试验组肉鸡1 ～21 d平均体重、平均日增重显著降低（P研究结果可为夏季高温下储存豆粕品质变化对肉鸡生产性能与生化指标的影响提供理论依据。

关键词：豆粕肉鸡生长性能肌肉品质抗氧化能力

白藜芦醇对轮状病毒感染猪肠上皮细胞IPEC-J2的抑制效应

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畜牧兽医学报 2024年

作者：彭宁梁雅旭龙菲余东明钟翔南京农业大学动物科技学院

旨在研究白藜芦醇对轮状病毒(porcine rotavirus，PoRV)感染猪肠上皮细胞的抗病毒作用。本试验以猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象，根据是否用PoRV或白藜芦醇(100 μmol·L-1)处理IPEC-J2细胞，分别设置阴性对照组、PoRV感染组和白藜芦... 详细信息

旨在研究白藜芦醇对轮状病毒(porcine rotavirus，PoRV)感染猪肠上皮细胞的抗病毒作用。本试验以猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象，根据是否用PoRV或白藜芦醇(100 μmol·L-1)处理IPEC-J2细胞，分别设置阴性对照组、PoRV感染组和白藜芦醇+PoRV感染组。通过实时荧光定量PCR技术、病毒滴度测定法和蛋白免疫印迹法检测PoRV在IPEC-J2细胞的复制与增殖情况。结果表明：1)在PoRV感染IPEC-J2的后期和全期添加白藜芦醇(100 μmol·L-1)可显著抑制PoRV的感染和复制(P研究添加100 μmol·L-1白藜芦醇可抑制PoRV对IPEC-J2细胞的感染和复制，且在PoRV感染后的维持阶段发挥作用，可为预防和治疗仔猪病毒性腹泻提供的新的依据和参考。

关键词：白藜芦醇猪轮状病毒抗病毒可变剪接

miR-23a/27a/24基因簇g.65307469G>A突变对大白猪产仔数和启动子活性的影响

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南京农业大学学报 2024年第2期47卷 334-341页

作者：王思琪李玉琦周春雪杨柳杜星吴望军潘增祥李齐发南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

[目的]本文旨在研究大白猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点多态性与产仔数性状的关系及潜在机制,为母猪繁殖性状的分子育种提供新的潜在遗传标记。[方法]利用混池测序技术筛选猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点,直接测序法对大... 详细信息

[目的]本文旨在研究大白猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点多态性与产仔数性状的关系及潜在机制,为母猪繁殖性状的分子育种提供新的潜在遗传标记。[方法]利用混池测序技术筛选猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点,直接测序法对大白猪群体(n=345)miR-23a/27a/24基因簇突变位点进行基因分型,计算遗传多样性;用线性模型对突变位点多态性与产仔数性状进行关联性分析;构建不同等位基因类型启动子载体,转染猪卵巢颗粒细胞,通过检测荧光素酶活性分析突变对启动子活性的影响;用生物信息学方法预测不同等位基因类型启动子潜在结合的差异转录因子,用荧光素酶活性分析差异转录因子对不同等位基因类型启动子活性的影响。[结果]在猪miR-23a/27a/24基因簇启动子-648 nt(Chr.2,65307469 nt)处发现1个新的G/A突变,命名为g.65307469G>A。在大白猪群体中发现3种基因型(GG、GA和AA),其中GG为优势基因型(89.57%),G等位基因为优势等位基因(94.64%)。关联性分析发现,GA基因型母猪的总产仔数(TNB)比GG基因型母猪每胎高0.56头(P0.05)。[结论]miR-23a、miR-27a和miR-24是大白猪产仔数性状的候选基因,g.65307469G>A突变抑制miR-23a/27a/24基因簇的启动子活性,但与转录因子THAP1无关。

关键词：大白猪 miR-23a/27a/24基因簇变异位点产仔数性状启动子活性

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饲粮添加不同水平芦丁对肉鸡肉品质和抗氧化功能的影响

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南京农业大学学报 2024年第1期47卷 78-86页

作者：马龙飞陈顺周斌斌刘慧娟张佳琦王恬王超南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

[目的]本试验旨在研究饲粮添加不同水平芦丁对肉鸡肌肉品质和抗氧化功能的影响。[方法]试验选取1日龄健康且体重相近的雄性肉鸡256只,随机分为4组,每组8个重复,每个重复8只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加250、500和... 详细信息

[目的]本试验旨在研究饲粮添加不同水平芦丁对肉鸡肌肉品质和抗氧化功能的影响。[方法]试验选取1日龄健康且体重相近的雄性肉鸡256只,随机分为4组,每组8个重复,每个重复8只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加250、500和1 000 mg·kg^(-1)芦丁。试验期第42天,每个重复取1只接近平均体重的肉鸡屠宰取样测定肉鸡肉品质、水分分布、脂肪酸含量、抗氧化等相关指标。[结果]与对照组相比,饲粮中添加250、500和1 000 mg·kg^(-1)芦丁显著降低了胸肌宰后24和48 h的滴水损失(P_(T)<0.05),添加250与500 mg·kg^(-1)芦丁分别降低胸肌的蒸煮损失与剪切力值(P_(T)<0.05),添加500和1 000 mg·kg^(-1)芦丁显著提高了胸肌pH_(24 h)值(P_(T)<0.05),添加500 mg·kg^(-1)芦丁显著降低了肉鸡胸肌中自由水的弛豫时间(T_(22))值(P_(T)<0.05);饲粮中芦丁的添加量与pH_(24 h)值、24和48 h的滴水损失呈线性或二次相关(P_(T)<0.05)。在脂肪酸含量方面,饲粮中添加250和500 mg·kg^(-1)芦丁显著增加了肉鸡胸肌中硬脂酸含量(P_(T)<0.05),添加500和1 000 mg·kg^(-1)芦丁显著提高了肉鸡胸肌中花生一烯酸和多不饱和脂肪酸(PUFA)含量(P_(T)<0.05),同时500 mg·kg^(-1)芦丁组胸肌中棕榈油酸和二十四碳一烯酸含量显著增加(P_(T)<0.05),1 000 mg·kg^(-1)芦丁组胸肌中γ-亚油酸含量显著降低(P_(T)<0.05)。在抗氧化能力方面,饲粮中添加500 mg·kg^(-1)芦丁显著降低了胸肌中MDA含量(P_(T)<0.05),提高了T-SOD活性(P_(T)<0.05),并显著增加胸肌中Nrf2和SOD mRNA的表达量(P_(T)<0.05),250 mg·kg^(-1)芦丁能够显著提高SOD mRNA的表达量(P_(T)<0.05)。饲粮中芦丁的添加量与MDA含量、Nrf2和GSH-Px mRNA表达量呈线性或二次相关(P<0.05)。[结论]肉鸡饲粮中添加芦丁可通过增强肌肉的保水性,提高胸肌pH_(24 h)值并调节肉鸡胸肌中脂肪酸比例从而提高了肉鸡肉品质,这与芦丁激活肌肉中Nrf2信号通路并增强其抗氧化能力有关。在本试验条件下,芦丁的适宜添加量为500 mg·kg^(-1)。

关键词：芦丁肉鸡肌肉品质脂肪酸抗氧化

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富氢水对肉鸡生长性能、抗氧化能力、肉品质和盲肠微生物的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：朱赫王亚梅胡恒姚文郑卫江南京农业大学动物科技学院

[目的]本试验旨在研究饮用富氢水对肉鸡生长性能、抗氧化能力、肉品质和盲肠微生物群影响。[方法]选取120只一日龄雄性AA肉鸡，随机分成两组（每组6个重复，每个重复10只鸡），对照组饮用自来水，富氢水组饮用富氢纳米气泡自来水，试验... 详细信息

[目的]本试验旨在研究饮用富氢水对肉鸡生长性能、抗氧化能力、肉品质和盲肠微生物群影响。[方法]选取120只一日龄雄性AA肉鸡，随机分成两组（每组6个重复，每个重复10只鸡），对照组饮用自来水，富氢水组饮用富氢纳米气泡自来水，试验为期42 d。[结果]虽然富氢水对肉鸡生长性能无显著影响，但可提高血清总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性和肝脏过氧化氢酶活性（P<0.05）；降低肝脏活性氧和丙二醛含量（P<0.05）。在鸡胸肉的肉品质方面，富氢水组剪切力显著低于对照组（P<0.05）；此外，富氢水组鸡胸肉中亮氨酸、赖氨酸及必需氨基酸占比显著高于对照组（P<0.05）；十一烷酸占比显著低于对照组（P<0.05），棕榈油酸、油酸、芥酸、γ-亚麻油酸、α-亚麻油酸及单不饱和脂肪酸占比显著高于对照组（P<0.05）。与对照组相比，富氢水可提高盲肠食糜中产丁酸盐菌（Mediterraneibacter、Kineothrix、Roseburia）和寡养单胞菌属（Stenotrophomonas）相对丰度（P<0.05），而降低Massilimaliae和共生小杆菌属（Symbiobacterium）相对丰度（P<0.05）。[结论]富氢水对肉鸡生长性能无显著影响，但对血清和肝脏的部分抗氧化指标起到积极作用；此外，富氢水还可提高盲肠食糜中部分产丁酸盐菌群的丰度，并通过改善氨基酸与脂肪酸组成调节肉鸡鸡胸肉品质。

关键词：富氢水肉鸡抗氧化能力肉品质盲肠微生物

围产期日粮添加白藜芦醇对山羊生产性能、血液指标及炎症因子基因表达的影响

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草业学报 2024年第4期33卷 210-220页

作者：赵洁陈恒光裴晓蒙于昊徐银莹茆达干南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

本试验旨在从山羊生长性能、血液指标和炎症因子基因表达方面研究白藜芦醇对围产期山羊的影响。18只妊娠129 d (即产前21 d)的经产苏白母山羊分为Con组(基础日粮)和Res组(添加白藜芦醇400 mg·kg^(-1)干物质采食量)。采集产前15 d(d-15... 详细信息

本试验旨在从山羊生长性能、血液指标和炎症因子基因表达方面研究白藜芦醇对围产期山羊的影响。18只妊娠129 d (即产前21 d)的经产苏白母山羊分为Con组(基础日粮)和Res组(添加白藜芦醇400 mg·kg^(-1)干物质采食量)。采集产前15 d(d-15)、产后0 d(d0)和15 d(d15)的血液,测定生产性能、血液指标及炎症因子基因表达。预试验1周,正式试验4周。结果发现,Res处理不显著影响母羊采食量、羔羊出生体重、体尺和日增重,分娩前后母羊采食量变化显著(P=0.023),两组母羊分娩当日采食量最低。生化指标方面:Res处理显著影响d0的游离脂肪酸(NEFA)水平,时间因素与Res的交互作用显著(P0.05)。抗氧化指标方面:Res处理提高d15的超氧化物歧化酶(SOD)活性(P0.05)。免疫指标方面:Res处理显著影响d0的免疫球蛋白A(IgA)(P0.05)。Res处理产后15 d的TNFα及干扰素γ(IFNγ)表达量显著降低(P0.05)。日粮添加白藜芦醇能影响围产期母羊血液游离脂肪酸水平,并在一定程度上增强母羊的抗氧化性能,降低炎症反应。

关键词：围产期山羊白藜芦醇生产性能炎症因子

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