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温肾通督方促进小鼠脊髓损伤的修复

中国组织工程研究 2025年第6期29卷 1118-1126页

作者：赵瑞华陈思娴郭杨石磊吴承杰吴毛杨光露张昊恒马勇南京中医药大学中医学院·中西医结合学院江苏省南京市210023 南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室江苏省南京市210023 南京中医药大学无锡附属医院江苏省中医退行性骨关节病临床医学创新中心江苏省无锡市214071

背景:前期研究证实,温肾通督方可通过抑制脾脏B细胞焦亡、促进微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片、影响小胶质细胞迁移和浸润、促进受损神经元恢复、降低脊髓损伤后神经元凋亡等促进脊髓损伤恢复,但其机制尚不明确。目的:探讨温肾通督方对脊... 详细信息

背景:前期研究证实,温肾通督方可通过抑制脾脏B细胞焦亡、促进微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片、影响小胶质细胞迁移和浸润、促进受损神经元恢复、降低脊髓损伤后神经元凋亡等促进脊髓损伤恢复,但其机制尚不明确。目的:探讨温肾通督方对脊髓损伤小鼠髓系细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)及PI3K/Akt信号通路的影响。方法:取36只C57BL/6小鼠,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、温肾通督方组,每组12只。模型组与温肾通督方组采用改良Allen’s法制备小鼠T10脊髓损伤模型,造模后第1天,温肾通督方组灌胃给予温肾通督方,假手术组、模型组灌胃给予生理盐水,每天1次,连续给药28 d。给药期间,通过BMS评分和斜板实验评价各组小鼠运动功能;造模后第7,28天,采用苏木精-伊红染色观察各组小鼠脊髓组织病理变化,免疫荧光染色双标法检测脊髓组织离子化钙结合适配分子1(ionized calcium binding adaptor molecule 1,IBA1)、TREM2蛋白表达,Western blot检测脊髓组织TREM2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl2、Bax、Caspase3蛋白表达。结果与结论:①BMS评分和斜板实验结果表明,脊髓损伤造模后小鼠后肢运动功能下降,而经过温肾通督方治疗后,脊髓损伤小鼠后肢运动功能明显提升。②苏木精-伊红染色结果显示,与模型组比较,温肾通督方小鼠脊髓组织病理结构明显改善,表现为背侧白质和神经元萎缩程度、细胞质空泡化降低及炎性细胞浸润减少等。③免疫荧光染色结果显示,造模后第7天,模型组IBA1、TREM2蛋白表达均低于假手术组(P<0.05),温肾通督方组IBA1、TREM2蛋白表达均高于模型组(P<0.05);造模后第28天,模型组TREM2蛋白表达低于假手术组(P<0.05),温肾通督方组小鼠脊髓组织中的TREM2蛋白表达高于模型组(P<0.05)。④Western blot检测结果表明,造模后第7天,与假手术组相比,模型组TREM2、Akt蛋白表达及Bcl2/Bax比值降低(P<0.05),p-Akt、Bax蛋白表达及p-Akt/Akt比值升高(P<0.05);与模型组相比,温肾通督方组TREM2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl2蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Ak、Bcl2/Bax比值升高(P<0.05),Bax、Caspase3蛋白表达降低(P<0.05)。造模后第28天,与假手术组相比,模型组TREM2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl2蛋白表达及Bcl2/Bax比值降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,温肾通督方组TREM2、PI3K、Akt、p-Akt、Bcl2蛋白表达及Bcl2/Bax比值升高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05)。⑤结果表明,温肾通督方可能通过上调小胶质细胞TREM2激活PI3K/Akt信号通路,抑制神经元凋亡发挥神经保护作用,进而促进脊髓损伤的修复。

关键词：脊髓损伤温肾通督方小胶质细胞髓系细胞触发受体2 PI3K/Akt信号通路

温肾通络止痛方对小鼠H型骨微血管内皮细胞/骨髓间充质干细胞共培养体系的影响

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中国组织工程研究 2025年第1期29卷 8-15页

作者：周士杰李沐哲员浬张天驰牛园园朱弈桦周勤峰郭杨马勇王礼宁南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室江苏省南京市210023 南京中医药大学无锡附属医院江苏省中医退行性骨关节病临床医学创新中心江苏省无锡市214071 南京中医药大学中医学院·中西医结合学院江苏省南京市210023

背景:骨骼依赖血管与骨细胞之间的密切连接来维持完整性,骨骼处在生理低氧环境中,因此在低氧环境下研究血管生成与骨生成具有重要意义。目的:探究在低氧环境下温肾通络止痛方对H型骨微血管内皮细胞/骨髓间充质干细胞共培养体系的影响及... 详细信息

背景:骨骼依赖血管与骨细胞之间的密切连接来维持完整性,骨骼处在生理低氧环境中,因此在低氧环境下研究血管生成与骨生成具有重要意义。目的:探究在低氧环境下温肾通络止痛方对H型骨微血管内皮细胞/骨髓间充质干细胞共培养体系的影响及相关机制。方法:运用酶消化法及流式分选技术,分选小鼠H型血管特异型骨微血管内皮细胞;应用骨髓贴壁法分离获取小鼠骨髓间充质干细胞;采用Transwell小室以及缺氧培养工作站建立两种细胞低氧共培养体系,使用50,100μg/m L质量浓度温肾通络止痛方冻干粉进行干预;通过划痕迁移实验与管形成实验评估共培养体系内H型骨微血管内皮细胞的成血管功能;通过碱性磷酸酶染色与茜素红染色评估共培养体系内骨髓间充质干细胞的成骨分化能力;使用Western Blotting与q-PCR检测共培养体系内H型骨微血管内皮细胞中PDGF/PI3K/AKT信号轴相关分子的蛋白表达及mRNA表达。结果与结论:(1)与常氧组相比,低氧组H型骨微血管内皮细胞划痕迁移率及新生血管长度均显著升高(P<0.05),骨髓间充质干细胞成骨分化能力增强(P<0.05);PDGF/PI3K/AKT信号轴相关分子的蛋白、mRNA表达升高(P<0.05);(2)与低氧组相比,经不同质量浓度温肾通络止痛方干预后H型骨微血管内皮细胞划痕迁移率及新生血管长度进一步提高(P<0.05),骨髓间充质干细胞成骨分化能力更强(P<0.05),PDGF/PI3K/AKT信号轴相关分子的蛋白、mRNA表达也进一步升高(P<0.05)。结果表明:低氧条件下H型血管生成及骨生成可能与PDGF/PI3K/AKT信号轴有关,而温肾通络止痛方可能通过激活PDGF/PI3K/AKT信号轴促进“H型血管生成-骨生成”作用从而防治骨质疏松症。

关键词：温肾通络止痛方 H型骨微血管内皮细胞骨髓间充质干细胞低氧血管生成骨生成

大黄酒蒸前后对便秘模型小鼠肠道菌群及免疫环境的影响

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中国实验方剂学杂志 2025年第2期 192-199页

作者：白亚亚田睿史亚军赵重博孙静张丽颜永刚唐于平张桥陕西中医药大学陕西省中药饮片工程技术研究中心陕西省秦岭中草药应用开发工程技术研究中心陕西省中医药管理局中药配伍重点研究室南京中医药大学翰林学院

目的：探究大黄酒蒸前后对便秘模型小鼠治疗的作用，以及潜在的作用机制。方法：将54只雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、乳果糖组(1.5 mg·kg-1)，生、熟大黄高、中、低剂量组(8、4、1 g·kg-1)，除空白组外，其余各组灌胃盐酸洛哌... 详细信息

目的：探究大黄酒蒸前后对便秘模型小鼠治疗的作用，以及潜在的作用机制。方法：将54只雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、乳果糖组(1.5 mg·kg-1)，生、熟大黄高、中、低剂量组(8、4、1 g·kg-1)，除空白组外，其余各组灌胃盐酸洛哌丁胺(6 mg·kg-1)构建便秘模型。造模2周后，各给药组灌胃相应剂量药液，空白组及模型组给予等体积生理盐水，1次/d，连续2周。给药结束后，收集粪便用于肠道菌群的16S rRNA测序；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测结肠组织中胃泌素（GAS）、胃动素（MTL）、白细胞介素-6（IL-6）、γ干扰素（IFN-γ）含量；苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理学变化；流式细胞仪检测外周血中CD4+、CD8+及调节性T细胞（Treg）比例变化。结果：与空白组比较，模型组24 h粪便粒数、质量及粪便含水率显著降低（P<0.01），结肠可见黏膜上皮坏死脱落，固有层内局部肠腺变性、坏死、萎缩，坏死区见少量淋巴细胞散在浸润，GAS及MTL含量显著降低（P<0.01）,IL-6、IFN-γ含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,CD4+、CD8+及Treg比例显著下降（P<0.01）。与模型组比较，生、熟大黄高剂量组24 h粪便粒数、质量及粪便含水率明显升高（P<0.05,P<0.01），结肠病理损伤有不同程度缓解，GAS、MTL、IL-6、IFN-γ含量明显回调（P<0.05,P<0.01）,CD4+、CD8+细胞比例显著上升（P<0.01）,Treg比例虽有升高趋势，但差异无统计学意义。肠道菌群结果表明，与空白组比较，模型组中扩增子序列变体（ASV）数及Alpha多样性降低，Beta多样性存在明显差异，乳杆菌属（Lactobacillus）相对丰度降低，芽孢杆菌属（Bacillus）及螺杆菌属（Helicobacter）相对丰度升高；与模型组比较，生、熟大黄高剂量组ASV数及Alpha多样性有所升高，Beta多样性有向空白小鼠转归的趋势，乳杆菌属相对丰度升高，芽孢杆菌属及螺杆菌属相对丰度降低。结论：生、熟大黄可能通过改善肠道菌群失调，促进免疫系统激活，抑制炎症因子释放以提升胃肠功能，这可能是其治疗便秘的潜在作用机制之一。

关键词：大黄酒蒸便秘模型小鼠肠道菌群细胞免疫炎症因子胃肠激素

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荆芥不同器官在不同采收时间的ICP-AES矿质元素分析

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光谱学与光谱分析 2014年第2期34卷 553-556页

作者：单鸣秋于生于丽霞丁安伟南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室江苏南京210023

各种矿质元素在荆芥各器官间贮藏差异。从矿质元素角度了解荆芥合理的药用部位组成以及收时间。应用ICP-AES技术,测定并分析了在不同采收时间,荆芥的不同器官矿质元素含量、累积量和比例。结果显示,在不同采收时间,(1)荆芥穗中常量矿质... 详细信息

各种矿质元素在荆芥各器官间贮藏差异。从矿质元素角度了解荆芥合理的药用部位组成以及收时间。应用ICP-AES技术,测定并分析了在不同采收时间,荆芥的不同器官矿质元素含量、累积量和比例。结果显示,在不同采收时间,(1)荆芥穗中常量矿质元素K,P和微量矿质元素Cu含量最高,荆芥叶中常量元素Mg,Ca,Na和微量元素Fe,Mn,Zn含量最高。(2)荆芥不同器官所含常量元素中Ca和K含量最高,Na含量最低;所含微量元素中Fe含量最高,Mo含量最低。(3)在荆芥茎中,K∶P最高,而Zn∶Cu则为最低;Ca∶Mg和Fe∶Mn在荆芥穗中最低。(4)随着采收时间的推移,各元素在荆芥不同器官中的含量变化并不显著。荆芥茎中各矿质元素含量均较低;从矿质元素含量的角度看,在合理的采收时间范围内,荆芥的质量受时间影响不显著。

关键词：荆芥矿质元素

采用微波消解-ICP-AES法对不同产地果用银杏叶无机元素分析与评价

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光谱学与光谱分析 2013年第3期33卷 808-812页

作者：姚鑫周桂生唐于平尚尔鑫宿树兰钱大玮段金廒南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室江苏南京210046

采用微波消解-ICP-AES法探索不同产地果用银杏采果后叶中无机元素含量,用主成分分析法对其所含元素进行分析和评价。结果表明,不同产地果用银杏叶含有22～26种无机元素,其中Fe,Zn,Cu,Mn,Cr,Co,Ni,Sr,B,Si和Ni等11种为人体必需微量元素,C... 详细信息

采用微波消解-ICP-AES法探索不同产地果用银杏采果后叶中无机元素含量,用主成分分析法对其所含元素进行分析和评价。结果表明,不同产地果用银杏叶含有22～26种无机元素,其中Fe,Zn,Cu,Mn,Cr,Co,Ni,Sr,B,Si和Ni等11种为人体必需微量元素,Ca,P,K,Na和Mg等五种为人体必需宏量元素;主成分分析选择了7个因子,并对果用银杏叶进行了综合评价,其综合评价函数为F=0.230 17F1+0.122 39F2+0.079 67F3+0.078 97F4+0.065 25F5+0.062 03F6+0.056 71F7,结果发现江苏泰兴、河北石家庄以及山东泰安样品综合排序分列1,2和3位,表明从无机元素考虑这三个产地果用银杏叶样品品质较好。本研究为我国银杏资源的综合利用与开发提供了参考。

关键词：果用银杏叶无机元素主成分分析产地

清心解瘀颗粒抗动脉血栓形成及对TNF-α诱导的***926细胞中Akt/NF-κB信号通路的影响

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中国实验方剂学杂志 2025年第3期 89-97页

作者：何晨晨韦琛谊吕正豪蔡巧燕高铸烨张铃褚剑锋福建中医药大学中西医结合学院中西医结合研究院福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建中医药大学陈可冀学术思想传承工作室中国中医科学院西苑医院

目的：观察清心解瘀颗粒对三氯化铁（FeCl3）诱导大鼠颈动脉血栓形成的作用及其对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导人脐静脉细胞融合细胞（***926）中血栓形成相关蛋白组织因子（TF）、组织因子途径抑制因子（TFPI）的表达及蛋白激酶B（Ak... 详细信息

目的：观察清心解瘀颗粒对三氯化铁（FeCl3）诱导大鼠颈动脉血栓形成的作用及其对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导人脐静脉细胞融合细胞（***926）中血栓形成相关蛋白组织因子（TF）、组织因子途径抑制因子（TFPI）的表达及蛋白激酶B（Akt）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响，初步探究清心解瘀颗粒抑制血栓形成的药效作用机制。方法：取36只SD大鼠，随机分为正常组、模型组、阿司匹林组、清心解瘀颗粒低、中、高剂量组，每组各6只。清心解瘀颗粒低、中、高组给药剂量分别为0.99、1.98、3.96 g·kg-1；阿司匹林组给药剂量为9 mg·kg-1，正常组与模型组给予等体积蒸馏水灌胃。连续预防性灌胃给药14 d后，采用45%的FeCl3溶液建立大鼠颈总动脉血栓模型，取下血管组织后称量大鼠血栓湿重；采用苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠颈总动脉血栓形成情况；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血浆中血管性血友病因子（vWF）、血小板内皮细胞黏附分子-1（PECAM-1）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）及纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的含量；利用TNF-α诱导***926细胞建立内皮细胞损伤模型；采用细胞增殖与活性检测法（CCK-8）筛选清心解瘀颗粒干预浓度；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中TF、TFPI、Akt、p-Akt、NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65蛋白的表达。结果：动物实验结果显示，与正常组比较，模型组的颈动脉血栓质量明显增加（P实验结果显示，31.25、62.5、125、250、500 mg·L-1的清心解瘀颗粒对***926细胞活性无影响，因此后续采用250、500 mg·L-1的清心解瘀颗粒作为干预浓度；Western blot结果显示，与空白组比较，TNF-α刺激后***926细胞中TFPI的表达明显下调（P<0.05）,TF的表达及p-Akt/Akt、p-NF-κB p65/NF-κB p65的比值均明显升高（P<0.05）；清心解瘀颗粒干预后可上调TFPI的表达（P<0.05）并抑制TF的表达及下调p-Akt/Akt、p-NF-κB p65/NF-κB p65的比值（P<0.05）。结论：清心解瘀颗粒具有抑制血栓形成及调节TNF-α诱导内皮细胞中血栓形成相关因子TF、TFPI表达的作用，其机制可能与抑制Akt/NF-κB信号通路的异常活化有关。

关键词：清心解瘀颗粒血栓内皮细胞组织因子蛋白激酶B/核转录因子-κB(Akt/NF-κB)信号通路

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黄柏生物碱成分在二妙丸类方中保护尿酸盐致人血管内皮细胞损伤作用及其配伍变化的研究

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高等学校化学学报 2009年第8期30卷 1522-1527页

作者：尹莲邓海山朱晓勤李欣段金廒丁安伟南京中医药大学药学院江苏省方剂研究重点实验室南京210046

研究对二妙丸类方(二妙丸、三妙丸、四妙丸和加味四妙丸)起重要作用的基本方二妙丸的物质基础及其配伍变化.正交组合二妙丸类方组方药有效部位,四氮唑盐(MTT)法评价优选出对保护尿酸钠结晶(MSU)致人血管内皮细胞(HUVEC)损伤起重要作用... 详细信息

研究对二妙丸类方(二妙丸、三妙丸、四妙丸和加味四妙丸)起重要作用的基本方二妙丸的物质基础及其配伍变化.正交组合二妙丸类方组方药有效部位,四氮唑盐(MTT)法评价优选出对保护尿酸钠结晶(MSU)致人血管内皮细胞(HUVEC)损伤起重要作用的二妙丸黄柏生物碱部位,HPLC/DVD法建立黄柏生物碱部位指纹图谱,HPLC-ESI-MS/MS分析共有峰成分,鉴定了12个生物碱成分,并比较了二妙丸类方有效部位群HPLC/DVD指纹图谱配伍类方前后黄柏生物碱共有峰相对峰面积比值的变化.结果表明,黄柏生物碱配伍二妙丸及其类方后总相对含量分别为122.9%,80.7%,60.2%和94.2%,小檗碱、巴马汀等重要生物碱也呈现较大的变化趋势,茵芋碱、5-羟基小檗碱和四氢巴马汀等成分配伍二妙丸类方后消失.研究显示,基本方二妙丸中的黄柏生物碱是二妙丸类方中保护HUVEC起重要作用的物质基础,其相对含量变化与配伍类方后的功效变化一致.

关键词：二妙丸类方生物碱指纹图谱配伍液质联用

基于药物相互作用对当归-川芎配伍养血补血效应研究

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中国中西医结合杂志 2013年第4期33卷 516-521页

作者：黄美艳尚尔鑫唐于平郭建明史旭芹李伟霞段金廒南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室南京210046

目的采用响应曲面分析法研究当归-川芎配伍养血补血效应相互作用。方法采用乙酰苯肼和环磷酰胺复合法复制小鼠血虚模型,给予不同配比(0∶1、1∶5、2∶5、2∶3、1∶1、3∶2、5∶2、5∶1、1∶0)不同浓度归芎药对后,观察其对外周血常规、... 详细信息

目的采用响应曲面分析法研究当归-川芎配伍养血补血效应相互作用。方法采用乙酰苯肼和环磷酰胺复合法复制小鼠血虚模型,给予不同配比(0∶1、1∶5、2∶5、2∶3、1∶1、3∶2、5∶2、5∶1、1∶0)不同浓度归芎药对后,观察其对外周血常规、脏器指数的影响,采用多指标综合指数法对各指标进行整合,然后运用响应曲面分析法对整合结果进行分析,应用非线性回归的方法确定量效曲线的各个参数,建立三维响应曲面模型,应用Matlab软件构建响应曲面的三维图形。结果在整个三维响应曲面中,表现出协同作用的区域明显较大,其次是相加作用,未见明显的拮抗作用区域。当归与川芎的比例从4∶1到2∶1之间,从小剂量到大剂量,均表现为相加作用。而其他比例,则表现出小剂量为相加,大剂量表现为协同作用。结论本研究结果为中医临床合理地应用当归与川芎提供了科学依据;所采用的方法为定量研究中药配伍相互作用提供了参考。

关键词：当归川芎药对养血响应曲面分析法相互作用

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荆芥内酯在大鼠体内的排泄研究

中国药学杂志 2012年第16期47卷 1318-1323页

作者：姚卫峰耿婷丁安伟张丽南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室南京210046

目的研究荆芥内酯在大鼠体内的排泄情况。方法建立液-液萃取后HPLC测定大鼠尿液、粪便和胆汁中荆芥内酯含量的方法,并对大鼠灌胃/静脉注射荆芥内酯后的排泄情况和排泄特点进行分析。结果大鼠灌胃荆芥内酯(24 ***-1)后,胆汁12 h内、尿液3... 详细信息

目的研究荆芥内酯在大鼠体内的排泄情况。方法建立液-液萃取后HPLC测定大鼠尿液、粪便和胆汁中荆芥内酯含量的方法,并对大鼠灌胃/静脉注射荆芥内酯后的排泄情况和排泄特点进行分析。结果大鼠灌胃荆芥内酯(24 ***-1)后,胆汁12 h内、尿液36 h内的排泄具有明显的雌雄差异(P0.05);静脉注射荆芥内酯(12 ***-1)后,尿液36 h内的排泄具有明显的雌雄差异(P0.05)。结论荆芥内酯在大鼠尿液和胆汁中的排泄具有明显的雌性差异,以原型形式随尿液、粪便和胆汁排泄的量很少,可能主要以代谢产物的形式排出体外。

关键词：荆芥内酯高效液相色谱法排泄尿液粪便胆汁