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固本防哮饮对IL-4联合IL-13诱导的人支气管上皮细胞中CGRP/ILC2及GABA表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：欧炜莹袁雪晶纪建建南京中医药大学附属医院南京中医药大学第一临床医学院

目的：观察固本防哮饮含药血清对白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-13（IL-13）刺激的人支气管上皮细胞（BEAS-2B）中降钙素相关基因肽（CGRP）、γ-氨基丁酸（GABA）及Ⅱ型固有淋巴细胞（ILC2）相关转录因子、细胞因子的表达，探究其... 详细信息

目的：观察固本防哮饮含药血清对白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-13（IL-13）刺激的人支气管上皮细胞（BEAS-2B）中降钙素相关基因肽（CGRP）、γ-氨基丁酸（GABA）及Ⅱ型固有淋巴细胞（ILC2）相关转录因子、细胞因子的表达，探究其改善支气管上皮细胞Ⅱ型炎症的可能机制。方法：用含有高（20%）、中（15%）、低（10%）剂量的固本防哮饮含药血清及孟鲁斯特钠（10%）含药血清对IL-4和IL-13联合刺激的BEAS-2B细胞进行干预，实时荧光定量PCR（Real-time qPCR）法检测各组细胞中CGRP、GABA、粘蛋白（MUC）5AC、胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）、白细胞介素-25（IL-25）、白细胞介素-33（IL-33）、白细胞介素-5（IL-5）、GATA结合蛋白3（GATA3）、B细胞淋巴瘤/白血病11B （BCL11b）mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞CGRP、MUC5AC蛋白相对表达；免疫荧光技术检测CGRP和GABA在细胞中的相对表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测培养基上清和细胞上清中IL-33、MUC5AC、IL-5的蛋白含量；过碘酸-雪夫反应染色法（PAS染色）检测黏蛋白的分泌情况。结果：IL-4联合IL-13刺激细胞后，与正常组比较，各给药组CGRP、GABA、MUC5AC、TSLP、IL-25、IL-33 mRNA的表达量显著上升（P<0.01）；与模型组比较，固本防哮饮含药血清各剂量组可显著降低造模后细胞中CGRP、GABA、MUC5AC、IL-5、GATA3、BCL11b mRNA表达(P<0.01)，并表现出剂量依赖性。与正常组比较，模型组CGRP、GABA、MUC5AC、IL-33和IL-5蛋白表达增加（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，固本防哮饮含药血清各剂量组细胞中CGRP、GABA、MUC5AC、IL-33和IL-5的蛋白表达显著降低(P<0.05，P<0.01)。与正常组比较，模型组CGRP和GABA的平均荧光强度明显升高（P<0.01）；与模型组比较，固本防哮饮含药血清各剂量组中CGRP和GABA的平均荧光强度显著降低（P<0.01）。与正常组比较，模型组中粘蛋白的分泌增多；与模型组比较，固本防哮饮含药血清各剂量组中黏蛋白的分泌减少。结论：固本防哮饮通过减轻Ⅱ型免疫性气道炎症和减少气道粘液分泌，达到防治支气管哮喘的目的，其可能的机制是固本防哮饮降低了CGRP、GABA、 MUC5AC及ILC2相关转录因子的表达。

关键词：支气管哮喘固本防哮饮降钙素相关基因肽 γ-氨基丁酸 Ⅱ型固有淋巴细胞

基于LAMP2A介导的自噬探讨仙鹤草-黄连含药血清对结直肠癌细胞的作用及机制研究

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中国中药杂志 2024年

作者：何亚萍侯敏艳沈鑫玲李智育徐敏陈轩张淑娟熊晗彭海燕南京中医药大学第一临床医学院南京中医药大学附属医院

探讨仙鹤草-黄连 (Agrimoniae Herba-Coptidis Rhizoma，XHC-HL) 含药血清通过溶酶体相关膜蛋白2A型(lysosome-associated membrane protein type 2A，LAMP2A) 介导的自噬对人结直肠癌HT29和HCT116细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。通过生物信息学分析LAMP2A在结直肠癌的发生发展中的作用机制；蛋白免疫印迹（Western blot，WB）检测LAMP2A蛋白在结直肠癌细胞株中的表达；利用慢病毒转染技术构建LAMP2A干扰HT29及过表达HCT116结直肠癌细胞模型；实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time PCR）实验检测转染效率；结直肠癌HT29和HCT116 细胞分别给予不同浓度的仙鹤草-黄连含药血清，采用cell counting kit-8 (CCK-8) 法检测细胞增殖，筛选含药血清最佳干预浓度及时间。将HT29细胞分为NC（空白对照）组、XHC-HL（仙鹤草-黄连药对处理）组、XHC-HL+shLAMP2A（仙鹤草-黄连药对处理+干扰LAMP2A）组；将HCT116细胞分为NC（空白对照）组、XHC-HL（仙鹤草-黄连药对处理）组、XHC-HL+LAMP2A（仙鹤草-黄连药对处理+过表达LAMP2A）组，CCK-8检测细胞活力；平板克隆实验检测细胞增殖能力；划痕实验及Transwell迁移实验检测细胞迁移能力；Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot 技术和real-time PCR技术检测仙鹤草-黄连药对对结直肠癌细胞LAMP2A、热休克蛋白70 (the heat shock protein 70， HSC70)、热休克蛋白90 (The heat shock protein 90， HSP90)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase， GAPDH）的蛋白表达水平及 mRNA 的影响。通过差异表达分析发现结直肠癌患者相对于正常对照样本的LAMP2A表达水平有显著升高，生存分析提示伴侣介导的自噬（chaperone-mediated autophagy，CMA）关键分子LAMP2A与结直肠癌的进展密切关联，通过基因集功能富集分析发现LAMP2A高表达患者显著上调了血管生成，免疫抑制等肿瘤进展相关信号通路，且免疫浸润分析发现LAMP2A高表达患者其肿瘤微环境会有更少的CD8T细胞的浸润。仙鹤草-黄连含药血清可以抑制HT29和HCT116细胞活力，最佳干预质量分数及时间为20%、48 h。与NC组相比，仙鹤草-黄连药对均可抑制HT29和HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭，诱导细胞凋亡，药对处理干扰LAMP2A组均能进一步抑制肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力并促进凋亡，而过表达LAMP2A可逆转含药血清处理后结直肠癌细胞被抑制的增殖、迁移、侵袭能力，减少细胞凋亡率。仙鹤草-黄连药对含药血清对CMA具有抑制作用，通过LAMP2A介导的自噬，上调LAMP2A、 HSC70、HSP90蛋白和基因的表达，下调底物蛋白GAPDH的表达发挥抗CRC功能。综上，仙鹤草-黄连药对可通过下调CMA关键分子蛋白LAMP2A表达，抑制CMA活性，从而抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭，并诱导细胞凋亡。

关键词：仙鹤草-黄连药对结直肠癌 LAMP2A 分子伴侣介导自噬

清心滋肾汤治疗阴虚火旺型绝经综合征的临床疗效及调节KNDy的神经内分泌机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第6期30卷 119-125页

作者：周雨欣张镕晴卢苏许美娟陈赟南京中医药大学第一临床医学院南京210023 南京中医药大学附属医院江苏省中医院南京210029

目的:探究清心滋肾汤对绝经综合征阴虚火旺型患者治疗前后的综合疗效、症状评分、神经内分泌指标的影响及其调节KNDy神经元的作用机制。方法:选取60例于南京中医药大学附属江苏省中医院更年期专病门诊就诊且符合绝经综合征阴虚火旺诊断... 详细信息

目的:探究清心滋肾汤对绝经综合征阴虚火旺型患者治疗前后的综合疗效、症状评分、神经内分泌指标的影响及其调节KNDy神经元的作用机制。方法:选取60例于南京中医药大学附属江苏省中医院更年期专病门诊就诊且符合绝经综合征阴虚火旺诊断的患者,随机分为观察组(清心滋肾汤组)和对照组(芬吗通组)各30例,观察期为12周,比较两组治疗前后综合疗效、潮热汗出次数及程度、改良Kupperman评分、下丘脑神经元活性肽Kisspeptin、神经激肽B(NKB)、强啡肽(Dyn)、卵泡刺激素(FSH)和雌二醇(E2)在血清学水平的变化。结果:①临床综合疗效比较。治疗后,与对照组比较,两组患者综合疗效相当,差异无统计学意义。②潮热、汗出次数及程度比较。与本组治疗前比较,治疗后两组患者潮热、汗出次数及程度均明显降低(P临床证候群,其主要机制是作用于下丘脑KNDy神经元通路,下调Kisspeptin、NKB水平,上调Dyn水平,进一步缓解绝经综合征症状及改善患者血清性激素水平。该研究为中医药治疗绝经综合征潮热症状提供新思路。

关键词：绝经综合征清心滋肾汤 KNDy神经元作用机制

女性生殖行为与类风湿性关节炎的因果关系:一项孟德尔随机化研究

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中国循证医学杂志 2024年第10期24卷 1149-1155页

作者：刘晨茜汪娅蓓汪悦南京中医药大学第一临床医学院南京210023 江苏省中医院南京210029

目的采用两样本孟德尔随机化方法探讨女性生殖行为与类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的因果关系,以期为临床防治提供理论依据。方法在大型公开可检索的数据库中获取全基因关联分析汇总数据,选取4个与生殖行为相关的特征(初潮... 详细信息

目的采用两样本孟德尔随机化方法探讨女性生殖行为与类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的因果关系,以期为临床防治提供理论依据。方法在大型公开可检索的数据库中获取全基因关联分析汇总数据,选取4个与生殖行为相关的特征(初潮、绝经、首次妊娠年龄和末次妊娠年龄)作为暴露因素,RA作为结局因素,筛选出与暴露因素表型强相关的单核苷酸多态性作为工具变量,进行两样本孟德尔随机化分析,以评估暴露与疾病之间的潜在因果关系。结果(1)两样本孟德尔随机化的逆方差加权法结果显示,首次妊娠年龄和末次妊娠年龄都与RA发病风险呈负向因果关系[OR=0.91,95%CI(0.85,0.98),P=0.011;OR=0.54,95%CI(0.31,0.93),P=0.026],初潮和绝经与RA无因果关系。敏感性分析结果表明以上因果关系稳健,MR-Egger intercept分析未检测到潜在的水平多效性(P首次妊娠年龄-RA=0.169,P末次妊娠年龄-RA=0.283)。(2)反向孟德尔随机化分析显示,RA与首次妊娠年龄存在正向因果关联,与末次妊娠年龄不存在因果关系[OR=1.07,95%CI(1.02,1.11),P=0.001]。(3)多变量孟德尔随机化结果显示,女性首次妊娠年龄与RA风险呈负向因果关系[OR=0.88,95%CI(0.80,0.97),P=0.010],女性末次妊娠年龄也与RA风险呈负向因果关系[OR=0.68,95%CI(0.48,0.97),P=0.033]。(4)女性怀孕年龄与患RA的风险之间存在负相关关系,提示其具有潜在的保护作用。结论妊娠年龄可能与RA发病风险呈负相关的因果关系,初潮和绝经与RA无因果关系。

关键词：孟德尔随机化生殖行为类风湿性关节炎因果推断

膝痹宁Ⅱ联合脂肪干细胞外泌体调控线粒体自噬改善膝骨关节炎的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 111-119页

作者：康俊峰揭立士伏厚宇廖太阳施蕾苏子珊于利凯魏义保刘德仁田地茆军王培民南京中医药大学附属医院南京210004 山西中医药大学附属医院太原030024 南京中医药大学第一临床医学院南京210023

目的:观察膝痹宁Ⅱ及脂肪干细胞外泌体(ADSC-Exos)单独及联合应用对软骨退变及线粒体自噬的影响,探讨其改善膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法:将40只SD大鼠分为假手术组、模型组、ADSC-Exos组(4×10^(8)个/周)、膝痹宁组(8 g·kg^(-1)·... 详细信息

目的:观察膝痹宁Ⅱ及脂肪干细胞外泌体(ADSC-Exos)单独及联合应用对软骨退变及线粒体自噬的影响,探讨其改善膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法:将40只SD大鼠分为假手术组、模型组、ADSC-Exos组(4×10^(8)个/周)、膝痹宁组(8 g·kg^(-1)·d^(-1))和ADSC-Exos(4×10^(8)个/周)+膝痹宁(8 g·kg^(-1)·d^(-1))组。采用用前交叉韧带切断术(ACLT)建立膝骨关节炎模型。评估大鼠痛敏状态、微计算机断层扫描技术(Micro-CT)及病理染色检测膝关节及软骨组织退变程度、免疫荧光观察p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)B表达情况、酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-15水平、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、含血小板结合蛋白基序的解聚素金属5(ADAMTS5)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)、软骨蛋白聚糖抗体(ACAN)、PTEN诱导激酶1(PINK1)、帕金蛋白(Parkin)、p62、LC3A/B蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠冷刺激缩足阈值及机械痛敏阈值逐渐下降,软骨组织出现不同程度的磨损及缺失,软骨组织退变,血清IL-1β、IL-6、IL-15和TNF-α含量明显升高(P<0.01),软骨组织中MMP-3、MMP-13和ADAMTS5蛋白表达升高,ColⅡ、TIMP1和ACAN蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠冷刺激缩足阈值及机械痛敏阈值升高,软骨组织退变程度减轻,血清IL-1β、IL-6、IL-15和TNF-α含量降低(P<0.05,P<0.01),软骨组织中MMP-3、MMP-13和ADAMTS5蛋白表达降低,ColⅡ、TIMP1和ACAN蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);且以Exos+膝痹宁组改变最为明显。结论:ADSCs-Exos及膝痹宁Ⅱ均可以通过促进PINK1/Parkin信号通路表达,提高软骨细胞线粒体自噬水平,延缓软骨组织退变,且二者联用可以增强疗效。

关键词：脂肪干细胞外泌体膝痹宁Ⅱ 线粒体自噬软骨退变膝骨关节炎

仙鹤草-黄连通过调控分子伴侣介导自噬抑制结直肠癌的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第18期30卷 61-71页

作者：何亚萍侯敏艳彭海燕南京中医药大学第一临床医学院南京210029 南京中医药大学附属医院南京210029

目的:观察仙鹤草-黄连药对(XHC-HL)对结直肠肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及对自噬的影响,并探讨XHC-HL通过调控分子伴侣介导自噬(CMA)抑制结直肠癌的作用机制。方法:制备XHC-HL含药血清,培养人结直肠癌细胞株HT29和LOVO,分为空白组(... 详细信息

目的:观察仙鹤草-黄连药对(XHC-HL)对结直肠肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及对自噬的影响,并探讨XHC-HL通过调控分子伴侣介导自噬(CMA)抑制结直肠癌的作用机制。方法:制备XHC-HL含药血清,培养人结直肠癌细胞株HT29和LOVO,分为空白组(20%空白血清),XHC-HL组(5%、10%、20%含药血清),5-氟尿嘧啶(5-FU)组。用细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测细胞活力;5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色法检测细胞增殖能力;划痕实验及Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测XHC-HL对自噬关键分子酵母Atg6同系物-1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)及p62的影响;Western blot、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测XHC-HL对CMA相关蛋白和mRNA影响。结果:与空白组比较,XHC-HL组和5-FU组均能抑制HT-29和LOVO细胞活力(P室的数量均显著减少(P<0.01),细胞侵袭个数均降低(P<0.01),细胞凋亡增多(P<0.01)。Western blot结果显示,与空白组比较,XHC-HL组和5-FU组2种细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ的表达明显增加(P<0.05,P<0.01),而p62的水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与空白组比较,XHC-HL组和5-FU组2种细胞中溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)、热休克同源蛋白70(HSC70)、热休克蛋白90(HSP90)蛋白表达量均有不同程度的降低,甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达水平显著增高(P<0.01)。与空白组比较,XHC-HL组和5-FU组2种细胞中LAMP2A、HSC70、HSP90 mRNA水平均下调,GAPDH mRNA表达水平显著上调(P<0.01)。结论:XHC-HL可通过抑制CMA活性,从而抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,诱导其自噬,并促进细胞凋亡。

关键词：结直肠癌仙鹤草-黄连药对分子伴侣介导自噬中医药治疗

从生物钟对卵巢功能的影响探析调周法的科学内涵

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南京中医药大学学报 2024年第10期40卷 1080-1086页

作者：谈勇陈婕张玉涵夏桂成南京中医药大学第一临床医学院江苏南京210023

国医大师夏桂成教授立足于中医学天人相应的观点,重视女性生殖节律中的阴阳消长转化,创立“调整月经周期节律法”。女性的特殊生理现象表现在周期节律上,生物钟是产生和调节生物体生理行为和规律的内在机制,生物钟基因广泛表达于卵巢颗... 详细信息

国医大师夏桂成教授立足于中医学天人相应的观点,重视女性生殖节律中的阴阳消长转化,创立“调整月经周期节律法”。女性的特殊生理现象表现在周期节律上,生物钟是产生和调节生物体生理行为和规律的内在机制,生物钟基因广泛表达于卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞及黄体细胞中,并且参与类固醇激素的合成、卵泡体细胞的分化、卵泡发育以及排卵等多个生理过程,在女性生殖内分泌中发挥重要作用。昼夜节律紊乱可导致女性月经失调、卵巢功能障碍、内分泌代谢紊乱等生殖疾病。中医时间医学与生物钟节律系统有共通之处,充分认识生物钟对女性卵巢功能的影响,揭示其科学的内涵,明确其调控方法和机制,对抵御生殖障碍性疾病,优化生育具有积极的促进作用。

关键词：调周法生物钟卵巢功能女性生殖

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伏风理论指导儿科过敏性疾病辨证论治

南京中医药大学学报 2024年第10期40卷 1097-1102页

作者：汪受传南京中医药大学第一临床医学院江苏南京210029

提出特禀质儿童的体质特点是伏风内潜,一旦患儿为外来“虚邪贼风”所引,则发生如鼻鼽、风咳、哮喘、风瘾、湿疹等“风病”(过敏性疾病)。这类风病治疗应当以消风法为主,辨证配用散邪、除湿、润燥、豁痰、凉血、养血、固表等治法治疗。... 详细信息

提出特禀质儿童的体质特点是伏风内潜,一旦患儿为外来“虚邪贼风”所引,则发生如鼻鼽、风咳、哮喘、风瘾、湿疹等“风病”(过敏性疾病)。这类风病治疗应当以消风法为主,辨证配用散邪、除湿、润燥、豁痰、凉血、养血、固表等治法治疗。介绍了如何以伏风理论认识小儿鼻鼽、风咳、哮喘、风瘾、湿疹等过敏性疾病的病因病机、临床辨证,以及以消风法为主治疗这些疾病的有效经验方药。

关键词：伏风消风法过敏性疾病辨证论治

国医大师周仲瑛融贯古今创建病机理论新体系学术思想述要

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南京中医药大学学报 2024年第10期40卷 1071-1079页

作者：叶放吴勉华周学平程海波李柳冯哲金路朱垚郭立中赵智强王志英金妙文南京中医药大学第一临床医学院江苏南京210023

概述了国医大师周仲瑛教授以创建中医病机理论新体系为核心学术思想的探索历程、学术意义,对其理论内涵进行解读。作为中医高等教育教材建设的开拓者,周仲瑛教授创建了中医内科脏腑辨证纲要,坚持不懈开展病机理论创新研究,取得丰硕的学... 详细信息

概述了国医大师周仲瑛教授以创建中医病机理论新体系为核心学术思想的探索历程、学术意义,对其理论内涵进行解读。作为中医高等教育教材建设的开拓者,周仲瑛教授创建了中医内科脏腑辨证纲要,坚持不懈开展病机理论创新研究,取得丰硕的学术成果,充实、发展了中医理论学术体系。在对外感热病和内伤急难症临床诊疗过程中,系统创建了瘀热论、癌毒论等病机新理论,据此立法用药能够提高临床疗效,感悟出辨识病机是辨证论治的关键环节。周仲瑛教授晚年以整体观为指引,提出“病机十三条”,构建了中医病机辨证新体系,突出复合病机、病机要素因果链对临床复杂性病证的指导价值,形成以“审证求机,活化辨证”思想为灵魂的理论。该理论突破了从单一病机或固定证型辨证论治的僵化思维,以整体观思想重构了中医理论框架,是现代中医学的一次重大学术创新。

关键词：中医理论辨证论治病机病机十三条学术思想周仲瑛