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一种新型家蚕核多角体病毒Bac to Bac系统的构建

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微生物学报 2000年第2期40卷 155-160页

作者：邓小昭朱应刁振宇齐义鹏周宗安南京军区军事医学研究所分子生物学实验室南京210002 武汉大学病毒研究所武汉430073

用家蚕核型多角体病毒的全基因组DNA与AcBacmidDNA共转染家蚕BmN细胞,构建转座一穿梭载体BmBacmid。另一供体质粒以转座方式将乙肝病毒e抗原基因HBeAg整合到BmBacmid的attTn7位点上成为重组rBmHBe。结果表明BmBacmid既能在大肠杆菌中以... 详细信息

用家蚕核型多角体病毒的全基因组DNA与AcBacmidDNA共转染家蚕BmN细胞,构建转座一穿梭载体BmBacmid。另一供体质粒以转座方式将乙肝病毒e抗原基因HBeAg整合到BmBacmid的attTn7位点上成为重组rBmHBe。结果表明BmBacmid既能在大肠杆菌中以质粒的形式复制,又能在家蚕BmN细胞和草地夜蛾Sf9细胞中复制,形成感染性病毒粒子。Southernblotting证实重组病毒的构建是正确的。BmN细胞能正确识别与切割HBeAg信号肽序列,SDSPAGE表明HBeAg基因在家蚕细胞中高效表达,ELISA测定培养上清中HBeAg效价达1∶32000,细胞内HBeAg效价为1∶2000,培养液及细胞内的HBcAg含量极低(〈1∶160)。

关键词： BmNPV Bac to Bac策略表达系统 HBcAg

家蚕BmN细胞的微载体培养及HBeAg的高效表达

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中国病毒学 1998年第3期13卷 237-242页

作者：邓小昭刁振宇朱应何亮乔仁良周宗安张林元南京军区后勤部军事医学研究所分子生物学研究室

选择微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３对家蚕ＢｍＮ（从ＳｉｌｋｗｏｒｍＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉ获得的细胞系）细胞进行高密度培养，并获得成功。观察了家蚕ＢｍＮ细胞在微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３上的贴壁分布，研究了不同接种浓度与微载体浓度时细... 详细信息

选择微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３对家蚕ＢｍＮ（从ＳｉｌｋｗｏｒｍＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉ获得的细胞系）细胞进行高密度培养，并获得成功。观察了家蚕ＢｍＮ细胞在微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３上的贴壁分布，研究了不同接种浓度与微载体浓度时细胞的生长情况，并筛选出最佳的技术参数。在１０００ｍＬ滚瓶中用微载体Ｇｙｔｏｄｅｘ３培养家蚕细胞，在合适的培养条件下（细胞接种浓度３．６×１０５细胞／ｍＬ、微载体浓度５ｇ／Ｌ），５ｄ后，细胞的终密度达到２．８×１０６细胞／ｍＬ，细胞增长指数为７．９。在细胞指数生长期（传代后４８～６０ｈ）用载有ＨＢｅＡｇ基因的重组病毒（ｒＢｍＨＢｅ）接种（感染量为０．４ＰＦＵ／细胞），５ｄ后，培养上清中ＨＢｅＡｇ滴度为１∶９．６×１０４，是用方瓶静止培养的家蚕细胞表达量的３倍。

关键词：微载体昆虫细胞培养乙肝病毒E抗原基因表达

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化学裂解法检测nd HPFH突变

生物化学与生物物理进展 1999年第3期26卷 276-280页

作者：刘建伟徐湘民第一军医大学分子生物学研究所广州军区后勤部军事医学研究所

为进行中国人遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症（ＨＰＦＨ）的分子病理学研究，以四种已知非缺失型ＨＰＦＨ突变样品为研究材料，建立了针对二种γ珠蛋白基因（Ｇγ和Ａγ）的点突变筛查技术———化学裂解法（ＣＣＭ）．

关键词：化学裂解法点突变检测 γ-珠蛋白基因 HPFH

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乙肝病毒e抗原基因在大肠杆茵中高表达

中国药科大学学报 1992年第5期23卷 290-293页

作者：邓小昭张林元何亮张志敏南京军区军事医学研究所分子遗传室南京210002

取pZD 8703质粒DNA(本室构建的高表达乙肝核心抗原基因质粒)用Ava Ⅰ酶切开,Bal 31酶消化,加四种核甘酸dNTP、DNA聚合酶大片段酶补平后,用T_4 DNA连接酶连接,再用EcoRI酶消化,回收EcoRI小片段连接到pJLA 503的EcoRI位点,转化受体菌JM103... 详细信息

取pZD 8703质粒DNA(本室构建的高表达乙肝核心抗原基因质粒)用Ava Ⅰ酶切开,Bal 31酶消化,加四种核甘酸dNTP、DNA聚合酶大片段酶补平后,用T_4 DNA连接酶连接,再用EcoRI酶消化,回收EcoRI小片段连接到pJLA 503的EcoRI位点,转化受体菌JM103,获得在P_RP_L启动子控制下,由温度调节CIts 857开启和关闭的高表达乙肝e抗原(HBeAg)的重组体。用抗HBe-β)单克隆酶标抗体配套的ELISA双抗体夹心法测定经超声波处理的细菌原液,HBeAg的终效价在1:10240以上,只含少量HBeAg。可以代替血清HBeAg用作配套检测试剂。

关键词：基因基因表达乙型肝炎病毒 E抗原

细胞性一氧化氮供体的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第3期18卷 197-201页

作者：朱敏生沈月许祥裕朱有华施凤霞南京军区军事医学研究所

目的一氧化氮（ＮＯ）供体细胞系的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应研究。方法采用３Ｈ－胍氨酸转换法进行ＮＯ合成酶（ＮＯＳ）活性测定；亚硝酸盐检测；ＤＮＡ片段的提取及凝胶电泳分析；凋亡细胞的ＤＡＰＩ染色观察；Ｗｅｓｔｅｒ... 详细信息

目的一氧化氮（ＮＯ）供体细胞系的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应研究。方法采用３Ｈ－胍氨酸转换法进行ＮＯ合成酶（ＮＯＳ）活性测定；亚硝酸盐检测；ＤＮＡ片段的提取及凝胶电泳分析；凋亡细胞的ＤＡＰＩ染色观察；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析。结果将ｉＮＯＳ真核表达质粒、ｐＣＭＶ／ｉＮＯＳ转染至Ｓｐ２／０骨髓瘤的变异株中，并获得能稳定表达ｉＮＯＳ和合成ＮＯ的重组细胞系（ＳＰｍｔ／ｉＮＯＳ），表达ｉＮＯＳ的效率为每升培养物含４００μｇ蛋白。利用该细胞作ＮＯ细胞性供体，成功地证实ＮＯ能诱导Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞发生凋亡。结论所建细胞性ＮＯ供体应用于ＮＯ的生物学功能研究具有ＮＯ合成稳定；更能模拟体内细胞间ＮＯ的信息传递过程；不需任何外源刺激即可合成ＮＯ等独特优点。所建ＮＯ供体细胞可以用于肿瘤细胞凋亡的研究。

关键词：骨髓肿瘤细胞凋亡一氧化氮供体

双吡啶单肟HI-6药代动力学的动物种间相关性

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中国药理学与毒理学杂志 1989年第4期3卷 277-282页

作者：朱东亚丁树标施凤霞许祥裕南京军区军事医学研究所南京210002

给5种哺乳动物iv双吡啶单肟HI—6 20mg/kg,其药物代谢动力学均呈二室开放模型,部分药动学参数可表示为体重的指数函数。将5种动物的采血时间转换为生理等价时间,建立了预测人血浆中HI—6浓度的经验函数式。经人体资料验证,预测值与实测... 详细信息

给5种哺乳动物iv双吡啶单肟HI—6 20mg/kg,其药物代谢动力学均呈二室开放模型,部分药动学参数可表示为体重的指数函数。将5种动物的采血时间转换为生理等价时间,建立了预测人血浆中HI—6浓度的经验函数式。经人体资料验证,预测值与实测值基本一致。

关键词：双吡啶单肟 HI-6 药代动力学

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用新法制备K88ac基因探针

微生物学报 1989年第1期29卷 72-74页

作者：张林元邓小昭南京军区军事医学研究所

由于遗传工程技术的发展,基因探针被广泛应用。探针的DNA大都来自于大肠杆菌的重组质粒,这样制备的探针易污染该菌的染色体和载体DNA,作菌落杂交时易出现假阳性。为了克服这些缺点,用枯草杆菌质粒作载体克隆K88ac基因的EcoRI小片段。以... 详细信息

由于遗传工程技术的发展,基因探针被广泛应用。探针的DNA大都来自于大肠杆菌的重组质粒,这样制备的探针易污染该菌的染色体和载体DNA,作菌落杂交时易出现假阳性。为了克服这些缺点,用枯草杆菌质粒作载体克隆K88ac基因的EcoRI小片段。以枯草杆菌重组质粒作探针,与含K88ac基因的菌株杂交呈阳性,而不含K88ac基因的菌株呈阴性,且阴阳性有明显区别。

关键词： K88ac基因基因探针新法制备

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华东地区三种类型恙虫病自然疫源地调查

中华流行病学杂志 2000年第1期21卷 34-36页

作者：吴光华郭恒彬于明明南京军区军事医学研究所流行病学研究室 210002

目的　为查明恙虫病的自然疫源地类型给预防工作提供依据,在福建、浙江、江苏三省进行了系列调查。方法　①在三省选择有代表性的调查点;②收集地理景观及疫情资料;③现场调查及实验研究:主要是鼠类、恙螨与疾病的关系。结果　研究证明... 详细信息

目的　为查明恙虫病的自然疫源地类型给预防工作提供依据,在福建、浙江、江苏三省进行了系列调查。方法　①在三省选择有代表性的调查点;②收集地理景观及疫情资料;③现场调查及实验研究:主要是鼠类、恙螨与疾病的关系。结果　研究证明恙虫病在三省存在具有代表性的三型自然疫源地:①沿海岛屿型疫源地主要分布于福建。主要储存宿主为黄毛鼠;主要媒介恙螨为地里纤恙螨;流行季节在夏季;恙虫病立克次体(Rt)分型:Gilliam型。②内陆山林型疫源地分布于浙江。主要储存宿主为社鼠;主要媒介恙螨为高湖纤恙螨;流行季节在夏季;Rt分型:Gilliam型。③内陆平原丘陵型疫源地分布于江苏。主要储存宿主为黑线姬鼠、褐家鼠、社鼠、大麝;主要媒介恙螨为小盾纤恙螨;流行季节在秋冬季;Rt分型:Kawasaki型。结论　福建、浙江、江苏三省恙虫病的病原体型别、储存宿主、媒介恙螨与流行特征均有所不同。

关键词：恙虫病自然疫源地调查预防

江苏地区秋冬型恙虫病传播媒介小盾纤恙螨的研究

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中华医学杂志 1994年第2期74卷 94-96页

作者：吴光华郭恒彬于明明刘玉徐毛华沈建忠鲍明荣南京军区军事医学研究所

江苏省于１９８６年发现有秋冬型恙虫病流行。为查明该病的媒介，作者于１９８６～１９９２年进行了系列调查，结果：根据小盾纤恙螨［Ｌｅｐｔｏｔｒｏｍｂｉｄｉｕｍ（Ｌ）ｓｃｕｔｅｌｌａｒｅ］为恙虫病疫区鼠体的优势螨种；季节消... 详细信息

江苏省于１９８６年发现有秋冬型恙虫病流行。为查明该病的媒介，作者于１９８６～１９９２年进行了系列调查，结果：根据小盾纤恙螨［Ｌｅｐｔｏｔｒｏｍｂｉｄｉｕｍ（Ｌ）ｓｃｕｔｅｌｌａｒｅ］为恙虫病疫区鼠体的优势螨种；季节消长与居民恙虫病季节分布们一致；能自然感染、叮刺传播和经卵传递恙虫病立克队体［Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ，Ｒｔ］；被恙螨叮刺或悬液接种的小白鼠血请中能检测到特异性抗体，血清学分型属Ｇｉｌｌｉａｍ型，以上结果证明小盾纤恋螨为秋冬型恙虫病的传播媒介。

关键词：恙虫病流行病学小盾纤恙螨江苏