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潜阳育阴颗粒调控NR3C2/ROS/ERK通路抑制醛固酮诱导足细胞损伤的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：李茵袁方许骏尧宁澄王艺璇钱丽超李海涛李婕南京中医药大学附属南京中医院南京中医药大学药学院南京中医药大学附属医院

目的：探讨潜阳育阴颗粒对醛固酮干预的小鼠足细胞的保护机制。方法：将30只C57BL/6J小鼠随机分为5组：正常组、模型组、潜阳育阴颗粒低、高剂量组、螺内酯组，每组6只；除正常组外其余小鼠均植入微型渗透泵持续注入醛固酮(300 μg·kg-... 详细信息

目的：探讨潜阳育阴颗粒对醛固酮干预的小鼠足细胞的保护机制。方法：将30只C57BL/6J小鼠随机分为5组：正常组、模型组、潜阳育阴颗粒低、高剂量组、螺内酯组，每组6只；除正常组外其余小鼠均植入微型渗透泵持续注入醛固酮(300 μg·kg-1·d-1)，诱导小鼠肾损伤，造模后给药组分别给予潜阳育阴颗粒低剂量、高剂量(2.6、5.2 mg·kg-1·d-1)，螺内酯(18 mg·kg-1·d-1)连续干预28 d。苏木素-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色观察小鼠肾脏病理改变；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肾脏组织足细胞裂孔膜结构蛋白Nephrin、足细胞丝结蛋白Desmin、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、切割胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、核受体亚家族3C组成员2(NR3C2)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的表达水平；脱氧核苷酸末端转移介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色观察小鼠肾脏组织的凋亡水平；检测小鼠肾脏组织超氧化物歧化酶(SOD)水平；体外研究分为5组：正常组、模型组(醛固酮质量浓度200 nmol·L-1)、潜阳育阴颗粒低、中、高剂量组(25、50、100 mg·L-1)。细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度潜阳育阴颗粒对醛固酮诱导的足细胞相对活力的影响；Western blot检测足细胞中Nephrin、Desmin、BAX、Bcl-2、cleaved Caspase-3、NR3C2、p-ERK/ERK表达水平；流式细胞术结合异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)检测足细胞的凋亡水平；2，7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)观察足细胞的活性氧(ROS)水平。结果：与正常组比较，模型组小鼠肾脏结构病变、出现纤维化情况，凋亡程度升高(P<0.01)，SOD含量下降(P<0.01)；醛固酮浓度在200 nmol·L-1时足细胞活性显著下降(P<0.05)，模型组足细胞形态病变、细胞间微丝结构排列错乱，凋亡水平升高(P<0.01)，细胞内ROS水平显著升高(P<0.01)，小鼠肾脏组织及足细胞中Nephrin、Bcl-2、p-ERK/ERK蛋白表达明显下降(P<0.05，P<0.01)，Desmin、BAX、cleaved Caspase-3、NR3C2蛋白表达显著上升(P<0.05，P<0.01)；与模型组比较，潜阳育阴颗粒各剂量改善小鼠肾脏结构损伤和纤维化情况，减轻小鼠肾脏凋亡水平(P<0.05，P<0.01)，提高肾脏SOD含量(P<0.05，P<0.001)，改善足细胞活性(P<0.05，P<0.01)，恢复足细胞足突结构，改善足细胞凋亡(P<0.01，P<0.001)，下调足细胞ROS水平(P<0.01)，上调小鼠肾脏组织和足细胞中Nephrin、Bcl-2、p-ERK/ERK蛋白表达(P<0.05，P<0.01)，下调Desmin、BAX、cleaved Caspase-3、NR3C2蛋白表达(P<0.05，P<0.01)。结论：潜阳育阴颗粒通过调节NR3C2/ROS/ERK信号通路改善醛固酮诱导的小鼠足细胞损伤。

关键词：潜阳育阴颗粒足细胞醛固酮肾损害

知母治疗阿尔茨海默病网络药理学研究及实验验证

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浙江大学学报（医学版） 2024年第1期53卷 84-97页

作者：李德雨胡颖超刘欣于顾然南京中医药大学附属医院江苏南京210029

目的:探索知母治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法:通过网络药理学筛选知母治疗AD的活性成分、作用靶点,蛋白质-蛋白质相互作用网络构建及核心靶点分析,并进行基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。提取外周... 详细信息

目的:探索知母治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法:通过网络药理学筛选知母治疗AD的活性成分、作用靶点,蛋白质-蛋白质相互作用网络构建及核心靶点分析,并进行基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。提取外周血淋巴细胞并构建淋巴母细胞样细胞系(LCL),建立LCL-SKNMC体外细胞模型。采用MTT法和细胞计数试剂盒8(CCK-8)法分别检测SKNMC细胞和LCL的活性,7´-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测共培养模型中生成的活性氧,免疫荧光染色检测共培养模型中生成的β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42)),蛋白质印迹法检测共培养模型中相关蛋白的表达。分别观察氧化应激、正常状态及热应激状态下N2线虫的寿命,DCFH-DA探针检测N2线虫生成的活性氧,瘫痪实验研究CL4176线虫的瘫痪时间,硫黄素S染色检测CL4176线虫咽部沉积的Aβ。结果:知母具有15个潜在活性成分及103个药物-疾病靶点,可能通过白蛋白、Akt1、肿瘤坏死因子、表皮生长因子受体、血管内皮生长因子A、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、淀粉样前体蛋白(APP)等相关靶点发挥抗AD作用。知母药理作用主要涉及阿尔茨海默病、内分泌抵抗、胰岛素抵抗等生物过程,以及神经活性配体-受体相互作用、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-Akt信号通路、钙信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、神经营养因子信号通路等通路。体外实验显示,知母可减少LCL-SKNMC中活性氧生成和Aβ_(1-42)的产生(均P<0.01),抑制β-分泌酶1、APP、Aβ_(1-42)蛋白的表达(均P<0.05),上调PI3K、Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平(均P<0.05)。体内研究进一步证实,知母可延长应激状态及正常情况下线虫的寿命,减轻活性氧积累及Aβ沉积毒性。结论:知母可减少AD中Aβ的生成,抑制其诱导的氧化应激作用,这些作用可能是通过调控PI3K/Akt/GSK-3β通路实现的。

关键词：阿尔茨海默病知母淋巴母细胞样细胞系 SKNMC 秀丽隐杆线虫氧化应激

围手术期多维度数字化监测平台在胃癌患者中的应用价值

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中华消化外科杂志 2024年第4期23卷 601-608页

作者：李嘉宇江志伟王刚潘华峰葛苗苗王海锋徐鹏演蔡雨玲南海鸥章程王琼南京中医药大学附属医院普通外科南京210029

目的探讨围手术期多维度数字化监测平台在胃癌患者中的应用价值.方法采用回顾性队列研究方法.收集2022年7月至2024年1月南京中医药大学附属医院收治的50例行腹腔镜胃癌根治术患者的临床资料;男35例,女15例;年龄为(64±12)岁.所有患者... 详细信息

目的探讨围手术期多维度数字化监测平台在胃癌患者中的应用价值.方法采用回顾性队列研究方法.收集2022年7月至2024年1月南京中医药大学附属医院收治的50例行腹腔镜胃癌根治术患者的临床资料;男35例,女15例;年龄为(64±12)岁.所有患者遵循加速康复外科理念,采用以穿戴式监测设备为基础的围手术期多维度数字化监测平台实施围手术期管理措施.观察指标:(1)心率变异性(HRV)监测结果.(2)血糖和血氧监测结果.(3)运动和睡眠监测结果.(4)人体成分监测结果.正态分布的计量资料以(-x)±s表示,偏态分布的计量资料以M(IQR)表示.重复测量数据采用重复测量方差分析,偏态分布的计量资料通过SPSS转换功能转换为正态分布资料后再进行检验.手术前后比较,正态分布的计量资料采用配对样本t检验,偏态分布的计量资料采用非参数Wilcoxon符号秩和检验.结果 (I)HRV监测结果.HRV指标中,从术前至术后第3天,50例患者NN间期标准差从(103±26)ms变化为(101±36)ms,每5min NN间期标准差的平均值从(45±16)ms变化为(33±12)ms,相邻NN间期之差>50 ms的心搏数占NN间期心搏总数的百分比从6.02%(4.96%)变化为5.79%(4.20%),低频功率从 376.78(468.96)ms2 变化为 742.79(525.20)ms2,高频功率从 273.61(273.58)ms2变化为397.48(164.87)ms2,低频功率与高频功率之比从1.6±0.5变化为1.6±0.6,上述指标手术前后比较,差异均有统计学意义(F=34.43,26.15,24.58,5.51,6.11,6.02,P0.05).(3)运动和睡眠监测结果.从术前至术后第3天,50例患者运动步数从3 043(1 224)步变化为1 473(767)步,睡眠时长从(8.2±1.1)h变化为(7.3±0.8)h、睡眠评分从(80± 10)分变化为(78±5)分,上述指标手术前后比较,差异均有统计学意义(F=716.46,29.02,47.32,P0.05).结论围手术期多维度数字化监测平台应用于胃癌患者能精准监测围手术期应激水平和评估术后康复状态,并呈现可视化结果.

关键词：胃肿瘤加速康复外科可穿戴式监测设备数字化监测围手术期管理

重度子痫前期孕妇胎盘组织中Treg细胞及其相关因子的表达意义研究

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中国妇产科临床杂志 2024年第3期25卷 196-199页

作者：刘涛李兰贵州中医药大学第一附属医院重症医学科贵阳550001

目的探讨Treg细胞及其相关因子在重度子痫前期(SPE)孕妇胎盘组织中的表达和意义。方法纳入贵州中医药大学第一附属医院重症医学科2020年1月至2022年1月收治的74例SPE患者(SPE组)和本院同期75例正常足月生产的产妇(对照组)作为研究对象... 详细信息

目的探讨Treg细胞及其相关因子在重度子痫前期(SPE)孕妇胎盘组织中的表达和意义。方法纳入贵州中医药大学第一附属医院重症医学科2020年1月至2022年1月收治的74例SPE患者(SPE组)和本院同期75例正常足月生产的产妇(对照组)作为研究对象。收集研究对象基线资料及实验室检查数据,检测研究对象外周血CD4+CD25+Treg细胞的表达水平,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测外周血Treg细胞转录因子Foxp3 mRNA、转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平,采用蛋白印迹法(Western blot)检测胎盘组织中Foxp3、TGF-β1蛋白表达水平。结果SPE组患者血清CD4+CD25+Treg占比低于对照组;SPE组患者血清IL-10、TGF-β1水平均高于对照组(P<0.05),HLA-G水平低于对照组(P<0.05);SPE组患者血清、胎盘组织中Foxp3 mRNA表达水平低于对照组(P<0.05),血清、胎盘组织中TGF-β1 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05);SPE组胎盘组织中Foxp3蛋白表达量低于对照组,TGF-β蛋白表达量高于对照组;SPE患者外周血TGF-β1水平与胎盘组织TGF-β1蛋白水平呈正相关关系(r=0.645,P<0.05)。结论SPE患者外周血和胎盘组织中Treg细胞相关因子(Foxp3、TGF-β1)的表达均发生改变。

关键词：重度子痫前期胎盘组织 Treg细胞 Foxp3 转化生长因子β

中药调控糖尿病肾脏疾病肾间质纤维化相关信号通路研究进展

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中国实验方剂学杂志 2024年第5期30卷 213-225页

作者：朱玲玲佘云余江毅严倩华南京中医药大学南京210023 南京中医药大学附属医院南京210029

糖尿病肾脏疾病(DKD)是糖尿病(DM)常见的一种微血管并发症,也是造成终末期肾病(ESRD)的主要病因。肾间质纤维化(RIF)是DKD进展到ESRD的主要病理基础,显著增加了DKD患者的死亡率,给患者和社会带来了沉重的负担,是临床上亟待解决的问题。... 详细信息

糖尿病肾脏疾病(DKD)是糖尿病(DM)常见的一种微血管并发症,也是造成终末期肾病(ESRD)的主要病因。肾间质纤维化(RIF)是DKD进展到ESRD的主要病理基础,显著增加了DKD患者的死亡率,给患者和社会带来了沉重的负担,是临床上亟待解决的问题。RIF的发病机制错综复杂,主要与细胞外基质(ECM)过度沉积、上皮细胞-间充质转化(EMT)、氧化应激、炎症反应、细胞自噬等相关。转化生长因子-β1/Smad(TGF-β1/Smad)、核转录因子-κB(NF-κB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、分泌型糖蛋白/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、酪氨酸激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)、神经源性位点缺口同源蛋白(Notch)、核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)等多条信号通路介导了RIF的发生发展,是DKD治疗的新型靶点。由于其发病机制复杂,目前西医治疗以改善代谢的基础治疗为主,疗效欠佳,难以阻止DKD的病情进展,因此寻找新的治疗方法具有重要的临床意义。近年来,诸多研究证明中药可通过调控相关信号通路,从而减轻氧化应激、抑制炎症反应、调控细胞自噬等,达到治疗糖尿病肾脏疾病肾间质纤维化(DKD-RIF)的目的,具有多途径、多靶点、多环节、疗效显著的优势。但目前尚缺乏相关的总结性记载,基于此,笔者查阅了近年来国内外相关文献,综述了上述相关信号通路在DKD-RIF发生发展中的作用及中药调控相关信号通路治疗DKD-RIF的研究进展,以期为进一步的科学研究及临床实践提供新的思路与参考。

关键词：中药糖尿病肾脏疾病(DKD) 肾间质纤维化(RIF) 信号通路研究进展

清心滋肾汤治疗阴虚火旺型绝经综合征的临床疗效及调节KNDy的神经内分泌机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第6期30卷 119-125页

作者：周雨欣张镕晴卢苏许美娟陈赟南京中医药大学第一临床医学院南京210023 南京中医药大学附属医院江苏省中医院南京210029

目的:探究清心滋肾汤对绝经综合征阴虚火旺型患者治疗前后的综合疗效、症状评分、神经内分泌指标的影响及其调节KNDy神经元的作用机制。方法:选取60例于南京中医药大学附属江苏省中医院更年期专病门诊就诊且符合绝经综合征阴虚火旺诊断... 详细信息

目的:探究清心滋肾汤对绝经综合征阴虚火旺型患者治疗前后的综合疗效、症状评分、神经内分泌指标的影响及其调节KNDy神经元的作用机制。方法:选取60例于南京中医药大学附属江苏省中医院更年期专病门诊就诊且符合绝经综合征阴虚火旺诊断的患者,随机分为观察组(清心滋肾汤组)和对照组(芬吗通组)各30例,观察期为12周,比较两组治疗前后综合疗效、潮热汗出次数及程度、改良Kupperman评分、下丘脑神经元活性肽Kisspeptin、神经激肽B(NKB)、强啡肽(Dyn)、卵泡刺激素(FSH)和雌二醇(E2)在血清学水平的变化。结果:①临床综合疗效比较。治疗后,与对照组比较,两组患者综合疗效相当,差异无统计学意义。②潮热、汗出次数及程度比较。与本组治疗前比较,治疗后两组患者潮热、汗出次数及程度均明显降低(P中医药治疗绝经综合征潮热症状提供新思路。

关键词：绝经综合征清心滋肾汤 KNDy神经元作用机制

从“脾为之卫”理论探析巨噬细胞极化在PCOS慢性低度炎症中的作用

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 211-218页

作者：商婷婷庄子荀马桦范冰莹任青玲南京中医药大学附属医院南京210029

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种生殖功能障碍与糖脂代谢异常并存的生殖内分泌紊乱综合征,影响8%~13%的育龄期妇女和3%~11%的青春期女性,其临床特征具有高度异质性,目前治疗主要依赖于症状导向的个体化治疗策略。慢性低度炎症状态是PCOS的... 详细信息

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种生殖功能障碍与糖脂代谢异常并存的生殖内分泌紊乱综合征,影响8%~13%的育龄期妇女和3%~11%的青春期女性,其临床特征具有高度异质性,目前治疗主要依赖于症状导向的个体化治疗策略。慢性低度炎症状态是PCOS的核心发病机制之一。巨噬细胞是先天免疫的基础细胞,在调节全身炎症反应中起着不可或缺的作用,巨噬细胞M1/M2极化失衡可通过激活促炎反应、破坏卵巢组织修复、刺激雄激素过度合成、促进胰岛素抵抗(IR)发生等途径参与PCOS慢性低度炎症过程。重塑巨噬细胞表型可能为PCOS的潜在治疗策略。中医学认为“脾虚痰湿”是导致PCOS发病的重要病机,“脾为之卫”功能在PCOS的发生与发展中起着保障脾主运化、卫外防御等生理功能正常运行的关键作用。巨噬细胞极化失衡与中医学“脾为之卫”向“脾失为卫”转化过程相似。因此该文首次从中医“脾为之卫”理论角度,探析巨噬细胞极化与PCOS慢性低度炎症发病机制的深层联系,为PCOS的治疗和药物研究提供理论依据和新的研究方向。

关键词：多囊卵巢综合征(PCOS) 脾为之卫巨噬细胞极化慢性低度炎症

基于倾向性评分匹配和亚群治疗效果模式图队列研究暴露与结局关联的异质性分析

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中华流行病学杂志 2024年第5期45卷 748-754页

作者：王威于茜胡馨茹王晓骁南京中医药大学附属医院(江苏省中医院)GCP中心南京210029 南京中医药大学附属医院(江苏省中医院)科技处南京210029 南京中医药大学医学院·整合医学学院公共卫生学系南京210046 南京中医药大学附属医院(江苏省中医院)临床研究院南京210029

介绍亚群治疗效果模式图(STEPP)的基本原理、应用场景与主要步骤,梳理将其与倾向性评分匹配(PSM)联合应用在队列研究数据中的理论基础,旨在将STEPP应用到暴露与结局风险关联的异质性分析中。通过模拟案例“不同输液导管类型的肿瘤患者... 详细信息

介绍亚群治疗效果模式图(STEPP)的基本原理、应用场景与主要步骤,梳理将其与倾向性评分匹配(PSM)联合应用在队列研究数据中的理论基础,旨在将STEPP应用到暴露与结局风险关联的异质性分析中。通过模拟案例“不同输液导管类型的肿瘤患者发生静脉血栓栓塞(VTE)风险的队列研究”展示如何将PSM与STEPP在队列研究数据中联合应用,得出亚群中经外周置入中心静脉导管组和中心静脉导管组发生VTE的绝对风险值和相对风险值,以及亚群间的异质性分析结果,并对PSM与STEPP联合应用的局限性和研究前景进行讨论,为实际应用提供参考。

关键词：倾向性评分匹配亚群治疗效果模式图队列研究暴露关联

黄芪-莪术药对通过调控缺氧诱导因子及肿瘤干细胞化抑制结肠癌进展并增强5-FU疗效的机制研究

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中国中药杂志 2024年第4期49卷 1044-1051页

作者：陶靖孙瑞倩顾茹辛孙程尹刚张硕唐德才谭喜莹南京中医药大学附属医院药学部江苏南京210029 中国药科大学江苏南京210009 南京中医药大学江苏南京210023 南京大学附属鼓楼医院江苏南京210008 南京中医药大学附属南通中医院江苏南通226007

该研究基于动物和细胞模型研究黄芪-莪术药对通过调控缺氧诱导因子及肿瘤干细胞化抑制结肠癌进展并增强5-氟尿嘧啶(5-FU)疗效的机制。建立裸鼠HCT116皮下移植瘤模型,将造模成功的24只裸鼠随机分为模型组、5-FU组、黄芪-莪术组和联合给药... 详细信息

该研究基于动物和细胞模型研究黄芪-莪术药对通过调控缺氧诱导因子及肿瘤干细胞化抑制结肠癌进展并增强5-氟尿嘧啶(5-FU)疗效的机制。建立裸鼠HCT116皮下移植瘤模型,将造模成功的24只裸鼠随机分为模型组、5-FU组、黄芪-莪术组和联合给药组,治疗后每2 d测量1次肿瘤体积,采用Western blot方法检测裸鼠HCT116皮下移植瘤组织缺氧核心区关键靶点表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase,DPYD)、胸苷酸合酶(thymidylate synthase,TYMS)以及缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、缺氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factor-2α,HIF-2α)和肿瘤干细胞标志物CD133、SRY盒转录因子2(SRY-box transcription factor 2,SOX2)的蛋白表达情况。结果表明黄芪-莪术药对能减缓肿瘤生长速度,并显著提高5-FU的抑瘤率。黄芪-莪术药对明显降低肿瘤中EGFR和DPYD的蛋白表达,联合给药组中EGFR和TYMS的蛋白表达量显著降低。与模型组相比,黄芪-莪术药对可以显著抑制移植瘤组织缺氧核心区中HIF-1α、HIF-2α、SOX2、CD133的蛋白表达,与5-FU组相比,联合给药进一步抑制了HIF-1α、HIF-2α、SOX2的蛋白表达。在体外实验中,缺氧后HCT116细胞内HIF-1α、HIF-2α的蛋白表达量显著增加。与单独给予5-FU(1.38μmol·L^(-1))相比,单独使用黄芪-莪术(40 mg·mL^(-1))或5-FU联合黄芪-莪术均能更显著地抑制HIF-1α、HIF-2α、TYMS的蛋白表达。结果显示黄芪-莪术药对降低了结肠癌细胞中缺氧应答分子的表达,并减少了结肠癌的干细胞性质,从而起到了协同增强5-FU对结肠癌的治疗作用。

关键词：黄芪-莪术药对缺氧诱导因子肿瘤干细胞结肠癌