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参葛补肾胶囊及其多糖黄酮对幼龄小鼠性早熟的影响

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中国实验方剂学杂志 2025年第1期 95-103页

作者：孙虹雷帆李成功胡时先王卫华任宾郝娟罗睿杜力军中国医学科学院中国协和医学院药用植物研究所清华大学生命科学学院新疆华春生物药业有限责任公司药业研发中心清华大学药学技术中心

目的：探讨参葛补肾胶囊（简称参葛补肾）对正常3周龄小鼠性发育的作用。方法：实验共分2部分：第1部分将小鼠分为4组，正常组及参葛补肾低、中、高剂量组（给药剂量分别为234.7、469.4、938.7 mg·kg-1）。第2部分小鼠共分4组，分别为... 详细信息

目的：探讨参葛补肾胶囊（简称参葛补肾）对正常3周龄小鼠性发育的作用。方法：实验共分2部分：第1部分将小鼠分为4组，正常组及参葛补肾低、中、高剂量组（给药剂量分别为234.7、469.4、938.7 mg·kg-1）。第2部分小鼠共分4组，分别为正常组，太子参多糖组、总黄酮组、参葛补肾组，给药剂量均为469.4 mg·kg-1。给药7 d观察雌性小鼠的阴道开口及雄性小鼠的睾丸下降阴囊数及其卵巢和睾丸脏器系数等，给药4周后雌雄合笼2 d，观察雌鼠受孕率，孕鼠生产后继续给药母鼠4周，观察子鼠阴道开口数睾丸下降阴囊数及其卵巢和睾丸脏器系数等。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清性激素，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测下丘脑促性腺激素释放激素蛋白（GnRH）和生长激素蛋白（GH）的表达。结果：与正常组比较，参葛补肾给药7 d，对各组雌性小鼠的阴道开口及雄性小鼠的睾丸下降影响差异无统计学意义，给药4周参葛补肾低剂量组雌鼠的受孕率明显下降（P<0.05），其他影响差异无统计学意义。3剂量对卵巢睾丸脏器系数均影响无统计学意义，对下丘脑GnRH及GH表达作用差异无统计学意义，参葛补肾的主要组成太子参多糖给药7 d雌性小鼠阴道开口数明显减少（P<0.05），给药4周时未孕雌鼠血清雌二醇水平明显下降（P<0.05），但对雌雄鼠下丘脑GnRH、GH蛋白表达影响均差异无统计学意义；对子代小鼠在阴道开口和睾丸下降等性早熟指标均无明显影响。结论：参葛补肾对幼年小鼠性早熟无明显促进作用，对成年鼠受孕率及其子鼠性发育无明显影响。

关键词：参葛补肾胶囊太子参多糖总黄酮性早熟幼龄小鼠雌二醇睾酮

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吴茱萸次碱改善MAFLD小鼠脂肪肝和骨质疏松的作用

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药学学报 2025年第01期 141-149页

作者：张煜皓李依宁姜新海王伟志李顺旺盛任雷丽娟张语嫣王晶锐魏欣玮许艳妮林燕唐琳司书毅中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委微生物药物生物技术重点实验室天然药物活性物质与功能国家重点实验室国家新药(微生物)筛选实验室首都医科大学附属北京地坛医院首都医科大学附属北京中医医院北京市中医药研究所盛实百草药业有限公司

代谢相关脂肪性肝病（metabolic-associated fatty liver disease,MAFLD）和骨质疏松症（osteoporosis,OP）是两种非常普遍的代谢性疾病。越来越多的实验证据支持MAFLD和OP之间有病理生理联系,MAFLD常伴随OP的发生。吴茱萸次碱（rutaeca... 详细信息

代谢相关脂肪性肝病（metabolic-associated fatty liver disease,MAFLD）和骨质疏松症（osteoporosis,OP）是两种非常普遍的代谢性疾病。越来越多的实验证据支持MAFLD和OP之间有病理生理联系,MAFLD常伴随OP的发生。吴茱萸次碱（rutaecarpine,RUT）是中药吴茱萸的主要活性成分之一,课题组前期研究发现RUT具有降脂、抗炎和抗动脉粥样硬化作用,并且可以改善大鼠的OP。但是,RUT能否同时改善MAFLD小鼠的脂肪肝和OP症状,目前尚待研究。本研究利用高脂饲料饮食（high fat diet,HFD） 4个月喂养的C57BL/6小鼠构建MAFLD模型。灌胃给予RUT低剂量(5 mg·kg-1)和高剂量(15 mg·kg-1) 4周,实验结束时评价RUT在体内对肝脏脂肪变性和骨代谢的影响（本实验获得中国医学科学院医药生物技术研究所动物伦理委员会批准,批准号:IMB-20190124D303）。研究结果表明,RUT治疗显著减少了肝脏脂肪变性和脂质积累,同时显著减少骨丢失并促进了骨形成。综上,本研究表明RUT具有改善MAFLD小鼠的脂肪肝和OP的作用。

关键词：吴茱萸次碱非酒精性脂肪性肝病代谢相关脂肪性肝病骨质疏松症骨代谢

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一种新型高糖基化免疫融合蛋白NESP-Fc的研制

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中国生物工程杂志 2015年第4期35卷 80-85页

作者：晏丽王康李瑞建白义白先宏周海平百泰生物药业有限公司北京100176

新红细胞生成刺激蛋白(NESP),是重组人红细胞生长素(rh EPO)的一种高糖基化类似物,它含有5个N端糖链和比rhEPO高2倍的唾液酸残基,具有较好的代谢稳定性和3倍于rhEPO的半衰期。在新红细胞生成刺激蛋白(NESP)的基础上,通过NESP的cDNA与人I... 详细信息

新红细胞生成刺激蛋白(NESP),是重组人红细胞生长素(rh EPO)的一种高糖基化类似物,它含有5个N端糖链和比rhEPO高2倍的唾液酸残基,具有较好的代谢稳定性和3倍于rhEPO的半衰期。在新红细胞生成刺激蛋白(NESP)的基础上,通过NESP的cDNA与人IgG2的铰链区与CH2和CH3的cDNA连接,形成了融合蛋白NESP-Fc,来达到提高NESP半衰期的目的。表达载体的构建、融合蛋白的表达纯化和初步的功能性试验等一系列研究证实,所表达的融合蛋白主要以二聚体形式存在;NESP-Fc能明显促进UT-7细胞的生长和小鼠体内网织红细胞的增殖;在大鼠体内的研究发现其半衰期高达56h;小试规模重组蛋白的表达量在1.4g/L左右。这些研究为该融合蛋白最终实现临床应用和产业化打下了良好的基础。

关键词：贫血新红细胞生成刺激蛋白(NESP) 融合蛋白 CHO细胞

免疫融合蛋白sFcεRIα/mIg(IgG2)的研制

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中国生物工程杂志 2010年第10期30卷 17-21页

作者：马金伟程虹褚学者李先钟扈艳红喻志爱林峰何丽华白先宏胡品良百泰生物药业有限公司北京100176

哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎及食物过敏等疾病为一类常见疾病,但存在治疗效果不佳,患者病程长等特点。IgE分子是导致过敏性疾病的关键分子。抑制IgE分子与效应细胞膜表面FcεRI受体的结合可抑制过敏反应的发生。通过克隆FcεRI受体α... 详细信息

哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎及食物过敏等疾病为一类常见疾病,但存在治疗效果不佳,患者病程长等特点。IgE分子是导致过敏性疾病的关键分子。抑制IgE分子与效应细胞膜表面FcεRI受体的结合可抑制过敏反应的发生。通过克隆FcεRI受体α亚基的cDNA与IgG2的稳定区铰链区、CH2和CH3的cDNA连接,以二聚化融合蛋白sFcεRIα/mIg(IgG2)的形式在CHO细胞中表达,达到提高sFcεRIα生物半衰期的目的。表达载体构建和初步的功能性试验等一系列研究证实,所表达的融合蛋白的分子量为170kDa,并与人IgE和鼠IgE有较好的结合活性。这些研究为该融合蛋白最终实现产业化打下良好基础。

关键词： I型过敏反应疾病 IgE sFcεRIα 融合蛋白

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溶瘤I型单纯疱疹病毒的研究进展

微生物学通报 2015年第9期42卷 1795-1801页

作者：由鹏飞韩金乐叶祥忠北京万泰生物药业股份有限公司北京102206

溶瘤病毒(Oncolytic virus,OV)是可以靶向感染并杀伤肿瘤细胞的一类病毒,其中溶瘤I型单纯疱疹病毒(Oncolytic herpes simplex virus type 1,OHSV-1)是目前研究最多的溶瘤病毒之一,可通过多种策略进行构建,已有多种OHSV-1进入临床试验,... 详细信息

溶瘤病毒(Oncolytic virus,OV)是可以靶向感染并杀伤肿瘤细胞的一类病毒,其中溶瘤I型单纯疱疹病毒(Oncolytic herpes simplex virus type 1,OHSV-1)是目前研究最多的溶瘤病毒之一,可通过多种策略进行构建,已有多种OHSV-1进入临床试验,大量结果显示其具有较好的安全性和有效性。本文主要介绍OHSV-1的分子生物学特性与优势、主要的开发及靶向性策略、各类OHSV-1的研究进展以及目前存在的问题等。

关键词： I型单纯疱疹病毒溶瘤病毒肿瘤治疗

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不同EV71毒株的免疫保护差异性研究

中华微生物学和免疫学杂志 2010年第10期30卷 919-924页

作者：汪颖叶祥忠李娟贾继宗韩金乐李艳李益民游松北京万泰生物药业股份有限公司 102206 沈阳药科大学

目的对用MRC-5细胞分离的5株EV71疫苗候选株进行差异性研究,旨在筛选出符合疫苗制备需要的病毒株.方法将5株单克隆化的EV71疫莳候选株制备成试验苗,腹腔接种ICR雌性小鼠,加强免疫两周后,雌雄配对,饲养2周,对雌鼠再加强免疫1次,并对出... 详细信息

目的对用MRC-5细胞分离的5株EV71疫苗候选株进行差异性研究,旨在筛选出符合疫苗制备需要的病毒株.方法将5株单克隆化的EV71疫莳候选株制备成试验苗,腹腔接种ICR雌性小鼠,加强免疫两周后,雌雄配对,饲养2周,对雌鼠再加强免疫1次,并对出生24 h内的乳鼠进行颅腔攻毒,观察乳鼠生存状况;用ELISA法检测母鼠和乳鼠血清IgG滴度;用巢式PCR检测攻毒乳鼠肠道EV71载量;用MRC-5细胞培养法检测免疫血清对病毒的中和能力;用SPSS16.0对实验数据进行统计分析.结果 5株病毒免疫的雌鼠血清抗体水平随免疫次数增加而提高、抗体对病毒的中和能力存在差别;致死株攻毒的乳鼠存活状况存在差别,非致死株攻毒的乳鼠肠道EV71载量也存在差别.结论从分子水平、细胞水平和个体水平上证实5株病毒的免疫原性和免疫保护性存在差别,123株是免疫保护力最好的一株。

关键词： EV71 中和试验免疫保护

蛋白酶K单抗研制及其双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

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免疫学杂志 2015年第2期31卷 161-164页

作者：孙亮于志新赵风强谢鹤韩金乐叶祥忠北京万泰生物药业股份有限公司 102206

目的研制蛋白酶K单克隆抗体并构建定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法 ,用于生物制品中蛋白酶K的检测。方法用杂交瘤技术制备抗蛋白酶K的单抗,用棋盘法优化ELISA条件,建立定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法,分析其特异性、精密... 详细信息

目的研制蛋白酶K单克隆抗体并构建定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法 ,用于生物制品中蛋白酶K的检测。方法用杂交瘤技术制备抗蛋白酶K的单抗,用棋盘法优化ELISA条件,建立定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法,分析其特异性、精密性和准确性。结果经免疫、融合、克隆、筛选到稳定分泌蛋白酶K单抗的杂交瘤细胞。获得1株阻断蛋白酶K活性的单抗5G6,以5G6为包被抗体、4D3为酶标抗体,构建蛋白酶K定量检测的ELISA方法。本方法线性相关系数R=0.99,线性范围为293.4-2 500 pg/ml;定量限度为293.4 pg/ml;变异系数为CV〈15%;回收率介于89.3%-129.2%之间,37℃6 d的回收率〉80%;与蛋白酶K以外的其他蛋白无交叉反应。结论获得阻断蛋白酶K活性的单抗,构建出灵敏、特异的蛋白酶K定量检测方法。

关键词：蛋白酶K 单克隆抗体双抗体夹心ELISA

牛血清IgG双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立及应用

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中国生物制品学杂志 2016年第5期29卷 528-532,537页

作者：赵风强张明祥韩金乐苏玉坡谢鹤胡腾月贾继宗叶祥忠北京万泰生物药业股份有限公司北京102206

目的建立牛血清Ig G(bovine immunoglobulin G,BIg G)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法。方法用BIg G-Fc免疫BALB/c小鼠,制备抗BIg G单抗,确定包被抗体及酶标抗体后,建立定量检测BIg G抗原的双抗体夹心ELISA方法,并验证该方法的准确... 详细信息

目的建立牛血清Ig G(bovine immunoglobulin G,BIg G)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法。方法用BIg G-Fc免疫BALB/c小鼠,制备抗BIg G单抗,确定包被抗体及酶标抗体后,建立定量检测BIg G抗原的双抗体夹心ELISA方法,并验证该方法的准确度、精密度、稳定性、特异性,确定该方法的线性范围和定量限度。应用建立的方法检测不同厂家、不同批次牛血清及纯化EV71样品中BIg G抗原残留量。结果建立了以3E12D2为包被单抗(8.0μg/ml,100μl/孔),4A2G1B1-HRP为酶标抗体(1∶1 000稀释,100μl/孔)定量检测BIg G的双抗体夹心ELISA方法,该方法的线性范围为0.3~9.6 ng/ml,R^2>0.99,定量限度为0.3 ng/ml;回收率在94.1%~108.5%之间,同一实验者重复检测和不同实验者检测的变异系数均90%;该试剂样品与BIg G可发生特异性反应,与其他动物源血清无交叉反应。9批牛血清中BIg G含量均存在差异;精纯样品较粗纯样品BSA和BIg G均明显去除,但BIg G占牛血清残留量(BSA+BIg G)的比例却明显上升。结论建立的BIg G抗原的双抗体夹心ELISA方法符合定量检测需要,可用于牛血清的质量质控及残留量检测。

关键词：牛血清IgG 单克隆抗体双抗体夹心ELISA

rhVEGF_(165)在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达、纯化及其生物学活性

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生物工程学报 2011年第6期27卷 935-942页

作者：张甘良张海峰粘伟红孙九如嘉和生物药业有限公司上海201203

利用哺乳动物细胞表达系统,稳定表达和纯化高生物学活性的人重组血管内皮生长因子(VEGF165)蛋白。将VEGF165克隆于表达载体pCDNA4.0,与T-GS载体共同转染CHO-S(中国仓鼠卵巢细胞)细胞,MSX(Methionine sulphoximine)加压筛选高表达细胞株,... 详细信息

利用哺乳动物细胞表达系统,稳定表达和纯化高生物学活性的人重组血管内皮生长因子(VEGF165)蛋白。将VEGF165克隆于表达载体pCDNA4.0,与T-GS载体共同转染CHO-S(中国仓鼠卵巢细胞)细胞,MSX(Methionine sulphoximine)加压筛选高表达细胞株,5 L发酵罐培养,细胞培养上清液通过三步纯化得到rhVEGF165蛋白,通过Western blotting、Biacore和人脐静脉内皮细胞增殖实验等对表达蛋白的特异性、亲和力及生物学活性等进行检测。所建立的细胞株其rhVEGF165蛋白表达量约50 mg/L,纯化后纯度达到90%以上,细胞活性EC50为1.94 ng/mL。成功筛选到高表达rhVEGF165的CHO细胞株,纯化得到高活性、高亲和力的rhVEGF165蛋白。

关键词：血管内皮生长因子(VEGF165) 中国仓鼠卵巢细胞重组蛋白稳定表达生物反应器 rhVEGF165蛋白纯化