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益气养阴逐瘀方对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型体外抗炎活性的影响

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中国实验方剂学杂志 2019年第1期25卷 141-148页

作者：唐蕾吴坚于顾然储继红严士海王海丹戴国梁韩旭南京中医药大学附属医院

目的:研究益气养阴逐瘀方对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症模型相关细胞因子表达及经典活化(M1)/选择性活化(M2)炎症表型转化的影响。方法:运用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同给药浓度的益气养阴逐瘀方对RAW264.7细... 详细信息

目的:研究益气养阴逐瘀方对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症模型相关细胞因子表达及经典活化(M1)/选择性活化(M2)炎症表型转化的影响。方法:运用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同给药浓度的益气养阴逐瘀方对RAW264.7细胞增殖情况的影响;利用LPS诱导RAW264.7细胞,构建体外炎症模型,采用格里斯试剂法(Griess)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的分泌量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清中M1/M2型相关炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL^-1β),一氧化氮合酶(iNOS),白细胞介素-10(IL^-10),转化生长因子-β(TGF-β),精氨酸-1(Arg-1)的表达量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测M1型巨噬细胞标志基因TNF-α,IL-6,IL^-1β,iNOS和M2型巨噬细胞标志基因IL^-10,TGF-β,Arg-1mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内相关蛋白TNF-α,IL-6,IL^-1β,iNOS的表达。结果:MTT比色法显示,与空白组比较,益气养阴逐瘀方2.0g·L^-1及以下时对细胞增殖无明显影响。Griess法显示,与空白组相比,LPS组NO释放量显著上调(P<0.01);与LPS组相比,各给药组NO释放量均显著下调(P<0.01)。ELISA显示,与空白组相比,LPS组M1/M2型巨噬细胞相关炎症因子表达均显著上调(P<0.01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组可明显下调M1型巨噬细胞促炎症因子表达(P<0.01),对M2型巨噬细胞抗炎症因子无影响。Real-time PCR显示,与空白组相比,LPS组M1/M2型巨噬细胞相关mRNA表达显著上调(P<0.01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组可明显下调M1型巨噬细胞促炎症因子基因表达(P<0.05,P<0.01),对M2型mRNA表达无影响。Western blot显示,与空白组比较,LPS组TNF-α,IL-6,IL^-1β,iNOS蛋白的表达显著上调(P<0.01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组TNF-α,IL-6,IL^-1β,iNOS蛋白的表达均下调,且于2.0g·L^-1下调最显著(P<0.01)。结论:益气养阴逐瘀方可以有效抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。其诱导已经分化的促炎亚型M1型巨噬细胞向抗炎亚型M2型巨噬细胞转化不明显,其抗炎机制可能与通过抑制巨噬细胞向M1亚型方向极化从而发挥免疫调节作用,以减少NO,TNF-α,IL-6等相关炎症因子分泌相关。

关键词：动脉粥样硬化(AS) 益气养阴逐瘀方巨噬细胞经典活化(M1) 选择性活化(M2) 脂多糖瓜蒌薤白白酒汤当归补血汤

国医大师徐景藩治疗溃疡性结肠炎的用药规律分析和分子靶点预测

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中国中药杂志 2018年第5期43卷 1042-1048页

作者：宁丽琴叶柏沈洪陆为民徐丹华严晶谭唱唐德才南京中医药大学附属医院

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种主要累及直肠、结肠黏膜的慢性非特异性炎症，严重影响患者的身体健康和生活质量，被世界卫生组织列为现代难治性疾病之一。国医大师徐景藩教授对于对溃疡性结肠炎的治疗积累了丰富经验。... 详细信息

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种主要累及直肠、结肠黏膜的慢性非特异性炎症，严重影响患者的身体健康和生活质量，被世界卫生组织列为现代难治性疾病之一。国医大师徐景藩教授对于对溃疡性结肠炎的治疗积累了丰富经验。该研究通过收集徐老治疗溃疡性结肠炎的77例医案，通过数据挖掘，分析常用中药的使用频率和中药类别，应用系统聚类的方法探讨其用药规律。研究结果显示药物使用频率最高的是清热药，其次是止血药、利水渗湿药等。同时挖掘出常用药对和药物组合。最后，通过BATMAN。TCM生物信息学分析工具对高频中药进行GO富集分析和KEGG分子信号通路富集分析，预测其可能的分子作用靶点，结果表明中药复方可能通过活化PPAR-γ通路调节肠道炎症从而发挥治疗uc的作用。确切机制需要通过后续分子生物学实验加以验证。

关键词：溃疡性结肠炎中医传承用药规律分子靶点 BATMAN-TCM

左归丸调节β2AR介导的RANKL/OPG信号通路改善去卵巢大鼠骨量和显微结构水平

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中国实验方剂学杂志 2019年第18期25卷 1-8页

作者：刘飞祥林子璇徐道明叶素敏张明玥樊巧玲谭峰李星柴毅麦聪英卢圣峰南京中医药大学南京210023 南京中医药大学附属医院南京210029

目的:探讨左归丸治疗绝经后骨质疏松症的分子机制之一是通过对β2-肾上腺素能受体(β2AR)介导的核转录因子-κB受体激活因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路的调节。方法:通过去卵巢法建立骨质疏松模型,将40只雌性SPF级SD大鼠随机分... 详细信息

目的:探讨左归丸治疗绝经后骨质疏松症的分子机制之一是通过对β2-肾上腺素能受体(β2AR)介导的核转录因子-κB受体激活因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路的调节。方法:通过去卵巢法建立骨质疏松模型,将40只雌性SPF级SD大鼠随机分为模型组、假手术组、雌二醇(50μg·kg-1·d-1)组、左归丸低、高剂量(2. 3,4. 6 g·kg-1)组。采用酶联免疫吸附实验检测血清骨转换标志物;显微CT对右侧股骨远端骨密度水平和骨小梁微结构进行测量和分析;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胫骨和下丘脑组织中β2AR,OPG,RANK mRNA和蛋白表达水平。结果:与模型组比较,左归丸可显著降低大鼠血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽(β-CTX)水平(P <0. 01),增加骨特异性碱性磷酸酶(BALP)水平(P <0. 01),减少卵巢摘除诱导引起的大鼠骨量丢失,改善股骨远端骨小梁显微结构水平。同时,左归丸高、低剂量组均能显著上调胫骨组织中OPG mRNA和蛋白表达(P <0. 01),下调下丘脑组织β2AR mRNA和蛋白表达水平(P <0. 01),同时也能显著下调胫骨组织中RANKL mRNA和蛋白表达水平(P <0. 01)。结论:左归丸改善围绝经期综合症,增加骨量和改善骨小梁显微结构水平的分子机制可能与对β2AR介导的RANKL/OPG信号通路的调节有关。

关键词：左归丸绝经后骨质疏松症核转录因子-κB受体激活因子配体(RANKL) β2-肾上腺素能受体(β2AR) 骨保护素(OPG)

中药调控糖尿病肾脏疾病肾间质纤维化相关信号通路研究进展

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中国实验方剂学杂志 2024年第5期30卷 213-225页

作者：朱玲玲佘云余江毅严倩华南京中医药大学南京210023 南京中医药大学附属医院南京210029

糖尿病肾脏疾病(DKD)是糖尿病(DM)常见的一种微血管并发症,也是造成终末期肾病(ESRD)的主要病因。肾间质纤维化(RIF)是DKD进展到ESRD的主要病理基础,显著增加了DKD患者的死亡率,给患者和社会带来了沉重的负担,是临床上亟待解决的问题。... 详细信息

糖尿病肾脏疾病(DKD)是糖尿病(DM)常见的一种微血管并发症,也是造成终末期肾病(ESRD)的主要病因。肾间质纤维化(RIF)是DKD进展到ESRD的主要病理基础,显著增加了DKD患者的死亡率,给患者和社会带来了沉重的负担,是临床上亟待解决的问题。RIF的发病机制错综复杂,主要与细胞外基质(ECM)过度沉积、上皮细胞-间充质转化(EMT)、氧化应激、炎症反应、细胞自噬等相关。转化生长因子-β1/Smad(TGF-β1/Smad)、核转录因子-κB(NF-κB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、分泌型糖蛋白/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、酪氨酸激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)、神经源性位点缺口同源蛋白(Notch)、核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)等多条信号通路介导了RIF的发生发展,是DKD治疗的新型靶点。由于其发病机制复杂,目前西医治疗以改善代谢的基础治疗为主,疗效欠佳,难以阻止DKD的病情进展,因此寻找新的治疗方法具有重要的临床意义。近年来,诸多研究证明中药可通过调控相关信号通路,从而减轻氧化应激、抑制炎症反应、调控细胞自噬等,达到治疗糖尿病肾脏疾病肾间质纤维化(DKD-RIF)的目的,具有多途径、多靶点、多环节、疗效显著的优势。但目前尚缺乏相关的总结性记载,基于此,笔者查阅了近年来国内外相关文献,综述了上述相关信号通路在DKD-RIF发生发展中的作用及中药调控相关信号通路治疗DKD-RIF的研究进展,以期为进一步的科学研究及临床实践提供新的思路与参考。

关键词：中药糖尿病肾脏疾病(DKD) 肾间质纤维化(RIF) 信号通路研究进展

发酵虫草菌粉联合ACEI/ARB治疗糖尿病肾病的系统评价

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中国实验方剂学杂志 2021年第18期27卷 169-175页

作者：周熙谋顾霜夏宇史名妤何伟明南京中医药大学附属医院南京210029 南京中医药大学南京210023

目的:系统评价发酵虫草菌粉联合血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)/血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARB)治疗糖尿病肾病有效性及安全性。方法:计算机检索Pubmed,Embase,Cochrane library,中国知网(CNKI),中国生物医学文献数据库(CBM),万方数据库、... 详细信息

目的:系统评价发酵虫草菌粉联合血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)/血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARB)治疗糖尿病肾病有效性及安全性。方法:计算机检索Pubmed,Embase,Cochrane library,中国知网(CNKI),中国生物医学文献数据库(CBM),万方数据库、维普,查找筛选发酵虫草菌粉联合ACEI/ARB治疗糖尿病肾病的随机对照研究文献,并采用Cochrane风险评估工具对纳入研究进行质量评估,用RevMan 5.3软件对数据进行分析。结果:共纳入48项研究,4 562名患者。Meta分析结果表明,发酵虫草菌粉联合ACEI/ARB有效率高于单纯ACEI/ARB治疗[风险比(RR)=1.20,95%置信空间(CI)(1.15,1.24),P<0.000 01],并且能够有效降低尿白蛋白排泄率[标准化均数差(SMD)=-2.61,95%CI(-3.17,-2.05),P<0.000 01],24 h尿蛋白定量[SMD=-1.75,95%CI(-2.15,-1.35),P<0.000 01],血肌酐[均数差(MD)=-14.57,95%CI(-17.94,-11.21),P<0.000 01],尿素氮[MD=-1.05,95%CI(-1.29,-0.81),P<0.000 01],胱抑素C[MD=-0.52,95%CI(-0.68,-0.36),P<0.000 01],空腹血糖[MD=-0.59,95%CI(-0.93,-0.25),P=0.000 6],糖化血红蛋白[MD=-0.50,95%CI(-0.75,-0.24),P=0.000 1],肿瘤坏死因子-α(TNF-α)[SMD=-1.68,95%CI(-2.21,-1.15),P<0.000 01],C反应蛋白(CRP)[SMD=-1.35,95%CI(-1.77,-0.93),P<0.000 01],白细胞介素-6(IL-6)[SMD=-1.52,95%CI(-1.98,-1.07),P<0.000 01]。两组之间不良事件发生率无明显差异[RR=0.77,95%CI(0.49,1.21),P=0.25]。结论:发酵虫草菌粉联合ACEI/ARB治疗糖尿病肾病较单纯ACEI/ARB治疗更有效,值得临床推广使用,但还需要更多的多中心大样本随机对照试验(RCT)研究进行验证。

关键词：发酵虫草菌粉血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI) 血管紧张素受体拮抗剂(ARB) 系统评价

玉屏风散加味联合阿司匹林干预RSA合并血清阴性APS及对D-二聚体,PagT的影响

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中国实验方剂学杂志 2019年第19期25卷 10-16页

作者：吴诗敏谈勇南京中医药大学南京210029 南京中医药大学附属医院南京210029

目的:观察玉屏风散加味联合阿司匹林治疗复发性流产(RSA)合并血清阴性抗磷脂抗体综合征(SN-APS)的临床疗效,为临床治疗提供参考。方法:选取2016年12月至2018年3月就诊于南京中医药大学附属医院生殖医学科的109例RSA合并SN-APS的患者进... 详细信息

目的:观察玉屏风散加味联合阿司匹林治疗复发性流产(RSA)合并血清阴性抗磷脂抗体综合征(SN-APS)的临床疗效,为临床治疗提供参考。方法:选取2016年12月至2018年3月就诊于南京中医药大学附属医院生殖医学科的109例RSA合并SN-APS的患者进行分组研究,按照随机数字法分为空白组、对照组与观察组。空白组从孕前给予叶酸片安慰治疗,1片/次,1次/d。对照组于孕前给予阿司匹林1片/次,3次/d;丹参片4片/次,3次/d;叶酸片1片/次,1次/d治疗。观察组则于孕前给予玉屏风散加味口服,每次150 m L,2次/d,联合阿司匹林1片/次,3次/d,叶酸片1片/次,1次/d治疗,3组患者均试孕1年,并于妊娠后加用阿司匹林1片/次,3次/d,地屈孕酮1片/次,3次/d,分别观察至孕13周,流产则停药,对3组患者妊娠率、流产率、治疗前后凝血指标、中医证候评分以及流产月份等数据进行统计比较。结果:观察组治疗后在凝血指标D-二聚体,血小板聚集率(Pag T),中医证候评分(易感冒、自汗、恶风、神疲、乏力、腰膝酸软)较治疗前明显改善,且治疗后观察组凝血指标低于空白组(P 中医证候积分低于对照组与空白组(P 中医证候,疗效更为突出,但确切疗效需要更大样本验证。而保胎至超过流产月份或许并不能改变妊娠结局,故保胎治疗应至少维持至早孕期结束。

关键词：玉屏风散加味血清阴性抗磷脂抗体综合征(SN-APS) 复发性流产(RSA) 保胎治疗

健脾养正消癥方对裸鼠胃癌皮下移植瘤细胞凋亡的影响及自噬机制的实验研究

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中国中西医结合杂志 2015年第9期35卷 1113-1118页

作者：吴坚刘沈林张星星陈敏邹玺南京中医药大学附属医院中心实验室南京210029 南京中医药大学附属医院肿瘤科南京210029 南京中医药大学附属医院脾胃科南京210029 南京中医药大学附属医院普内科南京210029

目的观察健脾养正消瘢方对人胃癌MGC-803细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤抑瘤率的影响及可能的分子机制。方法取胃癌MGC-803细胞接种于裸鼠皮下,制备裸鼠移植性胃癌模型。32只BALB/c裸鼠按随机数字表法分为阴性对照组、阳性对照组和健脾养正... 详细信息

目的观察健脾养正消瘢方对人胃癌MGC-803细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤抑瘤率的影响及可能的分子机制。方法取胃癌MGC-803细胞接种于裸鼠皮下,制备裸鼠移植性胃癌模型。32只BALB/c裸鼠按随机数字表法分为阴性对照组、阳性对照组和健脾养正消瘢方高、低剂量组,每组8只。阴性对照组给予生理盐水灌胃,阳性对照组给予5-氟尿嘧啶(5-Fu,2.5 mg/kg)灌胃,健脾养正消瘢方高、低剂量组分别以85、43 g/kg灌胃,每天1次,连续10天。观察健脾养正消瘢方对裸鼠皮下移植瘤抑瘤率的影响;采用RT-PCR法观察该复方对移植瘤中Bax、Bcl-2、Fas、Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin D3基因表达的影响;采用Western Blot法观察该复方对移植瘤中procaspase-3、procaspase-8和procaspase-9、cleavedPARP、Beclin-1和LC3B蛋白表达的影响。结果(1)与阴性对照组比较,阳性对照组和健脾养正消瘢方高、低剂量组瘤重明显减轻(P<0.05),健脾养正消瘢方高、低剂量组瘤重均高于阳性对照组(P<0.05)。(2)RT-PCR显示:与阴性对照组比较,阳性对照组和健脾养正消瘢方高、低剂量组Bax表达上调,Bcl-2、Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin D3表达下调(均P<0.05),阳性对照组及健脾养正消瘢方高剂量组Fas表达上调(P<0.05);与阳性对照组比较,健脾养正消瘢方高、低剂量组Fas、Bax表达均下调,Bcl-2、Cyclin D2和Cyclin D3表达上调(均P<0.05),健脾养正消瘢方高剂量组Cyclin D1下调,低剂量组Cyclin D1上调(均P<0.05)。(3)Western blot显示:与阴性对照组比较,健脾养正消瘢方高、低剂量组procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9蛋白表达下调,cleaved-PARP、Beclin-1、LC3BⅡ蛋白表达上调(均P<0.05);阳性对照组procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9和LC3BⅡ蛋白表达下调,cleaved-PARP、Beclin-1和LC3BⅠ蛋白表达上调(均P<0.05)。结论健脾养正消瘢方对胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤有显著的抑制作用,其作用可能与其激活凋亡、自噬相关因子有关。

关键词：健脾养正消癥方胃癌MGC-803细胞皮下移植瘤凋亡自噬

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胃癌细胞免疫临床研究进展

中华肿瘤杂志 2019年第5期41卷 321-325页

作者：徐睿涵吴坚陈敏邹玺刘沈林南京中医药大学附属医院 210029 南京中医药大学附属医院中心实验室 210029 南京中医药大学附属医院普内科 210029 南京中医药大学附属医院肿瘤科 210029

胃癌是我国临床最常见的消化道恶性肿瘤,临床治疗存在很大的挑战。胃癌患者免疫微环境中存在T淋巴细胞亚群表达的变化。T淋巴细胞既是细胞免疫的主要效应细胞,又是人体重要的免疫调节细胞,不仅反映了肿瘤微环境的状态,与肿瘤患者预后有... 详细信息

胃癌是我国临床最常见的消化道恶性肿瘤,临床治疗存在很大的挑战。胃癌患者免疫微环境中存在T淋巴细胞亚群表达的变化。T淋巴细胞既是细胞免疫的主要效应细胞,又是人体重要的免疫调节细胞,不仅反映了肿瘤微环境的状态,与肿瘤患者预后有密切的关系,而且对肿瘤的临床治疗发挥至关重要的指导作用。目前,程序性细胞死亡因子1(PD-1)/程序性死亡分子配体1(PD-L1)单抗已获批用于胃癌的治疗,肿瘤疫苗、过继性细胞疗法在胃癌中的应用也在不断探索中。如何筛选免疫治疗患者、制定最佳联合治疗方案以及评估免疫治疗效果都是目前需要研究和解决的问题。

关键词：胃肿瘤细胞免疫研究进展 T细胞耗竭

基于LC/Q-TOF-MS整合网络药理学探讨潜阳育阴颗粒防治高血压肾损害的药效物质基础与作用机制

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中国实验方剂学杂志 2021年第2期27卷 116-129页

作者：吴信华李长印曹园瞿慧韩洋方祝元南京中医药大学附属医院南京210029

目的:系统研究潜阳育阴颗粒的化学成分,探讨其发挥药效的主要活性成分和作用机制。方法:采用液相色谱/四级杆-飞行时间质谱法(LC/Q-TOF-MS)对潜阳育阴颗粒中的化学成分进行全面分析,检测条件为Agilent Poroshell 120 SBC18色谱柱(3.0 mm... 详细信息

目的:系统研究潜阳育阴颗粒的化学成分,探讨其发挥药效的主要活性成分和作用机制。方法:采用液相色谱/四级杆-飞行时间质谱法(LC/Q-TOF-MS)对潜阳育阴颗粒中的化学成分进行全面分析,检测条件为Agilent Poroshell 120 SBC18色谱柱(3.0 mm×100 mm,2.7μm),流速0.4 mL·min^(-1),电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式扫描,扫描范围m/z 25~1 000;正离子模式的流动相A为水+10 mmol·L^(-1)甲酸铵+0.125%甲酸+0.1%甲醇,B为乙腈-水(9∶1)+10 mmol·L^(-1)甲酸铵+0.125%甲酸;负离子模式的流动相A为水+10 mmol·L^(-1)甲酸铵+0.1%甲醇,B为乙腈-水(9∶1)+10 mmol·L^(-1)甲酸铵;梯度洗脱程序均设定为0~3.5 min,5%B;3.5~4 min,5%~10%B;4~9 min,10%~25%B;9~18 min,25%~30%B;18~25 min,30%~50%B;25~27 min,50%~90%B;27~32 min,90%B;32~33 min,90%~5%B;33~39 min,5%B。根据化合物的一级、二级质谱信息,与对照品或文献数据比对,快速识别化学成分。结合网络药理学方法对潜阳育阴颗粒的化学成分进行靶标分析、功能富集,初步筛选出主要药效物质,并探讨其作用机制。结果:从潜阳育阴颗粒中共识别出99个化学成分,从中筛选出43个与高血压肾损害相关的活性成分及48个核心靶点。核心成分包括山柰酚,槲皮素,阿魏酸,木樨草素,咖啡酸甲酯,肉桂酸,芦荟大黄素,大黄素,N-反式-阿魏酰酪胺,没食子酸,异红草素,8-O-阿魏酰基哈巴苷,咖啡酸乙酯,异奥卡宁,杯苋甾酮,二苯乙烯苷,马钱苷,23-乙酰泽泻醇B和哈巴苷;核心靶点包括血管内皮生长因子A(VEGFA),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1),Jun原癌基因(JUN),G蛋白β1(GNB1),肿瘤蛋白p53(TP53),β-淀粉样前体蛋白(APP),丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)等。结论:潜阳育阴颗粒主要从调控血管内皮、血管生成、炎症反应、氧化应激及免疫应答等方面发挥清肝补肾、化瘀通络的功效。

关键词：潜阳育阴颗粒高血压肾损害网络药理学液相色谱/四级杆-飞行时间质谱法(LC/Q-TOF-MS) 药效物质作用机制数据库