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禽腺病毒4型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

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畜牧与兽医 2024年第6期56卷 101-109页

作者：刘文健王帅雯吉梅刘萌汤智辉张硕宋素泉闫丽萍南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中海生物制药(泰州)有限公司江苏泰州225316

旨在制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber-2蛋白的单克隆抗体并建立Fiber-2蛋白的定量检测方法。本研究将原核表达的Fiber-2蛋白免疫BALB/c雌鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并通过免疫印迹、间接免疫荧光和抗体相加试验筛选杂交瘤细胞株... 详细信息

旨在制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber-2蛋白的单克隆抗体并建立Fiber-2蛋白的定量检测方法。本研究将原核表达的Fiber-2蛋白免疫BALB/c雌鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并通过免疫印迹、间接免疫荧光和抗体相加试验筛选杂交瘤细胞株;以制备的单克隆抗体为捕获抗体和酶标检测抗体,通过优化捕获抗体包被浓度和酶标抗体稀释度等条件,建立特异性检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法。结果:本研究成功筛选到3株能够稳定传代的杂交瘤细胞株1H2、2A9和3E1,其分泌的抗体均与FAdV-4全病毒具有良好的反应性,可识别不同抗原表位;进一步发现,以1H2为捕获抗体、2A9为酶标检测抗体,能够建立检测Fiber-2蛋白的ELISA方法;该方法具有良好的重复性,批内重复及批间重复试验变异系数均小于10%;敏感性高,Fiber-2蛋白检测限为0.078 ng/μL;特异性好,不与FAdV-4的其他结构蛋白及鸭腺病毒3型的Fiber-2蛋白发生反应。综上,本研究成功制备了3株Fiber-2蛋白单克隆抗体,并建立了定量检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法,为后续FAdV-4基础研究和Fiber-2亚单位疫苗研究奠定了物质基础。

关键词：禽腺病毒血清4型单克隆抗体双抗体夹心ELISA

饲料中添加串叶松香草对团头鲂幼鱼生长性能、抗氧化能力和脂肪代谢的影响

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水产学报 2024年第4期48卷 323-336页

作者：胡颂钦林艳史秀兰迟长虹严盈缪凌鸿董在杰南京农业大学无锡渔业学院中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室

为探讨饲料中添加串叶松香草对团头鲂幼鱼生长性能、抗氧化能力和脂代谢的影响，实验选取240尾初始体重为（3.85±0.50） g的团头鲂幼鱼，随机分为4组，每组3个重复，每重复20尾鱼。各组分别投喂串叶松香草添加水平为0%（对照组）、2%... 详细信息

为探讨饲料中添加串叶松香草对团头鲂幼鱼生长性能、抗氧化能力和脂代谢的影响，实验选取240尾初始体重为（3.85±0.50） g的团头鲂幼鱼，随机分为4组，每组3个重复，每重复20尾鱼。各组分别投喂串叶松香草添加水平为0%（对照组）、2%、4%和6%的实验饲料，饲喂8周后测定鱼体生长性能、肌肉组成、血液生化、肝肠抗氧化和肝脏脂代谢相关基因表达。结果显示，相较于对照组，4%和6%串叶松香草组的增重率、特定生长率显著下降，6%组的终末均重显著降低，饵料系数显著增加。在抗氧化能力方面，2%串叶松香草组鱼体肠道过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）活性显著高于对照组。在脂肪沉积和代谢方面，4%和6%串叶松香草组鱼体肌肉粗脂肪含量显著高于对照组。4%和6%串叶松香草组肠道脂肪酶活性显著低于对照组。6%串叶松香草组血清中的甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）均显著高于对照组。4%和6%串叶松香草组肝脏中脂肪合成基因fas、srebp1c的表达量显著升高。同时，6%串叶松香草组肝脏中脂肪分解基因lpl、cpt1a、pparβ的表达量显著下降。CCl4溶液腹腔注射应激96 h后2%串叶松香草组累积死亡率低于对照组，且应激24 h后鱼体肝脏SOD活性显著高于对照组。研究表明，在饲料中添加2%的串叶松香草对团头鲂幼鱼的生长和饲料利用无不利影响，并且能够提高肠道的抗氧化能力，而当添加量增加至4%和6%时会抑制鱼体生长，并引起团头鲂幼鱼脂肪沉积。本研究结果为串叶松香草在水产动物饲料中的应用提供了参考。

关键词：团头鲂串叶松香草生长性能抗氧化能力脂代谢

猪肺炎支原体乳酸脱氢酶在诱导猪支气管上皮细胞凋亡中的作用

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 2195-2205页

作者：王吉英尹蕊如谢星王海燕刘胡栋胡辉熊祺琰冯志新邵国青于岩飞湖南农业大学动物医学院长沙410125 江苏省农业科学院兽医研究所南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225327 怀化职业技术学院动物科技学院怀化418099 南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所南京210014 湖南医药学院医学人文与信息管理学院怀化418000

猪肺炎支原体感染会引起宿主上皮细胞的损伤及凋亡。上皮屏障的破坏往往导致细菌和病毒的继发感染,给养猪业造成严重的经济损失,但具体的致病机制及毒力因子尚未完全阐明。前期研究发现猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, L... 详细信息

猪肺炎支原体感染会引起宿主上皮细胞的损伤及凋亡。上皮屏障的破坏往往导致细菌和病毒的继发感染,给养猪业造成严重的经济损失,但具体的致病机制及毒力因子尚未完全阐明。前期研究发现猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)不仅参与猪肺炎支原体的代谢还与猪肺炎支原体的毒力相关。因此,本研究通过原核表达及亲和层析获得猪肺炎支原体乳酸脱氢酶重组蛋白(recombinant LDH, rLDH),之后分别用不同浓度的rLDH与猪支气管上皮细胞(porcine bronchial epithelial cell, PBEC)孵育,经显微镜观察rLDH对细胞形态的影响,通过CCK-8法检测rLDH对细胞活力的影响。选取对细胞形态及活力影响不显著的50和100μg·mL^(-1) rLDH分别与PBEC孵育,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,反转录荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法和免疫印记检测凋亡相关基因caspase 3、caspase 8、caspase 9、Bax、BCL-2的转录水平和蛋白水平。结果显示:猪肺炎支原体rLDH呈剂量依赖性地诱导PBEC凋亡,其作用与猪肺炎支原体菌株一致。用rLDH及Mhp 168孵育后,PBEC的促凋亡因子Bax、caspase 3和caspase 9的mRNA水平显著上调,凋亡抑制因子BCL-2的mRNA水平显著下调,caspase 8的mRNA水平未发生显著变化。促凋亡因子Bax、caspase 3的蛋白表达水平显著上调,凋亡抑制因子BCL-2的蛋白表达水平显著下调。结果表明,猪肺炎支原体可能通过LDH诱导PBEC内源性细胞凋亡,凋亡相关因子caspase 3、caspase 9、Bax和BCL-2在其中发挥重要作用。

关键词：猪肺炎支原体(Mhp) 乳酸脱氢酶(LDH) 猪支气管上皮细胞(PBEC) 凋亡

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饲养密度对肉鸭生长性能和保健生理功能的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：屠民航蔡根谭闫乐艳韩国峰施振旦马龙飞陈顺王恬陈哲王超南京农业大学动物科技学院江苏省农业科学院畜牧研究所/农业农村部种养结合重点实验室江苏省农业科学院农业设施与装备研究所/农业农村部长江中下游设施农业工程重点实验室

[目的]本试验旨在研究不同饲养密度对肉鸭生长性能、免疫力、肠屏障和抗氧化能力的影响。[方法]试验选取1日龄雄性樱桃谷鸭200只，随机分为4个不同饲养密度的试验组，分别为SD1(11只·m-2)、SD2(12只·m-2)、SD3(13只·m-2)、SD4(14只·... 详细信息

[目的]本试验旨在研究不同饲养密度对肉鸭生长性能、免疫力、肠屏障和抗氧化能力的影响。[方法]试验选取1日龄雄性樱桃谷鸭200只，随机分为4个不同饲养密度的试验组，分别为SD1(11只·m-2)、SD2(12只·m-2)、SD3(13只·m-2)、SD4(14只·m-2)，每组3个重复，试验期为42 d。[结果] 肉鸭42 d体重和1 ～ 42 d平均日增重在SD1与SD2组间无显著差异（P > 0.05），与SD1、SD2组相比，SD3、SD4组平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和最终体重显著降低（P 0.05）。与SD1、SD2组相比，SD4组血清中D-乳酸（D-LA）、脂多糖（LPS）含量和二胺氧化酶（DAO）活性显著升高（P 免疫球蛋白A（SlgA）mRNA的表达量显著下降（P 免疫及抗氧化功能，这可能与高密度可抑制Nrf2信号通路及激活NF-κB信号通路密切相关。在本试验条件下，肉鸭饲养密度为11 ～ 12只·m-2较适。

关键词：饲养密度肉鸭生长性能抗氧化肠道功能

PRRSV Nsp4突变毒株对β2M分子表达的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：康磊刘珂王建忠尹才邱亚峰魏建超李蓓蓓邵东华李宗杰粟硕马志永南京农业大学动物医学院免疫学研究所教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室江苏省动物免疫学工程实验室中国农业科学院上海兽医研究所苏州市相城区农业技术综合服务中心宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心

[目的]本次试验探究PRRSV＿Nsp4基因是否在抑制β2M分子表达方面发挥关键性作用，为进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制打下了基础。[方法]本次试验首先建立了PRRSV的反向遗传平台，并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。随后根据之... 详细信息

[目的]本次试验探究PRRSV＿Nsp4基因是否在抑制β2M分子表达方面发挥关键性作用，为进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制打下了基础。[方法]本次试验首先建立了PRRSV的反向遗传平台，并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。随后根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测，在其Domain II和Domain III区域分别筛选了3个和5个不同的氨基酸位点，并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变，随后将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒。最后将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞，并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV＿Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M分子表达方面发挥的作用。[结果]只有D2-5重组PRRSV毒株在不影响病毒复制能力的同时能够高效的在Marc-145和PAM细胞上促进β2M分子的表达，而野生毒株SH2020表现出了对β2M分子表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M分子表达方面发挥重要作用，并且Nsp4＿A80L突变能够显著促进β2M分子的表达。

关键词： Nsp4 β2M 反向遗传平台突变毒株

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一种实验室去除噬菌体制剂内毒素方法的建立

病毒学报 2024年第4期40卷 823-829页

作者：袁文源林焱朱伟云国家动物消化道营养国际联合研究中心江苏省消化道营养与动物健康重点实验室南京农业大学消化道微生物研究室南京210095

内毒素是革兰氏阴性菌被噬菌体裂解时释放的外膜脂多糖,是噬菌体制剂中的主要污染物,可能引发机体严重免疫反应。因此,去除内毒素对于噬菌体应用非常重要。在本文中,我们采用了透析法、超滤法及两者结合的方法分别去除噬菌体制剂中的内... 详细信息

内毒素是革兰氏阴性菌被噬菌体裂解时释放的外膜脂多糖,是噬菌体制剂中的主要污染物,可能引发机体严重免疫反应。因此,去除内毒素对于噬菌体应用非常重要。在本文中,我们采用了透析法、超滤法及两者结合的方法分别去除噬菌体制剂中的内毒素,并检测不同方法处理后噬菌体制剂中内毒素浓度及噬菌体滴度。结果显示,三种方法均能有效去除噬菌体制剂中的内毒素,其中透析法48h去除内毒素的效果最优,去除率达到99.9%以上。此外,超滤法得到的噬菌体回收率显著低于透析法,且每噬菌斑形成单位内毒素含量更高。超滤和透析结合的方法能在牺牲部分回收率的情况下节省时间,且内毒素去除率也能达到99%以上。综上,本文建立了一种通过透析去除噬菌体制剂内毒素的方法,与传统超滤法相比,具有操作简便、成本低、回收率高的优点,可以作为实验室去除噬菌体制剂内毒素的可行方法。

关键词：噬菌体内毒素透析超滤

唾液乳杆菌CICC23174株全基因组测序及功能分析

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中国兽医学报 2024年第2期44卷 290-297页

作者：王丽屏邓玲聪王大红王茂鹏尹革芬云南农业大学动物医学院云南昆明650201 南京农业大学动物医学院江苏南京210000 温州大学病毒学研究所温州市病毒学与免疫学重点实验室浙江温州325035 广东省养猪与猪病防控技术研究企业重点实验室广东广州511400

为探究唾液乳杆菌CICC23174株的生物学特性和基因功能,本研究以从鸡肠道分离得到的唾液乳杆菌CICC23174株为研究对象,通过使用二代测序平台HiSeq2000进行测序,利用多种生物学信息软件对原始数据进行组装和优化,并对其基因信息进行功能... 详细信息

为探究唾液乳杆菌CICC23174株的生物学特性和基因功能,本研究以从鸡肠道分离得到的唾液乳杆菌CICC23174株为研究对象,通过使用二代测序平台HiSeq2000进行测序,利用多种生物学信息软件对原始数据进行组装和优化,并对其基因信息进行功能注释、细菌素和信号肽预测、基因共线性比较和分子进化树分析。基因预测结果表明,唾液乳杆菌CICC23174株基因组大小为203542 bp,GC含量约为32.84%,基因组特征显示其编码基因1890个,含有3个细菌素和50个信号肽。重要的是,唾液乳杆菌CICC23174株含有27个特有基因,构成4个系统分别为Ⅰ型-CRISPR-Cas基因防御系统、Ⅱ型毒素-抗毒素系统、肿瘤抑制基因和蛋白分泌途径。而且基因共线性分析发现CICC23174株与模式菌株UCC118唾液乳杆菌最为相似,但是16S rRNA分子进化树结果表明CICC23174株与唾液乳杆菌FZJTZ9M6株遗传距离较近。本研究结果为丰富唾液乳杆菌的物种进化库,挖掘唾液乳杆菌潜在的益生功能奠定了基础。

关键词：唾液乳杆菌CICC23174株基因组学生物信息学功能注释细菌素基因共线性分析

唾液乳杆菌CICC23174全基因组测序及功能分析

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中国兽医学报 2024年第8期44卷 1659-1666页

作者：王丽屏邓玲聪王大红王茂鹏尹革芬云南农业大学动物医学院云南昆明650201 南京农业大学动物医学院江苏南京210000 广东省养猪与猪病防控技术研究企业重点实验室广东广州511400 温州大学病毒学研究所温州市病毒学与免疫学重点实验室浙江温州325035

为探究唾液乳杆菌CICC23174的生物学特性和基因功能,本研究以从鸡肠道分离得到的唾液乳杆菌CICC23174为研究对象,通过使用二代测序平台HiSeq2000进行测序,利用多种生物学信息软件对原始数据进行组装和优化,并对其基因信息进行功能注释... 详细信息

为探究唾液乳杆菌CICC23174的生物学特性和基因功能,本研究以从鸡肠道分离得到的唾液乳杆菌CICC23174为研究对象,通过使用二代测序平台HiSeq2000进行测序,利用多种生物学信息软件对原始数据进行组装和优化,并对其基因信息进行功能注释、细菌素和信号肽预测、基因共线性比较和分子进化树分析。基因预测结果表明,唾液乳杆菌CICC23174基因组大小为203542 bp,GC含量约为32.84%,基因组特征显示其编码基因1890个,含有3个细菌素和50个信号肽。重要的是,唾液乳杆菌CICC23174菌株含有27个特有基因,构成4个系统分别为Ⅰ型-CRISPR-Cas基因防御系统、Ⅱ型毒素-抗毒素系统、抑制肿瘤逃逸基因和蛋白分泌途径。而且基因共线性分析发现CICC23174菌株与模式菌株UCC118唾液乳杆菌最为相似,但是16S rRNA分子进化树结果表明CICC23174菌株与唾液乳杆菌FZJTZ9M6遗传距离较近。本研究结果为丰富唾液乳杆菌的物种进化库,挖掘唾液乳杆菌潜在益生功能奠定了基础。

关键词：唾液乳杆菌基因组学生物信息学功能注释细菌素基因共线性分析

动物针灸治疗机制研究的新进展——基于“远细胞是潜在经络实质细胞”的新观点

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畜牧与兽医 2024年第7期56卷 124-128页

作者：陈栋龚冠闻陈秋生南京中医药大学附属医院/江苏省中医院江苏南京210029 南京农业大学江苏南京210095

经络学说是针灸治疗的理论基础,而针灸疗效又是经络学说的实践验证。关于经络实质与针灸机制的研究,大多都是建立在现有已知结构(如神经、血管、筋膜、肥大细胞、免疫等)的基础之上,取得的突破有限。新近提出的“远细胞是潜在经络实质... 详细信息

经络学说是针灸治疗的理论基础,而针灸疗效又是经络学说的实践验证。关于经络实质与针灸机制的研究,大多都是建立在现有已知结构(如神经、血管、筋膜、肥大细胞、免疫等)的基础之上,取得的突破有限。新近提出的“远细胞是潜在经络实质细胞”观点为经络结构的探寻提供了一个新角度,但需要针灸治疗的验证。本文就针刺激活远细胞联络通讯、远细胞介导针灸治疗、穴位TC广泛联系性与中医“整体观”关联以及远细胞与针刺“得气”和循经感传关系的研究现状进行了综述和分析。针刺动作必然引起远细胞的联动机制,有利于针体-细胞的衔接,并可转变为生物信号而启动下游传递,从而调节靶脏器功能,达到治疗目的。这些研究进展,能够从新角度诠释针灸的细胞机制,并能用疗效验证“远细胞是潜在经络实质细胞”观点。

关键词：动物针灸细胞机制经络实质远细胞

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