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miR-23a/27a/24基因簇g.65307469G>A突变对大白猪产仔数和启动子活性的影响

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南京农业大学学报 2024年第2期47卷 334-341页

作者：王思琪李玉琦周春雪杨柳杜星吴望军潘增祥李齐发南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

[目的]本文旨在研究大白猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点多态性与产仔数性状的关系及潜在机制,为母猪繁殖性状的分子育种提供新的潜在遗传标记。[方法]利用混池测序技术筛选猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点,直接测序法对大... 详细信息

[目的]本文旨在研究大白猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点多态性与产仔数性状的关系及潜在机制,为母猪繁殖性状的分子育种提供新的潜在遗传标记。[方法]利用混池测序技术筛选猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点,直接测序法对大白猪群体(n=345)miR-23a/27a/24基因簇突变位点进行基因分型,计算遗传多样性;用线性模型对突变位点多态性与产仔数性状进行关联性分析;构建不同等位基因类型启动子载体,转染猪卵巢颗粒细胞,通过检测荧光素酶活性分析突变对启动子活性的影响;用生物信息学方法预测不同等位基因类型启动子潜在结合的差异转录因子,用荧光素酶活性分析差异转录因子对不同等位基因类型启动子活性的影响。[结果]在猪miR-23a/27a/24基因簇启动子-648 nt(Chr.2,65307469 nt)处发现1个新的G/A突变,命名为g.65307469G>A。在大白猪群体中发现3种基因型(GG、GA和AA),其中GG为优势基因型(89.57%),G等位基因为优势等位基因(94.64%)。关联性分析发现,GA基因型母猪的总产仔数(TNB)比GG基因型母猪每胎高0.56头(P0.05)。[结论]miR-23a、miR-27a和miR-24是大白猪产仔数性状的候选基因,g.65307469G>A突变抑制miR-23a/27a/24基因簇的启动子活性,但与转录因子THAP1无关。

关键词：大白猪 miR-23a/27a/24基因簇变异位点产仔数性状启动子活性

HDACi和RS-1提高CRISPR/Cas12i介导的HDR编辑效率

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农业生物技术学报 2024年第10期32卷 2306-2323页

作者：陈秋崇李尚朴苗洱钰周冰倩王旭孟祥宇王小龙徐坤西北农林科技大学动物科技学院/农业农村部动物生物育种国际联合研究中心/陕西省动物遗传育种与繁殖重点实验室

CRISPR/Cas12i是我国学者新近开发的、具有自主知识产权的CRISPR基因编辑系统，被证实具有不亚于CRISPR/Cas9系统的打靶效率。同源定向修复（homology-directed repair, HDR）是DNA双链断裂（double-stranded break, DSB）的主要修复方... 详细信息

CRISPR/Cas12i是我国学者新近开发的、具有自主知识产权的CRISPR基因编辑系统，被证实具有不亚于CRISPR/Cas9系统的打靶效率。同源定向修复（homology-directed repair, HDR）是DNA双链断裂（double-stranded break, DSB）的主要修复方式之一。基于HDR机制的基因编辑可用于纠正基因组中任何形式的突变，但受限于哺乳动物细胞中普遍较低的HDR效率。本研究首先通过单链复性（single-strand annealing, SSA）报告试验、剂量梯度和浓度梯度实验分别验证CRISPR/Cas12i系统在人（Homo sapiens）胚肾细胞系HEK293T中不同靶点的活性、介导HDR编辑的单链寡核苷酸（single-stranded oligonucleotides,ssODN）供体模板剂量及添加小分子药物的适宜浓度，进而通过流式细胞分选、基因组PCR、Sanger测序和在线预测等手段，检测添加不同小分子药物对HEK293T细胞和绵羊（Ovis aries）胎儿成纤维细胞中CRISPR/Cas12i系统介导的HDR编辑效率的影响。结果显示，CRISPR/Cas12i系统在HEK293T细胞18个不同靶点均表现出较高编辑活性，除2个位点稍低外，其余均在80%左右；不同剂量及长度的ss ODN对HDR效率有一定影响，且小分子药物适宜浓度在不同物种和不同类型细胞中略有不同；组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor, HDACi）和RS-1 (C20H16Br2N2O3S)对HEK293T细胞和绵羊胎儿成纤维细胞中CRISPR/Cas12i系统介导的HDR编辑效率均有显著提升，其中RS-1细胞毒性最小，且在提升HDR效率同时未显著降低插入/缺失突变（insertion/deletion mutation, InDel）效率；此外，Entinostat作为HDACi之一，在绵羊胎儿成纤维细胞的骨形态发生蛋白受体1B （bone morphogenetic protein receptor 1B,BMPR1B）基因相关位点提升HDR编辑效率约148倍。总之，CRISPR/Cas12i系统具有较高编辑活性，能够在模式细胞和绵羊原代细胞中介导有效的、以ssODN为供体的HDR精确编辑，且适宜浓度的HDACi和RS-1可以有效提高HDR编辑效率。本研究为CRISPR/Cas12i基因编辑系统的推广与应用提供了参考和借鉴。

关键词： CPRISPR/Cas12i 同源重组 RS-1 (C20H16Br2N2O3S) 组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi) 绵羊

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棘胸蛙Clock基因克隆及其转录表达分析

广西师范大学学报(自然科学版) 2024年

作者：袁鸿汪小冬魏秀英王加品陈以芳姚红艳陈敦学贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室(贵州大学) 贵州农业职业学院畜牧水产系

生物钟在生物体内出现昼夜周期性震荡，影响着生物的生长发育，棘胸蛙Quasipaa spinosa作为一种重要的两栖类动物，蝌蚪期主要在白天活动，而变态后则主要在夜间活动，出现相反的昼夜节律特征。目前关于棘胸蛙Clock基因的昼夜变化特征... 详细信息

生物钟在生物体内出现昼夜周期性震荡，影响着生物的生长发育，棘胸蛙Quasipaa spinosa作为一种重要的两栖类动物，蝌蚪期主要在白天活动，而变态后则主要在夜间活动，出现相反的昼夜节律特征。目前关于棘胸蛙Clock基因的昼夜变化特征暂不清楚。有鉴于此，我们克隆了棘胸蛙的Clock基因，发现其蛋白序列含有1个HLH结构域、2个PAS结构域和1个PAC结构域，且这些结构域在不同物种中高度保守。进化分析表明，鱼类Clock基因可以分为2个不同的组：Clock A组和Clock B组，两栖类Clock基因不分亚型地聚在一起，其中棘胸蛙与高山倭蛙Clock紧密聚在一起。为了探索节律基因在棘胸蛙体内的转录特征，我们选择5个关键的节律基因（Clock、Bmal1、Per2、Cry1和RoRα）用于研究不同发育阶段和不同组织中的表达谱。结果显示：Clock基因在所有组织和所有发育阶段中存在本底表达，且在变态阶段的表达水平最高。节律表达谱显示Clock和Bmal1基因的表达较为一致，均在夜间观察到表达峰值，Per2和Cry1都在一天开始的时候出现表达高峰。但Per2和Cry1的表达模式具有组织特异性，Cry1基因在T4阶段在肌肉、脑、肝和心脏组织中呈现另一个短暂的表达峰。这可能与夜间褪黑素水平的增加或实验动物的行为模式有关。实验结果有助于我们深刻理解两栖类错综复杂的昼夜节律系统。

关键词：棘胸蛙 Clock基因昼夜节律进化表达谱协同作用

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黄羽肉鸡肉质研究进展

饲料工业 2024年第11期45卷 12-20页

作者：张丽张德祥罗威罗成龙李莹杜宗亮广东省农业科学院动物科学研究所猪禽种业全国重点实验室广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广东广州510640 华南农业大学动物科学学院农业农村部鸡遗传育种与繁殖重点实验室广东广州510642

随着国内经济的高速发展,消费者对肉类的品质、新鲜度、风味要求日益提高。黄羽肉鸡因肉质细嫩、滋味鲜美,富含人体生长发育所需的营养物质,在国内肉鸡市场占据重要位置。通常采用肉色、pH、嫩度和系水力等物理指标评定肉品优劣。肉品... 详细信息

随着国内经济的高速发展,消费者对肉类的品质、新鲜度、风味要求日益提高。黄羽肉鸡因肉质细嫩、滋味鲜美,富含人体生长发育所需的营养物质,在国内肉鸡市场占据重要位置。通常采用肉色、pH、嫩度和系水力等物理指标评定肉品优劣。肉品的风味也是消费者选购时的关注重点,风味包括肉品中氨基酸、脂肪酸、肌苷酸等风味前体物质在高温加热下经过化学反应产生的可溶性滋味化合物和挥发性香气化合物。文章从肉质的物理评定指标以及风味前体物质角度简述了我国黄羽肉鸡肉质研究进展,分析了挥发性香气化合物对肉质的影响,为探究鸡肉风味的调控机制以及肉质改良提供理论基础和研究思路。

关键词：黄羽肉鸡肉质风味物理指标化学成分

黑山羊及其杂交后代育肥性能、屠宰性能及肉质性状的比较研究

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中国畜牧兽医 2024年第6期51卷 2429-2439页

作者：肖文韩勇杨红文龙勇粟朝芝袁超杨洋王德凤赵彦频秦杨殷富跃贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵阳550025 贵州省农业科学院畜牧兽医研究所贵阳550005 贵州省畜禽遗传资源管理站贵阳550004

【目的】在相同发酵全混合饲粮(total mixed ration, TMR)育肥条件下,比较分析黑山羊及其杂交后代育肥性能、屠宰性能、肉质性状以及营养物质表观消化率的差异情况,为评价贵州黑山羊与黑色努比亚山羊的杂交效果,以及杂交新品系的育肥增... 详细信息

【目的】在相同发酵全混合饲粮(total mixed ration, TMR)育肥条件下,比较分析黑山羊及其杂交后代育肥性能、屠宰性能、肉质性状以及营养物质表观消化率的差异情况,为评价贵州黑山羊与黑色努比亚山羊的杂交效果,以及杂交新品系的育肥增效研究提供一些数据支持。【方法】选取健康的7~8月龄贵州黑山羊、黑色努比亚山羊、贵州黑山羊♀×黑色努比亚山羊♂(杂交F1代山羊)公羊各5只(共计15只)进行育肥试验。试验共计90 d,其中预试期10 d,正试期80 d。试验期间测定每间隔10 d体重、始末体尺指标和试验末期营养物质表观消化率;育肥结束后,选取3个品种(系)山羊各3只屠宰,测定屠宰性能;取后肢的股二头肌和前肢的臂三头肌进行肉质性状指标测定。【结果】杂交F1代山羊平均日增重显著高于贵州黑山羊(P0.05);粗蛋白质、粗脂肪和中性洗涤纤维表观消化率显著高于贵州黑山羊(P<0.05);胴体重、净肉重、净肉率、肉骨比和肋肉厚(GR值)均显著高于贵州黑山羊(P<0.05);后肢股二头肌和前肢臂三头肌的剪切力均显著低于贵州黑山羊和黑色努比亚山羊(P<0.05),肉色亮度L~*值均显著高于黑色努比亚山羊(P<0.05),后肢股二头肌蒸煮损失显著低于贵州黑山羊和黑色努比亚山羊(P<0.05),前肢臂三头肌蒸煮损失显著低于贵州黑山羊(P<0.05),前肢臂三头肌pH_(45 min)显著高于贵州黑山羊和黑色努比亚山羊(P<0.05)。【结论】通过黑色努比亚山羊杂交改良,贵州黑山羊杂交F1代山羊育肥期的体增重和体尺变化与黑色努比亚山羊相似,屠宰性能、肉质性状以及表观消化率均较贵州黑山羊有不同程度提高和改善。

关键词：贵州黑山羊黑色努比亚山羊杂交F1代育肥性能屠宰性能肉质性状

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不同方法提取的山茱萸多糖品质特征

南方农业学报 2024年第7期55卷 2031-2043页

作者：石云鑫杨家潘诗琴曾诚郭荣荣李晓蝶宋旭琴杨剑宋亚贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 茅台学院食品科学与工程系贵州遵义564507 贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室贵州贵阳550025 高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州贵阳550025

【目的】研究不同提取方法对山茱萸多糖品质特征的影响,为山茱萸多糖的深加工及其开发利用提供参考依据。【方法】分别以热水提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法、酸提取法、碱提取法和复合酶提取法等6种方法提取山茱萸多糖,比... 详细信息

【目的】研究不同提取方法对山茱萸多糖品质特征的影响,为山茱萸多糖的深加工及其开发利用提供参考依据。【方法】分别以热水提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法、酸提取法、碱提取法和复合酶提取法等6种方法提取山茱萸多糖,比较不同提取方法对山茱萸多糖的提取率、总糖含量、抗氧化能力、理化性质和结构表征的影响。【结果】不同提取方法所得的山茱萸多糖品质特征具有差异性。其中,碱提取法提取的山茱萸多糖提取率(15.13%)、总糖含量(93.43%)、铁离子还原能力(1.31 mmol/g),以及多糖中的C=O和C-H含量均高于其他方法;微波辅助提取法提取的山茱萸多糖吸油性(19.00 mL/g)和泡沫稳定性(41.67%)均高于其他方法;复合酶提取法提取的山茱萸多糖体外胆固醇吸附能力(621.80 mg/g)最强,且对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的平均清除率(60.06%)明显高于其他方法;而热水提取法提取的山茱萸多糖质量浓度为0.2 mg/mL时,其对2,2-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除率(61.20%)明显高于其他方法;超声辅助提取法提取的山茱萸多糖起泡性(17.00%)显著高于其他方法(P<0.05)。傅里叶变换红外光谱显示,不同方法提取的山茱萸多糖中官能团含量不同;扫描电镜分析结果显示,热水提取法和微波辅助提取法提取的山茱萸多糖表面光滑平整,结构排列紧密,超声波辅助提取法和复合酶提取法提取的山茱萸多糖分子间排斥力强;X射线衍射分析结果显示,碱提取法提取的山茱萸多糖在32°和45°时有明显且强烈的吸收峰,而热水提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法、酸提取法和复合酶提取法提取到的山茱萸多糖有相似结构;热稳定分析中,碱提取法提取的山茱萸多糖热稳定性高于其他方法,在800℃时质量损失率为50.92%。【结论】不同方法提取的山茱萸多糖结构、抗氧化活性和理化性质各不相同,但不同方法对其热力学特征影响较小,呈相似的变化趋势。可根据不同方法提取的山茱萸多糖特点进行开发利用。

关键词：山茱萸多糖提取方法品质特征

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RGMb通过BMP信号通路促进子宫内膜腺细胞的增殖

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第2期36卷 182-189页

作者：薛洋邝美倩张毛朵李曼曼茆达干南京农业大学动物科技学院动物遗传育种与繁殖系南京210095 南京农业大学动物科学类国家级实验教学示范中心南京210095

RGMb蛋白是反义导向分子(repulsive guidance molecule,RGM)家族成员之一,可在细胞水平上介导骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)的信号通路。大量研究报道,RGMb参与调控细胞的增殖、分化、凋亡以及细胞间的黏附能力。本... 详细信息

RGMb蛋白是反义导向分子(repulsive guidance molecule,RGM)家族成员之一,可在细胞水平上介导骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)的信号通路。大量研究报道,RGMb参与调控细胞的增殖、分化、凋亡以及细胞间的黏附能力。本研究旨在探讨RGMb对子宫内膜腺细胞的作用及其分子机制。应用siRNA与过表达技术处理子宫内膜腺细胞系(Ishikawa),采用qPCR与Western印迹技术确定其转染效率,以及BMP相关信号通路(MAPK与Smad)成员的表达。结果显示:下调RGMb基因的表达显著降低了p-ERK1/2(1.861±0.1864 vs 0.885±0.0869,P=0.0090)与p-Smad1/5/8(1.624±0.1238 vs 1.093±0.0890,P=0.0253)的表达水平。过表达RGMb基因显著升高了p-ERK1/2(1.237±0.1114 vs 2.089±0.1658,P=0.0130)与p-Smad1/5/8(1.139±0.0562 vs 1.98±0.1449,P=0.0056)的表达水平。而RGMb基因下调和过表达对p-P38 MAPK蛋白表达水平均无显著影响(P>0.05)。采用CCK-8和qPCR技术检测RGMb对Ishikawa细胞增殖活力及增殖相关基因的影响。结果显示:转染80 nmol/L RGMb siRNA显著降低Ishikawa细胞的增殖活力(0.479±0.0271 vs 0.3487±0.0094,P=0.0104),同时降低增殖相关基因CCND1(1±0.0366 vs 0.6719±0.0236,P=0.0017)和CDK2(1±0.0370 vs 0.853±0.0135,P=0.0202)表达水平;转染1μg/mL RGMb基因过表达质粒显著提高Ishikawa细胞增殖活力(0.283±0.0030 vs 0.3714±0.0140,P=0.0001),同时增加CCND1(1±0.0178 vs 1.375±0.0356,P=0.0007)和CDK2(1±0.0188 vs 1.376±0.0513,P=0.0023)基因的表达水平。以上结果表明,RGMb可能通过p-ERK1/2与p-Smad1/5/8影响Ishikawa细胞增殖活力,为进一步研究RGMb调控子宫机能的分子机制提供科学依据。

关键词：反义导向分子b 子宫内膜腺细胞细胞增殖 ERK1/2 Smad

绿茶渣对赤水乌骨鸡蛋壳厚度及SLC26A9基因表达的影响

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当代畜牧 2024年第3期 33-37页

作者：罗韦李辉孔翠莲叶涛肖涛威宁彝族回族苗族自治县动物疫病预防控制中心贵州威宁553100 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 织金县农业农村局贵州织金552100 安顺市畜牧技术推广站贵州安顺561000

为了探究绿茶渣对蛋壳厚度相关基因的影响,笔者选取300日龄的赤水乌骨鸡母鸡360只,随机分成4个组,即对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组,每组90只,分别饲喂添加0.00%、0.80%、1.60%和2.40%绿茶渣的饲粮。饲养试验结束后,利用实时荧... 详细信息

为了探究绿茶渣对蛋壳厚度相关基因的影响,笔者选取300日龄的赤水乌骨鸡母鸡360只,随机分成4个组,即对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组,每组90只,分别饲喂添加0.00%、0.80%、1.60%和2.40%绿茶渣的饲粮。饲养试验结束后,利用实时荧光定量PCR技术检测赤水乌骨鸡卵壳腺和肝脏中溶质载体26A家族成员9(Solute carrier family 26 member9,SLC26A9)基因的表达量。结果显示,添加1.60%绿茶渣时卵壳腺中SLC26A9基因的表达量显著降低(P<0.05);添加0.80%和2.40%绿茶渣时SLC26A9基因在肝脏中的表达量显著升高(P<0.05);添加不同比例的绿茶渣均使得蛋壳厚度显著降低(P<0.05)。推测绿茶渣可能是通过影响SLC26A9基因的表达,从而导致蛋壳厚度变薄。该结果可为赤水乌骨鸡蛋壳品质的研究提供理论参考。

关键词：赤水乌骨鸡绿茶渣蛋壳 SLC26A9基因

稳定表达猪SARM1的MARC-145细胞系的建立

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农业生物技术学报 2015年第4期23卷 538-545页

作者：周翔纪立凯李振红王鹏刘榜华中农业大学动物科技学院/农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室

猪(Sus scrofa)SARM1基因是重要的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)候选基因,建立稳定表达SARM1的猴胚胎肾上皮细胞系(MARC-145)是进行SARM1功能研究的基础。本研究成功构建p EGFP-N1-p SARM1真核表达载体,并在MARC-145细胞中瞬时转染,结果显示,猪SARM1-GFP融合蛋白定位于MARC-145细胞的线粒体。使用浓度为800μg/m L的G418对转染p EGFP-N1-p SARM1的细胞进行加压筛选6 d,并进一步使用单克隆法筛选出稳转细胞系,结果显示,稳转细胞系形态正常,绿色荧光稳定表达。RT-PCR和Western blot检测结果均显示SARM1基因在稳转细胞系中稳定表达。应用q RT-PCR方法在PRRSV感稳转细胞系12 h后可以检测到PRRSV开放阅读框7(open reading frame 7,ORF7)在稳转细胞系中表达,并且稳转细胞系中ORF7的表达量在感染后12、24和48 h极显著低于普通MARC-145细胞中的表达量(P系中复制能力较低。本研究为进一步开展猪SARM1在PRRSV感染过程中的功能研究提供了基本材料。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 猴胚胎肾上皮细胞系 SARM1 线粒体稳定转染