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基于LAMP2A介导的自噬探讨仙鹤草-黄连含药血清对结直肠癌细胞的作用及机制研究

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中国中药杂志 2024年

作者：何亚萍侯敏艳沈鑫玲李智育徐敏陈轩张淑娟熊晗彭海燕南京中医药大学第一临床医学院南京中医药大学附属医院

探讨仙鹤草-黄连 (Agrimoniae Herba-Coptidis Rhizoma，XHC-HL) 含药血清通过溶酶体相关膜蛋白2A型(lysosome-associated membrane protein type 2A，LAMP2A) 介导的自噬对人结直肠癌HT29和HCT116细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。通过生物信息学分析LAMP2A在结直肠癌的发生发展中的作用机制；蛋白免疫印迹（Western blot，WB）检测LAMP2A蛋白在结直肠癌细胞株中的表达；利用慢病毒转染技术构建LAMP2A干扰HT29及过表达HCT116结直肠癌细胞模型；实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time PCR）实验检测转染效率；结直肠癌HT29和HCT116 细胞分别给予不同浓度的仙鹤草-黄连含药血清，采用cell counting kit-8 (CCK-8) 法检测细胞增殖，筛选含药血清最佳干预浓度及时间。将HT29细胞分为NC（空白对照）组、XHC-HL（仙鹤草-黄连药对处理）组、XHC-HL+shLAMP2A（仙鹤草-黄连药对处理+干扰LAMP2A）组；将HCT116细胞分为NC（空白对照）组、XHC-HL（仙鹤草-黄连药对处理）组、XHC-HL+LAMP2A（仙鹤草-黄连药对处理+过表达LAMP2A）组，CCK-8检测细胞活力；平板克隆实验检测细胞增殖能力；划痕实验及Transwell迁移实验检测细胞迁移能力；Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot 技术和real-time PCR技术检测仙鹤草-黄连药对对结直肠癌细胞LAMP2A、热休克蛋白70 (the heat shock protein 70， HSC70)、热休克蛋白90 (The heat shock protein 90， HSP90)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase， GAPDH）的蛋白表达水平及 mRNA 的影响。通过差异表达分析发现结直肠癌患者相对于正常对照样本的LAMP2A表达水平有显著升高，生存分析提示伴侣介导的自噬（chaperone-mediated autophagy，CMA）关键分子LAMP2A与结直肠癌的进展密切关联，通过基因集功能富集分析发现LAMP2A高表达患者显著上调了血管生成，免疫抑制等肿瘤进展相关信号通路，且免疫浸润分析发现LAMP2A高表达患者其肿瘤微环境会有更少的CD8T细胞的浸润。仙鹤草-黄连含药血清可以抑制HT29和HCT116细胞活力，最佳干预质量分数及时间为20%、48 h。与NC组相比，仙鹤草-黄连药对均可抑制HT29和HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭，诱导细胞凋亡，药对处理干扰LAMP2A组均能进一步抑制肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力并促进凋亡，而过表达LAMP2A可逆转含药血清处理后结直肠癌细胞被抑制的增殖、迁移、侵袭能力，减少细胞凋亡率。仙鹤草-黄连药对含药血清对CMA具有抑制作用，通过LAMP2A介导的自噬，上调LAMP2A、 HSC70、HSP90蛋白和基因的表达，下调底物蛋白GAPDH的表达发挥抗CRC功能。综上，仙鹤草-黄连药对可通过下调CMA关键分子蛋白LAMP2A表达，抑制CMA活性，从而抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭，并诱导细胞凋亡。

关键词：仙鹤草-黄连药对结直肠癌 LAMP2A 分子伴侣介导自噬

华蟾素联合沙利度胺/地塞米松方案治疗新诊断多发性骨髓瘤痰瘀痹阻型患者的回顾性临床研究

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中医杂志 2024年第1期65卷 72-78页

作者：张玮光丁海花陈碧清孔祥图代兴斌徐祖琼杨箐刘细细黎陈铖胡中晓朱学军南京中医药大学附属医院江苏省南京市210029 南京中医药大学第一临床医学院南京市浦口区中医院

目的观察华蟾素片联合沙利度胺/地塞米松(TD)方案治疗新诊断多发性骨髓瘤痰瘀痹阻型患者的疗效及安全性。方法回顾性分析2015年6月1日至2019年7月31日江苏省中医院收治的50例新诊断多发性骨髓瘤痰瘀痹阻型患者的临床资料,根据治疗方... 详细信息

目的观察华蟾素片联合沙利度胺/地塞米松(TD)方案治疗新诊断多发性骨髓瘤痰瘀痹阻型患者的疗效及安全性。方法回顾性分析2015年6月1日至2019年7月31日江苏省中医院收治的50例新诊断多发性骨髓瘤痰瘀痹阻型患者的临床资料,根据治疗方案分为对照组(含硼替佐米/地塞米松方案) 27例和观察组(华蟾素片联合TD方案) 23例。两组患者均治疗2或3个疗程。主要结局指标为患者治疗后临床缓解情况(包括总缓解率、深度缓解率),患者1年、2年总生存率,不良反应。次要结局指标为治疗前后骨髓浆细胞比例,血红蛋白、血清β2-微球蛋白、乳酸脱氢酶、血肌酐、血尿素氮水平及骨痛积分、卡氏(KPS)评分。结果治疗后观察组和对照组总缓解率分别为69.57%(16/23)及70.37%(19/27),深度缓解率分别为56.52%(13/23)及55.56%(15/27),两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组和对照组1年总生存率分别为90.9%和92.4%,2年总生存率分别为81.8%和80.9%,组间差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗过程中,两组均未发生肾功能损伤。观察组周围神经损伤发生率为8.70%(2例),低于对照组的48.15%(13例),两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。与治疗前比较,两组患者治疗后骨髓浆细胞比例、β2-微球蛋白水平、血肌酐水平、骨痛评分降低,血红蛋白水平、KPS评分升高(P<0.05或P<0.01)。两组治疗后比较,观察组治疗后骨痛评分低于对照组,KPS评分高于对照组(P<0.05)。结论华蟾素片联合TD方案与含硼替佐米/地塞米松方案治疗新诊断多发性骨髓瘤痰瘀痹阻型患者疗效相当,但华蟾素片联合TD方案在减轻患者疼痛、提高生活质量方面优于含硼替佐米/地塞米松方案,且安全性更好。

关键词：多发性骨髓瘤痰瘀痹阻华蟾素沙利度胺硼替佐米临床缓解生存率不良反应

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益肾调心法治疗低促性排卵障碍理法探析

中华中医药杂志 2024年第3期39卷 1263-1266页

作者：王欣哲金晶南京中医药大学附属医院南京210029

低促性腺激素性性腺功能减退是排卵障碍的原因之一,其对于女性生殖内分泌的不利影响受到临床重视。目前,中医尚缺乏对其病机治法的研究,国医大师夏桂成教授创立的“心(脑)-肾-子宫轴”为中医妇科生殖内分泌疾病的研究提供了方向。文章... 详细信息

低促性腺激素性性腺功能减退是排卵障碍的原因之一,其对于女性生殖内分泌的不利影响受到临床重视。目前,中医尚缺乏对其病机治法的研究,国医大师夏桂成教授创立的“心(脑)-肾-子宫轴”为中医妇科生殖内分泌疾病的研究提供了方向。文章从中西医生殖轴互参中分析了低促性排卵障碍的病因病机,提出了“心肾不交”为病机关键,论证了益肾调心治法的有效性,并根据肾中阴阳偏颇拟定治疗方案,革新了该病的论治理念,以期为临床提供指导。

关键词：益肾调心法心肾观低促性排卵障碍清心滋肾汤补肾促排卵汤补肾助孕方

乌梅丸及其单味药有效成分在消化系统疾病中的研究进展

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中华中医药学刊 2024年

作者：任娜韩秀珍刘溦溦李岩李水洪商洪涛南京中医药大学附属医院

乌梅丸载于我国东汉时期的一部中医经典《伤寒杂病论》：“蛔厥者，乌梅丸主之。又主久利”，该方由乌梅、细辛、桂枝、黄连、黄柏、当归、干姜、附子、人参、蜀椒10种中草药组成，其主要功效为暖肝调中，清上温下。临床研究中多以其... 详细信息

乌梅丸载于我国东汉时期的一部中医经典《伤寒杂病论》：“蛔厥者，乌梅丸主之。又主久利”，该方由乌梅、细辛、桂枝、黄连、黄柏、当归、干姜、附子、人参、蜀椒10种中草药组成，其主要功效为暖肝调中，清上温下。临床研究中多以其加减方或联合西药治疗溃疡性结肠炎、肠易激综合征、慢性萎缩性胃炎、胃食管反流病、胃癌、肠息肉等多个消化系统疾病。现代药理学显示，乌梅丸治疗胃肠疾病发挥着抗炎、抗氧化、保护胃黏膜、抗肿瘤、抗溃疡等重要药理作用。本文借助文献报道，从该方临床报道、方剂组成中各药物有效成分与消化系统疾病药理研究、动物实验报道等三个方面进行归纳总结，根据相关报道中该方的有效成分，总结出该方药物运用于常见消化系统疾病的主要有效成分，并通过其药理成分阐释该方的组方配伍规律，以期为乌梅丸临床应用及相关研究的开展提供参考。

关键词：乌梅丸有效成分组方配伍消化系统疾病研究进展

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院前呼吸心跳骤停事件的五运六气分析

辽宁中医杂志 2024年

作者：沈佩高飞茆颖张敬华南京中医药大学南京市急救中心南京中医药大学附属南京中医院脑病科

目的分析院前呼吸心跳骤停与五运六气是否存在关联，为院前预防及接诊猝死患者提供理论指导。方法对2021（辛丑年）-2022（壬寅年），经由南京市急救中心接诊的8，237例呼吸心跳骤停患者进行统计，结合《黄帝内经》中五运六气学说的相... 详细信息

目的分析院前呼吸心跳骤停与五运六气是否存在关联，为院前预防及接诊猝死患者提供理论指导。方法对2021（辛丑年）-2022（壬寅年），经由南京市急救中心接诊的8，237例呼吸心跳骤停患者进行统计，结合《黄帝内经》中五运六气学说的相关理论，分析发生此类不良事件的患者是否有时间趋向性及运气规律性。结果院前呼吸心跳骤停事件的发生具有一定的运气学规律。结论五运六气理论能够为院前预防及诊治呼吸心跳骤停提供一定理论指导。

关键词：呼吸心跳骤停,五运六气发病体质疾病防治

黄连解毒汤调控Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路改善大鼠脓毒症急性肺损伤

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：龙敏刘克琴岳煜费立博邵龙刚童佳佳秦慧玲张潇月李探陈慧敏赵谦辛恒南京中医药大学第二附属医院南京市第一医院

目的：研究黄连解毒汤（HLJDD）对脓毒症急性肺损伤（ALI）的改善作用及其机制。方法：通过网络药理学平台挖掘HLJDD改善脓毒症ALI作用的药效物质基础及潜在的作用机制；将60只SD大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、地塞米松阳性对照... 详细信息

目的：研究黄连解毒汤（HLJDD）对脓毒症急性肺损伤（ALI）的改善作用及其机制。方法：通过网络药理学平台挖掘HLJDD改善脓毒症ALI作用的药效物质基础及潜在的作用机制；将60只SD大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、地塞米松阳性对照组、黄连解毒汤低剂量组、黄连解毒汤高剂量组、黄连解毒汤高剂量+Nrf2抑制剂组，采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症ALI模型12 h后进行灌胃给药，建模7 d后处死并分离肺组织，观察组织病理学改变和相关键靶点的表达。结果：通过网络药理学平台挖掘分析，HLJDD治疗ALI的高频活性成分为β-谷甾醇、槲皮素、豆甾醇、黄连碱、表小檗碱；通过作用于谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、检测核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶1（HMOX1）、TP53基因（Tp53）、丝裂原活化蛋白激酶3（MAPK3）、肿瘤坏死因子（TNF）、信号传导及转录激活蛋白3（STAT3）、白细胞介素-1B（IL-1B）、原癌基因（MYC）9个核心靶点，调控铁死亡等信号通路等来调控脓毒症ALI的作用。黄连解毒汤可改善脓毒症ALI大鼠肺泡间质水肿、肺泡壁增厚等病理损伤；使丙二醛（MDA）、Fe2+、活性氧（ROS）水平均显著降低，超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）水平显著升高；电镜和普鲁士蓝染色显示可显著改善线粒体微结构和铁沉积；使Nrf2、SLC7A11和GPX4和HO1蛋白表达均显著升高。Nrf2抑制剂能够显著逆转HLJDD对脓毒症ALI肺组织的保护作用。结论：HLJDD可通过多途径多靶点改善脓毒症ALI，其代表性机制可能为激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路来发挥作用。

关键词：黄连解毒汤脓毒症急性肺损伤检测核因子E2相关因子2(Nrf2)/SLC7A11/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路网络药理学

温经通络汤含药血清对小鼠软骨细胞损伤及IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴的影响研究

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南京中医药大学学报 2024年第5期40卷 469-478页

作者：魏伟彭晨健顾任钧颜习武叶嘉鹏黄桂成孙鲁宁南京中医药大学附属医院江苏南京210029 南京中医药大学第一临床医学院江苏南京210023 南京中医药大学附属南京中医院江苏南京210001

目的研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制。方法采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型,检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9... 详细信息

目的研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制。方法采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型,检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)以及糖酵解相关酶乳酸脱氢酶A(LDHA)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶2(NOX2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(NOX4)的mRNA表达;测定细胞内MMP3、MMP13、P65、IκB-ζ、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)以及LDHA蛋白表达水平;进一步检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和乳酸的浓度,测定细胞内辅酶Ⅰ(NAD)的还原态(NADH)和氧化态(NAD+)的比率,以及细胞内活性氧(ROS)水平。结果温经通络汤含药血清可显著抑制IL-1β软骨细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达(P<0.01),降低细胞上清液中NO浓度(P<0.05,P<0.01),下调IκB-ζ(P<0.05)和P65蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。温经通络汤含药血清可显著下调MMP3、MMP9、MMP13以及ADAMTS4 mRNA表达(P<0.01),抑制MMP13(P<0.05,P<0.01)和MMP3(P<0.05)的蛋白表达。氧化应激方面,它可显著抑制软骨细胞内ROS的产生,提高NADH/NAD+比率,降低上清液中MDA浓度,下调HIF-1α蛋白表达(P<0.01)。温经通络汤含药血清可显著降低乳酸浓度,下调LDHA、PKM2、NOX2、NOX4的表达,降低细胞内糖酵解水平(P<0.05,P<0.01)。结论温经通络汤含药血清可通过抑制炎症、软骨降解、氧化应激和糖酵解,缓解IL-1β诱导的小鼠原代软骨细胞损伤,其机制可能与调控IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴有关。

关键词：温经通络汤含药血清 IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴白细胞介素-1β 软骨细胞损伤

益肾健脾活血方穴位敷贴联合健身气功五禽戏改善透析患者衰弱的应用研究

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中国实用护理杂志 2024年第2期40卷 81-89页

作者：赵如琴刘胜凤薄祥敏殷玲谢敏陈继红郭月月南京中医药大学附属医院(江苏省中医院)肾内科南京210029

目的观察益肾健脾活血方穴位敷贴联合健身气功五禽戏对改善透析治疗的衰弱患者机体的营养状况及衰弱程度的效果及影响,为透析患者衰弱的康复治疗提供依据。方法采用随机对照研究方法,便利抽样法选取南京中医药大学附属医院肾内科2020年... 详细信息

目的观察益肾健脾活血方穴位敷贴联合健身气功五禽戏对改善透析治疗的衰弱患者机体的营养状况及衰弱程度的效果及影响,为透析患者衰弱的康复治疗提供依据。方法采用随机对照研究方法,便利抽样法选取南京中医药大学附属医院肾内科2020年4月至2021年12月住院规律透析治疗的衰弱患者80例,按照随机数字表法分为对照组与试验组各40例。对照组采用规律透析、基础治疗及饮食护理,试验组在此基础上采用健脾益肾活血方穴位敷贴联合健身气功五禽戏。比较2组患者干预前、干预12周后实验室检查结果、主观整体评估量表得分及中医症状得分;比较2组患者干预前及干预4、8、12周后不同时间点的Fried衰弱量表得分变化。结果对照组年龄(54.08±11.34)岁,男23例,女17例。试验组年龄(57.38±9.89)岁,男19例,女21例。干预4、8、12周后不同时间点试验组的Fried衰弱量表得分分别为2(2,2)、1(1,2)、1(0,1)分,低于对照组的3(2,4)、2(2,3)、2(2,3)分,其时间效应、组间效应及交互效应的比较,差异均有统计学意义(F=105.76、18.38、46.67,均P中医症状得分为(4.68±2.50)分,低于对照组的(9.58±4.40)分,差异有统计学意义(t=6.13,P<0.01)。结论益肾健脾活血方穴位敷贴联合健身气功五禽戏可有效改善透析衰弱患者的营养状况,减轻患者的衰弱程度。

关键词：透析益肾健脾活血方穴位敷贴五禽戏衰弱

计算机辅助复方苦参注射液中抑制p21活化激酶1的活性成分预测及分子机制研究

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生物医学工程学杂志 2024年第2期41卷 313-320页

作者：林琳常静杰田耀洲陈姣南京中医药大学附属中西医结合医院南京210028 江苏省中医药研究院南京210028 广州中医药大学深圳医院(福田) 广东深圳518000

靶向p21活化激酶1(PAK1)是胰腺癌治疗的新策略。复方苦参注射液中含有多种抗胰腺癌成分,但具体作用靶点未知。本研究基于分子对接的虚拟筛选发现,复方苦参注射液中的14α-羟基苦参碱与PAK1的别构调节位点具有较高的结合自由能。分子动... 详细信息

靶向p21活化激酶1(PAK1)是胰腺癌治疗的新策略。复方苦参注射液中含有多种抗胰腺癌成分,但具体作用靶点未知。本研究基于分子对接的虚拟筛选发现,复方苦参注射液中的14α-羟基苦参碱与PAK1的别构调节位点具有较高的结合自由能。分子动力学模拟发现,14α-羟基苦参碱使PAK1的α1和α2螺旋向外延伸形成一个较深的别构调节口袋,同时诱导三磷酸腺苷(ATP)结合口袋处的β-折叠向内关闭,导致ATP结合口袋处于“半闭合”状态而失活。当去除14α-羟基苦参碱后,PAK1从失活构象向活性构象转变,因此推测,14α-羟基苦参碱可能是PAK1的可逆别构调节抑制剂。本研究采用现代技术方法对中药活性成分进行研究,为天然产物的开发利用及寻找新的胰腺癌治疗方案奠定基础。

关键词：复方苦参注射液 p21活化激酶1 14α-羟基苦参碱胰腺癌分子对接分子动力学模拟