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治疗性单克隆抗体修饰变异体的液质联用分析技术进展

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化学试剂 2024年

作者：叶沛均左成意刘振虎廖玉玲江正瑾王启钦暨南大学药学院药物分析研究中心

治疗性单克隆抗体（mAbs）因具有靶向性高、药效作用强等优点而广泛应用于恶性肿瘤和自身免疫性疾病的高效治疗，成为全球新药研发热点。由于抗体药物自身结构复杂，尤其在生产、储存等过程甚至在病人体内易出现各种修饰变化，如氧化、... 详细信息

治疗性单克隆抗体（mAbs）因具有靶向性高、药效作用强等优点而广泛应用于恶性肿瘤和自身免疫性疾病的高效治疗，成为全球新药研发热点。由于抗体药物自身结构复杂，尤其在生产、储存等过程甚至在病人体内易出现各种修饰变化，如氧化、脱酰胺化、糖基化等，这些修饰不仅会增加mAbs的异质性，还会影响其稳定性和生物活性，因此监测mAbs体内外修饰变化情况，对于药物研发、生产及体内命运动态变化分析意义重大。液质联用技术（LC-MS）通过将液相色谱分离和质谱检测相结合已成为抗体质量研究和临床监测的重要分析手段，而mAbs体内分析的生物样本前处理面临着基质干扰严重以及血药浓度低等分析挑战。系统总结了抗体修饰变异体分析技术涉及的样本前处理过程和LC-MS技术的应用进展。

关键词：单克隆抗体修饰变异体分析样品前处理液质联用技术

免疫细胞在支气管哮喘发病机制中的作用研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第5期40卷 465-471页

作者：屯妮萨古丽·艾买提江李改茹新疆医科大学药学院药物分析教研室新疆乌鲁木齐830017

支气管哮喘是由各种免疫细胞共同参与的慢性气道炎症性疾病。T淋巴细胞[包括1型辅助T(Th1)细胞、Th2细胞、Th17细胞、调节性T细胞(Treg)、滤泡辅助性T(Tfh)细胞和细胞毒性T(Tc)细胞]、固有淋巴样细胞(ILC)、B细胞、粒细胞(肥大细胞、嗜... 详细信息

支气管哮喘是由各种免疫细胞共同参与的慢性气道炎症性疾病。T淋巴细胞[包括1型辅助T(Th1)细胞、Th2细胞、Th17细胞、调节性T细胞(Treg)、滤泡辅助性T(Tfh)细胞和细胞毒性T(Tc)细胞]、固有淋巴样细胞(ILC)、B细胞、粒细胞(肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞)、巨噬细胞及树突状细胞(DC)等作为参与哮喘免疫机制的主要角色,被变应原激活后,分泌各自特异性细胞因子,其在功能上相互作用、相互联系,形成复杂的哮喘相关免疫细胞相互作用网络体系。哮喘相关免疫细胞以固有免疫和获得性免疫,细胞免疫和体液免疫等免疫应答的方式,进行多靶点和多环节的动态调控免疫机制参与哮喘发病机制。Treg、调节性B细胞(Breg)、巨噬细胞及DC的免疫抑制作用有待进一步深入研究,有望成为治疗哮喘和研发新药的重要靶点。

关键词：支气管哮喘免疫细胞发病机制综述

基于四面体DNA框架的循环信号放大策略用于microRNA的电化学检测

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分析试验室 2024年第2期43卷 274-281页

作者：黄静戴志龙陈观宇饶盼详杨宁许丽兰陈敬华章溪福建医科大学药学院临床药学与药事管理学系福州350108 福建医科大学药学院药物分析学系福州350108

基于四面体DNA框架和G-四链体(G4)结构,利用靶标介导的无酶链置换循环信号放大策略,构建了一种电化学传感策略,用于microRNA-21的高灵敏检测。根据靶标(microRNA-21)序列设计四面体DNA框架发夹探针,当靶标存在时,其与四面体DNA框架上的... 详细信息

基于四面体DNA框架和G-四链体(G4)结构,利用靶标介导的无酶链置换循环信号放大策略,构建了一种电化学传感策略,用于microRNA-21的高灵敏检测。根据靶标(microRNA-21)序列设计四面体DNA框架发夹探针,当靶标存在时,其与四面体DNA框架上的发夹探针互补配对杂交,进而启动3条发夹DNA的链置换循环反应,在电极表面形成大量的“Y”型DNA。每个“Y”型DNA结构中的2个末端均有G4结构,可与血红素(hemin)形成一种具有类辣根过氧化物酶特性的G4/hemin DNAzyme,催化3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢的反应并产生较强的电流信号,从而用于microRNA-21的检测。当靶标不存在时,链置换反应无法启动,因而电化学信号较弱。结果显示,在1.00 fmol/L~1.00 nmol/L浓度范围内,峰电流差值(各浓度电流值-空白组电流值)与microRNA-21浓度的对数值具有良好的线性关系,线性方程为ΔI=45.04lgc+756.1,线性相关系数R^(2)=0.9987,检测限为17.92 amol/L。该方法有望用于与miRNA-21相关的肿瘤早期诊断的临床应用。

关键词：微小RNA 四面体DNA框架循环信号放大 DNAzyme 电化学传感

紫外-可见光谱传感对甘草品种及产地的准确鉴别

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光谱学与光谱分析 2024年第9期44卷 2647-2656页

作者：胡爱芬黄云任理雪王欣雨陈亨业付海燕中南民族大学药学院药物分析系湖北武汉430074 湖北省民族药物现代化工程技术研究中心湖北武汉430074

甘草是具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳等功能的中药材,由于遗传和地理环境的影响,不同品种和产地的品质及价格差异很大,常有不法商家为了利益以次充好。针对与甘草品质密切相关的甘草酸和甘草苷的结构特性,通过6种能与其发生特异性... 详细信息

甘草是具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳等功能的中药材,由于遗传和地理环境的影响,不同品种和产地的品质及价格差异很大,常有不法商家为了利益以次充好。针对与甘草品质密切相关的甘草酸和甘草苷的结构特性,通过6种能与其发生特异性光学反应的有机染料和金属离子构建了一种甘草品种和产地快速鉴别的光谱传感方法。收集了新疆、内蒙古、宁夏、北京、乌兹别克斯坦五个甘草主产地的175个样品,分别测定甘草提取液和加入不同的金属离子-有机染料的紫外-可见光谱数据,通过比较两者之间紫外-可见光谱的差异,筛选出6种能与甘草提取液发生特异性光学反应的金属离子和有机染料,用于紫外-可见光谱传感点的构建。通过构建的紫外-可见光谱传感方法对采集的所有样品进行检测分析,并结合偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和随机森林(RF)算法对甘草的品种和产地进行鉴别。结果显示,原始甘草品种和产地的谱峰在多处重叠,PLS-DA分类结果中的Q2仅为0.75,即纯光谱对甘草能进行初步鉴定但预测准确度不高。为了进一步提高其鉴别准确度,在甘草提取液中加入金属离子和有机染料产生谱峰变化,相比于甘草原始紫外-可见光谱,甘草品种和产地的谱峰都有较为明显的差异。采用矢量编码偏最小二乘判别分析(Dummy codes-PLSDA)和随机森林(RF)算法建立甘草品种和产地的鉴别模型,发现6种传感材料的融合光谱的准确率均达到100%,显著提高了金属离子-有机染料传感阵列对甘草的识别能力,RF模型准确率明显高于PLS-DA模型,其中单一传感点的RF和PLSDA模型的鉴别准确率分别大于98.65%和91.30%,远高于原始光谱的65.22%。通过金属离子-有机染料,构建了一种用于甘草品种和产地准确鉴别的紫外-可见光谱传感方法。为其他中药材的快速鉴别提供了一种新思路,有利于消费者的健康和利益的保障,促进中药资源的可持续发展。

关键词：甘草金属离子-染料紫外-可见传感偏最小二乘判别分析(PLS-DA) 真实性鉴别

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脑靶向肽偶联药物研究进展

中国药学杂志 2024年第9期59卷 768-775页

作者：崔娜史亚军白敏王胜正丁一陕西中医药大学药学院陕西咸阳712046 空军军医大学第一附属医院药剂科西安710032 空军军医大学药学系药物化学与药物分析学教研室西安710032

中枢神经系统(central nervous system,CNS)疾病严重危害人类的生命健康。但由于血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的存在,缺乏将药物输送到大脑的有效技术,这严重影响CNS疾病相关药物的开发成功率,致使治疗效果往往不尽如人意。因此,... 详细信息

中枢神经系统(central nervous system,CNS)疾病严重危害人类的生命健康。但由于血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的存在,缺乏将药物输送到大脑的有效技术,这严重影响CNS疾病相关药物的开发成功率,致使治疗效果往往不尽如人意。因此,迫切需要一种新技术解决上述问题。脑靶向肽偶联药物由脑靶向肽、连接基团和有效载荷3部分组成,其利用生物相关的内源性转运机制使生物活性分子透过BBB,并到达脑实质,已成为一种有前景的CNS药物。本文简要介绍了脑靶向肽偶联药物中脑靶向肽、连接基团和有效载荷的种类及特征等,并列举了一些常见的脑靶向肽偶联药物,以及此类药物面临的挑战和改进的方法,以期为后续CNS药物的设计和开发提供新思路。

关键词：多肽偶联药物脑靶向肽连接基团有效载荷中枢神经系统血脑屏障

非标记型适配体传感器对石房蛤毒素的高灵敏度检测

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海军军医大学学报 2024年第4期45卷 441-447页

作者：奚潇雨刘英连志兰陆峰海军军医大学(第二军医大学)药学系药物分析学教研室上海200433 上海理工大学健康科学与工程学院上海200093

目的建立基于荧光染料噻唑橙和核酸适配体45e-1的非标记型适配体传感器,以快速、灵敏地检测石房蛤毒素(STX)。方法将50 nmol/L 45e-1溶解在缓冲液(20 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L NaCl、2.5 mmol/L MgCl_(2)、5 mmol/L KCl,pH=7.5)中,... 详细信息

目的建立基于荧光染料噻唑橙和核酸适配体45e-1的非标记型适配体传感器,以快速、灵敏地检测石房蛤毒素(STX)。方法将50 nmol/L 45e-1溶解在缓冲液(20 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L NaCl、2.5 mmol/L MgCl_(2)、5 mmol/L KCl,pH=7.5)中,在95℃水浴中加热10 min,冰水浴中冷却5 min。随后加入STX标准溶液,充分混匀,室温孵育10 min后。再加入噻唑橙溶液,添加缓冲液使反应体系体积为100μL,充分混合后室温孵育2 min。最后在496 nm激发波长下测定体系的荧光强度。结果当噻唑橙与45e-1的摩尔浓度比为5∶1、噻唑橙与45e-1的孵育时间为2 min、STX与45e-1的孵育时间为10 min、Mg^(2+)的浓度为2.5 mmol/L、K^(+)的浓度为5 mmol/L时,反应体系的荧光强度与STX浓度呈良好的线性关系,拟合线性方程为Y=3639.8X+2341.5[R^(2)=0.9725,X为STX浓度(nmol/L)的常用对数],检测限为0.67 nmol/L,对其他常见海洋毒素的交叉反应可以忽略。在海水中,该方法的回收率为90.7%~108.7%,RSD为7.1%~10.9%。结论所建立的非标记型适配体传感器可以定量检测STX,具有良好的特异性和重现性。

关键词：非标记型噻唑橙石房蛤毒素适配体传感器

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桔梗质量标志物筛选

中成药 2024年第10期 3393-3399页

作者：井亚江王七龙黄建萍安佳王祥张岗彭亮高静王昌利王育朋张鑫磊颜永刚陕西中医药大学药学院陕西省秦岭中草药应用开发工程技术研究中心“秦药”研发重点实验室陕西海天制药有限公司空军军医大学药学院药物化学与药物分析学教研室

目的筛选桔梗质量标志物。方法建立HPLC-ELSD指纹图谱，获取化学成分信息。采用网络药理学建立成分-靶点、蛋白互作网络，筛选核心靶点与潜在质量标志物，并进行细胞实验验证。结果 19批药材指纹图谱中有12个共有峰，相似度0.933～0.... 详细信息

目的筛选桔梗质量标志物。方法建立HPLC-ELSD指纹图谱，获取化学成分信息。采用网络药理学建立成分-靶点、蛋白互作网络，筛选核心靶点与潜在质量标志物，并进行细胞实验验证。结果 19批药材指纹图谱中有12个共有峰，相似度0.933～0.997。共得15种活性成分、5个核心靶点、5个质量标志物。各质量标志物干预后，A549细胞上清IL-17、TNF水平降低（P<0.01）,EGFR、JUN、RXRA、STAT3、TNF、PTGS2 mRNA表达升高（P<0.01）。结论桔梗皂苷D3、桔梗皂苷D2、桔梗皂苷A、远志皂苷D2、桔梗酸A可作为桔梗质量标志物，该药材能通过免疫调节、抑制炎症因子分泌、调控细胞分化与增殖等途径达到宣肺、利咽功效。

关键词：桔梗质量标志物 HPLC-ELSD指纹图谱网络药理学细胞实验

金纳米颗粒表面催化发夹组装无酶信号放大快速荧光法检测微RNA-721

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海军军医大学学报 2024年第6期45卷 717-724页

作者：刘英奚潇雨封加栋陆峰上海理工大学健康科学与工程学院上海200093 海军军医大学(第二军医大学)药学系药物分析学教研室上海200433

目的构建一种自催化发夹组装无酶信号放大的靶标快速荧光法,用于检测靶标miRNA。方法首先在金纳米颗粒(AuNP)表面修饰5-羧基荧光素(FAM)标记的DNA发夹探针H1,形成探针AuNP-H1,H1的荧光被AuNP猝灭。加入靶标miRNA会导致AuNP上的H1标记荧... 详细信息

目的构建一种自催化发夹组装无酶信号放大的靶标快速荧光法,用于检测靶标miRNA。方法首先在金纳米颗粒(AuNP)表面修饰5-羧基荧光素(FAM)标记的DNA发夹探针H1,形成探针AuNP-H1,H1的荧光被AuNP猝灭。加入靶标miRNA会导致AuNP上的H1标记荧光素远离AuNP而重新发射荧光,随后H1与DNA发夹探针H2发生循环自组装,靶标循环被利用,导致荧光信号放大。将探针AuNP-H1、探针H2及不同浓度的miRNA-721共反应后,在480 nm激发波长下测定体系的荧光强度。结果以急性心肌炎生物标志物miRNA-721为模型靶标,在优化的实验条件下使用20μL探针AuNP-H1、50μL 3μmol/L探针H2(退火缓冲液为20 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L NaCl、5 mmol/L MgCl_(2),pH 7.4)与50μL不同浓度(0.1~5μmol/L)的miRNA-721在30℃共反应20 min,发现在520 nm处的相对荧光强度变化值(ΔF=F-F_(0))与miRNA-721浓度(C)呈良好的线性关系,拟合线性方程为ΔF=29232×lgC-52435(R2=0.9910)。该荧光法检测限为1.23 nmol/L。在正常人血清中的加标回收率为92.71%~104.02%。一次完整的miRNA分析可以在20 min内完成。结论该方法可用于生物样品中miRNA-721的检测,为急性心肌炎的早期诊断提供了一种快速检测手段。

关键词：荧光无酶信号放大催化发夹组装微RNA-721 金纳米颗粒

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天然产物调控成骨分化的研究进展

中国药科大学学报 2024年

作者：蔡浒吴晓倩韩凌飞冯锋曲玮柳文媛中国药科大学药物分析系中国药科大学中药学院浙江省原料药安全研究中心

成骨细胞是骨细胞的重要来源，参与骨生成和修复，对维持骨平衡起关键作用，若体内成骨分化过程被干扰，则可能产生多种骨相关疾病。天然产物具有来源广泛、种类繁多、生理活性多样、毒不良反应较小等特点，近年来研究发现天然产物对成... 详细信息

成骨细胞是骨细胞的重要来源，参与骨生成和修复，对维持骨平衡起关键作用，若体内成骨分化过程被干扰，则可能产生多种骨相关疾病。天然产物具有来源广泛、种类繁多、生理活性多样、毒不良反应较小等特点，近年来研究发现天然产物对成骨细胞分化具有调控效果，本文从天然产物来源出发，对植物源、动物源及微生物源天然产物干预成骨分化进行综述，为天然产物治疗骨病中提供理论基础。

关键词：天然产物成骨分化研究进展